检索结果-南通市图书馆

马立克病病毒单克隆抗体库构建及gB蛋白特异性单抗的筛选与鉴定

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畜牧兽医学报 2023年

作者：李林燕滕蔓刘金玲郑鹿平柴书军丁轲余祖华罗俊河南省农业科学院动物免疫学重点实验室农业农村部动物免疫学重点实验室河南省动物免疫学重点实验室河南省农业科学院中英禽病国际研究中心河南科技大学功能微生物与畜禽健康实验室

马立克病(MD)是由马立克病病毒(MDV)感染引起的危害最严重的一种家禽免疫抑制病与肿瘤病，制备MDV单克隆抗体可为后续的基因功能、致病机制及诊断技术研究提供关键试剂。本研究利用NE-PERTM细胞核和细胞质提取试剂，分别制备了vvMDV标... 详细信息

马立克病(MD)是由马立克病病毒(MDV)感染引起的危害最严重的一种家禽免疫抑制病与肿瘤病，制备MDV单克隆抗体可为后续的基因功能、致病机制及诊断技术研究提供关键试剂。本研究利用NE-PERTM细胞核和细胞质提取试剂，分别制备了vvMDV标准毒株Md5感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)核蛋白和浆蛋白，通过切向流超滤浓缩后制备免疫原，分别免疫6～8周龄雌性BALB/c小鼠，常规细胞融合方法制备单克隆抗体杂交瘤细胞。通过间接免疫荧光试验(IFA)筛选，建立了一个容量为 31株纯化的MDV单克隆抗体杂交瘤细胞库，包括27株稳定分泌MDV-1特异性抗体和4株稳定分泌MDV-1、MDV-2和HVT保守抗体的杂交瘤细胞株。经过293T细胞真核表达gB蛋白并结合IFA染色，其中1株单克隆抗体J-1F3-C6被鉴定为MDV糖蛋白gB的特异性单克隆抗体，其单抗腹水IFA效价为1：25 600，轻链型为Kappa，IgG亚型为IgG2a。进一步IFA染色表明，J-1F3-C6可特异性识别MDV-1、MDV-2和HVT毒株表达的gB蛋白，但在蛋白质免疫印迹(Western blot)分析中J-1F3-C6只与MDV-1和HVT发生特异性反应。综上，本研究建立了一个MDV单克隆抗体杂交瘤细胞库，并从中筛选鉴定了1株gB蛋白特异性的单克隆抗体，为后续研究奠定了重要基础。

关键词：马立克病单克隆抗体糖蛋白gB 间接免疫荧光试验共聚焦分析蛋白质免疫印迹

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酶联免疫法检测猪肉中的司帕沙星

现代食品科技 2022年第2期38卷 266-271页

作者：邢广旭赵东孙雪峰温留丁张颖硕张改平河南省农业科学院动物免疫学重点实验室河南郑州450003

为了建立一种检测猪肉中司帕沙星(SPFX)残留的方法,并且在检测时具有特异性高,背景低和无需样品预处理的特点。该研究制备了间接竞争性酶联免疫吸附剂和特异性抗司帕沙星单克隆抗体。结果表明,该抗体与氟甲喹(11.99%)、氟罗沙星(11.14%... 详细信息

为了建立一种检测猪肉中司帕沙星(SPFX)残留的方法,并且在检测时具有特异性高,背景低和无需样品预处理的特点。该研究制备了间接竞争性酶联免疫吸附剂和特异性抗司帕沙星单克隆抗体。结果表明,该抗体与氟甲喹(11.99%)、氟罗沙星(11.14%)、恩诺沙星(4.60%)、环丙沙星(0.31%)几乎没有交叉反应。该方法测定了添加SPFX的猪肉中的药物残留,检测内变异系数小于5.68%,检测间变异系数小于5.51%。检测间和检测内的平均回收率分别为102%~106%和101%~104%。该抗体对SPFX的IC_(50)为31μg/L,没有抗体具有四种结构相关化合物和其他化合物。高效液相色谱(HPLC)和酶联免疫吸附试验(ELISA)的结果进一步证实了icELISA快速检测猪肉中SPFX的可靠性和准确性。该研究表明icELISA法检测猪肉中SPFX残留分析是一种可靠、简便、低成本的方法。

关键词：司帕沙星单克隆抗体酶联免疫吸附试验猪肉

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伪狂犬病病毒研究进展

畜牧与兽医 2024年第2期56卷 124-130页

作者：刘运超杨素珍尚延丽郝慧芳河南省农业科学院动物免疫学重点实验室河南郑州450002

伪狂犬病是由伪狂犬病病毒(pesudorabies virus,PRV)感染引起的一种严重的传染性病毒病,主要引起猪的繁殖失败、生长停滞和呼吸系统障碍,2周龄以下仔猪死亡率高达100%。伪狂犬病属于多种动物共患传染病,主要经口、鼻感染,通过在上呼吸... 详细信息

伪狂犬病是由伪狂犬病病毒(pesudorabies virus,PRV)感染引起的一种严重的传染性病毒病,主要引起猪的繁殖失败、生长停滞和呼吸系统障碍,2周龄以下仔猪死亡率高达100%。伪狂犬病属于多种动物共患传染病,主要经口、鼻感染,通过在上呼吸道上皮细胞中的复制,进一步感染神经系统和内脏器官。PRV有11种糖蛋白分子,在病毒的毒力、感染入侵和致病过程中发挥重要作用。临床上采用疫苗免疫和鉴别诊断相结合的方式进行PRV的防控,起到了一定的效果,但是仍然给养猪业造成巨大损失。因此,本文综述和讨论了猪伪狂犬病的临床症状以及病原的分子特征、致病机制和疫苗研究的最新进展,以期为该病疫苗研究和诊断试剂开发提供参考。

关键词：伪狂犬病病毒分子特征致病机制疫苗

家禽疱疹病毒CRISPR/Cas9基因编辑最新研究进展

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畜牧兽医学报 2022年第10期53卷 3335-3344页

作者：罗俊刘金玲郑鹿平罗琴滕蔓河南省农业科学院动物免疫学重点实验室农业农村部动物免疫学重点实验室河南省动物免疫学重点实验室郑州450002 河南省农业科学院中英禽病国际研究中心郑州450002 河南牧业经济学院动物医药学院郑州450046

基于CRISPR/Cas9系统的基因编辑是最新一代的基因组编辑技术,在向导RNA(gRNA)的介导下几乎可以靶向编辑任何一种基因,实现基因组的定点突变、敲除或插入。近年来将CRISPR/Cas9基因编辑技术应用于大基因组DNA病毒的研究,尤其是用于疱疹... 详细信息

基于CRISPR/Cas9系统的基因编辑是最新一代的基因组编辑技术,在向导RNA(gRNA)的介导下几乎可以靶向编辑任何一种基因,实现基因组的定点突变、敲除或插入。近年来将CRISPR/Cas9基因编辑技术应用于大基因组DNA病毒的研究,尤其是用于疱疹病毒的基因编辑已成为病毒学研究领域的最新国际热点。自2016年首次报道利用CRISPR/Cas9系统改造家禽疱疹病毒如马立克病病毒(MDV)基因组以来,短短5年时间已全面应用于家禽疱疹病毒的蛋白编码基因和非编码RNA基因的编辑、基因缺失疫苗和重组疫苗研发、抗病毒治疗以及抗病育种等领域。本文详细综述了当前CRISPR/Cas9基因编辑技术在家禽疱疹病毒中的应用进展和最新成果,并对其面临的问题和前景进行了展望,以期为后续研究提供重要参考。

关键词： CRISPR/Cas9 基因编辑家禽疱疹病毒

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猪细小病毒病研究进展

动物医学进展 2024年第3期45卷 107-110页

作者：刘运超陈玉梅杨苏珍魏蔷郝慧芳柴书军河南省农业科学院动物免疫学重点实验室河南郑州450002

猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)是一种无囊膜DNA病毒,主要引起母猪繁殖障碍。该病毒在全世界广泛流行,我国猪场PPV感染率高达90%以上,给养猪业带来巨大经济损失。PPV经口、鼻传播,主要侵染猪的生殖器官,引起母猪的死胎、木乃伊胎... 详细信息

猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)是一种无囊膜DNA病毒,主要引起母猪繁殖障碍。该病毒在全世界广泛流行,我国猪场PPV感染率高达90%以上,给养猪业带来巨大经济损失。PPV经口、鼻传播,主要侵染猪的生殖器官,引起母猪的死胎、木乃伊胎和公猪的精液质量下降。临床采用接种疫苗的方式进行防控,起到了一定的效果。论文对病毒的基因组和蛋白特征、流行病学和疫苗研究进行综述,以期为PPV的基础研究和疫苗开发提供参考。

关键词：猪细小病毒 VLP组装病毒抗原表位 VP2蛋白

1株类NADC30与类JXA1重组的猪繁殖与呼吸综合征病毒基因组遗传特征分析

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畜牧兽医学报 2020年第7期51卷 1677-1687页

作者：郭振华阮海宇耿瑞陈鑫鑫乔松林邓瑞广张改平河南省农业科学院动物免疫学重点实验室农业部动物免疫学重点实验室郑州450002 河南农业大学郑州450002

旨在分析本实验室2017年从临床病料中分离的1株猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的分子遗传特征,测定了其全基因组序列,并运用生物信息学软件对其遗传特点进行了分析。结果显示,该... 详细信息

旨在分析本实验室2017年从临床病料中分离的1株猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的分子遗传特征,测定了其全基因组序列,并运用生物信息学软件对其遗传特点进行了分析。结果显示,该毒株基因组全长15054 bp,与代表性毒株VR-2332、NADC30、CH-1a、JXA1和QYYZ的核苷酸相似性分别为84.5%、93.4%、84.2%、83.9%和82.1%。系统进化树分析显示,该毒株与NADC30-like毒株处于同一进化分支,属于lineage 1。基于GP5和Nsp2蛋白的氨基酸序列分析显示,分离株GP5蛋白糖基化位点位于34位、44位和51位;在37—45 aa的线性表位区较为保守,在27—30 aa和37—45 aa的线性表位区存在特异的氨基酸位点变异;Nsp2蛋白存在NADC30-lke毒株特征性的131个(323—433位、483位、504—522位)不连续氨基酸的缺失。基因重组分析显示,该毒株以类NADC30为主要亲本、以类JXA1为次要亲本,在Nsp2的氨基端(1340—2082 nt)发生了基因重组。本研究成功绘制了1株NADC30-like毒株的基因组遗传特征,确定了其在Nsp2区域发生了基因重组,提示PRRSV通过基因重组在不断发生遗传演化,开展持续的PRRSV流行及遗传变异监测对于该病的防控具有重要意义。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒同源性分析系统进化树遗传变异基因重组

鸡异质核糖核蛋白AB单克隆抗体的制备及鉴定

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河南农业科学 2022年第2期51卷 127-132页

作者：罗俊党露郑鹿平刘金玲柴书军赵东杨艳艳滕蔓河南省农业科学院动物免疫学重点实验室/农业农村部动物免疫学重点实验室/河南省动物免疫学重点实验室河南郑州450002 河南省农业科学院中英禽病国际研究中心河南郑州450002 广州医科大学附属第三医院广东广州510095

为研制鸡异质核糖核蛋白AB(hnRNPAB)单克隆抗体,为其生物学功能研究提供关键试剂,构建重组质粒pET-30a-hnRNPAB,转化感受态细胞E.coli BL21,经IPTG诱导表达,并通过树脂Ni对可溶性表达的鸡hnRNPAB蛋白进行亲和层析纯化之后免疫Balb/c小鼠... 详细信息

为研制鸡异质核糖核蛋白AB(hnRNPAB)单克隆抗体,为其生物学功能研究提供关键试剂,构建重组质粒pET-30a-hnRNPAB,转化感受态细胞E.coli BL21,经IPTG诱导表达,并通过树脂Ni对可溶性表达的鸡hnRNPAB蛋白进行亲和层析纯化之后免疫Balb/c小鼠,利用细胞融合技术制备抗鸡hnRNPAB的单克隆抗体细胞株,最终通过间接酶联免疫吸附试验(iELISA)筛选获得1株单克隆抗体杂交瘤细胞株5H2-H1。间接免疫荧光试验(IFA)和蛋白质免疫印迹(Western blot)分析表明,5H5-H1单克隆抗体可特异性识别鸡胚成纤维细胞(CEF)表达的hnRNPAB蛋白。同时IFA和间接免疫细胞化学试验(ICA)结果还显示,除了特异性识别鸡hnRNPAB蛋白之外,5H5-H1单克隆抗体还可以与源自人、鼠、猴、牛和猪在内的5种常见哺乳动物细胞系表达的hnRNPAB发生特异性反应。

关键词：鸡异质核糖核蛋白单克隆抗体间接免疫荧光试验 Western blot分析间接免疫细胞化学试验

水貂阿留申病毒串联表位重组抗原的表达及血清学初步评价

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中国兽医学报 2019年第11期39卷 2135-2139,2151页

作者：秦飞燕孙杰马凡舒王洋柏玲张蕾闫喜军中国农业科学院特产研究所特种经济动物分子生物学国家重点实验室/农业部经济动物疫病重点实验室吉林长春130122 河南省农业科学院动物免疫学重点实验室/农业部动物免疫学重点实验室/河南省动物免疫学重点实验室河南郑州450002

为探究水貂阿留申病毒(ADV)VP2主要抗原表位在水貂阿留申病血清学诊断中的作用,本试验将VP2蛋白主要抗原区的表位基因用柔性肽串联连接,将其克隆到表达载体pET-30a(+)中进行原核表达,并对诱导条件进行优化。利用Ni-NTA His-Bind纯化系... 详细信息

为探究水貂阿留申病毒(ADV)VP2主要抗原表位在水貂阿留申病血清学诊断中的作用,本试验将VP2蛋白主要抗原区的表位基因用柔性肽串联连接,将其克隆到表达载体pET-30a(+)中进行原核表达,并对诱导条件进行优化。利用Ni-NTA His-Bind纯化系统对融合蛋白进行纯化,经SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物,并将融合蛋白作为检测抗原进行CIEP试验。结果显示,融合蛋白在IPTG终浓度为1mmol/L、37℃诱导表达4h,蛋白表达量最高,其大小约为30000,以可溶性表达形式为主;融合蛋白能与6×His单克隆抗体及ADV多克隆抗体发生特异性反应,说明该蛋白具有较好的反应原性;且该蛋白作为对流免疫电泳技术(CIEP)检测抗原与ADV阳性血清之间产生了明显的沉淀线,证实了该蛋白作为CIEP检测抗原的可能性。以纯化后的重组蛋白为抗原初步建立的间接ELISA方法具有较高的准确性。结果表明该蛋白具有良好的血清学检测价值,为水貂阿留申病血清学诊断方法的建立奠定了基础。

关键词：阿留申病毒 VP2蛋白表位基因原核表达 CIEP ELISA

猪繁殖与呼吸综合征病毒高致病性毒株HN07-1反向遗传操作平台的构建

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农业生物技术学报 2021年第10期29卷 2043-2050页

作者：陈鑫鑫王林建乔松林李睿邓瑞广张改平河南省农业科学院动物免疫学重点实验室河南农业大学

猪繁殖与呼吸综合征是世界规模化猪场的主要疫病之一,主要由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)引起。本研究旨在构建PRRSV高致病性毒株HN07-1反向操作系统。通过将基因组进行分段克... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征是世界规模化猪场的主要疫病之一,主要由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)引起。本研究旨在构建PRRSV高致病性毒株HN07-1反向操作系统。通过将基因组进行分段克隆和测序的方法获得HN07-1毒株全长基因组序列。运用反向遗传学技术将全基因组分段克隆至载体上,构建含有全长HN07-1毒株cDNA的感染性克隆pcDNA3.2-rHN07-1,并以此为骨架,构建在PRRSV基因组ORF1b和ORF2a间插入增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, EGFP)的重组克隆pcDNA3.2-rHN07-1-EGFP;将构建的质粒转染Marc-145细胞拯救病毒。采用免疫荧光实验(immune fluorescence assay, IFA)和Western blot进行表达鉴定并对重组病毒进行滴度测定与分析。结果表明,PRRSV毒株HN07-1基因组全长15 345 nt,转染Marc-145细胞盲传一代后培养48 h出现典型的细胞病变效应,IFA和Western blot检测结果表明,拯救病毒与亲本毒株HN07-1一致,都能检测到PRRSV N蛋白表达。并且拯救病毒与亲本毒株具有相似的生长动力特性。综上所述,本研究成功构建了HN07-1感染性克隆,可用于反向遗传操作,为PRRSV致病机制研究及疫苗研发提供了参考。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) HN07-1 感染性克隆反向遗传技术病毒拯救