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鸡Visfatin蛋白的原核表达、纯化及其活性研究

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畜牧兽医学报 2016年第9期47卷 1785-1794页

作者：张盼盼商鹏飞田方圆韩瑞丽蒋瑞瑞孙桂荣康相涛刘小军田亚东河南农业大学牧医工程学院河南省家禽种质资源创新工程研究中心郑州450002

本试验旨在通过克隆Visfatin基因,将其在原核表达系统中表达并纯化,通过3T3-L1细胞的分化验证其活性,成功获得鸡重组Visfatin蛋白。以AA肉仔鸡肝组织总RNA为模板,qRT-PCR扩增Visfatin基因,转化进入pGEM？-T载体,再与原核表达载体pET-30... 详细信息

本试验旨在通过克隆Visfatin基因,将其在原核表达系统中表达并纯化,通过3T3-L1细胞的分化验证其活性,成功获得鸡重组Visfatin蛋白。以AA肉仔鸡肝组织总RNA为模板,qRT-PCR扩增Visfatin基因,转化进入pGEM？-T载体,再与原核表达载体pET-30a连接转化,获取含pET-30a-Visfatin重组质粒的*** BL21（DE3）表达菌株。以IPTG诱导重组菌株,优化表达条件,SDS-PAGE鉴定表达情况。采用镍离子亲和层析对Visfatin蛋白进行纯化,Western blot鉴定表达蛋白,并通过3T3-L1细胞的分化情况鉴定表达蛋白Visfatin的活性。结果,通过NcoⅠ、XhoⅠ酶切获得的结果与预期目的条带大小相符,成功构建pET-30a-Visfatin表达载体。SDSPAGE检测结果表明,在培养基pH为8.0,IPTG终浓度为0.4mmol·L-1,30℃条件下,诱导10～12h时可溶性蛋白表达量最大。通过镍离子层析纯化Visfatin蛋白,在SDS-PAGE的60ku处可见一条与预期一致的蛋白条带。Western blot证明纯化蛋白可与6＊His标签特异性结合。油红O染色结果表明,与对照组相比Visfatin诱导的3T3-L1细胞有更多的脂滴形成。qRT-PCR结果显示,在3T3-L1细胞分化过程中,Visfatin作用下标志基因PPARγ、aP2、FAS和C/EBPα的表达量显著增加（P〈0.05）。本研究成功建立了一套标准化的鸡Visfatin重组蛋白表达程序,获得了具有生物活性的鸡Visfatin,为其在家禽领域的进一步研究奠定了基础。

关键词：鸡重组Visfatin 克隆原核表达条件优化 3T3-L1

蛋鸡脂肪代谢相关基因ACACA和FASN表达及调控特性

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农业生物技术学报 2019年第2期27卷 280-288页

作者：田卫华杨丽玉李红韩瑞丽王彦彬田亚东康相涛刘小军河南农业大学牧医工程学院/河南省家禽种质资源创新工程研究中心/河南省家禽育种国际联合实验室

哺乳动物的研究表明,乙酰辅酶A羧化酶A(acetyl-CoA carboxylases alpha, ACACA)与脂肪酸合成酶(fatty acid synthase, FASN)是脂肪酸从头合成的关键限速酶,对脂肪酸的生物合成有着重要的作用,其表达受到多种激素的调控。本研究旨在探讨... 详细信息

哺乳动物的研究表明,乙酰辅酶A羧化酶A(acetyl-CoA carboxylases alpha, ACACA)与脂肪酸合成酶(fatty acid synthase, FASN)是脂肪酸从头合成的关键限速酶,对脂肪酸的生物合成有着重要的作用,其表达受到多种激素的调控。本研究旨在探讨蛋鸡脂肪代谢相关基因ACACA与FASN基因的表达规律以及雌激素、油脂摄入对其表达量的影响。利用qRT-PCR分析ACACA与FASN基因在蛋鸡不同组织以及不同发育时期肝脏中的表达规律,分别从个体和细胞水平研究不同雌激素和大豆油水平对蛋鸡ACACA与FASN基因表达量的影响。结果表明,ACACA与FASN基因在心、肝、脾、肺、肾、胸肌、十二指肠、腹脂、胰腺、卵巢中均有表达,且在肝脏组织中表达量最高;ACACA与FASN基因在产蛋高峰期鸡肝脏中的表达量极显著高于产蛋前期(P≤0.01);0.5、1.0、2.0 mg/kg的17β-雌二醇处理鸡肝脏组织和25,50,100 nmol/L的17β-雌二醇处理蛋鸡胚肝脏原代细胞后,ACACA与FASN基因的表达量呈现升高趋势,且差异具有显著性(P≤0.05)或极显著性(P≤0.01);饲喂8%大豆油饲粮组蛋鸡肝脏ACACA与FASN基因的表达水平分别显著(P≤0.05)与极显著(P≤0.01)高于对照组,4%大豆油饲粮组与对照组间无明显差异(P>0.05)。综上所述,鸡ACACA与FASN基因参与脂质代谢过程,其表达受雌激素调控,且饲粮中添加8%水平的大豆油可显著提高鸡ACACA与FASN基因的表达量。本研究为进一步解析ACACA与FASN基因对鸡脂质代谢的调控机制提供了科学依据。

关键词：乙酰辅酶A羧化酶A基因(ACACA) 脂肪酸合成酶基因(FASN) 产蛋鸡脂质代谢表达调控

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6个制汁葡萄果实品质差异分析

果树学报 2023年第8期40卷 1717-1727页

作者：荀志丽马小河黄丽萍王敏刘晓婷赵旗峰山西农业大学果树研究所山西太谷030815 果树种质资源创新和利用山西省重点实验室山西太谷030815

【目的】分析不同制汁葡萄品种果实品质及香气成分,筛选优良制汁品种。【方法】以国家种质资源圃太谷葡萄圃中6个制汁葡萄为试验材料,对其成熟期果实果粒大小、制汁率和可溶性固形物、可溶性糖、总酸、总酚、维生素C含量,以及香气成分... 详细信息

【目的】分析不同制汁葡萄品种果实品质及香气成分,筛选优良制汁品种。【方法】以国家种质资源圃太谷葡萄圃中6个制汁葡萄为试验材料,对其成熟期果实果粒大小、制汁率和可溶性固形物、可溶性糖、总酸、总酚、维生素C含量,以及香气成分和含量等指标进行测定分析。【结果】6个制汁葡萄品种单果粒质量在2.57~4.18 g之间,出汁率在68%~75%之间;除可溶性固形物含量无显著差异外,可溶性糖、总酸、总酚、维生素C含量均有显著差异;6个制汁品种共检测出65种香气化合物,组成与含量各不相同,其中OAV(odor activity value)≥1的化合物有19种。主成分分析得出,柔丁香和外明红葡萄位于第一主成分的正半轴,白香蕉和黑虎香葡萄在第二主成分的正半轴;香气化合物芳樟醇、玫瑰醚、苯乙酸乙酯、庚醛、壬醛、苯乙醛、β-大马士酮、戊酸乙酯、月桂烯的贡献率较大;聚类分析显示,果实中香气化合物可分为四大类,依据香气成分进行归类,可将白香蕉、康拜尔早生、外明红、柔丁香等6个品种区分开。【结论】根据果实中可溶性糖、维生素C、总酚含量以及果汁pH,底拉洼葡萄品质较好;根据香气化合物组成及含量,6个品种被明显区分,柔丁香葡萄香气物质种类最丰富,萜烯类贡献率较高,黑虎香葡萄C13-降戊二烯贡献率最高,柔丁香和黑虎香2个葡萄品种的香味更特殊。

关键词：制汁葡萄品种果实香气主成分分析

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四倍体三角梅的组培快繁技术体系的建立

分子植物育种 2024年

作者：王景飞陈宣戚华沙符瑞侃黄赛侯辛辛杨珺海南省农业科学院热带园艺研究所国家种质资源澄迈观测实验站海南省特种经济植物种质资源创新利用重点实验室

以四倍体三角梅的无菌苗为试验材料，采用组织培养的方法，对不同基本培养基、植物生长调节剂的种类和浓度进行对比试验，筛选适宜的增殖和生根的培养方法，并探索组培苗高效移栽方法，构建四倍体三角梅组培快繁技术体系。结果表明：MS... 详细信息

以四倍体三角梅的无菌苗为试验材料，采用组织培养的方法，对不同基本培养基、植物生长调节剂的种类和浓度进行对比试验，筛选适宜的增殖和生根的培养方法，并探索组培苗高效移栽方法，构建四倍体三角梅组培快繁技术体系。结果表明：MS基本培养基最适宜四倍体三角梅不定芽生长，增殖系数达4.33；最佳增殖培养基配方为MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA0.2 mg/L，增殖系数为5.56；最佳生根培养基配方为MS+NAA2.0 mg/L+IBA0.5 mg/L，生根率97.00%，生根数7.03条；组培苗适宜移栽基质为椰糠:珍珠岩：有机肥(V5:V5:V1)，成活率达98.00%，植株生长粗壮。本研究成功建立了四倍体三角梅组培快繁技术体系，将为三角梅四倍体种苗繁育、多倍体离体保存、优良品种选育提供技术支持。

关键词：三角梅四倍体组培快繁技术体系

不同间作方式对凉粉草品质及根际土壤特性的影响

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中国农业科学 2024年第14期57卷 2755-2770页

作者：苏海兰朱雁鸣陈宏牛雨晴郑梅霞朱育菁福建省农业科学院作物研究所/福建省种质资源中心

【目的】探析间作对凉粉草（Mesona chinesis）品质的影响及其作用机制，为凉粉草的高质量栽培技术开发提供理论依据。【方法】通过田间随机区组试验，设置大豆/凉粉草/玉米间作（S/M/C）和大豆/凉粉草间作（S/M）两种间作模式，并以单... 详细信息

【目的】探析间作对凉粉草（Mesona chinesis）品质的影响及其作用机制，为凉粉草的高质量栽培技术开发提供理论依据。【方法】通过田间随机区组试验，设置大豆/凉粉草/玉米间作（S/M/C）和大豆/凉粉草间作（S/M）两种间作模式，并以单独种植凉粉草（M）为对照，比较不同种植模式对凉粉草品质及其根际土壤特性的影响。【结果】相比于单独种植凉粉草，S/M/C间作模式和S/M间作有利于促进凉粉草叶片和茎中的钙（Ca，叶中增加11.36%—24.20%，茎中增加33.44%—38.16%）、镁（Mg，叶增加34.41%—52.00%、茎增加15.20%—91.99%）、铁（Fe，叶中增加15.21%—15.46%）、铜（Cu，茎增加17.19%—30.73%）等元素积累。S/M/C间作时，凉粉草茎部总黄酮含量增加44.42%。两种间作显著降低了凉粉草根际土壤全氮（TN）、碱解氮（AHN）、速效钾（AK）等养分含量，显著改善了凉粉草土壤pH(M模式4.82,S/M模式5.22,S/M/C模式5.51)，而pH是本研究中驱动细菌群落结构改变最重要的土壤因子。S/M/C处理显著提高凉粉草根际土壤的细菌多样性，两种间作均显著提高优势菌属芽孢杆菌（Bacillus）的相对丰度：由M模式下的3.24%分别增加至S/M模式下的5.28%和S/M/C模式下的8.09%。此外，S/M/C间作时，凉粉草根际土壤招募更多的蛭弧菌门（Bdellovibrionota）、Dependentiae、WS2等菌门及甲基孢囊菌属（Methylocystis）等菌属。【结论】大豆/凉粉草/玉米间作（S/M/C）可促进凉粉草营养元素和总黄酮等活性成分积累，有利于其品质提升。土壤pH的改善可能是S/M/C模式驱动土壤细菌多样性提高、群落结构变化的最主要因素。凉粉草根际土壤中特定细菌在S/M/C模式下的富集有利于凉粉草种植土壤的生物学特性的改善。因此，S/M/C等合理间作是实现凉粉草高质量种植的有效措施。

关键词：间作凉粉草品质土壤养分细菌多样性

基于转录组分析花生单粒精播与多粒穴播植株荚果产量差异的分子机制

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中国农业科学 2023年第22期56卷 4386-4402页

作者：杨莎刘珂珂刘颖郭峰王建国高华鑫孟静静张佳蕾万书波山东省农业科学院农作物种质资源研究所

【目的】在中国，为保证出苗率及播种质量，田间常采用多粒播种。然而，多粒穴播植株间的竞争往往限制了植株的生长和最终产量。为了解决这一矛盾，团队前期研究建立了单粒精准播种的高产栽培技术。单粒精播技术的节种作用和增产效果结... 详细信息

【目的】在中国，为保证出苗率及播种质量，田间常采用多粒播种。然而，多粒穴播植株间的竞争往往限制了植株的生长和最终产量。为了解决这一矛盾，团队前期研究建立了单粒精准播种的高产栽培技术。单粒精播技术的节种作用和增产效果结合起来能够带来更大的效益，实现节本增效。挖掘不同种植方式花生叶片、根系及荚果中的差异表达基因，探讨单粒精播栽培技术提高花生荚果产量的分子机制，为进一步推动花生高产高效提供理论依据和技术支撑。【方法】以花生品种花育25号为试材，测定单粒精播和多粒穴播种植产量相关指标，分别取花生开花后30 d倒三叶和主根及侧根、鸡头幼果期花生荚果进行转录组测序，从分子水平阐述不同播种方式花生产量的差异。【结果】与多粒穴播相比较，单粒精播种植方式下花生单株荚果数、单株饱果数、单株果重、经济系数均显著提高。转录组数据组装后，平均每库包含4 430万个读数。通过不同比较组合中差异表达基因、GO和KEGG通路分析，与多粒穴播相比较，单粒精播种植植物叶片中参与赤霉素信号传导、光信号传导等过程的转录因子及光系统Ⅱ放氧复合体、叶绿体膜、氧化还原反应等光合作用相关基因表达量升高；根系中生物胁迫和非生物胁迫诱导的苯丙素代谢途径相关基因包括细胞色素P450基因、氧化还原基因、胁迫反应转录因子和信号调节蛋白显著富集。荚果发育初期淀粉和蔗糖代谢基因显著富集，更加有利于花生荚果发育过程中籽仁充实。【结论】花生叶片中光合相关基因表达上调能够促进光合效率提升，与产量的增加密切相关；单粒精播提高了根系抗生物和非生物胁迫的能力，结合荚果发育初期能量物质相关基因表达上调均有利于地下部花生荚果的发育，提高花生产量。

关键词：花生单粒精播产量 RNA-Seq 光合作用苯丙素途径

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2BM-4型藜麦覆膜精量播种机设计与试验

农业机械学报 2020年第12期51卷 86-94页

作者：王小瑜康建明丁汉凤彭强吉张春艳李娜娜山东省农业机械科学研究院济南250100 山东省农作物种质资源中心济南250100

针对目前国内缺乏藜麦专用播种机械的现状,设计了一种藜麦覆膜精量播种机。根据藜麦覆膜精量种植农艺要求,采用滴灌管浅埋开沟技术,使用滑刀式开沟器在两侧种行间开出宽45 mm、深20 mm的浅沟,用于埋设滴灌管;采用随动仿形覆膜装置将地... 详细信息

针对目前国内缺乏藜麦专用播种机械的现状,设计了一种藜麦覆膜精量播种机。根据藜麦覆膜精量种植农艺要求,采用滴灌管浅埋开沟技术,使用滑刀式开沟器在两侧种行间开出宽45 mm、深20 mm的浅沟,用于埋设滴灌管;采用随动仿形覆膜装置将地膜铺设于整平装置整平后的地表上;设计了翼勺式取种器,确定了种勺结构和侧孔、容种腔的长度,以实现藜麦精量取种;采用滚筒式穴播器在地膜上打穴播种,采用覆土装置将土壤输送至种行进行覆盖,完成播种过程。以白藜品种“陇藜1号”为试验对象,采用三因素四水平正交试验设计方法,试验分析播种机的作业速度、侧孔长度、充种高度对播种性能的影响。结果表明,当播种机作业速度为1.0 m/s、侧孔长度为10 mm、充种高度140 mm时,播种机性能指标最佳,此时合格指数为85.4%,空穴指数为1.7%,漏播指数为5.2%,重播指数为9.4%,播深合格指数为88.1%,各项性能指标均达到了设计要求和相关标准要求,满足藜麦种植的覆膜精量播种要求。

关键词：藜麦覆膜精量播种机正交试验

老化处理对大豆种子活力及线粒体抗坏血酸-谷胱甘肽循环的影响

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植物生理学报 2016年第4期52卷 543-550页

作者：田茜王栋张文兰段乃彬李群颜廷进戴双丁汉凤山东省农作物种质资源中心济南250100

以大豆‘中黄13’为材料,研究人工老化后大豆种子活力及线粒体抗坏血酸-谷胱甘肽(ASC-GSH)循环的变化。结果表明,随老化时间的延长,大豆种子的发芽率、发芽势、发芽指数和活力指数均显著下降;老化种子的相对电导率和丙二醛(MDA)含量随... 详细信息

以大豆‘中黄13’为材料,研究人工老化后大豆种子活力及线粒体抗坏血酸-谷胱甘肽(ASC-GSH)循环的变化。结果表明,随老化时间的延长,大豆种子的发芽率、发芽势、发芽指数和活力指数均显著下降;老化种子的相对电导率和丙二醛(MDA)含量随着老化时间的延长逐渐增大,超氧阴离子(O_2?^-)产生速率和过氧化氢(H_2O_2)含量呈现先升高后降低的趋势;与对照相比,老化种子中线粒体细胞色素c氧化酶(COX)和苹果酸脱氢酶(MDH)活性显著下降,呼吸速率和呼吸控制率(RCR)显著降低;老化种子中线粒体超氧化物歧化酶(SOD)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)、单脱氢抗坏血酸还原酶(MDHAR)、脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)和谷胱甘肽还原酶(GR)的活性以及总ASC和GSH含量显著降低,说明老化导致活性氧(ROS)代谢异常,线粒体呼吸功能及ASC-GSH循环紊乱。ROS的过量积累可能是导致种子活力丧失的主要原因。

关键词：大豆人工老化线粒体活性氧抗坏血酸-谷胱甘肽循环

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家鸡全基因组测序研究进展

生物技术通报 2017年第7期33卷 35-39页

作者：李东华王鑫磊李转见孙桂荣康相涛闫峰宾河南农业大学牧医工程学院河南省家禽种质资源创新工程研究中心郑州450002

鸡具有独特的生物学特性。全基因组测序是即对一种生物的基因组中的全部基因进行测序,主要包括de novo测序和全基因组重测序。近年来,由于测序技术的飞速发展,鸡全基因组研究取得了很多重要的进展,为解释鸡的生物学特性和缩短分子育种... 详细信息

鸡具有独特的生物学特性。全基因组测序是即对一种生物的基因组中的全部基因进行测序,主要包括de novo测序和全基因组重测序。近年来,由于测序技术的飞速发展,鸡全基因组研究取得了很多重要的进展,为解释鸡的生物学特性和缩短分子育种周期发挥了重要作用。重点阐述了不同品种鸡全基因组de novo测序的完成、全基因组重测序技术在解析品种遗传多样性、揭示进化机制、质量性状遗传机制广泛应用,讨论了鸡全基因组测序工作存在的问题及其展望,旨在为家鸡种质资源的改良和分子育种提供重要的参考资料。

关键词：鸡基因组测序