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不同Reelin基因型小鼠海马结构组织学差异

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解剖学报 2016年第1期47卷 23-27页

作者：杨慈清李小英张必超郭潇周洁林俊堂新乡医学院生命科学技术学院河南新乡453003 河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003

目的通过对不同Reelin基因型小鼠海马区组织学结构的比较分析,为Reelin在海马结构形成中的作用提供依据。方法选择杂合子Reelin小鼠繁殖后代,在出生后10d进行基因型鉴定,设Reelin+/+、Reelin+/-和Reelin^-/-3组,每组3只小鼠。鉴定后的... 详细信息

目的通过对不同Reelin基因型小鼠海马区组织学结构的比较分析,为Reelin在海马结构形成中的作用提供依据。方法选择杂合子Reelin小鼠繁殖后代,在出生后10d进行基因型鉴定,设Reelin+/+、Reelin+/-和Reelin^-/-3组,每组3只小鼠。鉴定后的小鼠通过4%多聚甲醛心脏灌注后剥离全脑,通过多聚甲醛固定、蔗糖脱水后冷冻切片,采用4’6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)为细胞核染色,用免疫荧光标记T-box brain gene 1(Tbr-1)、神经元核抗原(Neu N)和GFAP特异性表达的细胞,光学显微镜下观察、摄片后对结果进行分析。结果从DAPI染色的细胞核及Tbr-1、Neu N和GFAP标记的细胞结构可以看出,Reelin+/+型小鼠和Reelin+/-型小鼠海马区都具有相似的结构,但将Reelin+/+和Reelin^-/-型小鼠相比较,Reelin^-/-型小鼠海马结构模糊,齿状回细胞向门区扩散,海马本部的细胞层结构紊乱,出现密集双细胞带,GFAP标记细胞减少。结论 Reelin缺失表达对小鼠大脑正常结构的形成具有明显的影响。在Reelin表达缺失后海马区齿状回细胞分布弥散,海马本部细胞层的分布紊乱,胶质细胞及纤维分布减少。

关键词： Reelin 海马免疫荧光 reeler小鼠

鸡胚发育过程中Shh超表达对脊髓神经纤维投射的抑制作用

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解剖学报 2015年第1期46卷 1-5页

作者：李晗杨慈清王聪睿胡阿珍付苏雷林俊堂新乡医学院生命科学技术学院河南新乡453003 河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003

目的探讨鸡胚发育过程中,sonic hedgehog（Shh）在脊髓中超表达后对神经纤维投射的影响。方法在鸡胚龄2.5～3d（E2.5～E3）时,利用鸡胚活体原位电转基因技术将Shh表达质粒和携带有报告基因绿色荧光蛋白（GFP）的质粒共转入鸡胚脊髓,E6... 详细信息

目的探讨鸡胚发育过程中,sonic hedgehog（Shh）在脊髓中超表达后对神经纤维投射的影响。方法在鸡胚龄2.5～3d（E2.5～E3）时,利用鸡胚活体原位电转基因技术将Shh表达质粒和携带有报告基因绿色荧光蛋白（GFP）的质粒共转入鸡胚脊髓,E6时取材切片,至少取3个材料,免疫荧光技术检验Shh的超表达,利用Open Book技术研究Shh在鸡胚脊髓中超表达后对神经纤维投射的影响。结果在脊髓组织切片水平上,免疫荧光结果表明,Shh在鸡胚脊髓中成功超表达,无论在组织切片上还是通过Open Book技术进行观察,与对照组相比,超表达后转染侧神经纤维都无法正常通过底板投射到对侧,表明Shh在鸡胚脊髓神经纤维投射方面具有重要作用。结论在鸡胚发育过程中,脊髓中Shh超表达后对神经纤维投射具有抑制作用。

关键词： Shh 神经纤维投射活体原位电转 Open Book 鸡胚

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C1型尼曼-匹克症小鼠嗅球细胞的病理变化

解剖学报 2016年第1期47卷 2-6页

作者：闫欣乔梁杨恩慧林俊堂新乡医学院生命科学技术学院河南新乡453003 河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003

目的通过观察NPC1基因突变型小鼠嗅球的形态学变化,探讨C1型尼曼-匹克症对嗅觉系统的影响。方法提取小鼠尾部组织DNA进行聚合酶链反应检测种系基因型;选取出生后第30天的野生型和突变型小鼠,采用免疫组织化学方法观察对比嗅球系统中神... 详细信息

目的通过观察NPC1基因突变型小鼠嗅球的形态学变化,探讨C1型尼曼-匹克症对嗅觉系统的影响。方法提取小鼠尾部组织DNA进行聚合酶链反应检测种系基因型;选取出生后第30天的野生型和突变型小鼠,采用免疫组织化学方法观察对比嗅球系统中神经元轴突的形态结构和髓鞘形成,以及神经丝蛋白(SMI31)和髓鞘碱性蛋白(MBP)的表达情况;TUNEL方法检测嗅球神经细胞的凋亡情况。结果 NPC1基因突变型小鼠嗅球中NPC1蛋白表达明显降低,神经细胞凋亡增加;SMI31免疫荧光显示嗅球内SMI31发生变性聚集,导致神经纤维缠结;同时,MBP蛋白表达量明显降低,髓鞘形成受到抑制。结论 NPC1基因突变能够引起嗅球神经细胞发生病理性变化,影响嗅觉系统的正常功能。

关键词： C1型尼曼-匹克症嗅觉障碍神经元髓鞘障碍免疫组织化学小鼠

双色荧光示踪鸡胚脊髓两侧连合纤维投射研究方法的建立

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解剖学报 2016年第2期47卷 284-288页

作者：于亚楠刘彦礼杨慈清张必超徐振平林俊堂新乡医学院生命科学技术学院河南新乡453003 河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003

目的建立1种双色荧光示踪鸡胚脊髓两侧连合纤维投射的实验方法。方法鸡胚孵育至胚龄2.5-3d,通过鸡胚活体原位电转基因技术将携带有报告基因绿色荧光蛋白（GFP）的质粒（p CAGGS-GFP）准确注射到鸡胚脊髓腔,实现定时、定位活体电转基因... 详细信息

目的建立1种双色荧光示踪鸡胚脊髓两侧连合纤维投射的实验方法。方法鸡胚孵育至胚龄2.5-3d,通过鸡胚活体原位电转基因技术将携带有报告基因绿色荧光蛋白（GFP）的质粒（p CAGGS-GFP）准确注射到鸡胚脊髓腔,实现定时、定位活体电转基因。转染后继续孵育至6d,取GFP阳性表达的胚胎,部分做脊髓横向切片,部分利用open-book技术将脊髓展开观察连合纤维的发育情况,每组至少取3个标本。其后在脊髓非转染侧连合神经元所在之处,点状注射Di I乙醇溶液,封片后于4℃避光孵育3d,在荧光显微镜下观察脊髓连合纤维投射情况。结果脊髓横切及open-book结果显示,鸡胚脊髓GFP阳性转染侧的神经元轴突穿过底板投射到脊髓对侧;同时在open-book结果中还可观察到,转染侧轴突穿过底板后分别沿腹索和外侧索向头尾部投射;Di I标记的非转染侧连合神经元轴突也同样穿过底板投射到对侧,并在侧索白质内延伸。结论本实验成功建立了1种双色荧光示踪鸡胚脊髓两侧连合纤维投射的研究方法,为研究脊髓神经发育提供技术保障。

关键词：胚胎脊髓连合纤维投射活体电转 Di I示踪鸡

鸡胚发育过程敲减神经型钙黏蛋白表达对视顶盖神经元迁移及神经丝蛋白的影响

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解剖学报 2013年第5期44卷 612-615页

作者：杨慈清李琼付苏雷李晗范义峰郭志坤林俊堂新乡医学院生命科学技术学院细胞工程教研室河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003 新乡市驼人医疗器械有限公司河南新乡453403 新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003

目的阐明鸡胚发育过程神经型钙黏蛋白（N-cadherin）在中枢神经系统中的作用及其对神经丝蛋白（NF）表达的影响。方法鸡胚正常培养到第3天（E3），采用鸡胚带壳开窗培养方法，取出3～4ml蛋清，开窗培养至E5，将N-cadherin干扰载体pGP... 详细信息

目的阐明鸡胚发育过程神经型钙黏蛋白（N-cadherin）在中枢神经系统中的作用及其对神经丝蛋白（NF）表达的影响。方法鸡胚正常培养到第3天（E3），采用鸡胚带壳开窗培养方法，取出3～4ml蛋清，开窗培养至E5，将N-cadherin干扰载体pGPU6-GFP-neo-N-cadherin-shRNA通过活体电转基因技术导入视顶盖，电转后继续培养到E12，每组收集3个胚胎，取材，固定，包埋，切片后进行荧光免疫组织化学分析相关蛋白的表达。结果鸡胚发育过程，敲减N-cadherin表达影响神经元迁移，被敲减的细胞主要停留在室管膜区，在N-cadherin受到抑制表达的区域，NF的表达也受到抑制，其表达明显减弱。结论 N-cadherin的抑制表达可导致神经元的迁移发生紊乱，影响NF的表达。

关键词：胚胎发育视顶盖神经型钙黏蛋白神经丝蛋白活体电转鸡胚

乳鼠心肌细胞移植对兔急性心肌梗死区微血管密度的影响

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解剖学报 2009年第5期40卷 803-806页

作者：王晓冰郭志坤新乡医学院河南省组织再生重点开放实验室河南新乡453003

目的观察乳鼠心肌细胞移植对兔急性心肌梗死区微血管密度及微血管再生的影响。方法新西兰大白兔16只,新生乳鼠40只。建立兔急性心肌梗死模型后,将培养的SD乳鼠心肌细胞移植到兔心肌梗死区,分别于移植后1、23、、4周取材,用碱性磷酸酶组... 详细信息

目的观察乳鼠心肌细胞移植对兔急性心肌梗死区微血管密度及微血管再生的影响。方法新西兰大白兔16只,新生乳鼠40只。建立兔急性心肌梗死模型后,将培养的SD乳鼠心肌细胞移植到兔心肌梗死区,分别于移植后1、23、、4周取材,用碱性磷酸酶组织化学法和免疫荧光法进行染色,光镜观察,LEICA Qwin V3图像分析系统分析兔心肌梗死边缘区毛细血管密度及其再生情况。结果乳鼠心肌细胞移植后的1、2、3、4周不同的时间段,兔心肌梗死区的毛细血管密度及新生毛细血管数量均明显高于对照组(P<0.05)。定量分析显示,毛细血管密度呈现先升后降的趋势。结论异体异种心肌细胞移植能够促进兔心肌梗死区的毛细血管新生,有利于改善心肌的血液供应。

关键词：心肌细胞移植毛细血管密度血管新生酶组织化学免疫荧光大鼠兔

纳米金颗粒@介孔二氧化硅修饰钛种植体促进高糖条件下的成骨分化

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中国组织工程研究 2025年第22期29卷 4694-4701页

作者：邓云艺陈世超罗明东李若彤兰小蓉余科李广文西南医科大学附属口腔医院种植科四川省泸州市646000 口颌面修复重建和再生泸州市重点实验室四川省泸州市646000 西南医科大学口腔医学研究所四川省泸州市646000

背景:微纳米结构改性是钛种植体表面处理的热点研究领域。糖尿病高血糖环境会影响钛种植体与骨组织形成稳定的结合,探索通过表面微纳结构改性来提高钛种植体在高糖环境下的成骨活性是有必要的。目的:观察钛表面纳米金颗粒@介孔二氧化硅... 详细信息

背景:微纳米结构改性是钛种植体表面处理的热点研究领域。糖尿病高血糖环境会影响钛种植体与骨组织形成稳定的结合,探索通过表面微纳结构改性来提高钛种植体在高糖环境下的成骨活性是有必要的。目的:观察钛表面纳米金颗粒@介孔二氧化硅涂层对体外高糖条件下成骨分化的影响。方法:分别制备纳米金颗粒悬浮液与介孔二氧化硅,将二者按一定比例混合在去离子水中,制备纳米金颗粒@介孔二氧化硅悬浮液。取钛片,分3组处理:光滑组经过水砂纸打磨处理,纳米管组经过水砂纸打磨处理后采用阳极氧化技术制备二氧化钛纳米管涂层,实验组制备二氧化钛纳米管涂层后浸泡于纳米金颗粒@介孔二氧化硅悬浮液中,制备纳米金颗粒@介孔二氧化硅涂层,表征3组钛片表面的微观形貌、亲水性。将大鼠骨髓间充质干细胞接种于3组钛片表面,通过细胞活/死荧光染色及CCK-8实验检测细胞增殖,DAPI/鬼笔环肽染色检测细胞黏附。将大鼠骨髓间充质干细胞接种于3组钛片表面,加入高糖成骨诱导培养基培养,通过碱性磷酸酶与茜素红S染色检测成骨分化。结果与结论:(1)扫描电镜下可见光滑组钛片表面均匀平坦,纳米管组钛片表面排列紧密的二氧化钛纳米管阵列,实验组钛片在二氧化钛纳米管表面及内部均负载纳米金颗粒@介孔二氧化硅;纳米管组、实验组钛片亲水性均优于光滑组。(2)细胞活/死荧光染色结果显示,3组钛片表面的细胞活力均高于90%;CCK-8实验结果显示,实验组细胞增殖率高于光滑组、纳米管组;DAPI/鬼笔环肽染色结果显示,二氧化钛纳米管涂层、纳米金颗粒@介孔二氧化硅涂层更有利于细胞黏附。(3)碱性磷酸酶与茜素红S染色结果显示,实验组钛片表面细胞碱性磷酸酶活性与细胞外基质矿化程度均高于光滑组、纳米管组。(4)结果表明,纳米金颗粒@介孔二氧化硅涂层可增强钛表面生物活性,促进高糖环境下的成骨分化。

关键词：纳米金颗粒介孔二氧化硅钛表面改性微纳结构高糖条件成骨分化

大鼠白色和棕色脂肪来源的间充质干细胞成脂分化特性的比较

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解剖学报 2016年第5期47卷 607-613页

作者：牛艳菲赵国安常玉巧甘黎殷国田郭志坤新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室新乡医学院第三附属医院心内科河南新乡453003

目的探讨白色脂肪组织(WAT)和棕色脂肪组织(BAT)来源的间充质干细胞成脂分化特性的差异。方法雄性SD大鼠15只,3只用于细胞分离培养,12只用于细胞移植。体外分离培养WAT和BAT两种来源的脂肪干细胞,用油红O染色检测两种干细胞的成脂分化率... 详细信息

目的探讨白色脂肪组织(WAT)和棕色脂肪组织(BAT)来源的间充质干细胞成脂分化特性的差异。方法雄性SD大鼠15只,3只用于细胞分离培养,12只用于细胞移植。体外分离培养WAT和BAT两种来源的脂肪干细胞,用油红O染色检测两种干细胞的成脂分化率,用免疫荧光技术检测成脂诱导、分化后的细胞是棕色脂肪细胞还是白色脂肪细胞。4’6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)标记两种来源的干细胞后移植至腹股沟区,分别在第1、2、3周取材,免疫荧光技术检测植入细胞的分化趋向。结果 WAT来源的干细胞增殖速度明显快于BAT来源的干细胞,前者成脂分化率为0.205±0.069,后者为0.165±0.053,两种干细胞的成脂诱导率差异无统计学意义(P>0.05)。两种干细胞分别植入体内后,在第1、2、3周发现,两种干细胞均表达棕色脂肪特异性蛋白解耦联蛋白1(UCP1)。结论 WAT和BAT来源的干细胞在体外及体内诱导成脂后均分化为棕色脂肪细胞。

关键词：解耦联蛋白1 棕色脂肪组织白色脂肪组织脂肪间充质干细胞成脂诱导免疫荧光大鼠

小鼠脂肪源和骨髓源间充质干细胞表面标记表达的比较

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解剖学报 2016年第2期47卷 203-208页

作者：余霞李琼任明芬牛艳菲甘黎郭志坤新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室新乡医学院第二附属医院心内科河南新乡453003

目的探讨小鼠脂肪源间充质干细胞（ADMSCs）和骨髓源间充质干细胞（BMSCs）表面标记表达的差异。方法分别对小鼠脂肪源和骨髓源间充质干细胞进行成骨、成脂、成心肌分化诱导、鉴定;流式细胞术与细胞免疫荧光法检测CD29、CD44、CD45和CD7... 详细信息

目的探讨小鼠脂肪源间充质干细胞（ADMSCs）和骨髓源间充质干细胞（BMSCs）表面标记表达的差异。方法分别对小鼠脂肪源和骨髓源间充质干细胞进行成骨、成脂、成心肌分化诱导、鉴定;流式细胞术与细胞免疫荧光法检测CD29、CD44、CD45和CD73的表达并进行比较。结果 BMSCs形态均一,呈长梭形;ADMSCs形态多样,呈梭形、星形、多角形等,胞体较大,表面分泌物较多;两者均可诱导分化为成骨细胞、脂肪细胞和心肌样细胞。流式细胞术检测显示,BMSCs表面分子CD29、CD44和CD73表达率分别为（83.43±1.97）%、（90.33±0.81）%、（2.63±0.42）%;ADMSCs表面分子CD29和CD44的表达率分别为（53.1±1.05）%、（34.8±2.1）%,CD73表达不稳定,在1.8%~19.7%之间波动。两种细胞均不表达造血干细胞标记物CD45。免疫荧光显示,CD73分子与部分CD29、CD44阳性细胞共表达。结论小鼠BMSCs和ADMSCs均具有成脂、成骨、成心肌分化能力,但是在形态上和分子表达上均存在差异。BMSCs的CD44和CD29表达高于ADMSCs;而CD73的表达则相反,CD73在两种细胞的表达均较低,在ADMSCs的表达不稳定。

关键词： CD73 CD29 CD44 间充质干细胞免疫荧光法流式细胞术小鼠