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RNA结合蛋白ELAVL1的功能及其调控病毒复制的研究进展

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畜牧兽医学报 2024年第5期55卷 1914-1925页

作者：余祖华高梦茹齐志颖张静雨何雷陈建丁轲河南科技大学动物科技学院功能微生物与畜禽健康实验室/动物疫病与公共卫生重点实验室洛阳471003 洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室洛阳471023

胚胎致死异常视觉蛋白1(embryonic lethal abnormal vision like 1, ELAVL1),又被称为人类抗原R(human antigen R, HuR),是一种典型的RNA结合蛋白(RNA binding protein, RBP),通过与3′非翻译区(3′untranslated element, 3′UTR)的AU富含元件(AU-rich element, ARE)结合,在mRNA转录和翻译过程中发挥重要作用。ELAVL1的作用十分广泛,可调控肿瘤的发生发展、凋亡、迁移与侵袭,是许多癌症治疗的关键靶点,还能参与调节编码器官发育和组织稳态的蛋白质和mRNA的水平,也有许多研究表明,ELAVL1通过转录后调控和翻译后修饰来调节病毒复制。本文主要综述了ELAVL1的生物学特点、功能、调控机制及其在病毒复制过程中的调控作用,旨在为进一步研究ELAVL1与畜禽病毒复制之间互作的机制提供理论参考。

关键词： ELAVL1 RNA结合蛋白病毒调控机制

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mdv1-miR-M4-5p对MDCC-MSB1细胞增殖和凋亡的影响

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畜牧兽医学报 2024年

作者：余祖华高梦茹何雷魏颖陈建陈松彪丁轲河南科技大学动物科技学院功能微生物与畜禽健康实验室/动物疫病与公共卫生重点实验室洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室河南科技学院动物科技学院

为研究马立克病病毒(Marek 's disease virus， MDV)编码的mdv1-miR-M4-5p对MDCC-MSB1细胞增殖和凋亡的影响，将mdv1-miR-M4-5p模拟物、抑制物及其阴性对照转染MDCC-MSB1细胞后48 h，采用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测细胞中mdv1-miR-M4-5p、TGF-β1、Smad2以及caspase-9、caspase-3、cyt-c、cyclinD1、Bcl-2等增殖和凋亡相关分子的转录；CCK-8检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞周期和凋亡。结果显示：与对照组相比，mdv1-miR-M4-5p模拟物转染显著上调了MDCC-MSB1细胞中mdv1-miR-M4-5p、cyclinD1、Bcl-2的转录水平，下调了TGF-β1、Smad2、cyt-c、caspase-9和caspase-3的表达，促进了细胞的增殖，减少了G1期细胞，增加了S和G2细胞，降低了细胞凋亡率。与对照组相比，mdv1-miR-M4-5p抑制物转染后MDCC-MSB1细胞的增殖、凋亡及其相关分子转录的结果与mdv1-miR-M4-5p模拟物转染后的结果相反。综上，Mdv1-miR-M4-5p可促进MDCC-MSB1细胞增殖，抑制其凋亡，这可能是通过抑制TGF-β1/Smad2信号通路来实现的。

关键词： Mdv1-miR-M4-5p MDV 增殖凋亡 TGF-β1/Smad2

病毒感染与宿主抗感染免疫之间“博弈”——凋亡、坏死和焦亡分子机制

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畜牧兽医学报 2024年第1期55卷 59-70页

作者：陈松彪刘飞飞尚珂余祖华何雷魏颖陈建张春杰程相朝丁轲洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室洛阳471003 河南科技大学功能微生物与畜禽健康实验室洛阳471003 动物病原与生物安全教育部重点实验室郑州450000

细胞死亡是宿主抗病毒感染免疫的重要组成部分,病毒感染可引起不同形式宿主细胞死亡,包括溶解性和非溶解性两种细胞死亡类型。这两种细胞死亡类型不仅能够消除病毒感染细胞,而且还能够利用炎症因子释放进一步促进宿主先天和适应性免疫... 详细信息

细胞死亡是宿主抗病毒感染免疫的重要组成部分,病毒感染可引起不同形式宿主细胞死亡,包括溶解性和非溶解性两种细胞死亡类型。这两种细胞死亡类型不仅能够消除病毒感染细胞,而且还能够利用炎症因子释放进一步促进宿主先天和适应性免疫进程。反之,病毒也发展出不同规避机制来抑制宿主细胞死亡进而促进自身感染。本文就病毒感染与宿主抗病毒感染免疫之间的“博弈”——凋亡、坏死和焦亡调控机制研究进展进行综述,旨在为深入理解病毒的分子致病机制以及开发新的抗病毒策略提供参考资料。

关键词：病毒宿主博弈凋亡坏死焦亡

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细菌外膜囊泡结构、分泌特性及致病机制

畜牧兽医学报 2024年第3期55卷 971-983页

作者：高远集刘畅陈淼陈松彪张俊峰李静贾艳艳廖成水郭荣显丁轲余祖华尚珂河南科技大学动物科技学院/功能微生物与畜禽健康实验室洛阳471003 洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室洛阳471003 河南科技大学动物疫病与公共卫生重点实验室洛阳471003 河南科技大学医学技术与工程学院洛阳471003

外膜囊泡(outer membrane vesicles, OMVs)是革兰阴性菌在生长过程中释放到胞外的囊泡状结构,被认为是细菌的“远程武器”,其功能主要是攻击宿主组织并帮助细菌定植、损害宿主细胞功能、调节宿主的防御,因此OMVs在细菌致病过程中发挥着... 详细信息

外膜囊泡(outer membrane vesicles, OMVs)是革兰阴性菌在生长过程中释放到胞外的囊泡状结构,被认为是细菌的“远程武器”,其功能主要是攻击宿主组织并帮助细菌定植、损害宿主细胞功能、调节宿主的防御,因此OMVs在细菌致病过程中发挥着重要作用。囊泡中的物质通过与细菌释放出的自诱导物化学信号分子结合,可以驱使细菌或者囊泡在内环境中发挥特殊功能,如群体感应、生物膜形成、获取营养、抗生素抗性、应激反应、对抗其它微生物的竞争或防御、微生物群落状态、核酸转移、水平基因转移、毒素和毒力因子的递送等,且在细菌生长周期发挥着不可或缺的作用。本文主要综述OMVs结构、分泌特性及其致病机制的最新研究进展,为深入研究细菌的致病机制以及开发新的抗菌策略提供理论指导。

关键词：细菌外膜囊泡结构分泌特性致病机制

抗菌肽PMAP-24KK水凝胶的制备及抗菌活性研究

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中国药学杂志 2024年第13期 1219-1225页

作者：毛付康范文琦路思阳王君辉王恩典崔靖靖王晓利牛明福廖成水河南科技大学功能微生物与畜禽健康实验室洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室河南科技大学基础医学与法医学院河南科技大学食品与生物工程学院

目的制备含猪源抗菌肽-24KK(porcine myeloid antimicrobial peptide-24KK,PMAP-24KK)的水凝胶，评价其理化性能和抗菌活性。方法将PMAP-24KK与海藻酸钠、碳酸钙和葡萄糖酸内酯结合得到PMAP-24KK水凝胶，首先分析PMAP-24KK水凝胶的形... 详细信息

目的制备含猪源抗菌肽-24KK(porcine myeloid antimicrobial peptide-24KK,PMAP-24KK)的水凝胶，评价其理化性能和抗菌活性。方法将PMAP-24KK与海藻酸钠、碳酸钙和葡萄糖酸内酯结合得到PMAP-24KK水凝胶，首先分析PMAP-24KK水凝胶的形成时间、溶胀率、含水率、保水率和释放率等理化性质，然后进行药敏试验测定其对细菌的体外抗菌活性、缓释和抗菌屏障以及对小鼠皮肤创伤愈合的效果。结果 PMAP-24KK水凝胶在2 min左右可以形成具有网状结构的凝胶态，溶胀率和含水率均在10 h达到平衡状态，分别为(158.83±3.26)%和(61.01±2.41)%,24 h的保水率和释放率约为55%和81%。PMAP-24KK水凝胶对金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌、猪霍乱沙门菌和鼠伤寒沙门菌表现出抑菌效果。PMAP-24KK水凝胶18 h内的缓释作用没有明显区别，18 h后开始逐渐下降至36 h无抗菌活性。PMAP-24KK水凝胶能有效地起到抗菌屏障作用，且有助于小鼠创伤模型皮肤伤口的愈合。结论本研究成功制备获得具有良好理化特性和抗菌活性的PMAP-24KK水凝胶，且具有较好的缓释和抗菌屏障以及促进伤口愈合的作用，为抗菌肽水凝胶应用的进一步研究奠定基础。

关键词：抗菌肽猪源抗菌肽-24KK 海藻酸钠水凝胶抗菌活性

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鸡FGL2基因的克隆分析及原核表达

西北农林科技大学学报（自然科学版） 2024年第3期52卷 11-18,39页

作者：郭亚格刘佳隆齐志颖何雷贾艳艳陈建陈松彪廖成水丁轲余祖华洛阳市活载体生物材料与动物疫病重点实验室河南洛阳471003 河南科技大学动物科技学院功能微生物与畜禽健康实验室河南洛阳471003

【目的】克隆鸡纤维蛋白原样蛋白2(fibrinogen-like protein 2,FGL2)基因,并进行生物信息学分析和原核表达,为鸡FGL2蛋白的功能研究奠定基础。【方法】采用逆转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)技术扩增鸡FGL2基因,克隆至pMD19-... 详细信息

【目的】克隆鸡纤维蛋白原样蛋白2(fibrinogen-like protein 2,FGL2)基因,并进行生物信息学分析和原核表达,为鸡FGL2蛋白的功能研究奠定基础。【方法】采用逆转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)技术扩增鸡FGL2基因,克隆至pMD19-T载体,测序后对鸡FGL2基因及其编码的蛋白进行生物信息学分析。构建原核表达质粒pET-32a-FGL2,将其转化BL21(DE3)大肠杆菌感受态细胞,利用IPTG进行诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western-blot分析。【结果】成功克隆了鸡FGL2基因的CDS区,序列全长为1320 bp,编码439个氨基酸。生物信息学分析显示,鸡FGL2氨基酸与火鸡、雉鸡、珍珠鸡、鹌鹑等禽类的同源性高,达96%以上;与哺乳类动物的同源性较低,其中与犬的同源性仅有64.8%。FGL2蛋白由439个氨基酸组成,理论分子质量为50.24 ku,分子式为C_(2221)H_(3451)N_(615)O_(673)S_(22),理论等电点(pI)为8.63,为不稳定的亲水性分泌型蛋白,无跨膜区。成功构建了原核表达质粒pET-32a-FGL2,其在大肠杆菌BL21(DE3)可表达以包涵体形式为主的FGL2融合蛋白,分子质量约为70 ku。【结论】成功克隆出了1320 bp的鸡FGL2基因,明确了其编码蛋白的生物学信息,经诱导表达后获得FGL2重组蛋白。

关键词：鸡 FGL2基因生物信息学分析原核表达

猪圆环病毒3型四川株Cap蛋白的截短表达及其抗体间接ELISA方法的建立

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中国畜牧兽医 2024年第7期51卷 3056-3066页

作者：欧云文潘琴汪洋代军飞任绍科张洋翟佳佳张杰开江县动物疫病预防控制中心达州636250 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室兰州730046 河北科技师范学院河北省预防兽医学重点实验室秦皇岛066004

【目的】原核截短表达猪圆环病毒3型(Porcine circovirus type 3,PCV3)四川株Cap蛋白(1-197位氨基酸),并建立其抗体间接ELISA检测方法,为PCV3血清学调查提供材料。【方法】以PCV3四川分离株基因组为模板,PCR扩增获得Cap蛋白编码基因片段... 详细信息

【目的】原核截短表达猪圆环病毒3型(Porcine circovirus type 3,PCV3)四川株Cap蛋白(1-197位氨基酸),并建立其抗体间接ELISA检测方法,为PCV3血清学调查提供材料。【方法】以PCV3四川分离株基因组为模板,PCR扩增获得Cap蛋白编码基因片段,将其克隆至原核表达载体pET-30a(+)中构建重组质粒pET30a-PCV3-Cap。经酶切和测序鉴定后,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,Ni-NTA树脂亲和层析纯化,获得具有良好抗原性的重组Cap蛋白。基于纯化的重组Cap蛋白建立间接ELISA方法,确定最佳抗原包被浓度、待检血清最佳稀释比例、酶标抗体稀释比例和阴阳性临界值,对间接ELISA方法的特异性、敏感性、重复性、相关性和符合率进行分析,并对2018-2022年采自川东北地区猪场的351份临床猪血清进行检测,分析该区域PCV3流行情况。【结果】试验成功构建pET30a-PCV3-Cap重组表达载体,实现重组Cap蛋白(1-197位氨基酸)的原核截短表达,蛋白大小约为26 ku,可与PCV3阳性猪血清发生特异性反应;确定最佳抗原包被浓度为1 ng/μL,待检血清最佳稀释比例为1∶100,酶标抗体稀释比例为1∶60000,阴阳性临界值D_(450 nm)为0.684;建立的间接ELISA方法与猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、日本乙型脑炎病毒(JEV)和猪细小病毒1型(PPV1)阳性猪血清均不发生交叉反应,敏感度达1∶1600,批内变异系数和批间变异系数均材料。

关键词：猪圆环病毒3型(PCV3) Cap蛋白截短表达 ELISA

新型阿卡斑病毒NSs蛋白生物信息学分析及多克隆抗体制备

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中国畜牧兽医 2024年第5期51卷 2015-2026页

作者：蔡畅陈赫威宋瑞鹏覃绍敏刘金凤秦树英孙倩陈童锦悦欧长波刘兴友马玲吴健敏广西壮族自治区兽医研究所广西兽医生物技术重点实验室南宁530001 河南科技学院动物科技学院新乡453003 农业农村部(广西)-东盟跨境动物疫病防控重点实验室南宁530001 广西大学动物科学技术学院南宁530004 新乡学院生命科学与基础医学学院新乡453003

【目的】对新型阿卡斑病毒(Akabane virus,AKAV)非结构蛋白(non-structura,NSs)进行生物信息学分析,进而制备抗多克隆抗体,为新型AKAV检测及功能研究提供必要材料。【方法】使用蛋白生物信息学在线分析网站,对新型AKAV NSs蛋白进行系统... 详细信息

【目的】对新型阿卡斑病毒(Akabane virus,AKAV)非结构蛋白(non-structura,NSs)进行生物信息学分析,进而制备抗多克隆抗体,为新型AKAV检测及功能研究提供必要材料。【方法】使用蛋白生物信息学在线分析网站,对新型AKAV NSs蛋白进行系统分析。克隆NSs全长基因,利用大肠杆菌表达系统表达NSs重组蛋白,优化蛋白诱导条件并分析重组蛋白的可溶性;收获破碎菌体,经8 mol/L尿素变性、Ni 2+-NTA亲和层析纯化、透析及浓缩后进行SDS-PAGE、Western blotting鉴定;将纯化的重组NSs蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体;应用间接ELISA、Western blotting和间接免疫荧光试验(IFA)测定多克隆抗体效价及特异反应性。【结果】生物信息学分析表明,NSs蛋白由91个氨基酸残基构成,等电点为12.10,属于碱性蛋白,不稳定指数约为79.04,平均亲水性为指数为―0.059,为不稳定的亲水蛋白;无跨膜区和信号肽,属于非分泌蛋白。试验成功构建了NSs蛋白原核表达载体pET-32a-NSs,经SDS-PAGE和Western blotting鉴定显示,成功表达重组NSs蛋白,分子质量为29.3 ku,主要以包涵体形式存在,与生物信息学分析结果一致;制备的多克隆抗体效价可达1∶16384000,Western blotting和IFA结果表明所制备抗体能够与NSs蛋白发生特异性反应,具有较好的特异性。【结论】试验成功获得纯化的新型AKAV NSs蛋白,该蛋白具有较好的免疫原性;制备获得效价高、特异性好的多克隆抗体,为后续新型AKAV疫苗开发、检测及NSs蛋白功能研究提供了基础。

关键词：新型阿卡斑病毒(AKAV) NSs蛋白生物信息学原核表达多克隆抗体

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组学技术在旋毛虫研究中的应用进展

中国人兽共患病学报 2022年第8期38卷 723-732页

作者：廖成水陈耀华王晓利程相朝河南科技大学洛阳471023 洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室洛阳471023

旋毛虫是一种典型的食源性人兽共患寄生线虫,呈全球分布且寄生无宿主特异性,给畜牧业养殖带来重大经济损失,且严重威胁食品安全。近年来,组学技术的应用为解析旋毛虫致病机制提供了有效的手段。本文主要综述了基因组学、转录组学、蛋白... 详细信息

旋毛虫是一种典型的食源性人兽共患寄生线虫,呈全球分布且寄生无宿主特异性,给畜牧业养殖带来重大经济损失,且严重威胁食品安全。近年来,组学技术的应用为解析旋毛虫致病机制提供了有效的手段。本文主要综述了基因组学、转录组学、蛋白质组学等技术在旋毛虫研究中的应用及研究进展,以期为旋毛虫的生长发育、感染与宿主免疫等研究提供新思路,同时也为其他同类寄生虫研究提供参考。

关键词：组学旋毛虫基因组学转录组学蛋白质组学