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新型鹅细小病毒信阳株的全基因组扩增及遗传进化分析

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畜牧与兽医 2023年第1期55卷 112-119页

作者：焦凤超张鑫李迎晓雷震曲哲会董建国赵瑜何书海李洵黄立赵聘信阳农林学院/河南省水禽资源开发利用与疫病防控工程技术研究中心河南信阳464000

为了解信阳地区新型鹅细小病毒(NGPV)的遗传变异特性,对疑似NGPV感染麻鸭病例进行病原检测,采集肝脏和脾脏无菌处理后接种SPF鸭胚,成功分离到1株NGPV,命名为HNXY21株,并对其进行全基因组序列分析和VP1基因重组鉴定。序列比对和系统发育... 详细信息

为了解信阳地区新型鹅细小病毒(NGPV)的遗传变异特性,对疑似NGPV感染麻鸭病例进行病原检测,采集肝脏和脾脏无菌处理后接种SPF鸭胚,成功分离到1株NGPV,命名为HNXY21株,并对其进行全基因组序列分析和VP1基因重组鉴定。序列比对和系统发育树表明,分离株HNXY21和其他9株NGPV同处于鹅细小病毒(GPV)组内的一个独立分支上,与山东分离株SD0316(GenBank登录号:MN415969)核苷酸同源性最高;VP1蛋白的氨基酸序列分析显示,与经典GPV和番鸭细小病毒(MDPV)相比,有8个氨基酸位点突变;通过Simplot软件对VP1基因进行重组分析表明,分离株HNXY21 VP1基因存在重组信号,其潜在的主要亲本为山东分离株SD0316和弱毒疫苗株SYG61v。本研究结果丰富了NGPV的分子生物学资料,为进一步研究NGPV的致病机制奠定了基础。

关键词：新型鹅细小病毒遗传变异重组

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细胞保存技术在禽类遗传资源保存应用中的研究进展

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中国家禽 2020年第8期42卷 93-100页

作者：秦清明李治利李建柱赵云焕赵聘焦凤超张自富信阳农林学院河南省水禽资源开发利用与疫病防控工程技术研究中心河南信阳464000

禽类具有特殊的生殖系统,导致其遗传资源保存应用方法的研究进展缓慢。在禽类遗传资源保存方法中,生殖细胞的保存应用、睾丸卵巢组织的保存移植具备一定的稳定性和长效性,是未来进行禽类遗传资源保存应用的主要手段。文章综述了精液、... 详细信息

禽类具有特殊的生殖系统,导致其遗传资源保存应用方法的研究进展缓慢。在禽类遗传资源保存方法中,生殖细胞的保存应用、睾丸卵巢组织的保存移植具备一定的稳定性和长效性,是未来进行禽类遗传资源保存应用的主要手段。文章综述了精液、原始生殖细胞、囊胚细胞、性腺生殖细胞、睾丸组织和卵巢组织等在禽类遗传资源保存应用的研究进展,以期为我国禽业遗传资源保存提供参考。

关键词：禽遗传资源生殖细胞

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应用羽毛无损鉴别鹌鹑早期性别的方法

畜牧与兽医 2022年第8期54卷 14-19页

作者：李治利易先国李岩闫艳霞赵云焕秦清明信阳农林学院/河南省水禽资源开发利用与疫病防控工程技术研究中心河南信阳464000

试验旨在探寻一种无损、价廉、耗时短,可用于大批量鹌鹑早期性别鉴定的方法。采用4种不同方法(试剂盒法、加热法、碱裂解法和碱裂解-乙醇洗涤法)提取鹌鹑羽毛样品的基因组DNA,使用凝胶电泳检验DNA质量,紫外分光光度计测定其浓度和纯度;... 详细信息

试验旨在探寻一种无损、价廉、耗时短,可用于大批量鹌鹑早期性别鉴定的方法。采用4种不同方法(试剂盒法、加热法、碱裂解法和碱裂解-乙醇洗涤法)提取鹌鹑羽毛样品的基因组DNA,使用凝胶电泳检验DNA质量,紫外分光光度计测定其浓度和纯度;选择最佳的羽毛DNA提取方法,应用PCR法检测3日龄鹌鹑的性别。基因组DNA提取电泳结果显示,仅碱裂解-乙醇洗涤法提取的DNA与试剂盒提取的DNA出现条带的位置相同;紫外分光光度计测定结果表明,试剂盒法获得的DNA浓度值远低于其他3种方法,其中碱裂解法浓度最高;OD_(260)/OD_(280)比值以试剂盒法和碱裂解-乙醇洗涤法(裂解10 min)为高,OD_(260)/OD_(230)比值以试剂盒法最高,碱裂解-乙醇洗涤法(裂解10 min)次之。PCR结果显示,除碱裂解法原液无目的条带外,其余各组均出现目的条带;碱裂解法操作步骤少、时间最短,加热法和碱裂解-乙醇洗涤法次之。综合分析选择碱裂解-乙醇洗涤法对70只鹌鹑进行性别鉴定,羽毛PCR鉴定性别结果与性腺解剖结果的符合率为100%,卡方分析检验差异均不显著(P>0.05)。研究表明,4种方法均可以用来处理鹌鹑羽毛样品,并用于鹌鹑的性别鉴定,其中碱裂解-乙醇洗涤法耗时更短、效果好、性价比更高,可用于大批量鹌鹑的早期性别鉴定,也适合用于其他使用PCR开展定性方面的试验。

关键词： DNA提取性别鉴定鹌鹑

一株孔雀源奇异变形杆菌全基因组测序及毒力与耐药性分析

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中国畜牧兽医 2024年第7期51卷 3030-3040页

作者：焦凤超雷震李迎晓武娴曲哲会信阳农林学院信阳464000 河南省水禽资源开发利用与疫病防控工程技术研究中心信阳464000

【目的】试验旨在了解分离自蓝孔雀的奇异变形杆菌PM19的毒力、耐药性以及基因组特征。【方法】采用动物试验、药敏试验和PCR方法对分离菌进行毒力、耐药性以及毒力基因检测,并运用Illumina NovaSeq6000平台进行基因组框架图测序,通过NR... 详细信息

【目的】试验旨在了解分离自蓝孔雀的奇异变形杆菌PM19的毒力、耐药性以及基因组特征。【方法】采用动物试验、药敏试验和PCR方法对分离菌进行毒力、耐药性以及毒力基因检测,并运用Illumina NovaSeq6000平台进行基因组框架图测序,通过NR、KEGG、Swiss-Prot、COG、PHI-base、CAZy、CARD和VFDB数据库进行功能基因注释以及病原宿主互作用蛋白、碳水化合物活性酶、耐药基因和毒力因子预测分析。【结果】分离菌PM19为多重耐药菌,对受试的氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸钾、头孢曲松、头孢噻肟、阿米卡星、庆大霉素、卡那霉素、环丙沙星、四环素、强力霉素、磺胺嘧啶钠、替米考星、氟苯尼考和氯霉素共14种抗菌药物全部耐药。分离菌具有较强毒力,对小鼠半数致死量为6.19×10^(6)CFU。FliL、zapA、rsmA、hmpA、mrpA、atfA、pmfA和ureC共8种毒力基因在该菌中被检测到。全基因组测序分析显示,该菌基因组大小约为3.98 Mb,GC含量为38.94%,预测到3715个编码基因。PHI-base数据库注释出158个与病原宿主互作用有关的蛋白基因;CAZy数据库注释出101个碳水化合物活性酶基因;通过CARD数据库和VFDB数据库分别注释到92个耐药基因和8类毒力相关基因。【结论】奇异变形杆菌PM19菌株具有较强毒力且为多重耐药菌株,携带大量病原宿主互作用蛋白基因、碳水化合物活性酶基因、耐药基因及毒力基因。

关键词：奇异变形杆菌多重耐药性毒力全基因组测序

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鸭源大肠杆菌耐药表型及耐药基因分析

中国家禽 2019年第10期41卷 64-68页

作者：焦凤超李迎晓张迎冰吴海港刘锦妮李洵赵灿曲哲会易本驰黄立赵聘信阳农林学院河南省水禽资源开发利用与疫病防控工程技术研究中心河南信阳464000

为了解鸭致病性大肠杆菌耐药表型及耐药基因的情况,选取信阳地区分离的11株致病性大肠杆菌,采用药敏纸片法对17种抗菌药物进行药敏试验,并对29种耐药基因进行PCR检测。结果显示:11株鸭源致病性大肠杆菌均表现为多重耐药,耐6、8、9种药... 详细信息

为了解鸭致病性大肠杆菌耐药表型及耐药基因的情况,选取信阳地区分离的11株致病性大肠杆菌,采用药敏纸片法对17种抗菌药物进行药敏试验,并对29种耐药基因进行PCR检测。结果显示:11株鸭源致病性大肠杆菌均表现为多重耐药,耐6、8、9种药物的现象最为普遍。在检测的29种耐药基因中,最为流行的基因是AacC4和FloR基因,两种基因检出率均为100%。耐药基因与相关耐药菌株检出率基本呈正相关。表明11株鸭源致病性大肠杆菌耐药性高,耐药谱广,携带耐药基因现象普遍,结果为鸭致病性大肠杆菌的耐药现状与临床用药提供理论指导。

关键词：大肠杆菌耐药性表型耐药基因

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鸭源大肠杆菌分离鉴定及其毒力基因检测

畜牧与兽医 2020年第3期52卷 73-77页

作者：李迎晓焦凤超张李敏杨露露李洵刘锦妮吴海港黄立赵聘信阳农林学院/河南省水禽资源开发利用与疫病防控工程技术研究中心河南信阳464000

从信阳市部分规模化鸭场疑似大肠杆菌感染病料中,通过传统分离培养及phoA基因检测,分离得到19株大肠杆菌。对分离菌进行种系发育分群、动物致病性试验和毒力基因检测。系统发育分子分群结果显示,19株分离菌中10株(52.63%)属于B2群,7株(3... 详细信息

从信阳市部分规模化鸭场疑似大肠杆菌感染病料中,通过传统分离培养及phoA基因检测,分离得到19株大肠杆菌。对分离菌进行种系发育分群、动物致病性试验和毒力基因检测。系统发育分子分群结果显示,19株分离菌中10株(52.63%)属于B2群,7株(36.84%)属于D群,1株(5.26%)属于B1群,1株(5.26%)属于A群。动物致病性试验结果显示,高致病性菌株9株(47.38%),中致病性菌株7株(36.84%),低致病性菌株3株(15.78%)。毒力基因的检测结果显示,ompT、iroN、hlyF、iutA和Iss五种毒力基因的检出率均为89.47%;fimC、marA和irp2基因检出率为63.16%;fyuA基因检出率为42.11%。

关键词：禽致病性大肠杆菌鸭分离鉴定致病性毒力基因

五种植物精油对鸭疫里默氏菌体外抑菌效果观察

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中国饲料 2020年第15期 55-58页

作者：左春生徐光科焦凤超李迎晓吴海港何敏黄立赵聘信阳农林学院/河南省水禽资源开发利用与疫病防控工程技术研究中心河南信阳464000

本试验旨在研究五种天然主要植物精油(桉叶油、肉桂油、紫苏油、陈皮油、薄荷油)对鸭疫里默氏菌的体外抑菌效果,分别用几种植物精油对鸭疫里默氏菌的敏感性进行测定,然后再采用试管二倍稀释法测定各植物精油对鸭疫里默氏菌的最小抑菌浓... 详细信息

本试验旨在研究五种天然主要植物精油(桉叶油、肉桂油、紫苏油、陈皮油、薄荷油)对鸭疫里默氏菌的体外抑菌效果,分别用几种植物精油对鸭疫里默氏菌的敏感性进行测定,然后再采用试管二倍稀释法测定各植物精油对鸭疫里默氏菌的最小抑菌浓度(MIC)。结果表明:桉叶油、肉桂油、陈皮油、紫苏油、薄荷油对鸭疫里默氏菌的最小抑菌浓度分别为:78.12、156.24、78.12、156.24、312.5μL/L。经分析可知,桉叶油、肉桂对鸭疫里默氏菌的体外抑菌效果最佳(P<0.05),紫苏、陈皮油对鸭疫里默氏菌的体外抑菌效果次之(P<0.05),薄荷油效果最差(P<0.05)。

关键词：植物精油鸭疫里默氏菌抑菌活性最小抑菌浓度(MIC)

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两种固定液对鸭小肠肥大细胞染色效果的比较

黑龙江畜牧兽医 2023年第10期 72-75,137页

作者：陈敏何敏王梦雪何书海焦凤超曲哲会信阳农林学院动物科技学院/河南省水禽资源开发利用与疫病防控工程技术研究中心河南信阳464000

为了探讨不同固定液对鸭小肠肥大细胞甲苯胺蓝染色效果的影响及鸭小肠内肥大细胞的数量和分布情况,试验选择5只100日龄的健康淮南麻鸭公鸭为研究对象,取鸭只十二指肠、空肠和回肠组织样品,均分为两份,分别置于10%中性福尔马林固定液和... 详细信息

为了探讨不同固定液对鸭小肠肥大细胞甲苯胺蓝染色效果的影响及鸭小肠内肥大细胞的数量和分布情况,试验选择5只100日龄的健康淮南麻鸭公鸭为研究对象,取鸭只十二指肠、空肠和回肠组织样品,均分为两份,分别置于10%中性福尔马林固定液和卡恩氏(Carnoy)固定液中固定,常规制作石蜡切片,切片经甲苯胺蓝染色后,观察小肠肥大细胞染色效果和肥大细胞形态、数量及分布,并进行统计分析。结果表明:Carnoy固定液对肥大细胞的染色效果优于10%中性福尔马林固定液,染色评分极显著高于10%中性福尔马林固定液(P<0.01);Carnoy固定液固定的十二指肠、空肠、回肠肥大细胞数量均极显著高于10%中性福尔马林固定液(P<0.01)。鸭十二指肠、空肠和回肠中肥大细胞形态和数目不同,在黏膜固有层血管、腺管周围的结缔组织中分布较多;空肠中肥大细胞数量最多,形态多样;十二指肠和回肠中肥大细胞数量递减,形态多为圆形。说明与10%中性福尔马林固定液相比,经Carnoy固定液固定的鸭小肠组织染色后,可清晰显示肥大细胞的形态分布。

关键词：鸭小肠肥大细胞福尔马林固定液 Carnoy固定液甲苯胺蓝染色

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鸡骨髓源造血干细胞的体外培养及分化诱导

中国家禽 2023年第10期45卷 6-11页

作者：何书海张晒焦凤超位格格王旭黄守孝董建国信阳农林学院动物科技学院河南信阳464000 河南省水禽资源开发利用与疫病防控工程技术研究中心河南信阳464000

为获取鸡骨髓源造血干细胞(HSC)和建立其体外培养方法,试验从鸡长骨中获取骨髓单个核细胞,流式细胞术分选出CD34^(+)HSC后,在体外进行培养和诱导分化,进一步观察CD34^(+)HSC的形态、生长状态、集落形成能力和分化能力。结果显示:IMDM培... 详细信息

为获取鸡骨髓源造血干细胞(HSC)和建立其体外培养方法,试验从鸡长骨中获取骨髓单个核细胞,流式细胞术分选出CD34^(+)HSC后,在体外进行培养和诱导分化,进一步观察CD34^(+)HSC的形态、生长状态、集落形成能力和分化能力。结果显示:IMDM培养基中添加50 ng/mL干细胞生长因子、30 ng/mL Flt-3配体、10μg/mL白细胞介素-3、50 ng/mL白细胞介素-6以及20%鸡血清可维持鸡CD34^(+)HSC的短期体外培养,最长可存活10 d。将上述培养体系加入到甲基纤维素半固体培养基中,可使鸡CD34^(+)HSC形成典型的干细胞克隆集落;在上述培养体系中加入50 ng/mL血小板生成素和80 ng/mL的粒细胞集落刺激因子,可诱导鸡CD34^(+)HSC向粒系细胞分化。瑞氏-姬姆萨染色结果显示,鸡CD34^(+)HSC的胞核较大,呈蓝紫色,核染色质细而分散,胞浆呈浅蓝色,均匀无颗粒。研究提示:在培养体系中添加鸡造血细胞生长因子,可实现鸡骨髓源CD34+HSC的体外扩增和定向诱导分化。

关键词：鸡骨髓造血干细胞分离培养分化诱导