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一株降解呕吐毒素蜡样芽孢杆菌的筛选与鉴定

食品科学 2016年第5期37卷 121-125页

作者：余祖华丁轲刘赛宝李亚菲李旺李元晓曹平华刘一尘孙二刚河南科技大学宏翔发酵饲料实验室河南洛阳471003 河南省动物疫病与公共安全院士工作站河南洛阳471003 河南宏翔生物科技有限公司河南汝州467500

目的:分离筛选能够降解呕吐毒素(deoxynivalenol,DON)的芽孢杆菌,以用于该毒素的生物降解。方法:采集霉变秸秆、土壤和粪便样品,先将样品加热80℃后,取上清液接种到以DON为唯一碳源的分离培养基富集DON降解菌。以LB培养基分离纯化富集菌... 详细信息

目的:分离筛选能够降解呕吐毒素(deoxynivalenol,DON)的芽孢杆菌,以用于该毒素的生物降解。方法:采集霉变秸秆、土壤和粪便样品,先将样品加热80℃后,取上清液接种到以DON为唯一碳源的分离培养基富集DON降解菌。以LB培养基分离纯化富集菌,然后对分离到的菌株进行DON毒素降解能力检测。对降解能力最强的菌株进行形态学观察、生理生化实验和16S r DNA序列鉴定。结果:从16株分离菌中筛选得到一株对DON降解能力最强的菌株***05,降解率最高可达80.61%,且对含DON饲料的降解率为82.68%。该菌株呈短杆状,能形成芽孢;生理生化特性符合蜡样芽孢杆菌的基本特征;16S r DNA序列进化树分析表明该菌株与蜡样芽孢杆菌的亲缘关系最近。结论:筛选获得了一株高效降解DON的蜡样芽孢杆菌***05,为饲料和食品中DON毒素的生物降解提供了可能。

关键词：呕吐毒素蜡样芽孢杆菌降解筛选鉴定

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鸡源高产淀粉酶丁酸梭菌的分离鉴定

中国畜牧兽医 2015年第11期42卷 3073-3079页

作者：李圣杰丁轲姜芳芳魏嘉敏李旺李元晓孙二刚河南科技大学宏翔发酵饲料实验室洛阳471003 河南宏翔生物科技有限公司汝州467500 河南省动物疫病与公共卫生重点实验室洛阳471003

为了获得产淀粉酶的丁酸梭菌,本研究从鸡小肠表面黏液中进行丁酸梭菌的分离与筛选,首先对样品进行80℃水浴10min除去非芽孢菌后,然后接种到TSN培养基进行菌株的分离与筛选。对分离到的菌株进行菌落形态、显微形态初步观察,然后对疑似丁... 详细信息

为了获得产淀粉酶的丁酸梭菌,本研究从鸡小肠表面黏液中进行丁酸梭菌的分离与筛选,首先对样品进行80℃水浴10min除去非芽孢菌后,然后接种到TSN培养基进行菌株的分离与筛选。对分离到的菌株进行菌落形态、显微形态初步观察,然后对疑似丁酸梭菌的菌株进行产酸能力和淀粉酶酶活检测,最后对既产酸又高产淀粉酶的菌株进行生理生化鉴定和16SrDNA序列分析。结果表明分离到一株革兰氏阳性厌氧菌C.B1,菌体呈短杆状,能形成圆形或椭圆形芽孢,生理生化结果也符合丁酸梭菌的基本特征,16SrDNA序列长度为1 450bp,与丁酸梭菌的同源性高达99%以上,因此确定该分离菌株为丁酸梭菌,为进一步开发新的微生态制剂奠定了基础。

关键词：丁酸梭菌鸡源淀粉酶分离鉴定

植物乳杆菌DPP8对蛋鸡生产性能、血清生化指标和蛋品质的影响

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中国兽医学报 2016年第9期36卷 1608-1612,1642页

作者：余祖华丁轲丁盼盼李旺李元晓刘一尘贾艳艳曹平华王玉琴赵战勤河南科技大学动物疫病与公共卫生重点实验室河南洛阳471003 河南科技大学宏翔生物饲料实验室河南洛阳471003

选取300只43周龄罗曼粉蛋鸡,随机分为5组,每组3个重复,每个重复20只鸡,对照组(Ⅰ组)饲喂基础日粮,试验Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组在饲喂基础日粮基础上分别添加2.0×106、2.0×107、2.0×108、2.0×109 CFU/g的*** DPP8制剂。预试期1周,试验期9... 详细信息

选取300只43周龄罗曼粉蛋鸡,随机分为5组,每组3个重复,每个重复20只鸡,对照组(Ⅰ组)饲喂基础日粮,试验Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组在饲喂基础日粮基础上分别添加2.0×106、2.0×107、2.0×108、2.0×109 CFU/g的*** DPP8制剂。预试期1周,试验期9周。结果显示:(1)Ⅱ组和Ⅲ组的产蛋率显著高于对照组(P饲料中添加一定量的*** DPP8具有改善蛋鸡生产性能和提高蛋鸡蛋品质的作用,其中按照2.0×108 CFU/g剂量添加效果最好。

关键词：植物乳杆菌蛋鸡生产性能血清生化指标蛋品质

鸡RORα真核表达载体的构建及其在MSB1细胞中的表达

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中国畜牧兽医 2018年第7期45卷 1791-1797页

作者：尤钊左珂朦余祖华丁轲王垚垚刘彤张梦珂邱静静河南科技大学动物疫病与公共卫生重点实验室洛阳471003 河南科技大学宏翔生物饲料实验室洛阳471003

为构建鸡维甲酸相关孤核受体α(retinoid acid receptor related orphan receptorα,RORα)的真核表达载体,并检测其在MSB1细胞中的表达效果,本研究参照GenBank中鸡RORα基因序列(登录号:NM_001289887.1)设计特异性引物,从鸡肝脏组织中... 详细信息

为构建鸡维甲酸相关孤核受体α(retinoid acid receptor related orphan receptorα,RORα)的真核表达载体,并检测其在MSB1细胞中的表达效果,本研究参照GenBank中鸡RORα基因序列(登录号:NM_001289887.1)设计特异性引物,从鸡肝脏组织中提取总RNA,经反转录合成cDNA,以此为模板进行PCR扩增,将扩增的特异性RORα基因片段连接pMD18-T载体,构建克隆载体pMD18-T-RORα,再用SalⅠ和BamHⅠ双酶切克隆载体pMD18-T-RORα和真核表达载体pEGFP-N1,将酶切回收的RORα与pEGFP-N1片段进行连接,构建重组真核表达载体pEGFP-N1-RORα,经PCR、酶切和测序验证准确性后,将其转染MSB1细胞,于转染后48h荧光显微镜下观察EGFP的表达情况,并采用实时荧光定量PCR检测鸡RORα在MSB1细胞中的表达水平。结果显示,从构建的重组质粒pEGFP-N1-RORα中可扩增出大小约1 600bp的特异性片段,用SalⅠ和BamHⅠ可切出大小约4 700和1 600bp的两条带。实时荧光定量PCR结果显示,转染MSB1细胞48h后,与对照组相比,重组真核表达载体转染组中鸡RORα基因mRNA水平显著增加(P<0.05)。表明本试验成功构建了鸡RORα的真核表达载体,该载体可在MSB1细胞中表达鸡RORα,为进一步研究鸡RORα对MSB1细胞增殖的影响奠定基础。

关键词：鸡甲酸相关孤核受体α(RORα)基因真核表达载体 MSB1细胞表达

产纤维素酶地衣芽孢杆菌的诱变选育及其产酶条件优化

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中国畜牧兽医 2016年第4期43卷 1006-1011页

作者：余祖华丁轲侯奎李元晓李旺刘一尘曹平华贾艳艳程相朝河南科技大学动物疫病与公共卫生重点实验室洛阳471003 河南科技大学宏翔生物饲料实验室洛阳471003

为提高产纤维素酶地衣芽孢杆菌(Bacillus lincheniformis)的产酶能力,本试验以前期分离的产纤维素酶地衣芽孢杆菌LY02作为出发菌株,通过紫外线对该菌株进行了诱变选育,筛选高产纤维素酶的突变株,并分别对其接种量、培养温度、培养时间... 详细信息

为提高产纤维素酶地衣芽孢杆菌(Bacillus lincheniformis)的产酶能力,本试验以前期分离的产纤维素酶地衣芽孢杆菌LY02作为出发菌株,通过紫外线对该菌株进行了诱变选育,筛选高产纤维素酶的突变株,并分别对其接种量、培养温度、培养时间、培养基初始pH和金属离子等产酶条件进行了优化。结果显示,经诱变选育后突变菌株的纤维素酶活力较出发菌株提高了34.31%。其最佳产酶培养条件为:接种量1.5%,培养温度37℃,培养时间24h,培养基初始pH 5.0,K+和Ba2+对纤维素酶的产生有激活作用。本研究为进一步将高产纤维素酶的突变株开发为生产菌株提供了基础条件。

关键词：地衣芽孢杆菌纤维素酶诱变产酶条件酶活力

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产纤维素酶地衣芽孢杆菌***02摇瓶发酵条件优化

河南科技大学学报（自然科学版） 2016年第4期37卷 76-80,8页

作者：余祖华丁轲侯奎李元晓李旺河南科技大学动物疫病与公共卫生重点实验室河南洛阳471003 河南科技大学宏翔生物饲料实验室河南洛阳471003

为了提高产纤维素酶地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis LY02,***02）的产酶能力,采用单因素试验对该菌株产酶的摇瓶发酵条件进行了优化。优化结果显示：菌株***02发酵培养基的最适碳源为麦芽糖,氮源为酵母膏,初始pH值为5.0,培养温度... 详细信息

为了提高产纤维素酶地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis LY02,***02）的产酶能力,采用单因素试验对该菌株产酶的摇瓶发酵条件进行了优化。优化结果显示：菌株***02发酵培养基的最适碳源为麦芽糖,氮源为酵母膏,初始pH值为5.0,培养温度为37℃,培养时间为30 h,装液量为60 mL（250 m L三角瓶）,接种量（体积分数）为2%,摇床转速180～200 r/min。通过优化发酵条件,菌株***02的产酶活性达到了0.683 5 U/mL,比优化前提高了约27.73%。

关键词：纤维素酶地衣芽孢杆菌发酵条件酶活

胆盐水解酶基因的克隆及其在干酪乳杆菌CECT5276中的分泌表达

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动物营养学报 2021年第1期33卷 466-473页

作者：丁轲余祖玲王镨蒂余祖华李旺李元晓何万领曹平华张春杰刘宁河南科技大学宏翔生物饲料实验室洛阳471003 洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室洛阳471003

本试验旨在克隆植物乳杆菌(***)DPP8的胆盐水解酶(BSH)基因,并在干酪乳杆菌(***)CECT5276中对其进行表达。通过PCR技术克隆*** DPP8的BSH基因,然后将该基因重组到***表达载体pMJ67-sp中,获得了重组表达质粒pMJ67-sp-BSH,再将其电转化至*... 详细信息

本试验旨在克隆植物乳杆菌(***)DPP8的胆盐水解酶(BSH)基因,并在干酪乳杆菌(***)CECT5276中对其进行表达。通过PCR技术克隆*** DPP8的BSH基因,然后将该基因重组到***表达载体pMJ67-sp中,获得了重组表达质粒pMJ67-sp-BSH,再将其电转化至*** CECT5276中,通过乳糖诱导BSH分泌表达。采用牛磺酸标准曲线法对表达产物的BSH活力进行测定,并采用邻苯二甲醛(OPA)法对其降胆固醇能力进行测定。结果显示:本试验获得了BSH基因的全长序列,为975 bp;同源性比较显示该基因与*** MBUL69的BSH基因的同源性为99.6%;进化树分析显示该基因与*** MBUL69的BSH基因处于同一分支。表达产物的十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果显示获得了1条分子质量约为37 ku的蛋白条带,与推测的BSH蛋白分子质量大小相符。酶活力测定结果表明重组菌株在37℃、0.5%乳糖诱导36 h时,表达产物中BSH活力最高,可达42.57 U/mL。重组菌株在含2%胆固醇的MRS培养基中培养48 h后,胆固醇降解率为94.43%。综上可知,本试验成功克隆了*** DPP8 BSH基因,并实现了其在*** CECT5276中的高效分泌表达。

关键词：胆盐水解酶克隆干酪乳杆菌分泌表达酶活力

gga-miRNA-155对MDCC-MSB1细胞增殖的影响

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2019年第2期47卷 1-6页

作者：余祖华丁轲郁川贾艳艳何雷廖成水李静张梦珂邱静静张春杰程相朝河南科技大学动物疫病与公共卫生重点实验室河南洛阳471023 洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室河南洛阳471023 河南科技大学宏翔生物饲料实验室河南洛阳471023

【目的】构建gga-miRNA-155前体基因(pre-gga-miRNA-155)真核表达载体,验证gga-miRNA-155在MDCC-MSB1细胞中的表达效果,探究其对MDCC-MSB1细胞增殖的影响。【方法】采用PCR方法从鸡肝脏基因组DNA中扩增gga-miRNA-155前体基因片段pre-gga-miRNA-155,并将其克隆入pMD-18T载体,构建克隆载体pMD-18T-pre-gga-miRNA-155。用EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切pcDNA6.2-GW/EmGFP-miRNA真核表达载体和pMD-18T-pre-gga-miRNA-155,将pre-gga-miRNA-155酶切回收片段与pcDNA6.2-GW/EmGFP-miRNA的酶切回收片段进行连接,构建重组真核表达载体pcDNA6.2-pre-gga-miRNA-155,对其进行PCR、EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切及DNA测序鉴定。将重组载体转染到MDCC-MSB1细胞中,应用实时荧光定量PCR (Real-time PCR)检测gga-mi-RNA-155的表达水平,利用MTT法检测细胞增殖能力的变化。【结果】PCR扩增获得了长度约154bp的鸡pre-gga-mi-RNA-155基因。成功构建了pre-gga-miRNA-155的真核表达载体pcDNA6.2-pre-gga-miRNA-155,瞬时转染MD-CC-MSB1细胞后gga-miRNA-155表达水平显著增加,且MDCC-MSB1细胞的体外增殖能力增强。【结论】成功构建了pre-gga-miRNA-155的真核表达载体,其可在MDCC-MSB1细胞中过表达gga-miRNA-155,且可促进MDCC-MSB1细胞的体外增殖。

关键词： gga-miRNA-155 表达载体 MDCC-MSB1细胞细胞增殖

基于两种模型研究饮茶对不同形态铁生物有效性的影响

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中国食品学报 2019年第4期19卷 54-60页

作者：何万领李晓丽杨肖娥河南科技大学动物科技学院动物生物饲料与精准营养实验室河南洛阳471023 环境修复与资源再生教育部重点实验室浙江大学环境与资源学院杭州310029

利用SD大鼠饲养实验和体外消化/Caco-2细胞系培养模型,分别研究饮茶与否以及间隔时间对不同形态铁生物有效性的影响。结果表明,与对照组相比,几种形态铁均不同程度改善了大鼠体内红细胞总数(RBC)、血红蛋白量(Hb)、总铁结合力(TIBC)、... 详细信息

利用SD大鼠饲养实验和体外消化/Caco-2细胞系培养模型,分别研究饮茶与否以及间隔时间对不同形态铁生物有效性的影响。结果表明,与对照组相比,几种形态铁均不同程度改善了大鼠体内红细胞总数(RBC)、血红蛋白量(Hb)、总铁结合力(TIBC)、血清铁、肝脏和肾脏铁状况,以EDTA-FeNa效果最好。饮茶降低了补铁各组大鼠血液RBC(P0.05)和48.82%(P<0.05)。补铁同时饮茶会严重影响铁的生物有效性,尤其是补铁后30 min内的铁生物有效性降低明显,而补铁45 min后再饮茶,对铁生物有效性影响不大。总之,不同形态铁的生物有效性也不同;饮茶可降低几种形态铁的有效性,尤其是补铁与饮茶同时进行时;建议补铁和饮茶应间隔一定时间。

关键词：饮茶不同形态铁铁生物有效性 Caco-2细胞模型 SD大鼠模型