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RNA沉默LASS2基因促进人前列腺癌细胞体外侵袭及其机制研究

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北京大学学报（医学版） 2011年第6期43卷 814-819页

作者：徐晓艳由江峰裴斐张波北京大学基础医学院病理学系北京100191 内蒙古医学院基础医学院病理教研室呼和浩特010059

目的:研究特异性沉默人源性长寿保障基因2(homosapiens longevity assurance homologue 2,LASS2,亦称TMSG1)的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对人前列腺癌细胞系低转移潜能亚系PC-3M-2B4的体外侵袭能力的影响及相关机制。方法:通过脂质体转染法将特异性沉默LASS2基因的siRNA转染入PC-3M-2B4细胞。分别用实时荧光定量PCR(real-time fluorogenetic quantitative PCR,RFQ-PCR)和Western blot方法检测LASS2siRNA对PC-3M-2B4细胞LASS2基因和蛋白表达的抑制作用,筛选有效的siRNA片段;运用液泡型ATPases(vacuo-lar H+-ATPases,V-ATPases)活性测定试剂盒来检测PC-3M-2B4细胞的V-ATPases活性;运用BCECF氢离子敏感荧光探针检测PC-3M-2B4细胞外氢离子浓度;采用Western blot方法分析PC-3M-2B4细胞的基质金属蛋白酶2(ma-trix metalloproteinase 2,MMP-2)的表达及分泌情况;应用明胶酶谱法检测PC-3M-2B4细胞上清液中MMP-2的活性;利用细胞划痕修复实验和Transwell法检测细胞体外迁移及侵袭能力。结果:通过RFQ-PCR和Western blot筛选后,siRNA-2能显著抑制PC-3M-2B4细胞LASS2基因mRNA和蛋白的表达,对mRNA表达的抑制率可达84.5%,对蛋白表达的抑制率可达60%。PC-3M-2B4细胞转染LASS2 siRNA-2后,其V-ATPases的活性及细胞外氢离子浓度明显升高,与空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);MMP-2蛋白的表达及分泌无明显变化,但分泌的MMP-2的活性形式增加,与空白对照组相比明显提高,差异有统计学意义(P<0.05);且细胞的体外迁移及侵袭能力明显高于空白对照组(P<0.05)。结论:特异性siRNA沉默LASS2基因能促进人前列腺癌细胞体外侵袭能力,其机制与沉默LASS2基因后激活V-ATPase,从而使细胞外氢离子浓度升高,进而激活MMP-2有关,提示LASS2基因是一新的肿瘤转移抑制基因。

关键词：前列腺肿瘤肿瘤转移基因,肿瘤抑制 RNA,小分子干扰

不同类型淋巴瘤Survivin的表达及其意义

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癌症 2004年第6期23卷 655-661页

作者：顾霞林汉良中山大学基础医学院病理学教研室广东广州510089

背景与目的:淋巴瘤的诊断与分型是临床病理诊断的难点。本研究检测抗凋亡基因survivin在不同类型淋巴瘤中的表达,并探讨其对淋巴瘤分型的意义。方法:用免疫组化法检测83例淋巴瘤、5例淋巴结反应性增生石蜡标本中survivin蛋白的表达;同时... 详细信息

背景与目的:淋巴瘤的诊断与分型是临床病理诊断的难点。本研究检测抗凋亡基因survivin在不同类型淋巴瘤中的表达,并探讨其对淋巴瘤分型的意义。方法:用免疫组化法检测83例淋巴瘤、5例淋巴结反应性增生石蜡标本中survivin蛋白的表达;同时用RT-PCR检测K562、HL-60、Raji、Jurkat细胞系和以上病例中18例淋巴瘤及2例淋巴结反应性增生新鲜标本中survivinmRNA的表达;对不同类型的淋巴瘤survivin蛋白及mRNA表达进行半定量分析。结果:Survivin蛋白在非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkinslymphoma,NHL)的DLBL(diffuselargeBcelllymphoma)、BL(Burkittlymphoma)、LBL(lymphoblasticlymphoma)中有较高的表达,分别为87.2%(34/39)、100%(2/2)、85.7%(6/7),而在FL(follicularlymphoma)、MALT(extranodalmarginalzoneB-celllymphomaofmucosa-associatedlymphoidtissue)和MZL(marginalzonelymphoma)中表达较低,分别为22.2%、33.3%和40.0%,且多为弱阳性。高表达组(DLBL、BL、LBL)与低表达组(FL、MZL、MALT)之间差异有统计学意义(P<0.01)。并且DLBL中survivin阳性者中位年龄为57岁,明显高于阴性者41岁。霍奇金淋巴瘤(Hodgkinslymphoma,HL)中大部分R-S(Reed-Sternberg)细胞表达survivin蛋白。

关键词：淋巴瘤 Survivin 病理分型免疫组化 RT-PCR

MTA3在肺癌细胞中调控细胞凋亡机制的研究

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中国肺癌杂志 2015年第10期18卷 610-615页

作者：李海英王庆苓张琳包海军张恒徐州医学院基础医学院病理教研室徐州221000

背景与目的肿瘤转移基因(metastasis associated gene,MTA)是一个肿瘤候选基因家族,主要包括MTA1、MTA2、MTA3,已有的研究证实在不同肿瘤中MTA3发挥着相反的作用,本研究旨在探讨MTA3在肺癌细胞中调控细胞凋亡方面的影响。方法应用Wester... 详细信息

背景与目的肿瘤转移基因(metastasis associated gene,MTA)是一个肿瘤候选基因家族,主要包括MTA1、MTA2、MTA3,已有的研究证实在不同肿瘤中MTA3发挥着相反的作用,本研究旨在探讨MTA3在肺癌细胞中调控细胞凋亡方面的影响。方法应用Western blot方法和Real-time PCR方法检测肺癌细胞系A549和H157中MTA3的转染效率,流式细胞仪方法检测上调/下调MTA3后肺癌细胞凋亡情况,Western blot方法检测下调MTA3后凋亡相关基因的表达。结果在肺癌细胞系A549和H157中干扰MTA3后则促进细胞凋亡,同时引起凋亡相关蛋白Bax、ClevedCaspase-3、p-PARP表达上调及Bcl-2表达下调。结论 MTA3在肺癌细胞系A549和H157细胞中通过抑制凋亡相关基因的表达抑制细胞凋亡。

关键词：肺肿瘤肿瘤转移相关基因3 细胞凋亡 A549 H157

食管鳞状细胞癌组织中核干细胞因子蛋白和mRNA的半定量表达

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中华肿瘤杂志 2008年第2期30卷 125-128页

作者：张功员尹磊李晟磊邢文英赵秋民乐晓平高冬玲陈奎生张云汉张钦宪郑州大学基础医学院组织与胚胎学教研室 450052 郑州大学基础医学院病理学教研室 450052

目的探讨食管鳞状细胞癌组织中核干细胞因子（NS）蛋白和mRNA的半定量表达情况。方法应用免疫组化SABC法和逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法，检测62例食管鳞状细胞癌组织及其相对应的31例癌旁不典型增生组织和62例正常食管黏膜组织中NS... 详细信息

目的探讨食管鳞状细胞癌组织中核干细胞因子（NS）蛋白和mRNA的半定量表达情况。方法应用免疫组化SABC法和逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法，检测62例食管鳞状细胞癌组织及其相对应的31例癌旁不典型增生组织和62例正常食管黏膜组织中NS蛋白和mRNA的半定量表达情况。结果正常食管黏膜组织、癌旁不典型增生组织和食管鳞状细胞癌组织中，NS蛋白阳性表达率分别为17．7％（11／62）、41．9％（13／31）和69．4％（43／62），组间比较，差异有统计学意义（X2=33．676，P〈0．01）。食管鳞状细胞癌组织中，Ns蛋白阳性表达率与其组织学分级、侵袭程度及淋巴结转移密切相关（均为P〈0．05），而与年龄、性别和病理分型无关（均为P〉0．05）。食管鳞状细胞癌组织中，NS mRNA的相对含量（0．971±0．121）高于癌旁不典型增生组织（0．913±0．085）和正常食管黏膜组织（0．866±0．103），组间比较，差异有统计学意义（F=14．829，P〈0．01）。不同组织学分级、不同侵袭程度及有无淋巴结转移的食管鳞状细胞癌组织之间，NS mRNA的相对含量差异均有统计学意义（均为P〈0．05），NS mRNA的相对含量与年龄、性别和病理分型无关（均为P〉0．05）。结论食管鳞状细胞癌组织中，NS mRNA的表达升高，其高表达与食管鳞状细胞癌的发生发展有关。

关键词：食管肿瘤鳞状细胞癌核干细胞因子 mRNA

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Notch信号与心脏干细胞关系的研究进展

中国细胞生物学学报 2014年第6期36卷 818-825页

作者：蒋晓帆丁然然姜汉国揭伟广东医学院基础医学院病理学教研室湛江524023

Notch信号是广泛存在于各种动物细胞中高度保守的信号途径,在干细胞生物学功能中发挥重要作用。心脏干细胞(cardiac stem cells,CSCs)是存在于心脏特殊微环境下的多潜能干细胞,其表面存在Notch受体,而与其相邻的细胞可表达Notch配体,提... 详细信息

Notch信号是广泛存在于各种动物细胞中高度保守的信号途径,在干细胞生物学功能中发挥重要作用。心脏干细胞(cardiac stem cells,CSCs)是存在于心脏特殊微环境下的多潜能干细胞,其表面存在Notch受体,而与其相邻的细胞可表达Notch配体,提示心脏干细胞中的Notch信号在某些条件下可被活化。该文从Notch信号通路的组成和激活、CSCs的界定与来源、CSCs主要类型的一般生物学特征及Notch信号通路与CSCs形成、分化和增殖的关系等方面进行综述,并展望了基于CSCs在心肌再生相关转化医学研究中的前景。

关键词： Notch信号心脏干细胞起源分化增殖心肌再生

鼠Mincle蛋白B细胞抗原表位预测及多克隆抗体制备

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免疫学杂志 2011年第8期27卷 683-687页

作者：郑小莉张艺谢晓东罗波刘佳佳泸州医学院基础医学院生物化学教研室 646000 泸州医学院基础医学院医学机能实验室 646000 泸州医学院基础医学院教务处实习科 646000 泸州医学院基础医学院基础医学院免疫学教研室 646000

目的预测鼠Mincle蛋白的B细胞抗原表位及制备其多克隆抗体。方法以鼠Mincle蛋白氨基酸序列为基础,利用signalP3.0和TMHMM Server在线软件分析其信号肽和跨膜结构,利用DNAstar软件预测其二级结构、蛋白骨架区的柔韧性、亲水性、表面可能... 详细信息

目的预测鼠Mincle蛋白的B细胞抗原表位及制备其多克隆抗体。方法以鼠Mincle蛋白氨基酸序列为基础,利用signalP3.0和TMHMM Server在线软件分析其信号肽和跨膜结构,利用DNAstar软件预测其二级结构、蛋白骨架区的柔韧性、亲水性、表面可能性及表面抗原性指数;融合表达PET30a(+)/Mincle蛋白并通过镍层析柱纯化后,免疫兔获得Mincle多克隆抗体。结果 Mincel蛋白是一种跨膜蛋白质,N末端第1-22号氨基酸可能位于蛋白的表面并可能为抗原表位;成功构建了重组载体PET30a(+)/Mincle,转化大肠杆菌BL21后表达包涵体融合蛋白,利用镍亲和层析得到了无生物活性的高纯度重组蛋白,纯化蛋白免疫兔,制备了滴度达1:128 000的多克隆抗体;Western-blot检测显示抗体特异性高。结论 Mincle蛋白N端即胞外区的第1-22氨基酸可作为Mincle蛋白的主要抗原表位区以制备Mincle多克隆抗体。

关键词：鼠Mincle蛋白 B细胞抗原表位多克隆抗体

TRIM24介导肺癌细胞吉非替尼耐药机制探讨

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中国肺癌杂志 2016年第1期19卷 24-29页

作者：李海英王庆苓包海军张恒庄莹徐州医学院基础医学院病理教研室徐州221000

背景与目的表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitor,EGFR-TKI)的原发和继发性耐药已成为其在临床肺癌治疗中的拦路虎,在肺癌组织中研究发现TRIM24呈高表达状态,在肺癌细胞中能... 详细信息

背景与目的表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitor,EGFR-TKI)的原发和继发性耐药已成为其在临床肺癌治疗中的拦路虎,在肺癌组织中研究发现TRIM24呈高表达状态,在肺癌细胞中能调控细胞增殖、周期和细胞凋亡,本研究旨在进一步探讨TRIM24调控肺癌细胞吉非替尼耐药的分子机制。方法应用MTT方法和流式细胞仪检测干扰TRIM24及干扰TRIM24后加入吉非替尼对肺癌细胞系增殖能力及凋亡率的抑制率的变化,同时应用Western blot方法检测凋亡相关基因的变化及AKT信号通路中蛋白的表达。结果在A549细胞中使用干扰TRIM24可以提高吉非替尼对肿瘤增殖能力的抑制率,增加吉非替尼诱导的凋亡水平,同时干扰TRIM24及干扰TRIM24加入吉非替尼后促凋亡相关基因p-BAD、Bcl-2和AKT及AKT信号通路相关蛋白PIK3CA均出现降低。结论 TRIM24能够调控肺癌细胞吉非替尼耐药,并且通过AKT信号通路引起肺癌细胞EGFRTKI耐药。

关键词：肺肿瘤吉非替尼表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂

同侧肾盂输尿管浸润性尿路上皮癌1例报道及文献复习

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肿瘤防治研究 2014年第11期41卷 1258-1260页

作者：叶入裴肖秀丽李鑫伏凯文龙汉安泸州医学院病理学教研室泸州646000

0引言尿路上皮癌是泌尿系统常见的恶性上皮肿瘤,同时同侧肾盂、输尿管浸润性尿路上皮癌,肉瘤样变异型伴鳞状分化非常罕见,据统计[1-2]肾盂癌占上尿路恶性肿瘤的5%~7%,原发性输尿管恶性肿瘤更少见,发生率只占肾盂癌的1/4,但近年来输尿管... 详细信息

0引言尿路上皮癌是泌尿系统常见的恶性上皮肿瘤,同时同侧肾盂、输尿管浸润性尿路上皮癌,肉瘤样变异型伴鳞状分化非常罕见,据统计[1-2]肾盂癌占上尿路恶性肿瘤的5%~7%,原发性输尿管恶性肿瘤更少见,发生率只占肾盂癌的1/4,但近年来输尿管恶性肿瘤发病率呈轻微上升趋势。现报道泸州医学院同侧肾盂输尿管浸润性尿路上皮癌1例并复习相关文献,以增强对该病的认识,提高诊治水平。

关键词：肾盂肿瘤输尿管肿瘤浸润性尿路上皮癌

非小细胞肺癌中Axin与β-连环素异常表达的关系

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中华病理学杂志 2005年第8期34卷 519-523页

作者：徐洪涛王亮林东刘洋刘楠王恩华中国医科大学基础医学院病理学教研室中国医科大学基础医学院病理学教研室 110001

目的探讨Axin(axisinhibitionprotein)和β连环素(βcatenin)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达、βcatenin突变及它们与各临床病理因素的关系。方法采用免疫组织化学(SP法)和直接测序方法对100例NSCLC标本中Axin和βcatenin的表达和βcate... 详细信息

目的探讨Axin(axisinhibitionprotein)和β连环素(βcatenin)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达、βcatenin突变及它们与各临床病理因素的关系。方法采用免疫组织化学(SP法)和直接测序方法对100例NSCLC标本中Axin和βcatenin的表达和βcatenin基因突变进行了检测。结果βcatenin的细胞膜表达降低率为80.0%,细胞核表达率为26.0%。高、中分化和低分化NSCLC中,βcatenin的表达降低率分别为70.0%(35/50)和90.0%(45/50),差异有统计学意义(P=0.012)。有淋巴结转移和无淋巴结转移NSCLC中βcatenin表达降低率分别为87.3%(48/55)和71.1%(32/45),差异有统计学意义(P=0.044)。Axin的阳性表达率为48.0%,高、中分化和低分化NSCLC中,Axin的阳性率分别为60.0%(30/50)和36.0%(18/50),差异有统计学意义(P=0.016)。在βcatenin核表达阳性的病例中,Axin阳性表达率为15.4%(4/26),低于βcatenin核表达阴性的病例(59.5%,44/74)(P<0.001)。100例肺癌新鲜标本中未发现βcatenin基因第三外显子突变。结论βcatenin的膜表达降低与NSCLC的低分化和淋巴结转移相关,Axin的表达与NSCLC的低分化和βcatenin的细胞核蓄积负相关。βcatenin基因第三外显子的突变可能不是NSCLC中βcatenin蛋白异常表达的主要原因。

关键词：钙黏着糖蛋白类癌,非小细胞肺免疫组织化学序列分析,DNA