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大口黑鲈双RNA病毒VP2蛋白原核表达及多克隆抗体制备

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西北农林科技大学学报(自然科学版) 2025年 1-8页

作者：张秋爽马宝福郑果林强梁红茹牛银杰罗霞李宁求付小哲中国水产科学研究院珠江水产研究所农业农村部渔用药物创制重点实验室广东省水产动物免疫与绿色养殖重点实验室

【目的】研究大口黑鲈双RNA病毒(largemouth bass birnavirus,LBBV)VP2蛋白的抗原性,为后续LBBV疫苗研究提供基础材料。【方法】PCR扩增LBBV VP2基因,构建重组质粒p ET-VP2,PCR和测序鉴定后转入大肠杆菌中进行诱导表达和纯化。以纯化的... 详细信息

【目的】研究大口黑鲈双RNA病毒(largemouth bass birnavirus,LBBV)VP2蛋白的抗原性,为后续LBBV疫苗研究提供基础材料。【方法】PCR扩增LBBV VP2基因,构建重组质粒p ET-VP2,PCR和测序鉴定后转入大肠杆菌中进行诱导表达和纯化。以纯化的重组VP2蛋白为抗原,皮下多点注射免疫新西兰大白兔,耳中央动脉采血并分离血清,通过间接ELISA方法测定多克隆抗体效价;利用Ni-NTA镍离子亲和层析纯化抗体,用BCA法测定纯化后抗体的浓度。通过Western blot和间接免疫荧光鉴定VP2多克隆抗体特异性;采用固定病毒-稀释血清法测定血清的中和效价。【结果】PCR扩增获得了1 266 bp的VP2基因片段。PCR和测序鉴定结果表明,重组质粒p ETVP2构建成功。VP2重组蛋白的诱导表达和纯化试验结果获得了64 ku的重组蛋白,符合预期大小。成功制备了VP2蛋白的多克隆抗体,其质量浓度为10 mg/m L,效价为1∶1 024 000,可特异性识别LBBV VP2蛋白;血清中和试验结果显示,VP2多抗中和抗体效价为1∶64。【结论】成功获得了大肠杆菌表达的LBBV重组VP2蛋白,制备了抗VP2蛋白的多克隆抗体,该多抗对LBBV具有中和作用。

关键词：大口黑鲈大口黑鲈双RNA病毒 VP2蛋白多克隆抗体

线纹尖塘鳢性别相关的2个dmrt基因结构特征及表达规律

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渔业科学进展 2025年第1期46卷 93-104页

作者：樊佳佳马冬梅朱华平林明辉钟再选田园园中国水产科学研究院珠江水产研究所农业农村部热带亚热带水产资源利用与养殖重点实验室广东省水产动物免疫与绿色养殖重点实验室广东广州510380

线纹尖塘鳢(Oxyeleotris lineolata)具有典型性别生长二态性,雄鱼生长优势显著,doublesex and mab-3 related transcription factor(DMRT)家族是一个与性别决定相关的转录因子家族。基于线纹尖塘鳢性腺转录组数据,共获得2个dmrt基因的c... 详细信息

线纹尖塘鳢(Oxyeleotris lineolata)具有典型性别生长二态性,雄鱼生长优势显著,doublesex and mab-3 related transcription factor(DMRT)家族是一个与性别决定相关的转录因子家族。基于线纹尖塘鳢性腺转录组数据,共获得2个dmrt基因的cDNA序列,分别命名为Oxldmrt1和Oxldmrt3,并采用PCR技术扩增验证2个基因的cDNA序列。运用生物信息学方法分析2个基因序列结构特征,结果显示,Oxldmrt1和Oxldmrt3开放阅读框分别为903 bp和1363 bp,分别编码300个氨基酸和453个氨基酸;OxlDMRT1属于碱性蛋白,而OxlDMRT3属于酸性蛋白;2个基因均含有高度保守的DM结构域,OxlDMRT3还存在DMA结构域。氨基酸聚类分析显示,脊椎动物不同DMRT家族都是独立聚类,OxlDMRT1属于DMRT1家族,OxlDMRT3属于DMRT3家族,DMRT1家族最先聚类,再和DMRT3家族聚类。利用实时荧光定量PCR技术(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)分析2个dmrt基因在雌鱼和雄鱼8个组织的表达水平,结果显示,2个基因在精巢中的表达量均显著高于其他组织(P部位一致,均在精原细胞中有较强的表达信号。综上所述,Oxldmrt1和Oxldmrt3均在线纹尖塘鳢性腺胚胎发育阶段和精巢发育过程中起调节作用,而Oxldmrt1还可能参与胚胎后期性别决定和性别分化调控过程,Oxldmrt3还可能参与神经系统发育。本研究为线纹尖塘鳢性别决定与性别分化相关的分子机制研究提供了参考。

关键词：线纹尖塘鳢 Oxldmrt1 Oxldmrt3 基因结构基因表达荧光原位杂交

基于非洲猪瘟病毒D250R蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立

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中国兽医科学 2025年

作者：朱文青徐丽华刘佳畦邬雨倩金子安吴旭琪袁秀芳周继勇郑肖娟浙江大学动物医学中心农业农村部动物病毒学重点实验室浙江省农业科学院畜牧兽医研究所

D250R是非洲猪瘟病毒(African swine fever virus，ASFV)感染早期表达的具有脱帽酶活性的非结构蛋白。本研究构建了pET-32a-D250R重组原核表达质粒，经IPTG诱导和镍亲和纯化成功获得原核细胞表达的重组蛋白His-D250R，该蛋白和真核细胞... 详细信息

D250R是非洲猪瘟病毒(African swine fever virus，ASFV)感染早期表达的具有脱帽酶活性的非结构蛋白。本研究构建了pET-32a-D250R重组原核表达质粒，经IPTG诱导和镍亲和纯化成功获得原核细胞表达的重组蛋白His-D250R，该蛋白和真核细胞表达的重组蛋白Flag-D250R均能被ASFV标准阳性血清识别，证明D250R蛋白是ELISA抗体检测方法的潜在靶标。在此基础上，以纯化的重组蛋白为免疫原制备鼠源多克隆抗体，该抗体ELISA效价大于1∶409 600。Western-blot试验表明该抗体与Flag-D250R和His-D250R均具有良好的反应性，证明His-D250R蛋白具有良好的抗原性。进一步以His-D250R蛋白为包被抗原，通过对抗原包被、封闭、抗体孵育、底物反应等条件的优化，建立间接ELISA抗体检测方法。其阴阳性临界值为0.359，检测PRV、PRRSV、PCV2、CSFV等阳性血清结果均呈阴性反应，灵敏度达1∶3 200，批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%，与商品化试剂盒符合率达98.8%。上述结果表明，基于His-D250R蛋白建立的间接ELISA抗体检测方法特异性、敏感性、重复性良好，具备一定临床应用价值，可以为非洲猪瘟诊断方法开发提供重要支持。

关键词：非洲猪瘟病毒 D250R蛋白原核表达多克隆抗体间接ELISA

通过式固相萃取净化/超高效液相色谱-串联质谱法测定稻渔水产品中 5 种新烟碱农药残留

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分析试验室 2025年

作者：马丽莎尹怡林嘉薇郑光明李丽春赵成周豪广东省水产动物免疫与绿色养殖重点实验室农业农村部外来入侵水生生物防控重点实验室中国水产科学研究院珠江水产研究所

建立了超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）法快速测定稻渔水产品中5种新烟碱类残留。样品用1%甲酸乙腈超声提取，PRiME HLB通过型固相萃取柱净化，UPLC-MS /MS检测，基质加标曲线内标法定量。结果表明，目标化合物在0.2～50 ng/mL... 详细信息

建立了超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）法快速测定稻渔水产品中5种新烟碱类残留。样品用1%甲酸乙腈超声提取，PRiME HLB通过型固相萃取柱净化，UPLC-MS /MS检测，基质加标曲线内标法定量。结果表明，目标化合物在0.2～50 ng/mL范围内均具有较好的线性关系，线性相关系数( r2) > 0. 998，检测限为0. 5 μg/kg，定量限为1. 5 μg/kg。在禾花鲤、牛蛙、克氏原螯虾和泥鳅基质中，3个不同添加水平的平均加标回收率在85.8%～115.4%之间，相对标准偏差小于9.6%。该方法可满足稻渔水产品中新烟碱类农药残留快速检测的要求。

关键词：稻渔水产品新烟碱类农药残留超高效液相色谱-串联质谱

肉鸡常规与低蛋白质饲粮净能效率和氨基酸标准回肠消化率比较研究

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动物营养学报 2025年

作者：班志彬陈思淼徐莹闫晓刚刘永发李立佳李柏浩张琦玉呙于明中国农业大学动物科学技术学院动物营养学国家重点实验室吉林省农业科学院动物营养与饲料研究所

本试验旨在比较不同日龄肉鸡对常规与低蛋白质饲粮净能利用效率和氨基酸标准回肠消化率的差异。试验分2个试验进行,试验1:分别选择7日龄爱拔益加(AA)肉鸡48只、17日龄AA肉鸡48只和30日龄AA肉鸡24只,每个日龄阶段分为2组[分别饲喂常规饲... 详细信息

本试验旨在比较不同日龄肉鸡对常规与低蛋白质饲粮净能利用效率和氨基酸标准回肠消化率的差异。试验分2个试验进行,试验1:分别选择7日龄爱拔益加(AA)肉鸡48只、17日龄AA肉鸡48只和30日龄AA肉鸡24只,每个日龄阶段分为2组[分别饲喂常规饲粮(饲粮粗蛋白质水平为23%)和低蛋白质饲粮(饲粮粗蛋白质水平为21%)],每组6个重复,每个重复4或2只鸡。每期试验7 d,其中预试期4 d,正试期3 d。采用家禽12室联排开路式呼吸测热装置分别测定肉鸡11～14日龄、21～24日龄和35～38日龄呼吸数据。试验2:分别选择7、17和30日龄AA肉鸡各108只,每个日龄阶段分为3组,每组6个重复,每个重复6只鸡。3组肉鸡分别饲喂常规饲粮、低蛋白质饲粮和无氮饲粮,并分别于10、20和33日龄时开展屠宰试验,测定氨基酸标准回肠消化率。结果表明:1)与常规饲粮相比,低蛋白质饲粮对3个日龄阶段肉鸡生长性能均无显著影响(P>0.05),显著降低肉鸡21～24日龄氧气消耗量(P0.05)。综上所述,与常规饲粮相比,低蛋白质饲粮会显著降低肉鸡21日龄后产热量,提高净能利用率;净能体系可以更有效判断饲粮蛋白质水平对肉鸡的影响,有利于精准测定肉鸡对低蛋白质饲粮的能量代谢参数并分析体内能量调控方向;在肠道发育完善后,肉鸡对低蛋白质饲粮的氨基酸标准回肠消化率低于常规饲粮。

关键词：肉鸡日龄低蛋白质饲粮净能氨基酸标准回肠消化率

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荔枝炭疽病的发生与防治研究进展

华南农业大学学报 2025年

作者：凌金锋黄荣董丁铭孔广辉习平根李敏慧彭埃天姜子德华南农业大学植物保护学院/广东省微生物信号与作物病害防控重点实验室广东省农业科学院植物保护研究所/农业农村部华南果蔬绿色防控重点实验室/广东省植物保护新技术重点实验室

荔枝Litchi chinensis Sonn.是中国重要的热带亚热带水果，然而刺盘孢属真菌Colletotrichum spp.侵染所致的荔枝炭疽病严重影响了荔枝的生产和果实采后贮运。荔枝炭疽病为害荔枝叶、枝梢、花穗和果实，症状复杂，病原种类多样，迄今已... 详细信息

荔枝Litchi chinensis Sonn.是中国重要的热带亚热带水果，然而刺盘孢属真菌Colletotrichum spp.侵染所致的荔枝炭疽病严重影响了荔枝的生产和果实采后贮运。荔枝炭疽病为害荔枝叶、枝梢、花穗和果实，症状复杂，病原种类多样，迄今已报道了5个复合种共22个种，其中，盘长孢状刺盘孢复合种C. gloeosporioides species complex为优势种群。高温、高湿的气候条件适合病害的发生，每年4—6月为我国荔枝炭疽病的爆发期。本文从荔枝炭疽病病害症状、病原、发生规律、致病机制以及防治技术等方面进行了全面综述，根据其侵染过程对已报道的刺盘孢属真菌的致病因子进行了归纳，对荔枝炭疽病的防控技术进行了总结分析，并对今后的荔枝炭疽致病机制研究和绿色防控技术进行了展望。

关键词：荔枝荔枝炭疽菌优势种群生物学特性发生规律致病机理防治策略

不同水平苜蓿叶粉对妊娠母猪粪便体外发酵产物和菌群组成的影响

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草业科学 2025年

作者：程佳雯张舒航韩尧皇甫卫康刘孟琦刘伯帅崔亚垒王志昌史莹华河南农业大学动物科技学院河南省草地资源创新与利用重点实验室河南省草业工程技术研究中心

本研究以妊娠母猪粪便微生物作为菌种构建体外发酵模型，旨在探究不同水平苜蓿叶粉（alfalfa leaf meal，ALM）在不同发酵时间下的气体和短链脂肪酸（SCFAs）产量，以及微生物组成变化规律。这有助于优化饲料配方从而提高母猪肠道健康... 详细信息

本研究以妊娠母猪粪便微生物作为菌种构建体外发酵模型，旨在探究不同水平苜蓿叶粉（alfalfa leaf meal，ALM）在不同发酵时间下的气体和短链脂肪酸（SCFAs）产量，以及微生物组成变化规律。这有助于优化饲料配方从而提高母猪肠道健康和生产性能，同时减少环境污染，提升经济效益。试验使用健康母猪的粪便微生物作为接种源，采用体外发酵法，选取ALM作为发酵底物，在发酵罐中分别添加0 mg（CON组）、50 mg（LALM组）、100 mg（MALM组）和200 mg（HALM组），在发酵时间为8、12、24和36 h时采集发酵液及底物残渣，测定气体、SCFAs产量及微生物组成。结果表明，随着ALM添加水平的升高，各时间段各发酵液中总气体、总SCFAs含量呈上升趋势；添加ALM可使H2S的产量显著降低（P<0.05）；添加ALM后乙酸含量极显著升高（P<0.01），在12 h后戊酸、异丁酸、异戊酸含量极显著升高（P<0.01）；与对照组相比，添加ALM后梭杆菌属（Fusobacterium）的相对丰度显著降低（P<0.05），柯林斯菌属（Collinsella）、普雷沃氏菌科NK3B31群（Prevotellaceae＿NK3B31＿group）和放线菌门（Actinobacteriota）的相对丰度显著升高（P<0.05）。综上所述，本试验结果表明，在妊娠母猪粪便微生物发酵液加入ALM能改善微生物区系组成结构，促进SCFAs生成，提高气体产生。

关键词：妊娠母猪体外发酵短链脂肪酸微生物菌落结构苜蓿叶粉

抗菌肽对产蛋高峰期笼养蛋鸭生产性能、蛋品质、血清生化指标、抗氧化能力和免疫功能的影响

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动物营养学报 2025年

作者：李茹田勇蒋春青冯伟峰邹晓庭卢立志浙江大学动物科学学院饲料科学研究所浙江大学动物分子营养学教育部重点实验室农业农村部(华东)动物营养与饲料重点实验室浙江省饲料与动物营养重点实验室浙江省农业科学院畜牧兽医研究所农产品质量安全危害因子与风险防控国家重点实验室农业农村部畜禽资源(家禽)评价利用重点实验室家禽种业与绿色养殖技术浙江省工程研究中心金华金婺农业发展有限公司

本试验旨在探讨笼养蛋鸭产蛋高峰期饲粮中添加不同水平抗菌肽对其生产性能、蛋品质、血清生化指标、抗氧化能力及免疫功能的影响。选取640羽产蛋率相近的220日龄绍兴鸭,随机分为4组,每组8个重复,每个重复20羽。对照组饲喂基础饲粮,试验... 详细信息

本试验旨在探讨笼养蛋鸭产蛋高峰期饲粮中添加不同水平抗菌肽对其生产性能、蛋品质、血清生化指标、抗氧化能力及免疫功能的影响。选取640羽产蛋率相近的220日龄绍兴鸭,随机分为4组,每组8个重复,每个重复20羽。对照组饲喂基础饲粮,试验组分别在基础饲粮中添加100、200和400 mg/kg抗菌肽。预试期7 d,正试期56 d。结果显示:1)与对照组相比,饲粮中添加200 mg/kg抗菌肽可显著提高产蛋率(P0.05)。3)与对照组相比,饲粮中添加200 mg/kg抗菌肽可显著提高血清总蛋白、白蛋白、球蛋白含量(P免疫球蛋白G和免疫球蛋白M含量(P免疫功能。在本试验条件下,产蛋高峰期笼养蛋鸭饲粮中添加200 mg/kg抗菌肽较为适宜。

关键词：抗菌肽笼养蛋鸭生产性能蛋品质血清生化指标抗氧化能力免疫功能

猪繁殖与呼吸综合征病毒谱系8毒株特异性单克隆抗体研制

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畜牧与兽医 2025年第1期57卷 111-118页

作者：任语馨张杰高雁怩孙杨杨张路捷白娟姜平南京农业大学/农业农村部动物细菌学重点实验室江苏南京210095

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株存在多种基因亚型(谱系)和抗原性差异,为了鉴别不同谱系流行毒株,选取PRRSV谱系8毒株BB0907(高致病性毒株)非结构蛋白2(NSP2)高变区基因片段(tNSP2),采用大肠杆菌表达制备获得NSP2重组蛋白,并免疫... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株存在多种基因亚型(谱系)和抗原性差异,为了鉴别不同谱系流行毒株,选取PRRSV谱系8毒株BB0907(高致病性毒株)非结构蛋白2(NSP2)高变区基因片段(tNSP2),采用大肠杆菌表达制备获得NSP2重组蛋白,并免疫BALB/c小鼠。结果:研制出5株NSP2单克隆抗体(3D6、6B2、6C3、8C2和8H6),小鼠腹水ELISA抗体效价均达1∶216000;5株单抗轻链类型都为Kappa型,3D6、6B2和6C8的重链类型为IgG1,8C2的重链类型为IgG2b,8H6重链类型为IgG2a;通过构建tNSP2蛋白截短体,Western blot鉴定出4个抗原表位,即^(485)GPLNFPTPSE^(494)、^(555)FPLAPSQNMG564、575EVLSEISDIL^(584)和^(585)NDTPAPVS^(593);间接免疫荧光试验结果显示,这些单抗均能与PRRSV谱系8毒株发生特异性反应,但与谱系1和谱系5毒株不反应。本研究为PRRSV分离毒株抗原鉴别诊断和生物学研究提供了有意义的研究材料。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 Nsp2 单克隆抗体 B细胞表位