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脂质体介导的重组质粒pIRES-hBMP-2-hVEGF_(165)体外转染对hBMSCs成骨能力的影响

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中国修复重建外科杂志 2009年第9期23卷 1124-1128页

作者：吴国平何小川杨智慧郭力泸州医学院附属医院整形烧伤科四川泸州646000

目的探讨重组质粒pIRES-hBMP-2-hVEGF165体外转染对hBMSCs成骨诱导分化的影响。方法构建hBMP-2和hVEGF165真核共表达载体。取健康成人自愿捐献的骨髓分离培养hBMSCs,采用阳离子脂质体将构建的质粒pIRES-hBMP-2-hVEGF165、pIRES-hBMP-2、... 详细信息

目的探讨重组质粒pIRES-hBMP-2-hVEGF165体外转染对hBMSCs成骨诱导分化的影响。方法构建hBMP-2和hVEGF165真核共表达载体。取健康成人自愿捐献的骨髓分离培养hBMSCs,采用阳离子脂质体将构建的质粒pIRES-hBMP-2-hVEGF165、pIRES-hBMP-2、pIRES-hVEGF165和空质粒载体(pIRES-neo)转染至hBMSCs,作为A、B、C、D组;另取相同数量的未转染细胞作为对照组(E组)。培养4周,采用RT-PCR检测hBMP-2、hVEGF165以及骨钙mRNA表达,Western blot检测细胞hBMP-2和hVEGF165表达,定量检测ALP活性,免疫组织化学方法检测ColⅠ表达。结果与E组比较,A组hBMSCs高表达hBMP-2、hVEGF165、ColⅠ及骨钙素,B组大量表达骨钙素及ColⅠ,C组高表达hVEGF165,而B组hVEGF165及C组hBMP-2和ColⅠ的表达与D、E组相似,呈阴性或仅有痕量表达。A、B、C、D及E组ALP活性分别为0.91±0.03、0.90±0.02、0.64±0.03、0.67±0.01、0.66±0.02,A、B组与E组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论重组质粒通过阳离子脂质体能成功转染hBMSCs,外源性hBMP-2和hVEGF165基因在转染细胞中能持续表达,并能增强hBMSCs的成骨能力。

关键词： hBMSCs 诱导分化hBMP-2 hVEGF165 基因治疗

烫伤大鼠结肠动力基本功能单位细胞损害和内质网应激研究

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中华烧伤杂志 2009年第3期25卷 193-196页

作者：李颖郭力四川泸州医学院附属医院整形烧伤科 646000

目的了解严重烫伤大鼠结肠壁内神经运动末梢-肌间丛cajal间质细胞（ICC）-平滑肌细胞超微结构改变以及葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12（caspase-12）表达情况，探讨其在烫伤大鼠结肠动力损伤中的可能机制。方法... 详细信息

目的了解严重烫伤大鼠结肠壁内神经运动末梢-肌间丛cajal间质细胞（ICC）-平滑肌细胞超微结构改变以及葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12（caspase-12）表达情况，探讨其在烫伤大鼠结肠动力损伤中的可能机制。方法采用简单随机法将50只SD大鼠分为烫伤组（40只）：大鼠造成30％TBSAⅢ度烫伤，伤后腹腔注射乳酸林格液（50mg／kg）复苏。于伤后3、6、12、24h处死大鼠，在距盲肠约5cm处剪取近端结肠4cm肠管，取中间各1cm分别用体积分数3％戊二醛及体积分数10％甲醛固定。对照组（10只）除不烫伤外，其余处理同烫伤组。取戊二醛固定的标本，透射电镜下观察大鼠肠道细胞变化情况。取甲醛固定的标本，采用免疫组织化学法检测结肠壁中GRP78和caspase-12的表达。结果透射电镜下，对照组大鼠结肠平滑肌细胞排列整齐，肌细胞内细胞器丰富，核居中，常染色质均匀，线粒体嵴较多、滑面内质网较少，肌间丛神经元细胞器丰富，紧邻肌间丛神经元可见ICC；烫伤组肠道平滑肌细胞形状不规则，排列紊乱，核周隙增宽，细胞内有溶解性大空泡，线粒体空泡样变，嵴溶解、固缩，粗面内质网扩张并部分溶解，ICC核周细胞质明显减少。烫伤组伤后3、6、12h GRP78评分分别为（4．3±0．9）、（6．0±0．7）、（4．8±1．1）分，均高于对照组[（2．4±0．7）分，P〈0．05]；烫伤组伤后6～24h caspase-12评分均高于对照组（P〈0．05）。对照组细胞均有GRP78表达，烫伤组强度染色主要出现在黏膜和肌间神经丛、间质细胞，而平滑肌细胞多呈轻中度染色。烫伤后3、12hGRP78呈阳性表达，伤后6h呈强阳性。caspase-12在伤后3h阳性表达不明显，伤后6、24h表达呈弱阳性，伤后12h表达呈阳性；对照组未见caspase-12表达。结论严重烫伤后大鼠结肠壁内神经运动末梢-肌间丛ICC-平滑肌细胞存在明显病理改变，这与内质网过度应激启动caspase—12凋亡通路致细胞损伤可能有关。

关键词：烧伤结肠细胞凋亡半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12 葡萄糖调节蛋白78

局部应用重组水蛭素对家兔耳静脉淤血皮瓣成活的影响

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中华烧伤杂志 2011年第3期27卷 215-217页

作者：廖毅童庭辉王太平韩寅四川泸州医学院附属医院整形烧伤科 646000

目的观察局部应用重组水蛭素对家兔耳静脉淤血皮瓣成活的影响。方法选取健康普通大耳白兔18只，按照随机数字表法分为对照组、低分子肝素治疗组、重组水蛭素治疗组，每组6只。各组家兔麻醉后在左耳背制作静脉淤血皮瓣模型：皮瓣大小为6c... 详细信息

目的观察局部应用重组水蛭素对家兔耳静脉淤血皮瓣成活的影响。方法选取健康普通大耳白兔18只，按照随机数字表法分为对照组、低分子肝素治疗组、重组水蛭素治疗组，每组6只。各组家兔麻醉后在左耳背制作静脉淤血皮瓣模型：皮瓣大小为6cm×3cm，以耳中心动脉为惟一血供、1cm宽蒂部为惟一静脉回流途径。术后分别于皮瓣下多点均匀注射1mL生理盐水、低分子肝素（625U）、重组水蛭素（1U），皮瓣原位缝合。观察皮瓣外观并计算成活率；术后1、3、5、7d取皮瓣远端组织检测血栓素B2含量。对数据行单因素方差分析、t检验。结果各组家兔皮瓣完全坏死区域毛发脱落明显；术后皮瓣均肿胀明显，远端淤血形成，对照组颜色明显深于2个治疗组。术后1d重组水蛭素治疗组1只家兔、低分子肝素治疗组2只家兔、对照组4只家兔出现明显血肿。低分子肝素治疗组、重组水蛭素治疗组家兔皮瓣成活率分别为（92．3±1．7）％、（94．8±1．9）％，均高于对照组[（77．9±1．2）％，F=191．29，P〈0．05]。2个治疗组家兔皮瓣成活率接近（t=2．75，P〉0．05）。术后3、5d，2个治疗组家兔血栓素B2含量均明显低于对照组（t值为6．68～30．55，P值均小于0．01），而2个治疗组家兔血栓素B2含量接近（t值分别为1．22、6．44，P值均大于0．05）。结论局部应用低分子肝素或重组水蛭素，可明显改善家兔皮瓣的静脉淤血，提高皮瓣成活率。

关键词：水蛭素类肝素,低分子量静脉淤血皮瓣

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重组人表皮细胞生长因子治疗烧伤创面研究

中国修复重建外科杂志 2003年第4期17卷 301-302页

作者：廖毅郭力丁尔英何小川谢兴乾夏德林泸州医学院附属医院整形烧伤科四川泸州646000

目的　探讨外用重组人表皮细胞生长因子 (rh EGF)治疗度烧伤创面最佳用药方式。　方法　 2 0 0 0年6月～ 2 0 0 1年 12月对 6 0例浅度和深度烧伤患者共 180个创面进行随机双盲实验 ,每例患者设 A、B、C 3个治疗区。A区为 SD- Ag... 详细信息

目的　探讨外用重组人表皮细胞生长因子 (rh EGF)治疗度烧伤创面最佳用药方式。　方法　 2 0 0 0年6月～ 2 0 0 1年 12月对 6 0例浅度和深度烧伤患者共 180个创面进行随机双盲实验 ,每例患者设 A、B、C 3个治疗区。A区为 SD- Ag对照治疗区 ,1% SD- Ag霜涂创面 ,每日 1次 ;B区为 rh EGF治疗区 ,rh EGF4 0 U/ cm2 直接喷在创面上 ,每日 1次 ;C区为 rh EGF和速愈平混合治疗区 ,rh EGF4 0 U/ cm2和速愈平 5 g混合涂在创面上 ,每日 1次 ;每日观察记录 3个治疗区变化 ,直至创面愈合停止用药 ;愈合 1周后检查创面外观、皮肤弹性 ,并行统计学处理。　结果　浅度创面 A区愈合时间为 (13.2 0± 2 .4 0 )天 ,B区为 (10 .2 0± 2 .2 0 )天 ,C区为 (8.72± 2 .31)天 ,组间比较有统计学意义 (P烧伤创面有明显促愈合作用 ,可改善愈合质量。rh EGF和速愈平联合使用对缩短创面愈合时间及提高愈合质量作用?

关键词：重组人表皮细胞生长因子治疗烧伤创面

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富血小板血浆促进创面愈合的细胞和分子机制

中国组织工程研究 2025年第13期29卷 2793-2801页

作者：龙晨艳程飚田举广东医科大学第一临床医学院广东省湛江市524000 广东医科大学中山市人民医院烧伤整形美容科广东省中山市528400 南部战区总医院烧伤整形科广东省广州市510030

背景:尽管富血小板血浆在促进创面愈合方面显示出治疗潜力,但其临床应用仍需要进一步的研究和验证。此外,对于富血小板血浆作用的机制仍存在一些争议和不确定性。目的:通过对富血小板血浆促进创面愈合的机制进行概述和分析,以增进对该... 详细信息

背景:尽管富血小板血浆在促进创面愈合方面显示出治疗潜力,但其临床应用仍需要进一步的研究和验证。此外,对于富血小板血浆作用的机制仍存在一些争议和不确定性。目的:通过对富血小板血浆促进创面愈合的机制进行概述和分析,以增进对该治疗方法的理解,为未来的基础研究和临床应用提供有益的指导。方法:在中国知网、PubMed数据库检索2000年1月至2023年12月发表的相关文献。英文检索词为“platelet rich plasma,PRP,wound,wound healing,refractory wounds,chronic wounds,cellular and molecular mechanisms,signaling pathways,regenerative medicine”,中文检索词为“富血小板血浆,PRP,创面,伤口,创面愈合,难愈性创面,慢性创面,细胞和分子机制,信号通路,再生医学”。根据纳入和排除标准,最终对80篇文献进行综述。结果与结论:①富血小板血浆在创面愈合中具有许多潜在的优势,它能够提供丰富的生长因子和细胞因子等生物活性物质;②富血小板血浆可以调节参与创面愈合的各种细胞类型的功能,包括表皮细胞、血管内皮细胞、成纤维细胞、干细胞和炎症细胞等;③在富血小板血浆疗法中,细胞外囊泡、线粒体对于创面愈合可能扮演着重要角色;④负载富血小板血浆水凝胶可广泛用于增强组织再生和作为药物传递的功能性载体;⑤富血小板血浆对创面细胞外基质合成和降解起调节作用,从而影响伤口愈合过程中基质重建;⑥富血小板血浆可能通过动态调节多种信号通路和上皮间质转化来影响组织修复与再生,从而为创面愈合的研究提供了全新的视角。

关键词：富血小板血浆生长因子创面愈合细胞和分子机制信号通路再生医学

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大黄对烫伤大鼠胃肠激素变化的影响

中华烧伤杂志 2008年第2期24卷 111-113页

作者：郭杏谭美云熊爱兵郭力四川泸州医学院附属医院整形烧伤科 646000 四川泸州医学院附属医院骨科 646000

目的了解严重烫伤大鼠早期血浆中胃肠激素的变化及大黄对胃肠激素水平的影响。方法88只Wistar大鼠随机分为正常对照组（8只）、烫伤对照组（40只，Ⅲ度烫伤后管饲蒸馏水）、烫伤治疗组（40只，Ⅲ度烫伤后管饲大黄水提液）。于烫伤后6、1... 详细信息

目的了解严重烫伤大鼠早期血浆中胃肠激素的变化及大黄对胃肠激素水平的影响。方法88只Wistar大鼠随机分为正常对照组（8只）、烫伤对照组（40只，Ⅲ度烫伤后管饲蒸馏水）、烫伤治疗组（40只，Ⅲ度烫伤后管饲大黄水提液）。于烫伤后6、12、24、48、72h取大鼠腹腔静脉血，用放射免疫法检测血浆胃动素（MTL）、P物质、血管活性肽（VIP）、生长抑素（SS）的含量。结果（1）正常对照组大鼠MTL和P物质分别为（198±28）、（61±10）ng／L；烫伤对照组明显下降，最低值分别为（110±15）、（30±5）ng／L，而后缓慢上升，72h达高峰，但仍未恢复正常（P〈0．05）；烫伤治疗组MTL和P物质下降趋势明显变缓，各时相点均高于烫伤对照组，伤后48h已达正常水平，72h分别为（232±32）、（73±11）ng／L，明显高于正常对照组（P〈0，05）。（2）正常对照组大鼠VIP和ss分别为（35±6）、（30±5）ng／L；烫伤对照组呈明显上升趋势，伤后6h分别为（70±12）、（49±9）ng／L（P〈0．01），而后缓慢下降但72h时仍高于正常水平（P〈0．05）；烫伤治疗组VIP和SS上升趋势幅度较小，各时相点均低于烫伤对照组，48h恢复至正常水平；VIP达最高值的时间推迟至伤后12h。结论大黄对严重烫伤大鼠早期血浆中胃肠激素的分泌和释放有明显的调控作用。

关键词：烧伤胃肠激素类大黄属

内毒素/脂多糖及烧伤血清对豚鼠肠道平滑肌细胞离子通道的影响

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中华烧伤杂志 2006年第3期22卷 184-186页

作者：郭力王熙斌杨艳童庭辉四川泸州医学院附属医院整形烧伤科 646000

目的观察内毒素/脂多糖(LPS)及烧伤血清对豚鼠结肠带平滑肌细胞钙激活钾通道(KCa)的影响,探讨烧伤后发生胃肠动力障碍的分子电生理机制。方法用急性酶分离法获取单个健康豚鼠结肠带平滑肌细胞,在对称性高钾溶液中采用细胞膜片钳单通道... 详细信息

目的观察内毒素/脂多糖(LPS)及烧伤血清对豚鼠结肠带平滑肌细胞钙激活钾通道(KCa)的影响,探讨烧伤后发生胃肠动力障碍的分子电生理机制。方法用急性酶分离法获取单个健康豚鼠结肠带平滑肌细胞,在对称性高钾溶液中采用细胞膜片钳单通道记录技术,分别记录细胞贴附式膜片(电极位于细胞膜外面)和内面向外式膜片(电极位于细胞膜内面)上的电流。引出的电流信号经转换器转换,输入计算机,用离子通道计算机分析系统进行数据处理,并测定以下指标：(1)电流幅值(CA)；(2)开放概率(PO)；(3)开放时间(OT)；(4)关闭时间(CT),以检测其特性并鉴定是否为KCa。确定为KCa后,向浴液中分别加入20、40、60、80、100 mg/L的LPS,观察LPS对两种膜片方式上KCa的影响。在浴液中分别加入正常血清和烧伤血清,观察血清对KCa的影响。结果在对称性高钾溶液中,豚鼠结肠带平滑肌细胞内面向外式膜片上的KCa电导值为(271±7)ps,是高电导的离子通道。随着膜去极化及细胞内Ca^(2+)增加,通道PO增加,该通道可被细胞外低浓度的钾通道阻断剂四乙胺(TEA,1 mmol/L)所阻断,而膜内面较高浓度的TEA(40 mmol/L)对该通道无阻断作用,证实为KCa。当Ca^(2+)为0 mol/L时,向浴液中分别加入20、40、60、80、100 mg/L的LPS,两种膜片方式KCa活性随LPS浓度的增加而增加。40 mg/L以上的LPS对KCa具有明显激活作用,通道PO显著增加(P＜0．05或0．01),用不含LPS的浴液灌流后亦不能回转。两种膜片方式下烧伤血清对KCa有激活作用,而正常血清无此作用。结论LPS和烧伤血清可通过激活肠道平滑肌细胞KCa抑制肠道蠕动。

关键词：内毒素类血清离子通道肌细胞,平滑肌膜片钳技术

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雌激素诱导干细胞成骨研究新进展

中国组织工程研究 2013年第14期17卷 2617-2624页

作者：吕炜亮廖毅童庭辉泸州医学院整形烧伤科四川省泸州市646000

背景:雌激素与人体正常骨代谢有紧密联系,并可以为干细胞诱导成骨提供有利条件。目的:文章就雌激素在多种干细胞诱导成骨中的应用情况及其作用机制、安全性、效果、优缺点、突出特性等进行综述。方法:由第一作者应用计算机检索PubMed数... 详细信息

背景:雌激素与人体正常骨代谢有紧密联系,并可以为干细胞诱导成骨提供有利条件。目的:文章就雌激素在多种干细胞诱导成骨中的应用情况及其作用机制、安全性、效果、优缺点、突出特性等进行综述。方法:由第一作者应用计算机检索PubMed数据库,以"estrogen,bone marrow mesenchymal stemcells,adipose derived stem cells,embryonic stem cells,osteogenesis"为检索词;应用计算机检索CNKI数据库、万方数据库以"雌激素,骨髓间充质干细胞,脂肪干细胞,胚胎干细胞,诱导成骨"为检索词。结果与结论:最终纳入50篇文献进行分析。雌激素在人体中是最重要的内分泌激素,在干细胞诱导成骨的研究中是一种安全有效的诱导剂,促进干细胞增殖与成骨分化,并在不同干细胞上表现出来的作用特点不同。其主要作用机制为:直接作用于位于干细胞上的雌激素受体发挥作用,也可以诱导产生各种细胞因子间接影响细胞增殖与分化。雌激素的浓度等级、干细胞上雌激素受体基因的编码调控表达转录、构建细胞支架等尚存在一定的争议,需进一步研究。

关键词：干细胞干细胞学术探讨骨髓间充质干细胞脂肪干细胞胚胎干细胞雌激素雌激素受体诱导成骨细胞因子组织工程综述文献

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烫伤血清对大鼠结肠平滑肌细胞骨架的影响

中华烧伤杂志 2010年第5期26卷 336-339页

作者：童庭辉王春艳郭力熊爱兵吴国平李越钢廖毅何晓川四川泸州医学院附属医院整形烧伤科 646000 四川泸州医学院附属医院麻醉科 646000

目的了解烫伤血清对体外培养的大鼠结肠平滑肌细胞骨架的影响,初步探讨伤后胃肠动力障碍的可能机制. 方法分离培养健康成年Wistar大鼠结肠平滑肌细胞.另取2只健康成年Wistar大鼠,其中1只不致伤,另一只致深Ⅱ度烫伤,采集2只大鼠血液分... 详细信息

目的了解烫伤血清对体外培养的大鼠结肠平滑肌细胞骨架的影响,初步探讨伤后胃肠动力障碍的可能机制. 方法分离培养健康成年Wistar大鼠结肠平滑肌细胞.另取2只健康成年Wistar大鼠,其中1只不致伤,另一只致深Ⅱ度烫伤,采集2只大鼠血液分离血清,用培养液配成体积分数20%的烫伤血清和体积分数20%的正常血清.采用随机数字表法将大鼠平滑肌细胞分为烫伤血清组和正常血清组,分别用2种血清培养.于处理1、3、6、12 h时（每组每时相点样本数均为10）,用流式细胞仪检测细胞肌动蛋白表达水平,并采用蛋白质印迹法检测β微管蛋白的相对含量.对数据行t检验. 结果（1）烫伤血清组细胞处理1、3、6、12 h时,肌动蛋白荧光强度分别为59±4、26±6、39±6、42±6,正常血清组分别为95±10、91±10、102±9、97±9,组间比较,差异均有统计学意义（t值分别为10.528、18.069、18.748、16.647,P＜0.05或P＜0.01）;烫伤血清组组内比较,处理3 h时降至最低点,6、12 h持续回升.（2）烫伤血清组处理1、3、6、12 h时,β微管蛋白的相对含量分别为14.44±0.26、8.61±0.19、11.76±0.31、12.13±0.29;正常血清组分别为22.37±1.15、21.87±1.79、23.24±1.55、21.99±2.02,组间比较差异有统计学意义（t值分别为21.176、23.365、23.000、15.273,P值均小于0.01）;烫伤血清组组内比较,处理3 h时达最低,6、12 h有所回升但势头缓慢.结论烫伤血清作用初始阶段,可使体外培养的大鼠肠道平滑肌细胞骨架含量减少,随后细胞骨架含量呈回升趋势,这可能与平滑肌细胞对烫伤血清刺激的耐受、适应和自我修复有关.

关键词：烧伤结肠细胞骨架肌动蛋白类微管蛋白平滑肌