检索结果-南通市图书馆

重组pfuDNA聚合酶的表达及扩增条件优化

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

化学试剂 2008年第9期30卷 641-645页

作者：景建洲江风阁李振勇陈小科郑州轻工业学院食品与生物工程学院河南郑州450002 河南省生物工程技术研究中心河南郑州450002

从Pyrococcus furiosus总DNA扩增出pfu DNA聚合酶基因,克隆到表达载体pPRoEX HTb,转化大肠杆菌DH5α。经IPTG诱导表达后,用热变性和(NH4)2SO4沉淀去除部分杂蛋白,粗酶液依次经Ni柱、肝素柱和DNA柱进一步纯化,获得了高纯度的重组pfu酶,... 详细信息

从Pyrococcus furiosus总DNA扩增出pfu DNA聚合酶基因,克隆到表达载体pPRoEX HTb,转化大肠杆菌DH5α。经IPTG诱导表达后,用热变性和(NH4)2SO4沉淀去除部分杂蛋白,粗酶液依次经Ni柱、肝素柱和DNA柱进一步纯化,获得了高纯度的重组pfu酶,并对重组酶的扩增条件进行了优化。结果显示,重组酶的最佳扩增条件为:pH 8.75、Mg2+浓度为2.0 mmol/L、温度为72℃,利用该酶成功扩增出4.5 kb的DNA片段。

关键词： pfu DNA聚合酶表达 pH Mg2+浓度延伸温度

非洲猪瘟病毒p37蛋白生物信息学分析及其多克隆抗体制备

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国畜牧兽医 2023年第1期50卷 300-309页

作者：张梦杨何健刘阳坤姚伦广南阳师范学院生命科学与农业工程学院南阳473061 河南省畜禽保健品工程技术研究中心南阳473061 河南省动物疫病诊断与综合防控工程技术研究中心南阳473061

【目的】获取ASFV p37蛋白,并制备抗ASFV p37蛋白的多克隆抗体,为ASFV p37蛋白结构和功能研究提供材料。【方法】应用生物信息学工具对ASFV HLJ/2018(GenBank登录号:MK333180.1)p37蛋白进行分析,设计合成p37基因,并构建pET32a-p37重组... 详细信息

【目的】获取ASFV p37蛋白,并制备抗ASFV p37蛋白的多克隆抗体,为ASFV p37蛋白结构和功能研究提供材料。【方法】应用生物信息学工具对ASFV HLJ/2018(GenBank登录号:MK333180.1)p37蛋白进行分析,设计合成p37基因,并构建pET32a-p37重组质粒。将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达后,通过SDS-PAGE对重组蛋白的可溶性进行分析。收集菌体进行超声破碎,分离沉淀并使用8 mol/L尿素变性后离心,用0.45μm滤膜过滤离心后的上清,使用镍亲和层析柱纯化蛋白,通过SDS-PAGE、Western blotting对其纯化效果及特异性进行验证。将纯化后的p37蛋白按照50μg/只免疫小鼠,制备抗ASFV p37蛋白多克隆抗体。利用间接ELISA方法测定制备的多克隆抗体效价;通过Western blotting、间接免疫荧光试验检测该多克隆抗体的特异性。【结果】生物信息学分析表明,p37蛋白为稳定亲水性蛋白,无跨膜区和信号肽。二级结构主要含有α-螺旋(45.28%)、延伸链(15.09%)、无规则卷曲(31.54%)。SDS-PAGE、Western blotting结果显示,经IPTG诱导后,成功表达重组蛋白p37,大小62 ku左右,主要以包涵体形式存在,且能与His单克隆抗体发生反应。间接ELISA结果显示,制备的鼠源多克隆抗体效价为1∶256000。Western blotting结果显示,在42 ku左右出现了特异性条带;间接免疫荧光显示出了特异性的红色荧光,表明该多克隆抗体能与重组杆状病毒表达的p37蛋白发生反应,具有较好的特异性。【结论】本试验成功表达并纯化了ASFV p37蛋白,制备了抗ASFV p37蛋白多克隆抗体,重组蛋白具有较好的免疫原性,能产生较强的免疫反应,为后续ASFV p37蛋白结构功能研究、抗体及相关疫苗研发奠定基础。

关键词：非洲猪瘟病毒(ASFV) p37蛋白蛋白表达多克隆抗体

维普期刊数据库博看期刊

同方期刊数据库

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

生物转化法制备L-天冬酰胺

中国生物工程杂志 2016年第1期36卷 63-67页

作者：张奇张露徐友强裴疆森程池中国食品发酵工业研究院中国工业微生物菌种保藏管理中心北京100015 山东省富马酸生物转化工程技术研究中心烟台265709

探索生物转化法制备L-天冬酰胺的技术与工艺。通过分子生物学方法,克隆来源于大肠杆菌(Escherichia coli,***)JM109的天冬酰胺合成酶A基因asn A,并于*** BL21(DE3)中表达,利用构建的***基因工程菌*** BL21(DE3)/p ET28a(+)-asn A全细胞... 详细信息

探索生物转化法制备L-天冬酰胺的技术与工艺。通过分子生物学方法,克隆来源于大肠杆菌(Escherichia coli,***)JM109的天冬酰胺合成酶A基因asn A,并于*** BL21(DE3)中表达,利用构建的***基因工程菌*** BL21(DE3)/p ET28a(+)-asn A全细胞高密度催化L-天冬氨酸生产L-天冬酰胺,以PITC柱前衍生-高效液相检测底物和产物。表达的蛋白质分子质量约为37k Da,与预期大小相符,比酶活力为1786.6U/g。L-天冬氨酸转化率为95.8%,L-天冬酰胺产量可达126.5g/L,生产速率为15.81g/(L·h)。结果表明,已成功构建高效表达天冬酰胺合成酶A基因工程菌株,并用于催化L-天冬氨酸转化生产L-天冬酰胺,解决了L-天冬酰胺生物转化生产工艺中ATP成本过高的难题,为L-天冬酰胺制备提供新的绿色途径。

关键词：生物转化 L-天冬氨酸天冬酰胺合成酶 L-天冬酰胺

枯草芽胞杆菌168不对称转化产生磷霉素的蛋白质组学分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

生物工程学报 2013年第6期29卷 735-750页

作者：解复红钞亚鹏石家骥张国青杨敬钱世钧中国科学院微生物研究所传感技术联合国家重点实验室北京100101 河南省科学院生物研究所河南省工业酶工程技术研究中心河南郑州450008

旨在用蛋白质组学方法揭示枯草芽胞杆菌Bacillus subtilis 168将顺丙烯磷酸转化成磷霉素的机理。*** 168能够将顺丙烯磷酸不对称转化成磷霉素。气相色谱分析发现在转化培养基发酵液中的磷霉素的含量达816.6μg/mL,转化率为36.05%。将分... 详细信息

旨在用蛋白质组学方法揭示枯草芽胞杆菌Bacillus subtilis 168将顺丙烯磷酸转化成磷霉素的机理。*** 168能够将顺丙烯磷酸不对称转化成磷霉素。气相色谱分析发现在转化培养基发酵液中的磷霉素的含量达816.6μg/mL,转化率为36.05%。将分别培养在含有底物和不含底物的培养基中的*** 168的胞质蛋白进行双向凝胶电泳。对两种条件下的电泳图谱进行比较,发现有98个差异表达蛋白。其中在有底物存在时,表达量下调的点有20个,表达量上调的点52个,底物特异性表达的点有26个。对差异表达蛋白进行质谱鉴定,共鉴定到80个蛋白点,其中下调的点17个,上调的点45个,底物特异性表达的点18个。这些蛋白分别参与胁迫反应、氧化还原反应、物质转运、核苷酸代谢、糖代谢、氨基酸和蛋白质代谢等。根据上述对*** 168蛋白质组学分析结果,推测菌株是通过两步将顺丙烯磷酸转化成磷霉素的。第一步是水化反应,第二步是脱氢反应。

关键词：枯草芽胞杆菌顺丙烯磷酸磷霉素转化蛋白质组学分析

盐酸预处理对生物质热解特性和热力学特性的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

农业机械学报 2020年第8期51卷 320-327页

作者：陈东雨黄顺朝刘新月牛卫生刘越洋史国宏沈阳农业大学工程学院沈阳110161 沈阳农业大学生物炭工程技术研究中心沈阳110161

为深入探讨盐酸预处理对生物质热解特性的影响,采用热重法对比分析了酸洗前后玉米秸秆和银中杨在低升温速率(10、20、30、40、50℃/min)下的热解特性,利用分布活化能模型(DAEM)计算了热解过程的动力学参数和相应的热力学参数,采用傅里... 详细信息

为深入探讨盐酸预处理对生物质热解特性的影响,采用热重法对比分析了酸洗前后玉米秸秆和银中杨在低升温速率(10、20、30、40、50℃/min)下的热解特性,利用分布活化能模型(DAEM)计算了热解过程的动力学参数和相应的热力学参数,采用傅里叶变换红外光谱(FTIR)分析了酸洗前后生物质化学结构的变化。结果表明:生物质热解过程经历了失水、玻璃化转变、快速热解和碳化4个阶段;酸洗预处理提高了生物质热解的最大失重速率和最终失重率,减少了焦炭的产生。在转化率为20%~70%时,用DAEM模型计算得到酸洗前后玉米秸秆和银中杨热解活化能分别为218.27~340.08 kJ/mol、225.17~291.73 kJ/mol、227.35~254.76 kJ/mol、197.39~235.52 kJ/mol。盐酸酸洗预处理整体上降低了生物质热解过程中的活化能、焓变和熵变,增加了吉布斯自由能(ΔG),促进了热解反应。酸洗前后玉米秸秆和银中杨红外光谱图相似,但在相同吸收峰处存在明显的强度变化,说明酸洗预处理对不同生物质有机官能团的影响程度不同。

关键词：玉米秸秆银中杨热解盐酸预处理酸洗动力学

卟啉钯敏化剂构效性质与三线态-三线态湮灭上转换性能研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

光谱学与光谱分析 2021年第1期41卷 71-79页

作者：叶常青于雪陈硕然梁作芹周宇扬王筱梅苏州科技大学绿色印刷纳米光子工程技术研究中心材料科学与工程学院江苏苏州215009

上转换发光是一种将长波长的激发光转化为短波长发射的反斯托克斯发光现象,三线态-三线态湮灭上转换(TTA-UC)能够在较低密度能量下被激发,且上转换量子产率高,因此获得研究者们广泛关注。关于敏化剂分子结构与上转换发光性能相关性的研... 详细信息

上转换发光是一种将长波长的激发光转化为短波长发射的反斯托克斯发光现象,三线态-三线态湮灭上转换(TTA-UC)能够在较低密度能量下被激发,且上转换量子产率高,因此获得研究者们广泛关注。关于敏化剂分子结构与上转换发光性能相关性的研究一直是TTA-UC研究领域的重要热点,选择两种代表性的卟啉钯光敏剂[PdOEP-八乙基卟啉钯(Ⅱ)和PdBrTPP-四溴苯基卟啉钯(Ⅱ)]与蒽衍生物9,10-(4-羟甲基)苯基蒽p-DHMPA发光剂组合上转换体系作为研究模型,通过一系列合成工作获得材料分子后,进一步比较两种敏化剂的光谱性质与体系最终上转换性能之间关系。通过细致研究敏化剂和发光剂的荧光发射和寿命等光谱性质对敏化剂系间窜越,三线态-三线态能量转移及三线态-三线态湮灭等能量传递过程的影响后,发现在532 nm处的摩尔吸光系数PdBrTPP(10.8 cm^-1·mmol^-1)大于PdOEP(3.0 cm^-1·mmol^-1);三线态寿命PdBrTPP(173.13μs)大于PdOEP(109.21μs)。但与p-DHMPA配对时光敏剂与发光剂的三线态能级差ΔE TT,PdOEP(0.140 eV)却高于PdBrTPP(0.062 eV),通过Stern-Volmer方程得到Stern-Volmer猝灭常数K SV和双分子猝灭常数k q值也是PdOEP略高,最终表现出上转换阈值PdOEP/p-DHMPA(22.40 mW·cm^-2)小于PdBrTPP/p-DHMPA(29.78 mW·cm^-2),上转换发光效率ΦUC,PdOEP/p-DHMPA(28.3%)大于PdBrTPP/p-DHMPA(26.8%)。因此,卟啉钯敏化剂的构效对三重态湮灭上转换发光效率影响最为重要的决定因素是敏化剂三线态高低。对于不同的敏化剂,在分子主体结构、摩尔吸光系数与三线态寿命等光谱参数差别不大的情况下,敏化剂的三线态能级越高,就将会具有更大的上转换发光效率。然而如果以总上转换能力指标来评价,PdBrTPP的共轭结构能够提升其在激发波长处吸收更多光子的能力,具有比PdOEP更高的摩尔吸光系数,造成其总上转换能力η比PdOEP高3.4倍。因此从上转换总效能指标来评价,通过敏化剂分子设计调控其在激发光波长处的摩尔吸光系数也不失为一种简单易行的方法。

关键词：三线态-三线态湮灭上转换敏化剂构效关系三线态能级摩尔吸光系数

水稻光温敏不育系同形可育株的成因与防控对策

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

杂交水稻 2012年第1期27卷 29-31页

作者：吴俊庄文熊跃东邓启云国家杂交水稻工程技术研究中心湖南长沙410125

同形可育株是指与光温敏不育系株叶穗粒形态基本一致、生育期相近,在各种光温条件下花药均能正常散粉、结实正常的可育杂株。因其从形态、株高、生育期等方面都难以辨别,给两系亲本繁殖和制种生产带来繁重的除杂任务和损失。通过对Y58S... 详细信息

同形可育株是指与光温敏不育系株叶穗粒形态基本一致、生育期相近,在各种光温条件下花药均能正常散粉、结实正常的可育杂株。因其从形态、株高、生育期等方面都难以辨别,给两系亲本繁殖和制种生产带来繁重的除杂任务和损失。通过对Y58S同形可育株的遗传研究和分子检测分析,认为同形可育株由串粉、回交及人工非主观选择而形成。在此基础上,提出以建立固定原原种繁殖基地为主要措施的防控对策,防止同形可育株的产生,从而确保两系杂交水稻制种的高纯、高效。

关键词：两系杂交水稻光温敏核不育系同形可育株原因对策

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

酿酒酵母工程菌生物合成白藜芦醇

中国食品学报 2016年第3期16卷 68-74页

作者：孙萍郭丽琼黄佳俊黄晓燕梁景龙林俊芳华南农业大学食品学院华南农业大学食品生物技术研究所广州510640 广东省微生态制剂工程技术研究中心广州510640

目的:构建能以酪氨酸为底物产白藜芦醇的重组酿酒酵母。方法:利用降落-重叠延伸PCR法和一步等温法,将拟南芥的4-香豆酰辅酶A连接酶基因(4cl)、巨峰葡萄的白藜芦醇合酶基因(rs)以及粘红酵母的酪氨酸解氨酶基因(tal)分别构建含有不同抗性... 详细信息

目的:构建能以酪氨酸为底物产白藜芦醇的重组酿酒酵母。方法:利用降落-重叠延伸PCR法和一步等温法,将拟南芥的4-香豆酰辅酶A连接酶基因(4cl)、巨峰葡萄的白藜芦醇合酶基因(rs)以及粘红酵母的酪氨酸解氨酶基因(tal)分别构建含有不同抗性筛选标记的附加型酵母表达载体,采用Li Ac/SS carrier DNA/PEG法转化酿酒酵母工业型菌株EC1118,通过高效液相色谱法检测重组酵母发酵产物。结果:成功获得酵母工程菌EC1118-H-TTC-K-T4C-TRC,以3 mmol/L酪氨酸为底物,28℃,150 r/min摇床避光发酵5 d,发酵液中白藜芦醇的产量为6.1979 mg/L。结论:成功构建一株能以酪氨酸为底物产白藜芦醇的工业型重组酿酒酵母,为白藜芦醇的工业化生产进一步奠定了基础。

关键词：白藜芦醇酿酒酵母酪氨酸生物合成基因表达

戊型肝炎病毒多拷贝分泌表达载体的构建及在毕赤酵母中的表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国新药杂志 2015年第3期24卷 271-275,302页

作者：郭敏雷清刘晓蒋琳兰州生物制品研究所有限责任公司甘肃省疫苗工程技术研究中心兰州730046

目的:将胞内表达载体p AO815改建成分泌型表达载体,并体外构建戊型肝炎病毒ORF2128-660多拷贝重组表达质粒,进一步比较不同转化子在毕赤酵母中的表达水平,以得到高表达重组菌株。方法:利用重叠PCR技术将α-factor信号肽基因与目的基因OR... 详细信息

目的:将胞内表达载体p AO815改建成分泌型表达载体,并体外构建戊型肝炎病毒ORF2128-660多拷贝重组表达质粒,进一步比较不同转化子在毕赤酵母中的表达水平,以得到高表达重组菌株。方法:利用重叠PCR技术将α-factor信号肽基因与目的基因ORF2128-660拼接后插入去磷酸化的p AO815载体,得到分泌型表达重组质粒α-ORF2128-660/p AO815(单拷贝),然后将Bam HⅠ和BglⅡ双酶切获得的目的基因表达盒(AOX-α-ORF2128-660)插入到去磷酸化的重组质粒α-ORF2128-660/p AO815中,得到2(AOX-α-ORF2128-660)/p AO815(2拷贝),电转化毕赤酵母GS115,甲醇诱导,SDS-PAGE分析不同拷贝数转化子的表达产量,ELISA检测表达产物的生物活性。结果:α-factor信号肽基因与目的基因ORF2128-660已克隆入表达载体中,目的蛋白分泌至诱导液上清中,相对分子质量约为59 000,与阴性对照比,单拷贝、2拷贝转化子表达的产物均有生物活性但表达水平无区别。结论:成功改建成分泌型表达载体,构建了多拷贝重组表达质粒,并且成功表达了目的蛋白,为利用改造的p AO815载体表达其他蛋白奠定了基础。

关键词：戊型肝炎病毒重叠PCR 多拷贝表达盒毕赤酵母 pAO815载体胞内表达载体分泌型表达载体