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基于Nrf2/ROS信号通路探讨岩藻多糖对食管癌细胞增殖的抑制作用

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食品工业科技 2024年第11期45卷 316-322页

作者：马永超程琦吴华陆琼金少举漯河医学高等专科学校河南漯河462002

目的:探讨岩藻多糖对食管癌增殖的影响,并分析其机制。方法:MTT法分析细胞增殖抑制率,Hoechst 33258染色和流式细胞术检测细胞凋亡,DCFH-DA探针检测ROS水平,Western blot法分析Nrf2、HO-1、NQO-1、Bcl-2、Bax、caspase-3水平,研究岩藻... 详细信息

目的:探讨岩藻多糖对食管癌增殖的影响,并分析其机制。方法:MTT法分析细胞增殖抑制率,Hoechst 33258染色和流式细胞术检测细胞凋亡,DCFH-DA探针检测ROS水平,Western blot法分析Nrf2、HO-1、NQO-1、Bcl-2、Bax、caspase-3水平,研究岩藻多糖对细胞增殖以及Nrf2/ROS信号通路的影响。裸鼠成瘤实验验证岩藻多糖对瘤体的瘤重、瘤体积及Nrf2、HO-1、NQO-1水平的影响。结果:1~16µg/mL岩藻多糖极显著抑制ECA109细胞增殖,48 h IC50为3.26µg/mL。与对照组(0.1%DMSO)相比,1、2、4µg/mL岩藻多糖处理后的ECA109细胞出现核凝聚、染色质不规则收缩、凋亡小体等明显的凋亡特征,(极)显著促进ECA109细胞凋亡,极显著下调Bcl-2表达水平,极显著上调Bax、Cleaved-caspase-3表达水平,极显著增加ROS水平,极显著降低Nrf2、HO-1、NQO-1蛋白水平(P<0.05,P<0.01);Nrf2过表达能显著下调岩藻多糖抑制ECA109细胞增殖效果,显著下调ROS水平,显著上调Nrf2、HO-1、NQO-1蛋白水平(P<0.05)。体内实验显示,50、100 mg/kg岩藻多糖极显著抑制瘤体体积、瘤体质量,下调瘤体Nrf2、HO-1、NQO-1水平(P<0.05)。结论:岩藻多糖抑制ECA109细胞增殖,对体内移植瘤抑瘤效果显著,其机制与调控Nrf2/ROS信号通路有关。

关键词：岩藻多糖 Nrf2/ROS 信号通路食管癌细胞增殖移植瘤

3-Pyrrolyl BODIPY的绿色生物合成、光物理性质及应用研究

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有机化学 2024年第1期44卷 216-223页

作者：马翠云罗海澜张福华郭丹陈树兴王飞漯河医学高等专科学校河南省营养与健康工程研究中心河南漯河462002 中原食品实验室河南漯河462333

3-吡咯基氟硼二吡咯(3-Pyrrolyl BODIPYs)荧光染料的绿色合成与应用是值得进一步研究的重要问题.到目前为止,在所有的合成方法中,都无法避免使用有毒的吡咯类有机化合物作为反应底物.本研究使用一种微生物源天然色素,沙雷氏菌y2的次级... 详细信息

3-吡咯基氟硼二吡咯(3-Pyrrolyl BODIPYs)荧光染料的绿色合成与应用是值得进一步研究的重要问题.到目前为止,在所有的合成方法中,都无法避免使用有毒的吡咯类有机化合物作为反应底物.本研究使用一种微生物源天然色素,沙雷氏菌y2的次级代谢产物灵菌红素,来合成目标化合物.利用灵菌红素天然的吡咯基甲川基结构,合成了一种新的3-pyrrolyl BODIPY.光物理性质实验表明其具有荧光成像的性能,然后使用SW480细胞进行细胞染色探索.激光共聚焦显微镜荧光成像结果显示其可在三通道中发射出不同强度的荧光,Z-stack结果揭示其红色通道与绿色通道中细胞穿透性可以达到266μm.细胞毒性实验也说明3-pyrrolyl BODIPY具有良好的生物相容性,是一种值得开发的荧光染料.

关键词：沙雷氏菌y2 灵菌红素绿色生物合成 3-吡咯基氟硼二吡咯荧光成像

富硒羊肚菌多糖的制备及其体外抗肿瘤活性探究

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食品工业科技 2024年第15期45卷 213-222页

作者：李贝贝王慧琴孙仪征郑州澍青医学高等专科学校河南郑州450064

本研究旨在优化提取和纯化富硒羊肚菌多糖(Se-MPS),并评估其抗肿瘤活性及其机制。采用单因素和响应面优化法,对富硒羊肚菌粗多糖的提取工艺进行优化。通过柱层析法对粗多糖进行纯化,并对其化学组成进行分析。使用HepG2细胞进行CCK-8试... 详细信息

本研究旨在优化提取和纯化富硒羊肚菌多糖(Se-MPS),并评估其抗肿瘤活性及其机制。采用单因素和响应面优化法,对富硒羊肚菌粗多糖的提取工艺进行优化。通过柱层析法对粗多糖进行纯化,并对其化学组成进行分析。使用HepG2细胞进行CCK-8试验、集落形成试验、划痕试验和Transwell试验来评价Se-MPS的抗肿瘤活性。采用RT-qPCR法、Western blot法和免疫荧光法评价Se-MPS的潜在抗肿瘤机制。单因素和响应面试验结果显示,富硒羊肚菌粗多糖提取的最佳工艺参数为:提取时间2.5 h、液料比45:1(mL/g)、提取温度82℃,得率为7.95%。纯化后,Se-MPS的总糖含量达到95.86%,硒含量高达76.07±0.32 mg/g。此外,Se-MPS显著降低了HepG2细胞的集落形成效率、细胞迁移率和侵袭细胞数目(P<0.05)。同时,Se-MPS抑制了PI3K/Akt通路传导,下调了葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)的mRNA表达,并降低了细胞的葡萄糖摄取量。研究结果表明,通过对提取时间、液料比及提取温度的优化,可改善富硒羊肚菌粗多糖得率。此外,通过调控PI3K/Akt通路,富硒羊肚菌多糖可发挥出较强的抗肿瘤活性。这项研究为富硒羊肚菌多糖的抗肿瘤活性提供了证据,并为相关功能性食品的开发提供了参考。

关键词：硒羊肚菌多糖化学组成响应面优化抗肿瘤活性

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六堡砖茶多糖制备及其免疫调节活性

食品工业科技 2024年第14期45卷 327-334页

作者：孙仪征王慧琴李贝贝郑州澍青医学高等专科学校河南郑州450064

目的:优化六堡砖茶多糖提取工艺,并进一步研究其免疫调节作用及其可能的调节机制。方法:采用单因素实验探究提取温度、料液比及乙醇浓度对茶多糖得率的影响,在此基础上与响应面试验相结合,对茶多糖提取工艺进行了优化。通过测定六堡砖... 详细信息

目的:优化六堡砖茶多糖提取工艺,并进一步研究其免疫调节作用及其可能的调节机制。方法:采用单因素实验探究提取温度、料液比及乙醇浓度对茶多糖得率的影响,在此基础上与响应面试验相结合,对茶多糖提取工艺进行了优化。通过测定六堡砖茶多糖对RAW264.7细胞的吞噬能力及NO释放量,检测核因子κB(Nuclear factor-κB,NF-κB)和AMP依赖的蛋白激酶(AMP-dependent protein kinase,AMPK)信号通路相关基因及蛋白表达,评价纯化后的茶多糖的体外免疫调节活性。结果:六堡砖茶多糖的最佳提取工艺为:提取温度91.11℃,料液比1:15.45(g/mL),乙醇浓度82.84%(v/v)。在此条件下,茶多糖得率为8.62%。细胞实验显示六堡砖茶多糖可显著增强RAW264.7细胞的吞噬能力及NO释放量(P<0.05),显著激活NF-κB和AMPK信号通路(P<0.05),显著上调诱导型一氧化氮合成酶(Inducible nitric oxide synthase,iNOS)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)的mRNA表达水平(P<0.05)。其中,高剂量茶多糖效果更佳。结论:通过优化提取温度、料液比及乙醇浓度条件,可有效提高六堡砖茶多糖得率,并可通过激活NF-кB/AMPK通路发挥免疫调节作用。该研究结果为六堡砖茶多糖活性深入探究和应用提供了研究基础。

关键词：六堡砖茶茶多糖提取响应面优化免疫调节

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长链非编码RNA GNAQ-ASI在高雄激素多囊卵巢综合征中的机制研究

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中国临床药理学杂志 2024年第8期40卷 1170-1174页

作者：李冰刘琳赫欣漯河医学高等专科学校医疗系河南漯河462000

目的探讨长链非编码RNA GNAQ-AS1介导miRNA-20b-5p靶向调控细胞分裂周期与凋亡调节蛋白2(CDCD2)在高雄激素多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠中的作用及其机制。方法在细胞水平上,分别通过细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测LncRNA GNAQ-AS1和miRNA-... 详细信息

目的探讨长链非编码RNA GNAQ-AS1介导miRNA-20b-5p靶向调控细胞分裂周期与凋亡调节蛋白2(CDCD2)在高雄激素多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠中的作用及其机制。方法在细胞水平上,分别通过细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测LncRNA GNAQ-AS1和miRNA-20b-5p的最佳抑制浓度,以Transwell小室检测细胞的迁移情况,并通过流式细胞术检测细胞周期。在动物水平上,将大鼠随机分为4组,分别为对照组、模型组、lncRNA GNAQ-AS1 siRNA组、miRNA-20b-5p mimics组,每组10只。模型组连续灌服溶于1%羧甲基纤维素的来曲唑1 mg·kg^(-1)·d^(-1),共3周,每周3次;lncRNA GNAQ-AS1 siRNA组在模型建立的基础上,用siRNA沉默lncRNA GNAQ-AS1表达,每周注射1次,共3周;miRNA-20b-5p mimics组在模型建立的基础上,用miRNA-20b-5p mimics过表达miRNA-20b-5p,尾静脉注射给药,给药量为1 mg·kg^(-1),每周注射1次,共3周。对照组注射等体积的0.9%NaCl。用酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测血清促黄体生成素(LH)、睾酮(T)、血清抗缪勒管激素(AMH)、促卵泡生长激素(FSH)表达水平,用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测卵巢组织中lncRNA GNAQ-AS1、miRNA-20b-5p和CDCD2的表达情况,用蛋白质印迹法检测CDCD2蛋白表达水平。结果 CCK-8检测结果表明,当给予5μmol·L^(-1)lncRNA GNAQ-AS1 siRNA时,对照组和lncRNA GNAQ-AS1组的细胞存活率分别为(38.25±0.62)%和(86.14±3.13)%,当给予10μmol·L^(-1)miRNA-20b-5p mimics时,对照组和miRNA-20b-5p mimics组的细胞增殖抑制率分别为(40.70±0.32)%和(85.35±2.13)%,表明KGN细胞给予10μmol·L^(-1)miRNA-20b-5p mimics时细胞活力明显降低。在动物水平上,RT-qPCR结果显示:模型组的lncRNA GNAQ-AS1、miRNA-20b-5p和CDCD2 mRNA的表达分别为1.72±0.37、0.59±0.10和2.47±0.13,表明lncRNA GNAQ-AS1、CDCD2的表达水平在模型组中明显上调,miRNA-20b-5p表达水平较于对照组下调(P<0.05)。与对照组相比,模型组大鼠血清LH、T和AMH水平明显升高,FSH和E2水平明显降低(均P<0.05)。与模型组相比,lncRNA GNAQ-AS1 siRNA组和miRNA-20b-5p mimics组LH、T和AMH水平显著降低,FSH和E2水平显著升高。与模型组相比,CDCD2蛋白表达水平在lncRNA GNAQ-AS1 siRNA组和miRNA-20b-5p mimics组均显著升高。结论 LncRNA GNAQ-AS1介导miRNA-20b-5p靶向调控CDCD2在PCOS中发挥重要作用。

关键词：长链非编码RNA 鸟嘌呤核苷酸结合蛋白q多肽-反义RNA1 高雄激素多囊卵巢综合征分子机制

红景天苷调节FAK/MEK/ERK信号通路对HPV阳性宫颈癌细胞发生发展的影响

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中国病原生物学杂志 2024年第2期19卷 166-171页

作者：张要盛任晓沈玲杨秀丽河南省南阳医学高等专科学校第一附属医院肿瘤内科三病区河南南阳473000

目的探讨红景天苷(Sal)调节局部黏着斑激酶(FAK)/胞外信号调节激酶的激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路对人乳头瘤病毒(HPV)阳性宫颈癌细胞发生发展的影响。方法分别用0、2.5、5、10、20、40、80、160、320μg/mL Sal处理HPV1... 详细信息

目的探讨红景天苷(Sal)调节局部黏着斑激酶(FAK)/胞外信号调节激酶的激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路对人乳头瘤病毒(HPV)阳性宫颈癌细胞发生发展的影响。方法分别用0、2.5、5、10、20、40、80、160、320μg/mL Sal处理HPV18阳性人宫颈癌细胞HeLa,根据细胞存活率确定适宜的Sal浓度用于正式实验。将HeLa细胞分组为对照组、Sal低剂量组、Sal中剂量组、Sal高剂量组、表皮细胞生长因子(EGF)(FAK激活剂)组、Sal高剂量+EGF组,CCK-8法、5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)染色检测细胞增殖;Transwell检测细胞迁移与侵袭;qRT-PCR检测HeLa细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、转移侵袭增强因子1(MIEN1)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)mRNA表达;Western Blot检测细胞中人乳头瘤病毒18型(HPV18)E6、HPV18 E7、p-FAK、p-MEK、p-ERK1/2蛋白表达。结果选取Sal浓度为40、80、160μg/mL用于正式实验。与对照组比较,Sal低剂量组、Sal中剂量组、Sal高剂量组HeLa细胞A_(450)值、EdU阳性细胞率、细胞迁移及侵袭数目、PCNA、MIEN1、MMP-9 mRNA表达及HPV18 E6、HPV18 E7、p-FAK、p-MEK、p-ERK1/2蛋白表达降低,且呈剂量依赖性(P<0.05);与对照组比较,EGF组HeLa细胞A_(450)值、EdU阳性细胞率、细胞迁移及侵袭数目、PCNA、MIEN1、MMP-9 mRNA表达及HPV18 E6、HPV18 E7、p-FAK、p-MEK、p-ERK1/2蛋白表达升高(P<0.05);与Sal高剂量组比较,Sal高剂量+EGF组HeLa细胞A_(450)值、EdU阳性细胞率、细胞迁移及侵袭数目、PCNA、MIEN1、MMP-9 mRNA表达及HPV18 E6、HPV18 E7、p-FAK、p-MEK、p-ERK1/2蛋白表达升高(P<0.05)。结论Sal可能通过抑制FAK/MEK/ERK信号通路抑制HPV阳性宫颈癌细胞发生发展。

关键词：红景天苷局部黏着斑激酶/胞外信号调节激酶的激酶/细胞外信号调节激酶信号通路人乳头瘤病毒宫颈癌增殖侵袭

牛蒡子苷元调控Notch/Hes-1信号通路对口腔鳞状细胞癌HSC-3细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

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中国肿瘤生物治疗杂志 2024年第4期31卷 351-358页

作者：任丽洁刘孟媛史冠忠唐亮沧州医学高等专科学校口腔系河北沧州061000

目的:探究牛蒡子苷元(ARC)通过调控Notch/Hes-1信号通路对口腔鳞状细胞癌(OSCC)HSC-3细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及其机制。方法:使用不同质量浓度的ARC处理人HSC-3细胞,CCK-8法检测ARC对细胞增殖活力的影响,以选择适宜的药物浓度。将HS... 详细信息

目的:探究牛蒡子苷元(ARC)通过调控Notch/Hes-1信号通路对口腔鳞状细胞癌(OSCC)HSC-3细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及其机制。方法:使用不同质量浓度的ARC处理人HSC-3细胞,CCK-8法检测ARC对细胞增殖活力的影响,以选择适宜的药物浓度。将HSC-3细胞分为对照组、ARC-L组(10 mg/L ARC)、ARC-M组(20 mg/L ARC)、ARC-H组(40 mg/L ARC)和ARC-H+Jagged1/FC组(40 mg/L ARC+1.2μg/mL Jagged1/FC)。采用EdU法检测细胞增殖能力,划痕愈合实验、Transwell实验和流式细胞术分别检测细胞的迁移、侵袭能力及细胞周期和细胞凋亡率,WB法检测增殖(c-Myc、cyclin D1)、凋亡(BAX、Bcl-2、survivin)、EMT(E-cadherin、vimentin、Snail)及Notch/Hes-1通路(Notch 1、Hes-1、NICD)相关蛋白的表达水平。结果:与0 mg/L相比,10~80 mg/L的ARC均能显著降低HSC-3细胞增殖活力(均P<0.05)。与对照组相比,ARC-L组、ARC-M组和ARC-H组HSC-3细胞EdU阳性率、划痕愈合率、侵袭细胞数、S期和G2/M期细胞占比及c-Myc、cyclin D1、Bcl-2、survivin、vimentin、Snail、Notch 1、Hes-1和NICD蛋白表达均显著降低(均P<0.05),细胞凋亡率、G0/G1期细胞占比及BAX、E-cadherin的蛋白表达均显著升高(均P<0.05),且呈浓度梯度依赖性。同时使用Notch激动剂Jagged1/FC,则可部分逆转ARC对HSC-3细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡及相关蛋白表达的作用(均P<0.05)。结论:ARC可能通过抑制Notch/Hes-1信号通路抑制OSCC细胞HSC-3增殖和侵袭并促进细胞凋亡。

关键词：牛蒡子苷元口腔鳞状细胞癌 HSC-3细胞增殖凋亡侵袭 Notch/Hes-1信号通路

虾青素通过AMPK/mTOR信号通路促进鸡肌肉干细胞增殖与分化

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生物技术通报 2024年

作者：段子朋孙缦利陈彦锋邓同兴金少举范文娟陈旭东漯河医学高等专科学校河南省营养与健康工程研究中心

【目的】研究虾青素（Astaxanthin,AST）对鸡肌肉干细胞（Chicken muscle stem cells,Ch-MuSCs）增殖的影响及其潜在机制。【方法】原代分离Ch-MuSCs，不同浓度AST(0、0.3、0.6、1.25、2.5、5μmol/L)处理，利用7-AAD联合Calcein AM染色法、MTT法、EdU法等检测细胞活力与增殖，免疫荧光染色检测肌管发育变化，Western blot分析AMPK/mTOR信号通路关键蛋白PI3k、AKT、p-PI3k、p-AKT以及mTOR、AMPK、p-m TOR、p-AMPK的蛋白表达。【结果】0.6、1.25μmol/L AST处理后均可显著增加细胞活性，减少坏死细胞（P <0.01），其中1.25μmol/L AST处理后细胞增殖最为显著（P <0.01）;Titin与MyoD免疫荧光染色显示，1.25μmol/L AST处理后Titin阳性肌管长度增加显著（P <0.05），且每条肌管内MyoD阳性细胞核增多（P <0.05）。Western blot结果显示，1.25μmol/L AST处理组p-PI3K和p-AKT水平显著升高（P <0.05）,AMPK及P-AMPK蛋白增加，mTOR蛋白表达水平降低（P <0.05），加入mTOR抑制剂雷帕霉素后，AMPK、mTOR蛋白表达量显著降低（P <0.05），但p-AMPK蛋白表达水平无明显变化；若同时采用AST处理，则AMPK及P-AMPK蛋白表达水平显著增加（P <0.05），但mTOR蛋白及p-m TOR表达水平显著降低（P <0.05）。【结论】AST可通过激活AMPK/mTOR信号通路中AMPK及其上游信号分子PI3K与Akt促进ChMuSCs的增殖与分化，通过抑制mTOR来调控Ch-MuSCs的生长速度。

关键词：鸡肌肉干细胞虾青素细胞增殖细胞分化

干扰TRIM59表达对慢性粒细胞白血病K562细胞柔红霉素化疗敏感性的影响及作用机制研究

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中国实验血液学杂志 2024年第1期32卷 45-51页

作者：王菁王振杰李占霞濮阳医学高等专科学校基础医学部河南省濮阳市人民医院风湿内科河南濮阳457000

目的:探讨干扰三元基序59(TRIM59)表达对慢性粒细胞白血病K562细胞柔红霉素(DNR)化疗敏感性的影响及相关分子机制。方法:采用RT-q PCR法检测慢性粒细胞白血病患者骨髓组织和K562细胞中TRIM59 m RNA表达水平。用脂质体转染法将TRIM59特... 详细信息

目的:探讨干扰三元基序59(TRIM59)表达对慢性粒细胞白血病K562细胞柔红霉素(DNR)化疗敏感性的影响及相关分子机制。方法:采用RT-q PCR法检测慢性粒细胞白血病患者骨髓组织和K562细胞中TRIM59 m RNA表达水平。用脂质体转染法将TRIM59特异性小干扰RNA(si-TRIM59)转染至K562细胞,并用DNR处理细胞。CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测凋亡相关蛋白和Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达。结果:与初治时骨髓组织相比,化疗耐药时患者骨髓组织中TRIM59 m RNA表达水平升高(P<0.05)。与对照组比较,si-TRIM59组和DNR组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率均显著升高(P<0.05);细胞中Bax、Caspase3、Cleaved-Caspase3蛋白表达量均显著升高,而Bcl-2、Wnt3α、GSK-3β蛋白表达量、p-β-catenin/β-catenin比值均显著降低(P<0.05)。与si-TRIM59组和DNR组比较,si-TRIM59+DNR组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率均显著升高(P<0.05);细胞中Bax、Caspase3、Cleaved-Caspase3蛋白表达量均显著升高,而Bcl-2、Wnt3α、GSK-3β蛋白表达量、p-β-catenin/β-catenin比值均显著降低(P<0.05)。结论:干扰TRIM59表达可增强K562细胞对DNR的化疗敏感性,其作用机制可能与调控Wnt/β-catenin信号通路相关。

关键词： TRIM59 慢性粒细胞白血病柔红霉素 Wnt/β-catenin信号通路增殖凋亡