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捻转血矛线虫耐药虫株与敏感虫株circRNAs差异表达分析

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中国农业大学学报 2024年第2期29卷 122-130页

作者：寇慧林陈昕迪王腾宇高娃温海峰张艳敏于宇李峥刘春霞王文龙内蒙古农业大学兽医学院/农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010010 河套学院医学系/内蒙古自治区蜱媒人畜共患传染病重点实验室内蒙古巴彦淖尔015000 内蒙古农业大学生命科学学院呼和浩特010010

为分析捻转血矛线虫伊维菌素敏感虫株与耐药虫株之间差异表达的circRNAs在调控耐药性中的作用,本研究以捻转血矛线虫敏感虫株和耐药虫株为研究对象,采用Illumina Hiseq 2000平台进行高通量测序及cDNA文库的构建,利用相关生物信息学软件... 详细信息

为分析捻转血矛线虫伊维菌素敏感虫株与耐药虫株之间差异表达的circRNAs在调控耐药性中的作用,本研究以捻转血矛线虫敏感虫株和耐药虫株为研究对象,采用Illumina Hiseq 2000平台进行高通量测序及cDNA文库的构建,利用相关生物信息学软件对测得的circRNAs进行差异性分析,同时对来源基因进行GO和KEGG pathway功能富集。运用TargetScan和Miranda软件预测关键circRNAs靶向的miRNAs,探究circRNAs-miRNAs的作用。随后又随机选取5个显著差异的circRNAs,进行RT-qPCR检测并与转录组测序结果进行一致性评定。结果显示:1)敏感虫株与耐药虫株共筛选出677个差异表达的circRNAs,其中47个显著差异,23个显著上调,24个显著下调。2)所有差异circRNAs的来源基因GO富集分析显示,共富集到生物过程336个、细胞组分59个和分子功能110个,主要与代谢过程、细胞膜结构和催化活性等相关,KEGG富集分析显示,富集到257条通路,主要与代谢(脂肪酸生物合成、甘油磷脂代谢和丙酸代谢)、胰高血糖素信号通路和AMPK信号通路等相关。3)circRNAs-miRNAs调控网络分析显示,627个差异circRNAs靶向结合187个miRNAs,组成了10602组调控关系。综上,本研究成功筛选了捻转血矛线虫伊维菌素敏感虫株和耐药虫株间差异表达的circRNAs,对所有差异circRNAs的来源基因进行功能注释和富集分析,并构建了部分显著差异circRNAs-miRNAs调控网络。本研究结果为捻转血矛线虫耐药性产生的分子机制研究提供了新思路。

关键词：捻转血矛线虫伊维菌素耐药性转录组 circRNAs 差异分析

内蒙古地区神经致病型马疱疹病毒1型的分离与鉴定

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中国预防兽医学报 2024年第6期46卷 636-640页

作者：冯心如刘佳利李静丁玉林王文龙高娃张迪王金玲内蒙古农业大学兽医学院/农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010010 内蒙古自治区科学技术厅内蒙古呼和浩特010000 河套学院医学系/内蒙古自治区蜱媒人畜共患传染病重点实验室内蒙古巴彦淖尔015000 内蒙古通辽市科尔沁区畜牧水产工作站内蒙古通辽028000

为调查内蒙古四子王旗某马场马流产是否由马疱疹病毒1型(EHV-1)感染导致,本研究采集该场马流产胎儿肝、脾等组织,将组织研磨上清液接种MDBK细胞,盲传5代,待出现细胞病变时收集细胞及培养上清,通过gB基因的PCR及透射电镜对分离病毒进行鉴... 详细信息

为调查内蒙古四子王旗某马场马流产是否由马疱疹病毒1型(EHV-1)感染导致,本研究采集该场马流产胎儿肝、脾等组织,将组织研磨上清液接种MDBK细胞,盲传5代,待出现细胞病变时收集细胞及培养上清,通过gB基因的PCR及透射电镜对分离病毒进行鉴定,采用2代测序技术对分离病毒全基因组测序,并进行分离病毒gB基因的同源性及遗传进化分析。采用SnapGene6.0.2软件分析分离病毒ORF30基因及其编码氨基酸序列。结果显示,组织上清液接种MDBK细胞并盲传5代后,细胞出现典型的圆缩、融合、脱落和聚堆成葡萄串状等细胞病变特征;EHV-1 gB基因的PCR检测结果呈阳性;电镜观察可见疱疹病毒典型的形态特征,表明分离到1株EHV-1,命名为EHV-1-NM2021。同源性分析结果显示:分离株EHV-1-NM2021 gB基因序列与国内外EHV-1参考株gB基因序列的同源性为97.7%~100%;构建gB基因的系统发育进化树,结果显示该基因与EHV-1德国株(RacL11)、澳大利亚株(438-77)处于同一进化分支,亲缘关系较近。此外,ORF30基因序列及氨基酸序列比对结果显示,EHV-1-NM2021 ORF30基因nt2254为鸟嘌呤(G),aa752为天冬氨酸(D),该分离株为神经致病型病毒。本研究首次在内蒙古鉴定并分离到神经致病型EHV-1,丰富了国内EHV-1的流行病学数据库,为EHV-1感染所导致马流产的防控奠定了研究基础。

关键词：马流产神经致病型马疱疹病毒1型遗传进化

一例赤大袋鼠梭菌性肠炎的诊断和病原分离鉴定

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野生动物学报 2024年第2期45卷 403-408页

作者：董俊斌李静丁玉林王文龙高娃郑秉武张迪王金玲内蒙古农业大学兽医学院农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010010 内蒙古自治区科学技术厅呼和浩特010000 内蒙古自治区蜱媒人畜共患传染病重点实验室河套学院医学系巴彦淖尔015000 呼和浩特市动物园呼和浩特010050 内蒙古通辽市科尔沁区畜牧水产工作站通辽028000

通过临床症状、尸体剖检、组织病理学、毒素实验和细菌分离鉴定的方法确诊了1例由A型产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)引起的赤大袋鼠(Macropus rufus)梭菌性肠炎的自然病例。动物园1只成年赤大袋鼠突然精神沉郁、厌食,于20 h后死... 详细信息

通过临床症状、尸体剖检、组织病理学、毒素实验和细菌分离鉴定的方法确诊了1例由A型产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)引起的赤大袋鼠(Macropus rufus)梭菌性肠炎的自然病例。动物园1只成年赤大袋鼠突然精神沉郁、厌食,于20 h后死亡,尸体角弓反张,腹围膨大。尸体剖检和组织学检查表明:胃肠道、肝脏和肾脏出现具有梭菌性肠炎证病意义的病变。小白鼠毒素实验结果显示,血样肠内容物内有急性致死性毒素。从出血的肠黏膜面分离到单一、有芽孢、粗大的革兰阳性杆菌,经产气荚膜梭菌毒素基因型多重PCR鉴定为A型产气荚膜梭菌。研究结果可为赤大袋鼠梭菌性肠炎的诊断和防控提供依据。

关键词：赤大袋鼠梭菌性肠炎出血性坏死性胃肠炎 A型产气荚膜梭菌

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mRNA疫苗和药物:癌症免疫治疗的新宠儿

生物化学与生物物理进展 2024年第9期51卷 2115-2132页

作者：未志盟党生李光晨高兰柱翟景波内蒙古民族大学医学院通辽028000 内蒙古通辽市科尔沁区第一人民医院检验科病理科通辽028000 通辽市传染病医院感染科通辽028000 人兽共患病防控自治区高等学校重点实验室通辽028000 内蒙古自治区布鲁氏菌病防治工程技术研究中心通辽028000

新型冠状病毒感染(corona virus disease 2019,COVID-19)mRNA疫苗成功研制,使得mRNA疫苗和药物成为癌症免疫治疗的一个有前途的平台。mRNA癌症疫苗和药物具有高效、安全、开发快速和经济成本低等优势。研究人员对mRNA疫苗的组成成分和... 详细信息

新型冠状病毒感染(corona virus disease 2019,COVID-19)mRNA疫苗成功研制,使得mRNA疫苗和药物成为癌症免疫治疗的一个有前途的平台。mRNA癌症疫苗和药物具有高效、安全、开发快速和经济成本低等优势。研究人员对mRNA疫苗的组成成分和递送载体进行了系统性优化,克服了其稳定性差、具有固有免疫原性和体内递送效率低等问题,使COVID-19 mRNA疫苗获批临床应用。尽管还没有mRNA癌症疫苗和药物获批临床应用,但是编码肿瘤抗原、治疗性抗体、细胞因子、肿瘤抑制因子、溶瘤病毒、CRISPR-Cas9、嵌合抗原受体(CAR)、T细胞受体(TCR)mRNA癌症疫苗和药物已经在临床前研究中显示出疗效,并且有一些已经进入临床试验。同时mRNA癌症疫苗和药物与检查点抑制剂联合应用,在临床试验中已取得显著有效的成果。本文对mRNA疫苗和药物的免疫机制、分类、修饰方法、递送系统、多种癌症疫苗和药物的临床应用现状和该领域当前挑战以及未来前景进行了综述,并期待mRNA癌症疫苗和药物尽快的应用于临床,使患者受益。

关键词： mRNA癌症疫苗和药物免疫机制分类修饰方法递送系统临床应用

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绵羊肺腺瘤病毒致病机制研究进展

病毒学报 2024年

作者：段续接张培刘淑英内蒙古农业大学兽医学院农业农村部动物临床诊疗技术重点实验室内蒙古自治区基础兽医学重点实验室

绵羊肺腺瘤病毒（Jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV）是绵羊肺腺瘤（ovine pulmonary adenomatosis,OPA）的病原，属于反转录病毒科，正反转录病毒亚科，β反转录病毒属，作为致癌性反转录病毒可引起绵羊发生不可逆的慢性传染性肺肿瘤... 详细信息

绵羊肺腺瘤病毒（Jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV）是绵羊肺腺瘤（ovine pulmonary adenomatosis,OPA）的病原，属于反转录病毒科，正反转录病毒亚科，β反转录病毒属，作为致癌性反转录病毒可引起绵羊发生不可逆的慢性传染性肺肿瘤疾病。JSRV的癌基因env所编码的囊膜蛋白（envelope,Env）诱导多种类型的细胞发生恶性转化及体内肿瘤生成。OPA常被视为人鳞屑样生长型肺腺癌（lepidic predominant adenocarcinoma,LPA）研究的理想模型。本文针对JSRV相关致病机制的最新热点研究展开综述。

关键词：绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白肿瘤生成致病机制

基于转录组学分析自然感染绵羊肺腺瘤病毒患羊肺肿瘤组织中转录差异基因及病毒致瘤机制的研究

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中国预防兽医学报 2024年第2期46卷 185-194页

作者：段续接杨惠孙志伟杜晓悦张培梁浚哲刘淑英内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010018 农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018 内蒙古自治区基础兽医学重点实验室内蒙古呼和浩特010018

绵羊肺腺瘤病(OPA)是由绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)引起的绵羊传染性肺肿瘤疾病。为探究JSRV对绵羊肺脏的致瘤机制,本研究从自然感染JSRV的羊(OPA患羊)肺肿瘤组织和健康羊肺组织中提取总RNA,构建二者的cDNA文库后采用Illumina Hi Seq 4000高... 详细信息

绵羊肺腺瘤病(OPA)是由绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)引起的绵羊传染性肺肿瘤疾病。为探究JSRV对绵羊肺脏的致瘤机制,本研究从自然感染JSRV的羊(OPA患羊)肺肿瘤组织和健康羊肺组织中提取总RNA,构建二者的cDNA文库后采用Illumina Hi Seq 4000高通量测序平台进行转录组学测序(RNA-Seq),采用DESeqR筛选健康绵羊与患病绵羊肺组织中的转录差异基因,并以P共筛选到1 360个转录上调基因和783个转录下调基因,其中154个转录显著上调基因,212个转录显著下调基因。GO功能分析显示,转录显著差异基因显著富集在178个GO条目中,包括114个生物过程(BP)、19个细胞成分(CC)和45个分子功能(MF),主要涉及生长因子活性、复制后修复、NAD^(+)二磷酸酶活性、核苷代谢过程和鸟苷核苷酸交换因子活性等生物学功能。KEGG分析显示转录显著差异基因主要富集在细胞增殖、分化和肿瘤生成,如PI3K/Akt、MAPK和Hippo等信号通路。RT-qPCR结果显示,10个转录显著差异基因与RNA-Seq筛选结果均一致。本研究进一步通过RT-qPCR、western blot检测Hippo信号通路核心蛋白哺乳动物STE20样蛋白激酶1/2 (MST1/2)、大肿瘤抑制因子1/2 (LATS1/2)、YES相关蛋白1/2 (YAP1)在两组绵羊肺组织样品中的转录及表达水平和YAP1的磷酸化水平(p-YAP1);采用免疫组化试验(IHC)检测Hippo信号通路中上述核心蛋白在两组绵羊肺组织中的表达及定位。RT-qPCR结果显示,与对照组相比,OPA羊肺组织中MST1和YAP1 mRNA的转录水平均极显著上调(P<0.01、P<0.001),LATS1 mRNA的转录水平显著上调(P<0.05)。Western blot结果显示,MST1/2蛋白在59 ku、YAP1和p-YAP1蛋白在65 ku、LATS1/2蛋白在140 ku处分别出现特异性条带;与对照组相比,OPA绵羊肺肿瘤组织中MST1/2和p-YAP1的表达水平显著上调(P<0.05),LATS1/2和YAP1的表达水平极显著上调(P<0.01)。IHC结果显示,在OPA组和对照组羊肺组织中MST1/2、LATS1/2及p-YAP1均定位于肺组织细胞质中,且与对照组相比,OPA组羊肺组织中上述分子均呈强阳性表达。YAP1主要定位于对照组羊肺组织细胞的胞质中,而在OPA组中YAP1主要定位于细胞核中(少量定位于细胞质中)。上述结果表明,OPA组绵羊肺组织中存在转录显著差异基因,主要参与细胞增殖、肿瘤发生和转移等过程,且主要富集在PI3K/Akt、MAPK、Hippo等信号通路,尤其是Hippo信号通路中的YAP蛋白可能通过核异位促进肿瘤的发生与发展。本研究为JSRV致瘤机制提供了新的研究基础与研究思路和方向。

关键词：绵羊肺腺瘤病绵羊肺腺瘤病毒转录组学分析 Hippo信号通路

基于gB蛋白的牛传染性鼻气管炎间接ELISA检测方法的建立

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中国农业大学学报 2024年第1期29卷 119-126页

作者：温靖于佳梁李丹包福祥内蒙古农业大学兽医学院/农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018 内蒙古自治区生态与农业气象中心呼和浩特010052

为建立一种针对牛传染性鼻气管炎病毒(Infectious bovine rhinotrachetitis virus,IBRV)的早期快速检测方法,并能判定免疫后是否再次发生感染,本研究利用原核表达IBRV gB蛋白,并通过SDS-PAGE和Western blot检测gB蛋白的表达,并初步建立... 详细信息

为建立一种针对牛传染性鼻气管炎病毒(Infectious bovine rhinotrachetitis virus,IBRV)的早期快速检测方法,并能判定免疫后是否再次发生感染,本研究利用原核表达IBRV gB蛋白,并通过SDS-PAGE和Western blot检测gB蛋白的表达,并初步建立基于gB蛋白检测IBRV的间接ELISA方法。结果表明:1)对IBRV标准阳性血清,本试验方法的最低检测限度为1∶4096,说明建立的gB-ELISA检测方法具有较高的敏感性。2)该方法对其他4种常见的牛疫病阳性血清检测均为阴性,不存在交叉反应,表明该方法具有良好的特异性。3)在对200头牛的临床样品的检测中,该方法与IDEXX(IBRV gB X3)抗体检测试剂盒符合率高达97.5%。综上,本研究建立的gB-ELISA检测方法敏感性高,特异性好,该方法为开发一种在感染早期快速对疾病进行诊断,并可以判定疫苗免疫后是否再次发生IBRV感染的试剂盒奠定基础。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒 gB蛋白 ELISA

青海高原地区小型兽类7种病原体携带情况调查研究

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中国人兽共患病学报 2024年第9期 880-886页

作者：程红兵刘益萍崔佳饶华祥栗冬梅于娟长治医学院基础医学部长治医学院公共卫生与预防医学系中国疾病预防控制中心传染病预防控制所媒介生物控制室传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室

目的了解青海高原地区伯氏疏螺旋体、问号钩端螺旋体、斑疹伤寒立克次体、恙虫病东方体、嗜吞噬细胞无形体、土拉弗朗西斯菌及巴贝虫7种病原体在小型兽类中的流行状况，为当地人兽共患疾病风险评估和预警提供科学依据。方法 2018年6-7... 详细信息

目的了解青海高原地区伯氏疏螺旋体、问号钩端螺旋体、斑疹伤寒立克次体、恙虫病东方体、嗜吞噬细胞无形体、土拉弗朗西斯菌及巴贝虫7种病原体在小型兽类中的流行状况，为当地人兽共患疾病风险评估和预警提供科学依据。方法 2018年6-7月，我们采用夹夜法在青海省海西蒙古族藏族自治州、海北藏族自治州及玉树藏族自治州的6个镇（区）捕获小型兽类，无菌收集其肝脏、脾脏和肾脏组织，采用实时荧光定量PCR法进行细菌性病原体的检测，采用普通PCR法进行巴贝虫的检测，对阳性PCR产物进行序列测定和分析。χ2检验或Fisher确切概率法比较不同小型兽类、生境的病原体检出率差异。结果共捕获15种235只小型兽类，检出伯氏疏螺旋体、问号钩端螺旋体和巴贝虫，未检出其他病原体。伯氏疏螺旋体在长尾仓鼠、大林姬鼠、高原鼠兔、小家鼠、子午沙鼠、普通田鼠、仓鼠、间颅鼠兔、五趾跳鼠等9种41只小型兽类中检出，阳性率为17.45%（41/235）;问号钩端螺旋体在长尾仓鼠、小家鼠、普通田鼠和根田鼠中检出，阳性率为3.40%（8/235）,巴贝虫仅在1只香鼬中检出，阳性率为0.85%（1/235）,不同病原体检出率差异有统计学意义（χ2=200.54,P区检出率最高，与其他生境差异有统计学意义（Fisher确切概率法，P区小型兽类中检测出伯氏疏螺旋体、问号钩端螺旋体和巴贝虫，对人有潜在致病性，当地应加强相应人兽共患疾病的监测，并制定相应的防控措施。

关键词：人兽共患病小型兽类流行情况青海高原地区

基于多组学解析布鲁氏菌BvfA对睾丸支持细胞线粒体NADH-泛醌氧化还原酶复合体的影响

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中国畜牧兽医 2024年第4期51卷 1400-1409页

作者：宋青山杨江流刘军贾芳河套学院巴彦淖尔015000 内蒙古医科大学基础医学院内蒙古自治区分子生物学重点实验室呼和浩特010110 宁夏大学生命科学学院西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室银川750021 中国农业科学院长春兽医研究所长春130122

【目的】明确布鲁氏菌BvfA对宿主睾丸支持细胞(TM4细胞)的损伤作用,以揭示布鲁氏菌对宿主的致病机制。【方法】利用RNA-Seq双端测序、Label-free蛋白组学技术和LC-MS非靶代谢组学技术分析感染布鲁氏菌S19△bvfA与S19菌株的TM4细胞的组... 详细信息

【目的】明确布鲁氏菌BvfA对宿主睾丸支持细胞(TM4细胞)的损伤作用,以揭示布鲁氏菌对宿主的致病机制。【方法】利用RNA-Seq双端测序、Label-free蛋白组学技术和LC-MS非靶代谢组学技术分析感染布鲁氏菌S19△bvfA与S19菌株的TM4细胞的组学差异,采用KEGG数据库对差异表达蛋白及差异代谢物通路进行分析,并利用平行反应监测(PRM)对蛋白表达量进行验证。【结果】感染S19△bvfA和S19菌株的TM4细胞差异表达基因共400个,差异表达蛋白共422个,差异代谢产物共271种。多组学联合分析发现,S19△bvfA和S19菌株感染TM4细胞差异表达基因、差异表达蛋白和差异代谢产物共同富集的KEGG通路为内源性大麻素信号通路,在该通路中发现S19△bvfA菌株感染TM4细胞的线粒体NADH-泛醌氧化还原酶复合体(ComplexⅠ)中有20个蛋白表达量下调。PRM验证结果显示,ComplexⅠ中Ndufb11、Ndufa9、Ndufv1、Ndufv2、Ndufs8和Ndufs2蛋白的表达趋势与Label-free蛋白组学技术测定结果一致。【结论】BvfA在布鲁氏菌感染TM4细胞时能引起转录、蛋白质和代谢水平的变化,布鲁氏菌BvfA使睾丸支持细胞线粒体NADH-泛醌氧化还原酶复合体蛋白表达下调。

关键词：布鲁氏菌多组学 BvfA 睾丸支持细胞