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Tet调控STGC3基因表达的CNE2细胞系裸鼠成瘤实验性研究

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生物化学与生物物理进展 2007年第4期34卷 359-365页

作者：邱青朝胡波贺修胜罗桥龙治峰唐国华廖银花南华大学肿瘤研究所衡阳421001

STGC3基因是一个新近克隆的肿瘤相关基因,前期的体外实验研究结果表明,STGC3基因在CNE2鼻咽癌细胞系高表达,可明显抑制CNE2的生长增殖.采用Tet/pTRE-STGC3/CNE2细胞系接种于裸鼠皮下,以强力霉素(Dox)诱导STGC3基因高表达,观测STGC3基因... 详细信息

STGC3基因是一个新近克隆的肿瘤相关基因,前期的体外实验研究结果表明,STGC3基因在CNE2鼻咽癌细胞系高表达,可明显抑制CNE2的生长增殖.采用Tet/pTRE-STGC3/CNE2细胞系接种于裸鼠皮下,以强力霉素(Dox)诱导STGC3基因高表达,观测STGC3基因高表达对CNE2裸鼠体内成瘤的影响,并探讨其可能作用机制.运用RT-PCR、蛋白质印迹及免疫组织化学方法,分别从mRNA和蛋白质水平,分析瘤组织中STGC3基因的表达;用流式细胞仪检测移植瘤组织内肿瘤细胞的凋亡情况;用免疫组织化学方法,检测移植瘤组织凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达.研究结果显示,STGC3蛋白表达主要定位于细胞核内,Dox诱导STGC3基因在Tet/pTRE-STGC3/CNE2细胞系高表达,Tet/pTRE-STGC3/CNE2细胞系裸鼠体内成瘤受到明显抑制,与对照组比较,移植瘤成瘤时间晚、生长慢、肿块小、细胞凋亡率高,Bax蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达减少,差异有显著性意义(P研究结果与前期体外实验结果一致,进一步证明STGC3基因对肿瘤细胞生长具有抑制作用.

关键词：鼻咽癌 STGC3基因裸鼠 Tet-on调控表达系统

一种组织微阵列供体取样与受体蜡块制作的新器具和新方法

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生物化学与生物物理进展 2005年第5期32卷 474-479页

作者：范松青张文玲熊炜马键周洁周鸣肖炳燚欧阳珏张秋红谭琛李桂源中南大学肿瘤研究所长沙410078

发明一种组织微阵列供体取样与受体蜡块制作的新器具和新方法.利用这种新器具和新方法成功地制作了分别含448和390个供体组织点阵的组织微阵列受体蜡块和切片.这种新方法制作的组织微阵列切片经H&E染色,显微镜下观察证实,所有切片均无... 详细信息

发明一种组织微阵列供体取样与受体蜡块制作的新器具和新方法.利用这种新器具和新方法成功地制作了分别含448和390个供体组织点阵的组织微阵列受体蜡块和切片.这种新方法制作的组织微阵列切片经H&E染色,显微镜下观察证实,所有切片均无供体点阵组织脱落,切片厚度适中,组织结构无挤压变形,细胞形态均匀一致.免疫组化检测P53和P16蛋白在组织微阵列切片与其相应的常规组织切片中的表达结果完全一致.这种组织微阵列供体取样与受体蜡块制作新器具和新方法成本低廉,操作简便,具有在实验室推广应用的价值.

关键词：组织微阵列组织阵列仪免疫组化

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泛素化在调控铁死亡中的作用

生物化学与生物物理进展 2024年第6期51卷 1269-1283页

作者：曹灿陶永光石颖中南大学肿瘤研究所长沙410078

铁死亡是一种由脂质过氧化驱动的铁依赖性的新的细胞死亡方式,越来越多的证据表明,铁死亡与各种病理状态有关,如神经退行性疾病、糖尿病肾病、癌症等,脂质过氧化驱动的铁死亡可能促进或抑制这些疾病的发生发展,细胞中抗氧化系统通过抑... 详细信息

铁死亡是一种由脂质过氧化驱动的铁依赖性的新的细胞死亡方式,越来越多的证据表明,铁死亡与各种病理状态有关,如神经退行性疾病、糖尿病肾病、癌症等,脂质过氧化驱动的铁死亡可能促进或抑制这些疾病的发生发展,细胞中抗氧化系统通过抑制脂质过氧化在抵抗铁死亡过程中发挥着重要作用。铁死亡的关键通路有以SLC7A11-GPX4为关键分子的氨基酸代谢通路、以铁蛋白或转铁蛋白为主的铁代谢通路,以及脂质代谢通路。铁死亡的发生受到细胞内蛋白质的调节,这些蛋白质会发生各种翻译后修饰,包括泛素化修饰。泛素-蛋白酶体系统(ubiquitin-proteasome system,UPS)是细胞内主要降解系统之一,通过酶促级联反应催化泛素分子标记待降解蛋白,随后由蛋白酶体识别并降解目标蛋白质。UPS根据其降解底物的不同在调节铁死亡的反应中发挥双重作用。UPS通过促进铁死亡关键分子(如SLC7A11、GPX4、GSH)以及抗氧化系统成分(如NRF2)的泛素化降解从而促进铁死亡,也可以通过促进脂质代谢通路中相关分子(如ACSL4、ALOX15)的泛素化降解从而抑制铁死亡。本综述介绍泛素化修饰在调控铁死亡进程中作用的最新研究进展,总结了已发表的关于E3泛素连接酶和去泛素酶调控铁死亡的研究,归纳了泛素连接酶、去泛素酶调控铁死亡的作用靶点,有助于确定人类疾病中新的预后指标,为这些疾病提供潜在的治疗策略。

关键词：铁死亡泛素化去泛素化脂质过氧化

Tet调控的脑相对特异性新基因LRRC4表达细胞系的构建

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生物化学与生物物理进展 2005年第4期32卷 325-330页

作者：张秋红王莉莉彭聪曹利王洁如李小玲李桂源中南大学肿瘤研究所长沙410078

LRRC4是一个在脑相对特异性表达的富亮氨酸重复超家族新成员,在神经胶质瘤表达明显下调或缺失且具有抑制脑胶质瘤细胞生长的潜能. 利用Tet-on基因表达系统,经过两轮转染,先后将调控质粒pTet-on和表达质粒pTRE-2hyg-LRRC4转染U251细胞系... 详细信息

LRRC4是一个在脑相对特异性表达的富亮氨酸重复超家族新成员,在神经胶质瘤表达明显下调或缺失且具有抑制脑胶质瘤细胞生长的潜能. 利用Tet-on基因表达系统,经过两轮转染,先后将调控质粒pTet-on和表达质粒pTRE-2hyg-LRRC4转染U251细胞系,分别用G418和潮霉素Hygromycin进行两次筛选. 在第一轮挑取的80个克隆中,利用pTRE-2hyg-luciferase报告基因进行最佳的低背景高表达的pTet-on细胞克隆筛选,在通过量效关系和动力学检测筛选的最佳克隆基础上,再进行pTRE-2hyg-LRRC4的转染,并通过RT-PCR和RNA印迹检测,成功获得了两个具有良好诱导性Tet调控的LRRC4双稳定表达细胞系,为进一步阐明LRRC4在脑胶质瘤发生发展中的作用,提供有利的研究基础和理想的实验平台.

关键词： LRRC4 Tet-on基因表达系统 Doxycycline

脑组织特异性基因/脑胶质瘤抑瘤基因LRRC4的功能研究进展

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生物化学与生物物理进展 2007年第12期34卷 1234-1239页

作者：武明花李小玲李桂源中南大学肿瘤研究所长沙410078

LRRC4是一个脑组织相对特异性表达基因,是采用表达序列标签(EST)介导的定位-候选克隆策略结合5′-RACE技术从染色体7q31～32区域克隆出来的一个富亮氨酸重复(LRR)超家族的新成员.LRRC4是神经系统发育与轴突生长的功能基因.LRRC4的表达... 详细信息

LRRC4是一个脑组织相对特异性表达基因,是采用表达序列标签(EST)介导的定位-候选克隆策略结合5′-RACE技术从染色体7q31～32区域克隆出来的一个富亮氨酸重复(LRR)超家族的新成员.LRRC4是神经系统发育与轴突生长的功能基因.LRRC4的表达与胶质瘤的级别进展呈负相关,其表达缺失参与脑胶质瘤进展的晚期事件.LRRC4能够下调一系列神经生长因子或受体(如IGF,EGF,PDGF,CNTF,bFGF,GDNF和BDNF等)的表达,通过调控多种信号转导通路(K-Ras/c-Raf/ERK/MAPK,PI-3K/AKT/NF-κB,p70S6/PKC,STAT3以及JNK2/c-Jun/mp53等)将U251细胞阻滞在G1晚期,抑制脑胶质瘤细胞的增殖和侵袭,而且这种抑制作用依赖于它的LRR结构域.LRRC4不能诱导胶质瘤细胞的凋亡,而是诱导胶质瘤细胞向胶质样细胞分化.

关键词： LRRC4 富亮氨酸重复超家族脑胶质瘤信号转导

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鼻咽癌癌变的分子机理

生物化学与生物物理进展 2006年第10期33卷 922-931页

作者：李桂源刘华英周鸣周后德李小玲中南大学肿瘤研究所长沙410078

鼻咽癌是一种多基因遗传性肿瘤,在中国南方和国外中国南方移民及后裔中发病率极高,严重危害了我国南方地区人民生命健康.对于这样一种具有明显民族聚集现象和地域差异的恶性肿瘤,目前认为其病理发病机制与遗传和环境因素的共同作用密切... 详细信息

鼻咽癌是一种多基因遗传性肿瘤,在中国南方和国外中国南方移民及后裔中发病率极高,严重危害了我国南方地区人民生命健康.对于这样一种具有明显民族聚集现象和地域差异的恶性肿瘤,目前认为其病理发病机制与遗传和环境因素的共同作用密切相关.现主要阐述鼻咽癌作为一种多基因遗传性肿瘤的病因发病机制,初步建立鼻咽癌易感基因群的概念和鼻咽癌发生发展过程中易感基因群主导的多阶段性多米诺骨牌效应分子机制假说,为寻找鼻咽癌遗传易感风险因子,筛选鼻咽癌高危人群以及探索鼻咽癌靶向性及个体化的诊断和治疗手段奠定实验与理论基础.

关键词：鼻咽癌病因发病机制易感基因群多阶段性多米诺骨牌效应

雌激素对转STGC3基因CNE2细胞系生长增殖的影响

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生物化学与生物物理进展 2007年第5期34卷 538-545页

作者：胡波邱青朝贺修胜罗桥唐国华龙治峰廖银花南华大学肿瘤研究所衡阳421001

为探讨雌激素对STGC3基因抑瘤的促进作用,将重组的pcDNA3.1(+)-STGC3真核表达载体导入鼻咽癌细胞系CNE2,经G418筛选,RT-PCR及蛋白质印迹检测STGC3的表达,获得稳定高表达STGC3基因的pcDNA3.1(+)/STGC3/CNE2细胞系.采用细胞计数法,检测雌... 详细信息

为探讨雌激素对STGC3基因抑瘤的促进作用,将重组的pcDNA3.1(+)-STGC3真核表达载体导入鼻咽癌细胞系CNE2,经G418筛选,RT-PCR及蛋白质印迹检测STGC3的表达,获得稳定高表达STGC3基因的pcDNA3.1(+)/STGC3/CNE2细胞系.采用细胞计数法,检测雌二醇(β-estradiol)对体外培养pcDNA3.1(+)/STGC3/CNE2细胞生长增殖的影响.将pcDNA3.1(+)/STGC3/CNE2细胞接种于裸小鼠前肢背部皮下,观察分析雌性与雄性裸鼠成瘤的差别.运用RT-PCR、免疫组织化学及蛋白质印迹方法,分别从mRNA及蛋白质水平,分析STGC3基因在裸鼠移植瘤组织中的表达状况.移植瘤组织病理切片检查,观察瘤细胞形态学变化.用流式细胞仪测定移植瘤组织的细胞周期分布.研究结果表明:细胞体外培养,pcDNA3.1(+)/STGC3/CNE2细胞经β-estradiol处理后,其生长速度明显减缓(P研究,接种pcDNA3.1(+)/STGC3/CNE2细胞实验组的移植瘤体积和重量均小于对照组,差异有显著性意义(P0.05);接种pcDNA3.1(+)/STGC3/CNE2细胞的雌性裸鼠组移植瘤,阻滞于G0/G1期细胞数大于其他各组(P研究结果显示,雌激素可能具有增强STGC3基因对CNE2细胞系的生长抑制作用.

关键词： STGC3基因雌激素鼻咽癌 CNE2细胞系裸鼠

RNA干扰Chk1/2调控二烯丙基二硫诱导的G2/M期阻滞作用及相关周期蛋白表达

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生物化学与生物物理进展 2010年第2期37卷 184-189页

作者：凌晖陆丽峰文玲何洁谭晖夏红苏琦南华大学肿瘤研究所衡阳421001

在细胞周期检测点信号传导通路中,Chkl和Chk2起着重要作用,主要参与G2/M期细胞周期检测点信号传导.首先采用RNAi技术在BGC823细胞中将Chk1、Chk2基因沉默,Chk1、Chk2 siRNA转染BGC823细胞后24h加入15mg/L二烯丙基二硫(diallyl disulfide... 详细信息

在细胞周期检测点信号传导通路中,Chkl和Chk2起着重要作用,主要参与G2/M期细胞周期检测点信号传导.首先采用RNAi技术在BGC823细胞中将Chk1、Chk2基因沉默,Chk1、Chk2 siRNA转染BGC823细胞后24h加入15mg/L二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS),接着通过Real-timePCR、Western blot分析Chk1、Chk2基因在转染前后的表达差异,然后运用流式细胞术和Western blot分析Chk1、Chk2基因沉默后对DADS诱导的细胞周期G2/M期阻滞作用及相关周期蛋白CDC25C和cyclinB1表达的影响.实验结果表明,与未转染对照组相比,转染Chk1、Chk2siRNA后BGC823细胞中Chk1、Chk2表达明显被抑制,二者的mRNA表达分别下降84.7%和69.0%,蛋白质水平分别下降73.4%和78.5%.流式细胞术分析结果发现,ChklsiRNA转染的BGC823细胞在15mg/LDADS处理24h后,G2/M期比例由单纯DADS处理组的58.1%降至10.4%(P比,细胞周期G2/M期比例差异不明显(P>0.05).Chk1和Chk2下游分子的改变显示,DADS可抑制BGC823细胞中CDC25C和cyclinB1表达(P0.05),Chk2基因沉默后对DADS抑制CDC25C和cyclinB1表达的作用无影响.由此得出结论,Chkl基因沉默可消除DADS诱导BGC823细胞G2/M期阻滞作用,DADS阻滞G2/M期可能是通过Chk1/CDC25C/cyclinB1信号通路起作用.

关键词： RNA干扰 Chkl/2 BGC823细胞株细胞周期二烯丙基二硫 CDC25C cyclinB1

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鼻咽癌的表观遗传学研究进展

生物化学与生物物理进展 2007年第7期34卷 673-681页

作者：刘华英彭淑平周鸣李桂源中南大学肿瘤研究所长沙410078

表观遗传学是功能基因组学的重要组成部分,它实际上是研究理化、生物等环境因素以及饮食习惯等对遗传因素的作用,并由这一作用引起DNA序列以外的遗传物质改变.鼻咽癌是我国南方常见恶性肿瘤,具有明显的家族聚集倾向,存在基因组不稳定性... 详细信息

表观遗传学是功能基因组学的重要组成部分,它实际上是研究理化、生物等环境因素以及饮食习惯等对遗传因素的作用,并由这一作用引起DNA序列以外的遗传物质改变.鼻咽癌是我国南方常见恶性肿瘤,具有明显的家族聚集倾向,存在基因组不稳定性,易受理化、生物等环境因素的影响,是多基因遗传性肿瘤.鼻咽癌这种独特病因体系提示:鼻咽癌是研究肿瘤表观遗传修饰的最佳模型之一.主要从DNA甲基化、组蛋白修饰、染色质重构和非编码RNA的调控4方面对鼻咽癌表观遗传学研究进展进行综述并针对性地提出了一些新的建议,目的是为进一步探究鼻咽癌表观遗传学发病机制,更好地全面理解鼻咽癌的病因发病机制网络体系,寻找鼻咽癌高危易感人群的筛查、早期诊断、治疗、预后判断的表观遗传修饰分子标志物开辟新的前景.

关键词：鼻咽癌表观遗传学 DNA甲基化组蛋白修饰染色质重构非编码RNA调控表观遗传修饰分子标志物