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鸡减蛋综合征病毒中和性单克隆抗体的制备、鉴定及在双抗体夹心ELISA中的应用

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河南农业科学 2024年第2期53卷 128-135页

作者：魏蔷李青梅金前跃宋亚鹏白怡霖张改平河南省农业科学院动物免疫学重点实验室/河南省动物免疫学重点实验室/农业部动物免疫学重点实验室河南郑州450002 河南农业大学牧医工程学院河南郑州450002 郑州大学农学院河南郑州450001

为了制备针对鸡减蛋综合征病毒(EDSV)的中和性单克隆抗体,首先纯化得到重组EDSV纤维蛋白,经血凝试验(HA)鉴定纤维蛋白的血凝活性,HA效价为1∶2~7。之后将纤维蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,免疫4次后,小鼠血清的间接酶联免疫吸附试验(iE... 详细信息

为了制备针对鸡减蛋综合征病毒(EDSV)的中和性单克隆抗体,首先纯化得到重组EDSV纤维蛋白,经血凝试验(HA)鉴定纤维蛋白的血凝活性,HA效价为1∶2~7。之后将纤维蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,免疫4次后,小鼠血清的间接酶联免疫吸附试验(iELISA)效价最高达到1∶409 600,间接免疫荧光试验(IFA)效价最高达到1∶12 800。取效价最高免疫小鼠脾细胞进行细胞融合制备杂交瘤细胞,结合iELISA和IFA检测,经过多轮亚克隆,最终成功获得了2株稳定分泌中和性单克隆抗体的杂交瘤细胞株9G12和10E11。iELISA结果显示,单克隆抗体9G12和10E11的腹水效价分别为1∶128 000和1∶1 020 000;IFA效价分别为1∶2 000和1∶8 000。Western blot检测结果显示,单克隆抗体9G12和10E11均不能识别变性的EDSV纤维蛋白,表明二者识别纤维蛋白的构象型表位。病毒中和试验结果表明,单克隆抗体9G12和10E11均具有中和活性,中和效价分别为1∶2~7和1∶2~4。亚型鉴定表明,这2种单克隆抗体的轻链均为Kappa型,重链均为IgG1亚型。将基于单克隆抗体9G12和10E11建立的双抗体夹心ELISA方法应用于临床检测EDSV抗原,与荧光定量PCR检测结果的符合率为91.7%。综上,成功筛选出9G12和10E11杂交瘤细胞株,二者分泌抗EDSV特异性抗体,且这2种抗体具有中和EDSV感染活性,可应用于EDSV的临床检测。

关键词：减蛋综合征病毒纤维蛋白中和性单克隆抗体抗体中和效价双抗体夹心ELISA

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猪细小病毒病研究进展

动物医学进展 2024年第3期45卷 107-110页

作者：刘运超陈玉梅杨苏珍魏蔷郝慧芳柴书军河南省农业科学院动物免疫学重点实验室河南郑州450002

猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)是一种无囊膜DNA病毒,主要引起母猪繁殖障碍。该病毒在全世界广泛流行,我国猪场PPV感染率高达90%以上,给养猪业带来巨大经济损失。PPV经口、鼻传播,主要侵染猪的生殖器官,引起母猪的死胎、木乃伊胎... 详细信息

猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)是一种无囊膜DNA病毒,主要引起母猪繁殖障碍。该病毒在全世界广泛流行,我国猪场PPV感染率高达90%以上,给养猪业带来巨大经济损失。PPV经口、鼻传播,主要侵染猪的生殖器官,引起母猪的死胎、木乃伊胎和公猪的精液质量下降。临床采用接种疫苗的方式进行防控,起到了一定的效果。论文对病毒的基因组和蛋白特征、流行病学和疫苗研究进行综述,以期为PPV的基础研究和疫苗开发提供参考。

关键词：猪细小病毒 VLP组装病毒抗原表位 VP2蛋白

抗球虫药的人工抗原合成及免疫分析方法研究进展

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食品与发酵工业 2024年第4期50卷 347-355页

作者：吴佳蓓田恒旗胡骁飞孙亚宁邢云瑞王琳王成宾王耀河南科技大学食品与生物工程学院河南洛阳471003 河南省农业科学院动物免疫学重点实验室河南郑州450002

抗球虫药在畜禽业应用广泛,但不合理使用会导致其在动物性食品中残留超标,对人类健康造成威胁。近年来,食品安全监督抽检中抗球虫药残留超标时有发生,因此,实现动物性食品中抗球虫药残留的高效快速检测,有利于兽药残留的有效监管。在众... 详细信息

抗球虫药在畜禽业应用广泛,但不合理使用会导致其在动物性食品中残留超标,对人类健康造成威胁。近年来,食品安全监督抽检中抗球虫药残留超标时有发生,因此,实现动物性食品中抗球虫药残留的高效快速检测,有利于兽药残留的有效监管。在众多残留检测方法中,免疫分析方法具有灵敏度高、特异性强,操作简单等优点,适用于大批量样品的现场快速检测。该文综述了抗球虫药人工抗原的合成方法,并对其免疫分析方法进行归纳总结,以期为开发更高效的抗球虫药残留分析方法提供参考。

关键词：抗球虫药人工抗原免疫分析研究进展

夏季北黄海贝类养殖区环境因子、长牡蛎糖原和免疫指标变化的调查

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水产学报 2024年第4期48卷 167-178页

作者：高磊孔宁刘冉阳赵俊彦邢镇张子杨赵宝李庆嵩付强王文彪李磊王玲玲宋林生大连海洋大学辽宁省海洋动物免疫学与疫病防控重点实验室辽宁省海洋动物免疫学重点实验室大连玉洋集团股份有限公司

为解析夏季环境胁迫和长牡蛎机体响应特征，实验针对2021年北黄海夏季高温降雨期的长牡蛎养殖海区开展了2次调查研究和对比分析。结果显示，7月海区表层水温分别为25.3和24.9°C，盐度分别为26.41和27.87；表层海水中硅藻丰度分别为3.6... 详细信息

为解析夏季环境胁迫和长牡蛎机体响应特征，实验针对2021年北黄海夏季高温降雨期的长牡蛎养殖海区开展了2次调查研究和对比分析。结果显示，7月海区表层水温分别为25.3和24.9°C，盐度分别为26.41和27.87；表层海水中硅藻丰度分别为3.6×10～3和3×10～3个/L，低于往年平均水平，甲藻多样性增加，表层海水中细菌的总丰度分别为2.10×10～9和2.77×1010个/L，弧菌丰度分别为3.37×10～8和5.40×10～8个/L；长牡蛎肝胰腺糖原含量分别为40.96和31.58 mg/g、闭壳肌糖原含量分别为6.63和8.91 mg/g；鳃丙二醛（MDA）含量分别为13.74和8.69 nmol/mg prot、鳃总抗氧化能力（T-AOC）分别为0.46和0.77 U/mg prot；海区养殖长牡蛎血淋巴细胞中Cg IL17-5和Cg TNF-1的mRNA表达量在第一次调查时相对室内暂养长牡蛎均剧烈升高；血淋巴细胞中Cg Caspase3的mRNA表达量升高但差异不显著。研究表明，2021年北黄海贝类养殖区在经历6—7月夏季高温降雨期后出现水温升高和盐度降低现象，硅藻丰度较往年平均水平下降而甲藻多样性增加，细菌总丰度较入夏前水平降低而弧菌丰度显著升高。与室内暂养对照组长牡蛎相比，海区养殖长牡蛎的糖原含量下降，并发生轻度氧化应激。研究结果有助于进一步理解夏季养殖环境的变化规律和长牡蛎机体响应特征，为预防夏季大规模死亡发生提供理论依据和参考。

关键词：长牡蛎高温降雨糖原免疫北黄海

猪繁殖与呼吸综合征病毒入侵宿主细胞途径研究进展

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中国兽医杂志 2024年第3期60卷 80-83页

作者：李睿乔松林张改平河南省农业科学院动物疫病防控研究所(河南省农业科学院动物免疫学重点实验室) 河南郑州450002

病毒入侵宿主细胞是其完成自身复制周期的首要步骤。全面解析病毒入侵宿主细胞途径可深入揭示病毒感染及其致病机制,有助于制定更为有效的抗病毒策略。猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是具有囊膜的单股正链RNA病毒,对全球养猪业造成巨大... 详细信息

病毒入侵宿主细胞是其完成自身复制周期的首要步骤。全面解析病毒入侵宿主细胞途径可深入揭示病毒感染及其致病机制,有助于制定更为有效的抗病毒策略。猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是具有囊膜的单股正链RNA病毒,对全球养猪业造成巨大的经济损失。以往研究报道PRRSV主要通过网格蛋白介导的内吞途径(CME)入侵宿主细胞。近年来研究发现,除CME外,PRRSV还会采取其他途径入侵宿主细胞。本文通过总结PRRSV入侵宿主细胞途径的最新研究进展,以期加深人们对PRRSV的认识,并为防控该病毒提供新的思路。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 入侵内吞巨胞饮膜融合

减蛋综合征病毒抗体胶体金免疫层析试纸条的研制及初步应用

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河南农业科学 2024年第1期53卷 125-132页

作者：宋亚鹏孙亚宁刘琳杨继飞李新生魏蔷张改平河南农业大学动物医学院河南郑州450046 河南省农业科学院动物免疫学重点实验室河南郑州450002

为建立快速检测减蛋综合征病毒(EDSV)抗体的方法,基于EDSV的Fiber蛋白,制备快速检测EDSV抗体的免疫层析试纸条,为养禽业提供针对病原微生物的感染预警及免疫评估。利用胶体金标记EDSV Fiber蛋白抗原为探针,将羊抗鸡IgG和抗Fiber蛋白的... 详细信息

为建立快速检测减蛋综合征病毒(EDSV)抗体的方法,基于EDSV的Fiber蛋白,制备快速检测EDSV抗体的免疫层析试纸条,为养禽业提供针对病原微生物的感染预警及免疫评估。利用胶体金标记EDSV Fiber蛋白抗原为探针,将羊抗鸡IgG和抗Fiber蛋白的抗体包被到硝酸纤维膜上,分别作为质控线和检测线,对家禽EDSV抗体水平进行监测。结果表明,制备的EDSV免疫层析试纸条具有高度特异性,与其他家禽病毒抗体无交叉反应,仅与EDSV抗体反应,在试纸条上产生可见的检测线;并且制备的试纸条具有高度稳定性,在室温条件下可至少保存6个月。应用制备的检测EDSV抗体的免疫层析试纸条对从河南、安徽、山东等地养鸡场采集的576份鸡血清样本检测,与血凝抑制试验(HI)结果进行平行比较,二者的Kappa值为0.878,具有良好一致性。综上,制备的检测ESDV抗体的免疫层析试纸条具有高度的特异性、敏感性、稳定性和易操作性,对EDSV抗体的临床检测具有实际应用价值。

关键词：减蛋综合征病毒 Fiber蛋白免疫层析试纸血凝抑制试验

高温胁迫下CgPOU3F4L调控长牡蛎血淋巴细胞凋亡的功能分析

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大连海洋大学学报 2024年

作者：李庆嵩高磊胡利叶佳钰王玲玲宋林生南方海洋科学与工程广东省实验室(珠海) 大连海洋大学辽宁省海洋动物免疫学与疫病防控重点实验室辽宁省海洋动物免疫学重点实验室

为解析长牡蛎（Crassostrea gigas）POU家族基因的组成、进化特征，以及在高温胁迫下参与调控长牡蛎血淋巴细胞凋亡的功能。结果表明：长牡蛎基因组中包含4个POU家族基因，分别为CgPOU2F1、CgPOU3F4、CgPOU3F4L和CgPOU4F3，其中CgPOU3F4... 详细信息

为解析长牡蛎（Crassostrea gigas）POU家族基因的组成、进化特征，以及在高温胁迫下参与调控长牡蛎血淋巴细胞凋亡的功能。结果表明：长牡蛎基因组中包含4个POU家族基因，分别为CgPOU2F1、CgPOU3F4、CgPOU3F4L和CgPOU4F3，其中CgPOU3F4L具有一段特有的氨基酸序列，其所涉及的功能分化特征还不清楚；CgPOU3F4L基因在外套膜、闭壳肌和血淋巴细胞中的mRNA表达水平显著高于肝胰腺（P<0.05），分别为肝胰腺中表达水平的91.32倍、19.24倍和7.92倍，其mRNA表达水平在28℃高温胁迫后12、24和36 h时与对照组（15℃）相比显著升高（P<0.05），分别是对照组的2.63倍、3.05倍和3.62倍；在凋亡相关基因CgBcl-2的启动子区的1197-1207区间和CgCaspase3的启动子区的1286-1297区间处发现了POU转录结合位点；利用RNAi技术抑制CgPOU3F4L基因表达，在高温胁迫24 h后CgPOU3F4L-RNAi组血淋巴细胞中CgBcl-2的mRNA表达水平显著上升（P<0.001），是对照组的7.49倍，CgCaspase3的mRNA表达水平显著下降（P<0.05），是对照组的0.57倍，且血淋巴细胞的凋亡率（16.53%）极显著低于对照组（45.90%）（P<0.001）。研究表明，长牡蛎CgPOU3F4L通过调控CgBcl-2和CgCaspase3的mRNA表达参与调节高温胁迫下血淋巴细胞凋亡过程，本研究结果为进一步解析牡蛎POU家族基因的进化特征及环境胁迫响应的机制提供了参考依据。

关键词：长牡蛎 POU3F4L 转录调控细胞凋亡高温胁迫

免疫层析技术在食物过敏原快速检测中的应用进展

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食品与发酵工业 2024年第1期50卷 311-317页

作者：郭开通胡骁飞孙亚宁邢云瑞王成宾吴佳蓓王琳宋乾召杨海涛王耀河南科技大学食品与生物工程学院河南洛阳471003 河南省农业科学院动物免疫学重点实验室河南郑州450002 河南宜测科技有限公司河南郑州451162

食物过敏是重要的公共卫生问题之一,严重威胁着过敏人群的健康,为保障过敏人群食品安全,针对食物过敏原开展检测方法研究尤为必要。近年来,针对食物过敏原的快速检测技术发展迅速,其中,免疫层析技术因其具有检测效率高、成本低、特异性... 详细信息

食物过敏是重要的公共卫生问题之一,严重威胁着过敏人群的健康,为保障过敏人群食品安全,针对食物过敏原开展检测方法研究尤为必要。近年来,针对食物过敏原的快速检测技术发展迅速,其中,免疫层析技术因其具有检测效率高、成本低、特异性强等优点,在快速检测中得到广泛应用。该文简述了主要食物过敏原及免疫层析技术的检测原理,对食物中植物源性食物过敏原(花生、大豆、小麦和树生坚果过敏原)和动物源性食物过敏原(牛奶、鸡蛋、甲壳类和鱼类过敏原)的免疫层析检测方法进行系统总结,并对其发展方向进行展望。

关键词：食物过敏过敏原免疫层析快速检测纳米颗粒

基于化学发光酶免疫分析法检测花生过敏原Ara h 2

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食品与发酵工业 2024年

作者：王耀郭开通王成宾宋乾召李才云葛梦鋆蔡文锦孙亚宁邢云瑞胡骁飞河南科技大学食品与生物工程学院河南省食品绿色加工与质量安全控制国际联合实验室河南省农业科学院动物免疫学重点实验室

Ara h 2是花生主要过敏原之一，为开发食物中Ara h 2过敏原成分的快速检测方法，减少因误食导致花生过敏事件的发生，该研究采用鼠源单克隆抗体作为捕获抗体、兔源多克隆抗体作为检测抗体，通过棋盘法优化抗体工作浓度，建立了一种检测... 详细信息

Ara h 2是花生主要过敏原之一，为开发食物中Ara h 2过敏原成分的快速检测方法，减少因误食导致花生过敏事件的发生，该研究采用鼠源单克隆抗体作为捕获抗体、兔源多克隆抗体作为检测抗体，通过棋盘法优化抗体工作浓度，建立了一种检测花生过敏原Ara h 2的间接双抗夹心化学发光酶免疫分析法，并对该方法的灵敏度、准确度、精密度和特异性进行评价。该方法的检出限为1.085 ng/mL，线性范围为3.12～200 ng/mL，添加回收率为78.30%～94.39%，批内和批间变异系数均小于10%，且特异性良好，与其他常见食物过敏原无交叉反应。该方法与相同抗体所建立的间接双抗夹心酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）方法相比，在灵敏度上表现出一定优势。该研究开发的化学发光酶免疫分析法可对花生食品生产过程中和消费前的Ara h 2过敏原成分检测提供可靠的技术支持。

关键词：化学发光酶免疫分析花生过敏原 Ara h 2 检测