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猫泛白细胞减少症病毒分离鉴定及VP2基因的遗传变异分析

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动物医学进展 2024年第8期45卷 28-34页

作者：张启龙李振河程敏姮栗云鹏高晓龙傅彩霞王林高敏余琦周德刚张玮李志军北京市动物疫病预防控制中心北京102629 北京市平谷区动物疫病预防控制中心北京101200

为分析北京地区猫泛白细胞减少症病毒(Feline panleukopenia virus,FPV)的流行毒株及其VP2基因遗传变异情况,对FPV胶体金试纸条检测结果为阳性的病死猫组织进行病毒分离,通过细胞病变、荧光定量PCR、间接免疫荧光和全基因组测序等试验,... 详细信息

为分析北京地区猫泛白细胞减少症病毒(Feline panleukopenia virus,FPV)的流行毒株及其VP2基因遗传变异情况,对FPV胶体金试纸条检测结果为阳性的病死猫组织进行病毒分离,通过细胞病变、荧光定量PCR、间接免疫荧光和全基因组测序等试验,分离鉴定到1株FPV,命名为FPVBJ-CP/2022株。对决定病毒宿主范围和抗原性的VP2基因系统进化树分析表明,分离株与FPVJF-3株、FPVBeijing-01/2018聚为一支,与FPV疫苗株、CPV群亲缘关系较远。VP2蛋白主要功能位点分析结果显示,VP2蛋白中决定病毒抗原性和宿主嗜性的10个关键位点氨基酸均未发生突变,但该分离株的VP2蛋白序列与GenBank其他FPV毒株的VP2蛋白相比,91位氨基酸由丙氨酸(A)突变为丝氨酸(S),505位氨基酸由天冬酰胺(N)突变为天冬氨酸(D),该突变是否对FPVBJ-CP/2022株VP2蛋白的功能和生物学特性造成改变,有待于进一步研究。论文通过对毒株的遗传变异分析,为更好地预防和控制FPV感染提供了研究基础。

关键词：猫泛白细胞减少症病毒分离鉴定 VP2基因遗传进化分析

基于猪流行性腹泻病毒S蛋白单克隆抗体的竞争ELISA方法的建立

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中国兽医科学 2024年

作者：柴茂马震原杨海波王淑娟赵雪丽刘影王东方王翠谢彩华闫若潜河南省动物疫病预防控制中心河南省重大动物疫病监测预警及防控重点实验室

为建立基于猪流行性腹泻病毒（PEDV）S蛋白单克隆抗体竞争ELISA方法，利用真核表达系统表达PEDV S蛋白主要抗原区，将纯化的S蛋白免疫小鼠后制备抗PEDV S蛋白的单克隆抗体，经各组分和反应条件优化，建立了检测PEDV S蛋白抗体的竞争ELIS... 详细信息

为建立基于猪流行性腹泻病毒（PEDV）S蛋白单克隆抗体竞争ELISA方法，利用真核表达系统表达PEDV S蛋白主要抗原区，将纯化的S蛋白免疫小鼠后制备抗PEDV S蛋白的单克隆抗体，经各组分和反应条件优化，建立了检测PEDV S蛋白抗体的竞争ELISA方法。结果表明，表达的S蛋白大小为92 ku，制备出IgG1亚类的抗S蛋白单克隆抗体5B3D6，建立的竞争ELISA方法S/N临界值为0.400，样品检测时间短（55 min），重复性稳定（变异系数小于10%），特异性强（无交叉反应），与血清中和试验的总符合率高（97.08%）。该方法为PEDV抗体评估和猪流行性腹泻防控提供了有力支撑。

关键词：猪流行性腹泻病毒 S蛋白单克隆抗体竞争ELISA

2010—2021年甘肃省山羊传染性胸膜肺炎流行病学调查分析

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中国兽医杂志 2024年第9期60卷 47-55页

作者：康新华韩庆彦毋艳萍柴刚王亮甘肃省动物疫病预防控制中心甘肃兰州730046 兰州市城关区动物疫病预防控制中心甘肃兰州730031

为了解甘肃省山羊传染性胸膜肺炎(CCPP)的流行情况,本试验采用流行病学调查方法对全省2010—2021年羊群CCPP的发病情况进行了调查,并从地区、物种、季节、性别、年龄、养殖规模、疫点类型和是否采取治疗措施方面对数据进行了统计分析。... 详细信息

为了解甘肃省山羊传染性胸膜肺炎(CCPP)的流行情况,本试验采用流行病学调查方法对全省2010—2021年羊群CCPP的发病情况进行了调查,并从地区、物种、季节、性别、年龄、养殖规模、疫点类型和是否采取治疗措施方面对数据进行了统计分析。调查结果显示,2010—2021年全省CCPP平均发病率为8.15%(11 077/135 860),病死率为29.49%(3 267/11 077),CCPP发病率与物种、季节、年龄和是否采取治疗措施有关。山羊CCPP发病率(9.79%,9 038/92 306)极显著高于绵羊(4.68%,2 039/43 554)(P0.05),CCPP的发病也无明显地域性。结果表明,CCPP在甘肃省普遍流行,山羊比绵羊更易感,在年龄较大、寒冷季节和缺乏治疗的情况下发病率增加。因此,养殖场户应当针对风险因素制定预防策略,并通过采取定期调查监测、预防接种和治疗等措施,降低CCPP在甘肃省的发病率。

关键词：山羊传染性胸膜肺炎(CCPP) 流行病学调查分析甘肃省

猪流行性腹泻病毒微滴式数字PCR定量检测方法的建立及初步应用

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畜牧兽医学报 2024年第1期55卷 413-418页

作者：周建浩王东方刘影王淑娟马震原谢彩华赵雪丽杨海波冯桂丹康台生胡煜锋李博文闫若潜河南农业大学动物医学院郑州450046 河南省动物疫病预防控制中心/河南省重大动物疫病监测预警及防控重点实验室郑州450008 河南科技大学动物科技学院洛阳471000 上海市动物疫病预防控制中心上海201103

旨在建立一种敏感性高、特异性强、重复性好的猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)定量检测方法。本研究根据GenBank登录的PEDV(MK862249.1)M基因序列保守区设计合成特异... 详细信息

旨在建立一种敏感性高、特异性强、重复性好的猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)定量检测方法。本研究根据GenBank登录的PEDV(MK862249.1)M基因序列保守区设计合成特异性引物对和探针;通过对反应体系和反应条件的优化,成功建立了可用于检测PEDV的荧光定量PCR(fluorescent quantitative real-time PCR,FQ-PCR)方法,将自行建立的FQ-PCR方法的引物对/探针用来确定ddPCR方法;对ddPCR方法进行敏感性、特异性、重复性和初步应用试验。结果显示:自行建立的FQ-PCR方法在敏感性、重复性等方面均优于行标FQ-PCR方法;根据自行设计的FQ-PCR方法建立的ddPCR方法最低检测极限为0.15 copies·μL^(-1),敏感性高于行业标准(SN/T 1699—2017)FQ-PCR方法(1.0×10^(1)copies·μL^(-1));模板浓度为1.0×10^(0)~1.0×10^(4)copies·μL^(-1)时,具有良好的线性关系(R 2>0.99);批内、批间变异系数(CV%)为1.52%~7.40%;对猪丁型冠状病毒、猪伪狂犬病毒等11种对照病毒核酸检测结果均为阴性;分别用建立的ddPCR方法、行业标准FQ-PCR方法对150份临床样品进行PEDV核酸检测,ddPCR方法对行业标准FQ-PCR方法检测阳性样品的检测符合率为10^(0)%。本研究成功建立的PEDV ddPCR检测方法可用于临床上PEDV感染的早期检测和定量检测,为PEDV核酸标准物质的研制提供了定量手段。

关键词：猪流行性腹泻病毒微滴式数字PCR 方法建立

日粮中添加复合益生菌对西门塔尔犊牛生长性能、血清指标及瘤胃发酵性能的影响

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中国饲料 2024年第13期 76-79页

作者：陈敏艳安加俊贾培龙陕西省动物疫病预防控制中心陕西西安710016 咸阳市动物疫病预防控制中心陕西咸阳713899

为研究日粮中添加复合益生菌对西门塔尔犊牛生长性能、血清指标及瘤胃发酵性能的影响,试验选取体重相近、70日龄的健康西门塔尔牛犊牛共18头,随机分为对照组、试验I组、试验II组。试验I组和II组分别在基础日粮基础上,额外添加1.5 g和3 ... 详细信息

为研究日粮中添加复合益生菌对西门塔尔犊牛生长性能、血清指标及瘤胃发酵性能的影响,试验选取体重相近、70日龄的健康西门塔尔牛犊牛共18头,随机分为对照组、试验I组、试验II组。试验I组和II组分别在基础日粮基础上,额外添加1.5 g和3 g益生菌,试验60 d。结果表明:(1)试验II组犊牛平均日增重较对照组提高了18.31%(P 0.05)。(2)血液生化指标中谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总蛋白、白蛋白、胆固醇和甘油三酯各组之间差异不显著(P> 0.05);试验II组Ig G和IL-6等免疫指标较对照组分别提高了26.08%和20.17%(P 0.05)。(3)试验II组瘤胃氨态氮和丁酸含量较对照组分别提高了49.85%和45.17%,乙酸含量降低了34.24%(P 0.05)。以上结果表明,犊牛日粮中添加复合益生菌能够促进犊牛的生长性能,提高免疫功能和瘤胃发酵功能。本试验中,以添加3 g/(头·d)的复合益生菌较适宜。

关键词：犊牛复合益生菌生长性能免疫瘤胃发酵

羊肠道病毒抗体间接ELISA检测方法的建立与初步应用

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中国动物传染病学报 2024年

作者：王勤欧云文何博刘俐君达州职业技术学院开江县动物疫病预防控制中心达州市动物疫病预防控制中心

为了建立一种快速的羊肠道病毒（CEV）抗体间接ELISA检测方法，试验采用原核表达系统对VP1蛋白进行体外表达，利用纯化后的重组蛋白建立间接ELISA抗体检测方法。结果显示：VP1蛋白以包涵体形式表达，Western blot检测表明重组蛋白具有... 详细信息

为了建立一种快速的羊肠道病毒（CEV）抗体间接ELISA检测方法，试验采用原核表达系统对VP1蛋白进行体外表达，利用纯化后的重组蛋白建立间接ELISA抗体检测方法。结果显示：VP1蛋白以包涵体形式表达，Western blot检测表明重组蛋白具有良好的反应活性，建立的间接ELISA方法检测BDV、BVDV、GPV、ORF、SPA阳性血清均为阴性，对CEV阳性血清的最低检出效价可达1︰25 600，与IFA方法的符合率为93.33%（28/30），检测四川地区816份羊血清样品的CEV阳性感染率达7.72%（63/816）。表明建立的间接ELISA方法具有良好的特异性、敏感性、准确性和临床适用性，可用于CEV临床抗体检测及流行病学调查。

关键词：羊肠道病毒 VP1蛋白原核表达间接ELISA 抗体检测

沙门菌感染IPEC-J2细胞前后上清液外泌体鉴定及其m^(6)A相关蛋白表达和转录组分析

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中国畜牧兽医 2024年第11期51卷 5086-5096页

作者：张新国淮安市淮阴区动物疫病预防控制中心淮安223001

【目的】探究外泌体在沙门菌感染猪小肠上皮细胞(IPEC-J2细胞)过程中的作用及分子调控机制。【方法】利用间接免疫荧光试验观察沙门菌感染前后IPEC-J2细胞中沙门菌抗体分布水平,用超速离心法提取沙门菌感染IPEC-J2细胞上清液中的外泌体... 详细信息

【目的】探究外泌体在沙门菌感染猪小肠上皮细胞(IPEC-J2细胞)过程中的作用及分子调控机制。【方法】利用间接免疫荧光试验观察沙门菌感染前后IPEC-J2细胞中沙门菌抗体分布水平,用超速离心法提取沙门菌感染IPEC-J2细胞上清液中的外泌体,并通过透射电镜观察外泌体形态、纳米颗粒跟踪分析测定外泌体粒径、Western blotting检测外泌体标记蛋白分子(CD9、CD63、CD81、TSG101)进行外泌体鉴定;利用实时荧光定量PCR和Western blotting检测N6-甲基腺嘌呤(m^(6)A)相关蛋白表达,同时结合转录组测序筛选上清液外泌体差异表达基因。【结果】间接免疫荧光试验结果显示,感染组IPEC-J2细胞中可观察到大量沙门菌分布,表明沙门菌可感染IPEC-J2细胞;透射电镜和外泌体粒径分析结果显示,IPEC-J2细胞分泌的外泌体为双层膜的囊泡,直径为30~150 nm;Western blotting结果显示,C-J2细胞分泌的外泌体存在CD9、CD63、CD81和TSG101特异性标记蛋白。沙门菌感染后外泌体中m^(6)A修饰相关基因表达检测发现,ALKBH 5、YTHDC 2及YTHDF 1基因的mRNA和蛋白表达均显著或极显著上调(P<0.05;P<0.01)。转录组测序结果显示,沙门菌感染IPEC-J2细胞前后外泌体中存在1524个差异表达基因,包括842个下调基因和682个上调基因。GO功能富集分析表明,沙门菌感染主要影响免疫系统过程、细胞连接和酶调节剂活性等生物过程;KEGG通路富集分析表明,其与IgA生产的肠道免疫网络、T细胞受体信号通路和Toll样受体信号通路等密切相关。【结论】本研究成功分离和鉴定了沙门菌感染IPEC-J2细胞上清液中的外泌体,并且表明外泌体中m^(6)A修饰可介导免疫信号通路来调控沙门菌感染宿主细胞,该研究可为今后深入探究外泌体对猪肠道沙门菌感染的分子机制提供理论参考。

关键词：猪沙门菌外泌体小肠上皮细胞转录组

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蓝舌病病毒感染对绵羊微血管内皮细胞中Ⅰ型干扰素应答的影响

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畜牧兽医学报 2024年

作者：罗世美陈韵伊李其沙周艳梅胡雪柔李铭悦魏子昱李芳马鲜平易华山西南大学动物医学院重庆市大足区动物疫病预防控制中心

蓝舌病病毒（bluetonguevirus，BTV）是一种严重危害绵羊等反刍动物的虫媒病毒，而绵羊微血管内皮细胞（sheeplungmicrovascularendothelialcells，SLMECs）构成肺半选择性屏障，为研究BTV感染与SLMECs干扰素抗病毒免疫应答的分子机制... 详细信息

蓝舌病病毒（bluetonguevirus，BTV）是一种严重危害绵羊等反刍动物的虫媒病毒，而绵羊微血管内皮细胞（sheeplungmicrovascularendothelialcells，SLMECs）构成肺半选择性屏障，为研究BTV感染与SLMECs干扰素抗病毒免疫应答的分子机制。本研究通过BTV噬斑实验以感染复数（MOI）为1的BTV诱导18、24、36h的SLMECs，通过实时荧光定量PCR分析干扰素相关通路基因mRNA表达特征，以及Westernblot分析MDA5、TRAF3、RIG-I和TBK1蛋白表达。结果表明，在诱导36h时，干扰素信号通路基因mRNA表达的变化最明显，RIG-I、MDA5、IKKε、IFN-β、TBK1和TRAF6基因mRNA上调表达，差异极显著；而IFN-α、VISA、USP18基因mRNA下调表达，差异极显著；在蛋白水平上MDA5、TBK1、RIG-I和TRAF3蛋白都上调表达。本研究发现BTV可感染SLMECs诱导Ι型干扰素免疫应答，为进一步分析IFN-I信号通路的激活在抗BTV感染天然免疫应答中的作用机制研究奠定基础。

关键词：蓝舌病病毒 I型干扰素绵羊肺微血管内皮细胞

应用检测阴性病例对照研究处置登革热暴发疫情

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医学动物防制 2024年第5期40卷 475-479页

作者：孙毅莹朱鑫李双玲李亚静王海峰洛阳市疾病预防控制中心传染病预防控制所河南洛阳471000 河南省疾病预防控制中心

目的应用检测阴性病例对照研究处置洛阳市1起登革热本地暴发疫情,为有针对性地制定登革热防控措施提供参考依据。方法对2019年洛阳市Y区登革热暴发疫情进行流行病学调查,采用检测阴性病例对照研究,使用χ^(2)检验及多因素logistic回归... 详细信息

目的应用检测阴性病例对照研究处置洛阳市1起登革热本地暴发疫情,为有针对性地制定登革热防控措施提供参考依据。方法对2019年洛阳市Y区登革热暴发疫情进行流行病学调查,采用检测阴性病例对照研究,使用χ^(2)检验及多因素logistic回归分析流行危险因素;采集血液标本,使用快速免疫血清测试卡检测登革热病毒NS1抗原,免疫球蛋白M(immunoglobulin M,IgM)、免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)抗体,采用PCR检测核酸;采用布雷图指数法监测蚊媒密度,评价综合防治效果。结果本次疫情共报告登革热病例38例,发病年龄以60~市推广爱国卫生运动,清理蚊虫孳生环境,降低媒介生物密度,防止疫情扩散蔓延。

关键词：检测阴性病例对照研究登革热暴发疫情