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转化生长因子β1/整合素连接激酶信号通路在大鼠肾小管上皮细胞转分化中的作用及大黄素对其的干预效应

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中西医结合学报 2009年第1期7卷 59-64页

作者：陈廷芳陈明秦建华王明勇四川省泸州医学院附属医院肾内科四川泸州646000 四川省泸州医学院附属医院传染免疫研究室四川泸州646000

目的:研究转化生长因子β1/整合素连接激酶(transforming growth factor-beta1/integrin-linked kinase,TGF-β1/ILK)信号通路在白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)诱导的大鼠肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化(tubular epithelial-myofibroblast transdifferentiation,TEMT)中的作用,并探讨大黄素是否是通过抑制TGF-β1/ILK信号通路而影响TEMT。方法:以体外培养的正常大鼠肾小管上皮细胞株(NRK52E)为研究对象,分为空白对照组、大黄素对照组、IL-1β诱导组、大黄素阻断组、TGF-β1Ⅰ型受体阻断剂(SB431542)阻断组、大黄素和SB431542共同阻断组、大黄素预处理组和大黄素逆转组。NRK52E细胞在上述处理因素下培养48h后,在倒置相差显微镜下观察细胞形态变化;免疫组化双标法检测细胞表型标志物α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscleactin,α-SMA)和E-钙黏连素(E-cadherin)的表达;免疫组化单染法检测NRK52E细胞TGF-β1和ILK的表达,采用图像分析软件定量分析免疫组化染色结果;酶联免疫吸附测定法测定NRK52E细胞分泌的纤维连接蛋白(fibronectin,FN)含量。结果:与空白对照组比较,IL-1β诱导TEMT的同时TGF-β1和ILK表达增加(P<0.05),大黄素可明显抑制IL-1β诱导的上述变化(P<0.05)。阻断TGF-β1信号通路后,IL-1β诱导的TEMT明显受抑,且ILK表达减少。与大黄素阻断剂组比较,大黄素预处理不能预防IL-1β诱导的TEMT,大黄素不能逆转IL-1β诱导的TEMT。相关分析显示,TGF-β1表达与α-SMA、FN、ILK表达呈正相关,与E-钙黏连素表达呈负相关。ILK表达与α-SMA、FN表达呈正相关,与E-钙黏连素表达呈负相关。结论:IL-1β通过激活TGF-β1/ILK信号通路蛋白而诱导TEMT,大黄素通过抑制TGF-β1/ILK信号通路蛋白而抑制IL-1β诱导TEMT。

关键词：白细胞介素1β 大黄素转化生长因子β1 整合素连接激酶大鼠

单用A23187快速诱导K562细胞分化成树突细胞的研究

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中华血液学杂志 2005年第7期26卷 408-412页

作者：赵春亭王宝中孟冬梅曹永献杨颉赵新东陈兵青岛大学医学院附属医院血液内科 266003 青岛大学医学院附属医院检验科免疫室 266003

目的探索一种快速、简便、廉价而高效获取树突细胞(DC)的方法。方法通过单用A23187、A23187+GMCSF或联合细胞因子(GMCSF、IL4及TNFα)将K562细胞诱导分化为DC(K562DC),倒置显微镜下观察细胞形态并摄相,流式细胞术检测K562DC表面分子表... 详细信息

目的探索一种快速、简便、廉价而高效获取树突细胞(DC)的方法。方法通过单用A23187、A23187+GMCSF或联合细胞因子(GMCSF、IL4及TNFα)将K562细胞诱导分化为DC(K562DC),倒置显微镜下观察细胞形态并摄相,流式细胞术检测K562DC表面分子表达情况。用MTT法检测K562DC刺激异基因淋巴细胞增殖及介导T细胞杀伤靶细胞的能力。结果上述3种细胞因子组合均能诱导K562细胞向成熟DC分化,均高表达CD1a、CD80、HLADR、CD83和CD86;含A23187的两组诱导72h获得DC数量分别为(69.5±17.2)%、(73.1±13.9)%,均高于细胞因子组的诱导率[(28.5±12.3)%],也高于细胞因子组诱导7d后的诱导率[(51.2±10.7)%](P值均0.05)。结论单用A23187可快速(72h以内)诱导K562细胞向成熟DC转化,与联合细胞因子相比,该方法所获得的DC更趋成熟从而更适用于临床免疫治疗。单用A23187快速诱导白血病细胞生成DC是一种快速、简便、廉价而高效获取DC的方法。

关键词： A23187 诱导 K562细胞树突细胞离子载体造血细胞生长因子

单侧输尿管结扎对大鼠肾间质PI3K/AKT表达的影响

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基础医学与临床 2006年第12期26卷 1345-1349页

作者：彭红霞陈明张超欧三桃刘斌泸州医学院附属医院肾内科肾功能保护研究室

目的探讨PI3K/AKT信号通路是否参与肾间质纤维化的发病过程。方法将30只SD大鼠随机分为假手术组、UUO模型组,模型组行左侧输尿管结扎术。术后5、10和15 d分别处死各组中的5只大鼠,取左肾行HE和Masson染色,并用免疫组化方法检测肾小管-... 详细信息

目的探讨PI3K/AKT信号通路是否参与肾间质纤维化的发病过程。方法将30只SD大鼠随机分为假手术组、UUO模型组,模型组行左侧输尿管结扎术。术后5、10和15 d分别处死各组中的5只大鼠,取左肾行HE和Masson染色,并用免疫组化方法检测肾小管-间质中TGF-β1、AKT1、磷酸化AKT1的表达。结果模型组大鼠肾小管-间质细胞增多,肾小管基底膜增厚皱缩,纤维化明显,随时间进展而加重。不同时间的UUO模型组肾组织AKT1、磷酸化AKT1、TGF-β1表达显著高于假手术组(P<0.01);于第10天模型组AKT1表达达高峰,于第15天磷酸化AKT1、TGF-β1表达达高峰;UUO大鼠肾组织第5天和第15天TGF-β1的表达与AKT1活性呈正相关,第10天和第15天梗阻肾的AKT1活性与肾小管-间质纤维化指数呈正相关(均P<0.05)。结论AKT1、磷酸化AKT1在大鼠梗阻性肾病模型肾小管-间质中表达及AKT1活性明显增加,提示PI3K/AKT信号通路可能参与肾小管-间质纤维化的过程。

关键词： PI3K/AKT信号通路 TGF-β1 肾小管-间质纤维化

非小细胞肺癌细胞株c-erbB-2基因的表达

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泸州医学院学报 2007年第4期30卷 269-272页

作者：曹新梅任德莲石华山刘代玉张岱权泸州医学院免疫教研室附属医院四川泸州646000 泸州医学院免疫教研室附属医院血液内科四川泸州646000 泸州医学院免疫教研室附属医院中医科四川泸州646000

目的:分析非小细胞肺癌细胞株中人类表皮生长因子受体-2(c-erbB-2)基因的mRNA水平和蛋白水平。方法:采用RT-PCR测定肺腺癌(CALU-3和A549)和鳞癌NCL-H520细胞株c-erbB-2 mRNA水平;采用流式细胞术检测CALU-3、A549和NCL-H520细胞株c-erbB-... 详细信息

目的:分析非小细胞肺癌细胞株中人类表皮生长因子受体-2(c-erbB-2)基因的mRNA水平和蛋白水平。方法:采用RT-PCR测定肺腺癌(CALU-3和A549)和鳞癌NCL-H520细胞株c-erbB-2 mRNA水平;采用流式细胞术检测CALU-3、A549和NCL-H520细胞株c-erbB-2蛋白水平。结果:肺腺癌CALU-3细胞株c-erbB-2mRNA水平均高于腺癌A549和鳞癌NCL-H520细胞株,差异有统计学意义(P0.05);CALU-3细胞株c-erbB-2蛋白的阳性率均高于A549和NCL-H520细胞株,差异有统计学意义(P0.05)。结论:c-erbB-2基因在肺腺癌CALU-3细胞株中的表达均高于腺癌A549和鳞癌NCL-H520细胞株。

关键词：癌,非小细胞肺癌基因,c—erbB-2 基因表达

急性淋巴细胞白血病白细胞磷酸化蛋白质分析方法的建立及初步分析

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中国组织工程研究与临床康复 2007年第7期11卷 1293-1295页

作者：段春燕何涛王松郑小莉景莉泸州医学院生物化学教研室/医学分子生物学实验室泸州医学院附属医院四川省泸州市646000

目的:在建立白细胞磷酸化蛋白质分离分析方法的基础上对急性淋巴细胞白血病白细胞细胞外信号调节激酶相关磷酸化蛋白质进行初步分析。方法:选择2005-01/2006-03于泸州医学院附属医院血液内科初诊住院的白血病患者10例,20～40岁,均经MIC... 详细信息

目的:在建立白细胞磷酸化蛋白质分离分析方法的基础上对急性淋巴细胞白血病白细胞细胞外信号调节激酶相关磷酸化蛋白质进行初步分析。方法:选择2005-01/2006-03于泸州医学院附属医院血液内科初诊住院的白血病患者10例,20～40岁,均经MICM分类法确诊为急性淋巴细胞性白血病,无合并严重感染,心、肺、肾、肝等重要脏器疾患。健康自愿者为泸州医学院学生10名,23～32岁。分离健康自愿者与急性淋巴细胞性白血病患者新鲜外周血白细胞,并均随机分为刺激组、抑制剂组、对照组。刺激组加入表皮生长因子(40μg/L);抑制剂组加入细胞外信号调节激酶特异性抑止剂UO126(10μg/L)和表皮生长因子(40μg/L);对照组加入等量的培养基,用Bradford法测定细胞蛋白质含量,BDTM Phophoprotein EnrichmentKit分离富集白细胞磷酸化蛋白质,SDS-PAGE分离磷酸化蛋白质,银染法染色,采用ScionImage软件分析电泳结果。结果:10例急性淋巴细胞白血病患者及10名正常健康志愿者均进入结果分析。①电泳图谱显示每条泳道中蛋白质条带清晰,其相对分子量主要介于26000～36000Da以及47000～65000Da之间。A、D蛋白质谱带在健康自愿者中的表达较急性淋巴细胞性白血病患者增强;B蛋白质谱带在急性淋巴细胞性白血病患者中表达较健康自愿者增强;D、E蛋白质谱带分别在健康自愿者、急性淋巴细胞性白血病患者刺激组的表达明显较抑制剂组增强。②在使用表皮生长因子刺激后,E蛋白质谱带的灰度值降低,其磷酸化水平明显增高;UO126抑制后,其磷酸化水平降低。结论:采用本实验建立的亲和层析富集磷酸化蛋白质、SDS-PAGE分离、专业软件分析等方法对急性淋巴细胞白血病白细胞细胞外信号调节激酶相关磷酸化蛋白质进行动态的分析,其方法较简便、结果可信,可为细胞信息传递磷酸化蛋白质组的研究奠定了基础。

关键词：急性淋巴细胞白血病十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳细胞外信号调节激酶

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儿童血管瘤内皮细胞功能测定及病因学意义

中华小儿外科杂志 2002年第2期23卷 106-107页

作者：吕麟亚邓辉胜刘铭谢才芬范琪李代渝四川泸州医学院附属医院儿外科 646000 四川泸州医学院附属医院心血管内科 646000 四川泸州医学院附属医院核医学646000 四川泸州医学院附属医院中心实验室 646000

目的　探讨血管瘤内皮细胞功能及其病因学意义。方法　采用放射免疫和硝酸还原酶法测定儿童血管瘤 30例瘤体内皮素 (ET)、一氧化氮 (NO)及外周血ET、NO水平 ,以 2 0例斜疝患儿外周血作为对照。结果　血管瘤患儿瘤体ET(6 6 .3± 12 .5 )p... 详细信息

目的　探讨血管瘤内皮细胞功能及其病因学意义。方法　采用放射免疫和硝酸还原酶法测定儿童血管瘤 30例瘤体内皮素 (ET)、一氧化氮 (NO)及外周血ET、NO水平 ,以 2 0例斜疝患儿外周血作为对照。结果　血管瘤患儿瘤体ET(6 6 .3± 12 .5 )pg/ml显著高于外周血 (5 5 .3± 13.1)pg/ml(P 0 .0 5 )。增生期血管瘤体ET(75 .6± 12 .5 ) pg/ml高于退化期 (6 5±10 .2 ) pg/ml及退化完成期 (6 2 .5± 7.3) pg/ml(P 0 .0 5 ) ,但增生期瘤体NO(2 7.9± 2 .1) pg/ml降低 (P <0 .0 1)。结论　增生期血管瘤内皮细胞具有活跃的合成分泌ET的功能 ,而合成分泌NO功能改变不明显 ,局部ET与NO水平的失调。

关键词：内皮缩血管肽类血管瘤内皮生长因子一氧化氮病因学儿童

纤维蛋白原Bβ链基因-1420G/A、-993C/T和-854G/A多态性与冠状动脉粥样硬化性心脏病的关联研究

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中华医学遗传学杂志 2006年第6期23卷 622-626页

作者：邢宏运蔡望伟李晓明符俏刘国勋四川省泸州医学院附属医院血液科 646000 海南医学院生物化学教研室海南省人民医院神经内科广东医学院附属医院血液研究室

目的调查健康人和冠状动脉粥样硬化性心脏病(简称冠心病)患者的纤维蛋白原B(fibrino-genB,FGB)β基因-1420G/A、-993C/T和-854G/A的基因多态性频率分布,以及与血浆Fg水平的关系。方法应用等位基因特异性PCR扩增技术和限制性片段长度多... 详细信息

目的调查健康人和冠状动脉粥样硬化性心脏病(简称冠心病)患者的纤维蛋白原B(fibrino-genB,FGB)β基因-1420G/A、-993C/T和-854G/A的基因多态性频率分布,以及与血浆Fg水平的关系。方法应用等位基因特异性PCR扩增技术和限制性片段长度多态性技术对186例冠心病患者和149名健康对照者进行分析。比浊法测定血浆Fg浓度。结果等位基因频率-1420A在冠心病组为0.33,在对照组为0.26,冠心病组明显比对照组升高,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。等位基因频率-993T和-854A在两组之间无差别。Logistic回归分析显示β-1420G/A与冠心病相关(OR=1.922,P=0.003)。冠心病组血浆Fg水平(3.87±1.75)g/L较健康人组(3.10±0.77)g/L明显升高,且差异有统计学意义(P<0·05)。结论纤维蛋白原Bβ-1420G/A可能与冠心病发病相关联。

关键词：纤维蛋白原遗传多态性冠状动脉粥样硬化性心脏病

丙型肝炎病毒NS4B对肝细胞c-myc和ras蛋白表达的影响

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肿瘤防治研究 2006年第10期33卷 736-738页

作者：陈霞李昌平徐建玉陈枫四川泸州医学院附属医院消化内科 646000 遂宁市人民医院消化内科泸州医学院附属医院传染免疫实验室

目的研究丙型肝炎病毒非结构蛋白4B(NS4B)对肝细胞内癌基因c-myc和ras蛋白表达的影响,从而探讨其在肝癌发生机制中的可能作用。方法通过脂质体介导法,将空白载体PXCN2及丙型肝炎病毒NS4B重组质粒PCXN2-NS4B引入Chang肝细胞内,并G418筛... 详细信息

目的研究丙型肝炎病毒非结构蛋白4B(NS4B)对肝细胞内癌基因c-myc和ras蛋白表达的影响,从而探讨其在肝癌发生机制中的可能作用。方法通过脂质体介导法,将空白载体PXCN2及丙型肝炎病毒NS4B重组质粒PCXN2-NS4B引入Chang肝细胞内,并G418筛选作稳定传代,RT-PCR法鉴定质粒成功转染入肝细胞内,免疫细胞化学方法观察细胞内c-myc和ras表达情况。结果获得具有G418抗性的Chang肝细胞;空白对照组及空白载体组无c-myc表达,转染NS4B组c-myc表达率为(21.3±1.2)%,与空白对照组及空白载体组比较差异有显著性;空白对照组及空白载体组ras弱阳性表达,转染NS4B组ras呈阳性表达,与空白对照组及空白载体组比较差异有显著性。结论丙型肝炎病毒NS4B可促进癌基因c-myc和ras表达,并可能在丙型肝炎病毒的致癌机制中起重要作用。

关键词：丙型肝炎病毒非结构蛋白4B c-myc ras G418

采用荧光定量PCR溶解曲线法监测人TCR alpha链CDR3谱系漂移技术的初步探讨

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中国免疫学杂志 2009年第8期25卷 727-730页

作者：汤贤英孙永苹马锐朱红倩田祖国孙万邦姚新生遵义医学院免疫学教研室遵义563003 贵州省人民医院血液内科贵阳563000 遵义医学院附属医院血液内科遵义563003

目的:初步探讨荧光定量PCR溶解曲线分析技术监测人外周血T细胞TCRalpha链CDR3谱系漂移(单/寡/多克隆增生)。方法:提取4例正常人、2例淋巴瘤型白血病患者PBMC中的总RNA,逆转录成cDNA,以32个人TCRalpha链胚系可变区基因家族(TRAV)设计上... 详细信息

目的:初步探讨荧光定量PCR溶解曲线分析技术监测人外周血T细胞TCRalpha链CDR3谱系漂移(单/寡/多克隆增生)。方法:提取4例正常人、2例淋巴瘤型白血病患者PBMC中的总RNA,逆转录成cDNA,以32个人TCRalpha链胚系可变区基因家族(TRAV)设计上游引物,共同的TCRalpha胚系链恒定区基因家族(TRAC)设计下游引物,荧光定量PCR(FQ-PCR)扩增32个TRAV基因各家族CDR3谱系,溶解曲线法分析各家族CDR3谱系的单/寡/多克隆增生。结果:正常人外周血T细胞TCRalpha链32个家族CDR3表达频率不一致,各家族PCR产物的溶解曲线谱型图(melting curve spectratyping)呈现熔点不同的CDR3多态性,为多克隆增生的高斯分布,2例淋巴瘤型白血病患者外周血T细胞TCRalpha链32个家族CDR3表达频率不一致,部分家族呈缺失状态,患者各家族PCR产物的溶解曲线谱型图上,多数家族为多克隆增生的高斯分布,但每个患者均出现数量不等的单克隆和寡克隆增生家族。结论:荧光定量PCR溶解曲线分析TCRalpha链CDR3谱系漂移技术方法稳定简便,能较好地监测正常人和临床样本外周血T细胞TCRalpha链CDR3谱系漂移(单/寡/多克隆增生)。

关键词： T淋巴细胞受体互补决定区3 荧光定量PCR 溶解曲线