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MeCP2诱导的视网膜色素上皮细胞转录组和m6A的改变

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中华实验眼科杂志 2024年第5期42卷 408-416页

作者：张咏雅李晓华赵雪茹李雪郑州大学人民医院眼科、河南省人民医院眼科、河南省立眼科医院、河南省眼科与视觉科学重点实验室、河南省医学科学院眼科研究所郑州450003

目的探讨重组人甲基CpG结合蛋白2(MeCP2)处理的视网膜色素上皮(RPE)细胞中mRNA和N6-甲基腺嘌呤(m6A)改变及其机制。方法将传代ARPE-19细胞贴壁培养后分为正常对照组和MeCP2组,正常对照组细胞采用正常培养液培养,MeCP2组细胞于含终质量浓... 详细信息

目的探讨重组人甲基CpG结合蛋白2(MeCP2)处理的视网膜色素上皮(RPE)细胞中mRNA和N6-甲基腺嘌呤(m6A)改变及其机制。方法将传代ARPE-19细胞贴壁培养后分为正常对照组和MeCP2组,正常对照组细胞采用正常培养液培养,MeCP2组细胞于含终质量浓度20 ng/ml重组人MeCP2蛋白培养液中,连续培养72 h。提取细胞内总RNA进行转录组测序(RNA-seq)和甲基化免疫共沉淀测序(MeRIP-seq)分析。采用edgeR软件包根据P<0.05筛选差异表达基因(DEGs)和差异甲基化基因(DMGs)。采用基因本体论(GO)富集分析对差异基因进行生物学功能描述,采用京都基因和基因组百科全书(KEGG)进行通路富集分析。筛选出DEGs与DMGs交集的基因,采用实时荧光定量PCR技术检测各组差异基因mRNA表达水平。结果共筛选出DEGs 100个,DMGs 7441个,富集分析发现DEGs与细胞外基质(ECM)-受体相互作用、细胞分裂、细胞周期和磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路等相关,DMGs与微管细胞骨架、血管生成、表皮生长因子受体(ErbB)信号通路、晚期糖基化终末产物(AGEs)-糖基化终末产物受体(RAGE)信号通路、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路、Notch信号通路和转化生长因子β(TGF-β)信号通路等相关。DEGs中24个基因表达增加,76个基因表达减少;DMGs中5个基因含有高甲基化峰,7439个基因含有低甲基化峰,注释峰后,正常对照组有7626个基因发生m6A甲基化,MeCP2组有8006个基因发生m6A甲基化,2个组间有7360个交集基因。正常对照组和MeCP2组的m6A甲基化富集于转录本的CDS、内含子和3'-非翻译区(3'UTR)区域,其甲基化比例分别为23.62%/22.27%、48.53%/48.35%和23.66%/25.28%。联合分析发现2个上皮-间充质转化(EMT)相关基因CSPG 5和RBP1的mRNA和m6A水平均降低。荧光定量PCR结果显示,MeCP2组GSPG5、RBP1、ZNF484 mRNA相对表达量均明显低于正常对照组,差异均有统计学意义(t=7.885、7.613、7.345,均P<0.01)。结论RPE细胞中MeCP2对EMT的调控机制与m6A甲基化修饰相关。CSPG 5和RBP 1基因可能是m6A甲基化的靶基因,参与MeCP2调控的EMT过程。

关键词：增生性玻璃体视网膜病变视网膜色素上皮细胞 MeCP2 m6A MeRIP-seq 上皮-间充质转化

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自拟化斑汤佐治瘀热伤络型小儿过敏性紫癜的疗效观察

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国医论坛 2024年第2期39卷 50-53页

作者：齐艳娟清丰县人民医院河南清丰457300

目的:观察自拟化斑汤联合西药治疗瘀热伤络型小儿过敏性紫癜的临床疗效。方法:选取2022年4月-2023年4月清丰县人民医院收治的62例过敏性紫癜患儿为研究对象,按随机数字表法分为对照组和观察组各31例。对照组给予西药常规治疗,观察组在... 详细信息

目的:观察自拟化斑汤联合西药治疗瘀热伤络型小儿过敏性紫癜的临床疗效。方法:选取2022年4月-2023年4月清丰县人民医院收治的62例过敏性紫癜患儿为研究对象,按随机数字表法分为对照组和观察组各31例。对照组给予西药常规治疗,观察组在对照组基础上给予自拟化斑汤治疗。经治2周后,比较两组患者的临床疗效、症状缓解情况、中医证候积分、炎性反应与凝血功能、治疗期间不良反应发生情况以及随访3个月复发情况。结果:治疗后,观察组临床总有效率为96.77%(30/31),高于对照组的80.65%(25/31)(P0.05);随访3个月观察组复发率为6.45%(2/31),低于对照组的25.81%(8/31)(P<0.05)。结论:自拟化斑汤佐治小儿过敏性紫癜,可提高临床疗效,改善临床症状,缩短症状缓解时间,改善机体微循环、缓解血管炎症损伤,安全性良好且复发率低。

关键词：自拟化斑汤瘀热伤络型小儿过敏性紫癜血证中西医结合疗法

巨大视网膜色素上皮撕裂合并渗出性视网膜脱离

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中华眼底病杂志 2024年第4期40卷 317-318页

作者：郭浩轶聂晓东郭希让河南省立眼科医院、河南省人民医院眼科、河南省眼科研究所郑州450003

患者男,72岁。因颜面部及四肢水肿5个月,双眼视物模糊3 d到河南省立眼科医院就诊。既往糖尿病史12年,胰岛素治疗,随机血糖12.8 mmol/L;糖尿病肾病半年;高血压史5年,血压控制差,波动在170~180/100~110 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)之间;低... 详细信息

患者男,72岁。因颜面部及四肢水肿5个月,双眼视物模糊3 d到河南省立眼科医院就诊。既往糖尿病史12年,胰岛素治疗,随机血糖12.8 mmol/L;糖尿病肾病半年;高血压史5年,血压控制差,波动在170~180/100~110 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)之间;低蛋白血症半年。肝功能检测,总蛋白38.9 mmol/L,白蛋白19.0 mmol/L。尿常规检测,尿蛋白(+++),尿糖(++)。24 h尿蛋白定量检测,尿蛋白4.54 g/L,24 h尿蛋白7.72 g/24 h。眼部检查:右眼视力眼前数指,左眼视力0.1。右眼、左眼眼压分别为18.0、16.2 mm Hg。

关键词：巨大视网膜色素上皮撕裂渗出性视网膜脱离图片精粹

Pentacam HR测量圆锥角膜患者角膜地形图参数的重复性

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中华实验眼科杂志 2024年第9期42卷 835-846页

作者：王晴杨凯丽徐丽妍顾宇伟范棋任胜卫赵东卿河南大学人民医院眼科、河南省人民医院眼科、河南省立眼科医院郑州450003 郑州大学人民医院眼科、河南大学人民医院眼科、河南省人民医院眼科、河南省立眼科医院郑州450003 郑州爱尔眼科医院郑州450000

目的探讨Pentacam HR测量不同严重程度圆锥角膜患者角膜地形图参数的重复性。方法采用诊断试验研究设计,纳入2019年1月至2022年3月就诊于河南省立眼科医院的亚临床圆锥角膜或圆锥角膜患者98例120眼,将患者分为亚临床圆锥角膜组、轻度圆... 详细信息

目的探讨Pentacam HR测量不同严重程度圆锥角膜患者角膜地形图参数的重复性。方法采用诊断试验研究设计,纳入2019年1月至2022年3月就诊于河南省立眼科医院的亚临床圆锥角膜或圆锥角膜患者98例120眼,将患者分为亚临床圆锥角膜组、轻度圆锥角膜组、中度圆锥角膜组和重度圆锥角膜组,每组各30眼。另选取拟行角膜屈光手术者30例30眼作为对照组。由同一医师对每眼进行3次Pentacam HR测量,记录包含角膜前表面、后表面、厚度、综合指数及光密度5个方面共53个参数。通过计算组内标准差、重复性限(r)及公差指数(TI)来比较不同分期圆锥角膜组与对照组间角膜地形图参数的重复性。结果亚临床、轻度、中度及重度圆锥角膜组与对照组所有参数的r值相比,分别有54.71%(29/53)、66.04%(35/53)、90.57%(48/53)、94.34%(50/53)参数TI>0.31。其中角膜前表面垂直中央曲率(Ks)、角膜前表面最大曲率(Kmax)、角膜前表面曲率半径、角膜后表面水平中央曲率(Kf)、角膜后表面曲率半径(PRC)、角膜最薄点厚度(TCT)、0-2 mm、2-6 mm区域角膜前表面光密度(A.0-2 mm、A.2-6 mm)、2-6 mm区域角膜中央层光密度(C.2-6 mm)、0-2 mm及2-6 mm区域全层角膜平均光密度(T.0-2 mm、T.2-6 mm)在亚临床及轻度圆锥角膜组表现出良好的重复性(TI<0.31);围绕Kmax最陡点3 mm区域的平均屈光力、角膜后表面平均曲率、中央圆锥角膜指数参数在亚临床、轻度及中度圆锥角膜组表现出良好的重复性(TI<0.31);围绕Kmax最陡点4 mm、5 mm区域的平均屈光力参数在各组间均表现出良好的重复性(TI<0.31)。结论对于亚临床与轻度圆锥角膜患者,推荐使用角膜后表面Kf、PRC和TCT来监测病情进展;对于监测中度与重度圆锥角膜患者病情,可重点检测围绕Kmax最陡点4 mm、5 mm区域的平均屈光力测量参数。

关键词：圆锥角膜 Pentacam HR 重复性重复性限公差指数

视网膜色素上皮细胞来源的细胞外囊泡在年龄相关性黄斑变性发病机制中的作用

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中华实验眼科杂志 2024年第9期42卷 876-880页

作者：高优歌王艳歌(综述) 宋宗明(审校) 河南大学人民医院眼科、河南省人民医院眼科、河南省立眼科医院、河南省眼科与视觉科学重点实验室、河南省医学科学院眼科研究所郑州450003

年龄相关性黄斑变性(AMD)是全球老年人不可逆视力丧失的主要原因之一,其主要病理特征是视网膜色素上皮(RPE)细胞变性和感光细胞不可逆性损伤或丢失。细胞外囊泡(EVs)是一类具有脂质双层膜的异质性纳米囊泡,包括外泌体、微囊泡和凋亡小体... 详细信息

年龄相关性黄斑变性(AMD)是全球老年人不可逆视力丧失的主要原因之一,其主要病理特征是视网膜色素上皮(RPE)细胞变性和感光细胞不可逆性损伤或丢失。细胞外囊泡(EVs)是一类具有脂质双层膜的异质性纳米囊泡,包括外泌体、微囊泡和凋亡小体,它们通过传递RNA和蛋白质等分子发挥生物学效应。本综述论述了RPE细胞来源的细胞外囊泡(RPE-EVs)参与调节氧化应激、炎症反应、新生血管生成等AMD病理生理过程。RPE-EVs来源的Apaf1、HDAC6、miR-494-3p、miR-138-5p、miR-21、miR-543、miR-302a-3p等可作为诊断和治疗AMD的候选分子靶点,但其作用机制尚未阐明。由于RPE-EVs具有高生物相容性、低免疫原性、低毒性、靶向性、稳定性、特异性等独特优势,未来需要继续深入研究RPE-EVs在AMD发病机制中的作用,同时将关注点放到RPE-EVs在AMD诊疗中的作用,实现RPE-EVs的临床转化,为AMD的诊断和治疗开辟新途径。

关键词：视网膜色素上皮细胞外囊泡年龄相关性黄斑变性氧化应激炎症新生血管

OPA 1基因新发无义变异导致ADOA一家系临床表型和基因型分析

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中华实验眼科杂志 2024年第10期42卷 932-937页

作者：王莉红王志立陈晓魏嘉陈慷崔龙江河南省人民医院、河南省立眼科医院郑州450003

目的分析常染色体显性遗传性视神经萎缩(ADOA)一家系的临床表型及基因型。方法采用家系调查研究方法,纳入2023年7-10月在河南省立眼科医院就诊的中国河南地区汉族ADOA一家系2代4名成员,包括2例患者。详细询问患者及其家系成员病史,并进... 详细信息

目的分析常染色体显性遗传性视神经萎缩(ADOA)一家系的临床表型及基因型。方法采用家系调查研究方法,纳入2023年7-10月在河南省立眼科医院就诊的中国河南地区汉族ADOA一家系2代4名成员,包括2例患者。详细询问患者及其家系成员病史,并进行全面的眼科检查,包括视力、视野、眼底、视网膜电图(ERG)、视觉诱发电位(VEP)、光学相干断层扫描;同时进行听力、肌电图及颅脑磁共振检查以明确是否伴有全身异常。收集该家系4名成员的外周血,对先证者进行全外显子组测序,其他成员采用Sanger测序验证。对新发现的变异位点进行致病性和蛋白结构分析。结果先证者女,15岁,左眼视力下降4年,双眼视神经萎缩,双眼黄斑区中心凹厚度稍变薄,神经节细胞复合体层厚度局部轻度变薄,VEP各波呈低振幅改变,部分视野缺失;全身检查未见明显听力障碍和肌张力异常。先证者母亲视神经部分区域萎缩,双眼黄斑区中心凹厚度稍变薄,VEP检查未见明显异常,ERG轻度异常。全外显子组测序结果显示,先证者及其母亲OPA 1基因外显子6出现杂合无义变异c.676C>T(***226Ter),该变异位点在HGMD数据库未见报道,千人基因组和gnomAD数据库未见收录,其可导致226位谷氨酰胺处发生提前终止。蛋白结构分析显示,OPA1蛋白***226Ter可造成蛋白与周围残基相结合的氢键改变,进而导致蛋白功能改变。根据ACMG指南,该变异可能致病。结论该ADOA家系患者表现为青少年时期发病的双眼视神经萎缩,左眼为主;OPA 1基因c.676C>T变异可能为该ADOA家系致病变异位点,该变异位点为首次报道。

关键词：常染色体显性遗传性视神经萎缩家系表型 OPA 1基因基因突变

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学龄期儿童黄斑区视网膜血流密度和厚度分析

中华眼底病杂志 2024年第1期40卷 44-51页

作者：高莎莎尚丽丽符爱存常铭航贺音王铭金学民雷博张凤妍郑州大学第一附属医院眼科郑州450000 河南省眼科研究所河南省立眼科医院郑州450003

目的观察并分析学龄期儿童黄斑区视网膜毛细血管血流密度和视网膜厚度与屈光度的相关性。方法横断面研究。2022年5~12月于郑州大学第一附属医院眼科就诊的学龄期儿童182名纳入研究。其中,男性95名,女性87名;年龄6~12岁;等效球镜度(SE)+0... 详细信息

目的观察并分析学龄期儿童黄斑区视网膜毛细血管血流密度和视网膜厚度与屈光度的相关性。方法横断面研究。2022年5~12月于郑州大学第一附属医院眼科就诊的学龄期儿童182名纳入研究。其中,男性95名,女性87名;年龄6~12岁;等效球镜度(SE)+0.50~-6.00 D。根据右眼SE将受检者分为正视眼组(+0.50≤SE-3.00 D时,除内环区DVP血流密度外,其余均与SE呈负相关(P0.05)。单因素线性回归、多重线性回归分析结果显示,内环区、外环区视网膜厚度与SE呈负相关(β=1.99、3.05,P0.05)。结论屈光度+0.50~-6.00 D的学龄期儿童,随屈光度增加,黄斑中心凹区视网膜毛细血管血流密度逐渐升高,内环区、外环区先升高后降低;内环区、外环区视网膜厚度逐渐降低,中心凹区视网膜厚度未发生显著变化。

关键词：扫频源光相干断层扫描血管成像儿童黄斑区血管密度视网膜厚度

伴肝损伤的甲状腺相关眼病患者临床特征及危险因素分析

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眼科新进展 2024年第3期44卷 203-207页

作者：靳玮柴昌河南省人民医院郑州大学人民医院河南省立眼科医院河南省眼科研究所河南省郑州市450003

目的探讨伴肝功能损伤的甲状腺相关眼病(TAO)患者临床特征及肝损伤相关危险因素。方法回顾性队列研究。收集2017年7月至2023年5月就诊于河南省人民医院的1030例TAO患者临床资料,根据患者肝功能是否正常分为TAO肝损伤患者(A组)(132例)及... 详细信息

目的探讨伴肝功能损伤的甲状腺相关眼病(TAO)患者临床特征及肝损伤相关危险因素。方法回顾性队列研究。收集2017年7月至2023年5月就诊于河南省人民医院的1030例TAO患者临床资料,根据患者肝功能是否正常分为TAO肝损伤患者(A组)(132例)及TAO肝功能正常患者(B组)(898例);收集并比较2组患者年龄、性别、吸烟史、肝功能各项指标[丙氨酸转氨酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、谷氨酰转肽酶(γ-GT)、总胆红素(TBil)、直接胆红素(DBil)、碱性磷酸酶(ALP)],甲状腺功能相关指标[游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)、促甲状腺激素(TSH)、促甲状腺素受体抗体(TRAb)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)、甲状腺球蛋白抗体]及眼部体征指标[眼突度、眼压、是否上睑退缩、NOSPECS分级、临床活动性评分(CAS)、双眼眼肌受累条数]的差异。采用多因素Logistic回归分析TAO患者发生肝损伤的危险因素。结果初诊未治疗的TAO患者出现肝损伤比例为12.82%。两组患者性别比及吸烟人数比例比较,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。A组患者年龄[(44.63±13.64)岁]大于B组[(40.25±14.04)岁],差异有统计学意义(t=3.718,P<0.05)。A组患者ALT、AST、γ-GT、ALP、TBil及DBil水平均大于B组,差异均有统计学意义(均为P<0.01)。A组患者FT3、FT4、TPOAb及TRAb水平均高于B组,TSH水平低于B组,差异均有统计学意义(均为P<0.01)。A组患者双眼眼肌受累条数及CAS评分≥3分的患者比例均高于B组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。回归分析结果显示,FT4、TRAb水平越高,年龄越大,TSH水平越低,TAO患者发生肝损伤的风险越高。结论高水平的FT4与TRAb,以及低水平的TSH和高龄是TAO患者发生肝损伤的独立危险因素。免疫因素和高水平甲状腺素对肝脏的直接毒性作用共同参与了TAO患者肝损伤的机制。

关键词：甲状腺相关眼病肝损伤甲状腺功能危险因素

SR8278改善时差所致小鼠泪腺功能紊乱的转录组学分析

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眼科新进展 2024年第4期44卷 264-269页

作者：黄深振齐迪裴晓婷路顶立司宏丽黄杜鎏睿张文潇巴梦茹轩书婷李志杰郑州大学人民医院河南省人民医院河南大学人民医院河南省立眼科医院河南省眼科研究所河南省郑州市450003

目的探讨核受体亚家族1 D组成员1(NR1D1)合成拮抗剂SR8278在改善时差诱导的小鼠眶外泪腺结构和功能损伤方面的作用及其机制。方法 36只健康的8~10周龄野生型C57BL/6J小鼠在12 h光照/12 h黑暗循环的昼夜节律箱内适应2周后随机分为3组:... 详细信息

目的探讨核受体亚家族1 D组成员1(NR1D1)合成拮抗剂SR8278在改善时差诱导的小鼠眶外泪腺结构和功能损伤方面的作用及其机制。方法 36只健康的8~10周龄野生型C57BL/6J小鼠在12 h光照/12 h黑暗循环的昼夜节律箱内适应2周后随机分为3组:正常组(12 h光照/12 h黑暗循环的昼夜节律箱饲养)、时差组(8 h前移的12 h光照/12 h黑暗循环的昼夜节律箱饲养)及时差+SR8278组(8 h前移的12 h光照/12 h黑暗循环的昼夜节律箱饲养,并给予25 mg·kg^(-1)的SR8278干预),每组12只,共干预5 d。干预结束后,收集各组小鼠的活动度和核心体温,记录小鼠的泪液分泌量,并对泪腺组织进行称重和泪腺细胞大小测量。采用免疫组织化学方法对小鼠眶外泪腺进行组织学评估。提取泪腺RNA进行包含NR1D1的高通量RNA-Seq分析,并对获得的转录组数据进行KEGG和GO功能富集分析。结果与正常组相比,时差组小鼠白天活动度较高,夜间活动度较低,白天核心体温较高,夜间核心体温较低,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。与时差组相比,时差+SR8278组小鼠白天活动度较低,夜间活动度较高,白天核心体温较低,夜间核心体温较高,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。与正常组相比,时差组小鼠泪腺重量及泪液分泌量降低,泪腺细胞增大,差异均有统计学意义(均为P<0.05);与时差组相比,时差+SR8278组小鼠泪腺重量及泪液分泌量增加,泪腺细胞减小,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。与正常组相比,时差组小鼠夜晚泪腺中NR1D1表达量较高;与时差组相比,时差+SR8278组小鼠夜晚泪腺中NR1D1表达量较低,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。生物信息学分析显示,时差组和时差+SR8278组共有947个显著性差异基因,其中显著性上调基因43个,显著性下调基因904个,信号通路差异最大的为Notch信号通路。结论 SR8278通过靶向抑制NR1D1,有效增强了时差小鼠的泪液分泌功能,其过程可能是通过Notch信号通路完成的。

关键词：时差 SR8278 泪腺功能紊乱小鼠