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金雀异黄素通过下调HDAC6减轻LPS诱导的大鼠背根神经节神经元炎性损伤

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中南大学学报（医学版） 2022年第6期47卷 707-716页

作者：周松林黄俊卿李科都帅刚杨彬郭中华河南省中医院疼痛科郑州450002 河南省中医院骨病一科郑州450002

目的:神经病理性疼痛(neuropathic pain,NP)是一种由躯体感觉神经病变或疾病引起的慢性疼痛,金雀异黄素(genistein,Gen)可能是治疗NP的潜在药物。因此,本研究旨在探讨Gen对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导大鼠背根神经节神经元(dors... 详细信息

目的:神经病理性疼痛(neuropathic pain,NP)是一种由躯体感觉神经病变或疾病引起的慢性疼痛,金雀异黄素(genistein,Gen)可能是治疗NP的潜在药物。因此,本研究旨在探讨Gen对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导大鼠背根神经节神经元(dorsal root ganglion neuron,DRGn)炎性损伤的作用及其可能的分子机制。方法:取出生1 d的幼年大鼠进行DRGn的分离和培养。取对数生长期的DRGn,分为8组:对照组、LPS组、Tubastatin A盐酸盐(tubastatin A hydrochloride,TSA)+LPS组、Gen1+LPS组、Gen2+LPS组、Gen2+TSA+LPS组、Gen2+pcDNA-组蛋白脱乙酰化酶6(histone deacetylase 6,HDAC6)+LPS组、Gen2+pcDNA3.1+LPS组。LPS组给予1μg/mL LPS处理24 h;TSA+LPS组、Gen1+LPS组、Gen2+LPS组给予5μmol/L TSA、5μmol/L Gen、10μmol/L Gen预处理0.5 h后加入1μg/mL LPS处理24 h;Gen2+TSA+LPS组给予10μmol/L Gen和5μmol/L TSA共同预处理0.5 h后加入1μg/mL LPS处理24 h;Gen2+pcDNA-HDAC6+LPS组、Gen2+pcDNA3.1+LPS组将100 nmol/L pcDNA-HDAC6、pcDNA3.1质粒分别转染至DRGn,转染24 h后,给予10μmol/L Gen预处理0.5 h,再加入1μg/mL LPS处理24 h。采用real-time RT-PCR检测DRGn中HDAC6 mRNA的表达水平,CCK-8法检测DRGn活力,流式细胞术检测DRGn凋亡情况,ELISA检测DRGn培养上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α水平;蛋白质印迹法检测DRGn中HDAC6、Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)、髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)、NF-κB p65的蛋白质表达水平。结果:与对照组相比,LPS组大鼠DRGn中HDAC6 mRNA和蛋白质的表达水平,TLR4和MyD88蛋白质表达水平均显著上调,p-NF-κB p65/NF-κB p65比值显著增加,DRGn活性显著降低且凋亡率显著升高,DRGn培养上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α水平均显著升高(均P<0.05)。与LPS组相比,TSA+LPS组、Gen1+LPS组、Gen2+LPS组和Gen2+TSA+LPS组大鼠DRGn中HDAC6 mRNA和蛋白质的表达水平,TLR4和MyD88蛋白质表达水平均显著下调,p-NF-κB p65/NF-κB p65比值显著降低,DRGn活性显著升高且凋亡率显著降低,DRGn培养上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α水平均显著降低(均P<0.05),且Gen2+TSA+LPS组上述变化最明显。与Gen2+LPS组相比,Gen2+pcDNA-HDAC6+LPS组大鼠DRGn中HDAC6 mRNA和蛋白质的表达水平,TLR4和MyD88蛋白质表达水平均显著上调,p-NF-κB p65/NF-κB p65比值显著增加,DRGn活性显著降低且凋亡率显著升高,DRGn培养上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α水平均显著升高(均P<0.05)。结论:Gen可减轻LPS诱导的大鼠DRGn炎性损伤,其作用机制可能与下调HDAC6的表达,进一步抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的激活有关。

关键词：金雀异黄素神经病理性疼痛背根神经节神经元组蛋白脱乙酰化酶6 脂多糖

督脉灸联合小剂量他达拉非治疗勃起功能障碍的疗效评价

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中华男科学杂志 2023年第1期29卷 83-87页

作者：张幸华李鹏超孙自学张正国杜俊鸽魏星星河南省中医院/河南中医药大学第二附属医院生殖医学科河南郑州450002 河南省中医院/河南中医药大学第二附属医院检验科河南郑州450002

目的:观察督脉灸联合小剂量他达拉非治疗勃起功能障碍(命门火衰型)患者的临床疗效。方法:将符合纳入标准的130例患者随机分为对照组65例(脱落3例,完成62例)、试验组65例(脱落2例,完成63例),对照组采用小剂量他达拉非片口服,5 mg/次,1次... 详细信息

目的:观察督脉灸联合小剂量他达拉非治疗勃起功能障碍(命门火衰型)患者的临床疗效。方法:将符合纳入标准的130例患者随机分为对照组65例(脱落3例,完成62例)、试验组65例(脱落2例,完成63例),对照组采用小剂量他达拉非片口服,5 mg/次,1次/d;试验组在对照组的基础上联合督脉灸,1次/周,2组疗程均为4周。观察两组患者治疗前后的临床疗效、勃起功能国际问卷-5(IIEF-5)评分、勃起质量量表(EQS)评分、勃起硬度(EHS)评分、中医证候积分、TSS患者评分及阴茎血管功能指标[阴茎海绵体动脉收缩期峰值流速(PSV)、舒张末期流速(EDV)、阻力指数(RI)]。结果:试验组总有效率(87.30%)高于对照组(66.13%,P中医证候积分、EDV较治疗前均降低(P<0.05),且试验组均优于对照组(P<0.05)。结论:督脉灸联合小剂量他达拉非治疗命门火衰型勃起功能障碍患者可以改善其勃起功能与临床症状,提高患者勃起硬度、勃起质量与其治疗满意度,且能改善其阴茎血管功能,提高阴茎血流速度,临床疗效确切,具有较好安全性。

关键词：勃起功能障碍督脉灸命门火衰型疗效评价

下调lncRNA NONRATT021972调控TLR4对糖脂毒性诱导的胰岛β细胞炎症反应

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医学研究生学报 2021年第11期34卷 1150-1157页

作者：郑翔宇付宗强张艳敏郭伟胜河南省中医院检验科郑州450000 河南省中医院肝胆外科郑州450000

目的关于lncRNA NONRATT021972在糖尿病中表达上调对胰岛β细胞影响的研究较少。文中旨在探讨下调lneRNA NONRAT021972调控Toll样受体4(TLR-4)对糖脂毒性诱导的胰岛β细胞炎症因子表达的影响。方法将胰岛β细胞NIT-1分成对照组(正常培... 详细信息

目的关于lncRNA NONRATT021972在糖尿病中表达上调对胰岛β细胞影响的研究较少。文中旨在探讨下调lneRNA NONRAT021972调控Toll样受体4(TLR-4)对糖脂毒性诱导的胰岛β细胞炎症因子表达的影响。方法将胰岛β细胞NIT-1分成对照组(正常培养的胰岛β细胞)、模型组(用25mmol/L葡萄糖、0.25mmol/L棕榈酸的细胞培养液处理)、sh-NC组(转染shRNA control,然后用25mmol/L葡萄糖、0.25mmol/L棕榈酸处理细胞)、sh-NONRATT021972组(转染sh-NON-RATT021972,然后用25mmol/L葡萄糖、0.25mmol/L棕榈酸处理细胞)。PCR方法检测NONRATTO21972.TLR4和TNF-α、IL-6、IL-1β mRNA表达;CCK8实验检测细胞增殖活性变化;流式细胞术检测细胞凋亡变化;Westernblot检测C-Caspase-3.C-Caspase-9、TLR4、TNF-α、IL-6、1L-1β蛋白表达。在胰岛β细胞中分别将NONRATT021972 shRNA、阴性对照载体和NON-RATT021972 shRNA.TLR4过表达载体共转染,用含有25mmol/L葡萄糖、0.25mmol/L棕榈酸的细胞培养液处理,分为sh-NON-RATT021972+NC组(共转染NONRATT021972 shRNA和空载体,高糖高脂诱导)和sh-NONRATT021972+TLR4组(共转染NONRATT021972 shRNA和TLR4过表达载体,高糖高脂诱导)。Westerm blot检测C-Caspase-3、C-Caspase-9、TLR4,TNF-α、IL-6、IL-1β蛋白表达。结果与对照组胰岛β细胞中NONRATTI021972表达水平(1.00±0.11)比较,模型组(2.47±0.12)明显升高(P<0.001);与sh-NC组NONRATT021972表达水平(2.45±0.23)比较,sh-NONRATT021972组(1.12±0.16)明显降低(P<0.001)。与对照组比较,模型组胰岛β细胞增殖活性降低,细胞凋亡率升高,细胞中C-Caspase-3、C-Caspase-9蛋白表达及TNF-α、IL-6、IL-1β mRNA和蛋白水平升高(P<0.05);与sh-NC组比较,sh-NONRATT021972组胰岛β细胞增殖活性升高,细胞凋亡率降低,细胞中C-Caspase-3.C-Caspase-9蛋白及TNF-α、IL-6、IL-1β mRNA和蛋白表达降低(P<0.05)。与sh-NONRATT021972+NC组比较,sh-NONRATT021972+TLR4组胰岛β细胞增殖活性降低(P<0.05),细胞凋亡率增加(P<0.05),细胞中C-Caspase-3、C-Caspase-9蛋白及TNF-α、IL-6、IL-1β mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论下调NONRATT021972通过降低TLR4的表达减少糖脂毒性诱导胰岛β细胞炎症因子表达和细胞凋亡,提高细胞增殖活性,为分子靶向治疗糖尿病提供了思路。

关键词：胰岛β细胞糖脂毒性 NONRATT021972 Toll样受体4 炎症

血清炎症因子对血流感染患者病原菌早期鉴别诊断价值研究

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中华医院感染学杂志 2018年第2期28卷 192-195页

作者：郭艳梅李永伟杨玉林牛小斌刘严严贺庆伟河南省中医院检验科河南郑州450002

目的分析血清炎症因子对血流感染患者病原菌早期鉴别诊断的指导价值,以期提升临床血流感染治疗的及时性和准确性。方法选择2015年2月-2016年2月医院收治疑似血流感染患者108例作为研究对象,采集患者静脉血行病原菌培养,同时于入组即刻... 详细信息

目的分析血清炎症因子对血流感染患者病原菌早期鉴别诊断的指导价值,以期提升临床血流感染治疗的及时性和准确性。方法选择2015年2月-2016年2月医院收治疑似血流感染患者108例作为研究对象,采集患者静脉血行病原菌培养,同时于入组即刻、入组后6h、24h、7d采集静脉血检测血清炎症因子降钙素原(PCT)、C-反应蛋白(CRP)、白介素-2(IL-2)、白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子(TNF-α)水平;根据病原菌检测结果,将患者分为感染组和非感染组,感染组患者根据病原菌种类分为细菌感染亚组、真菌感染亚组;比较感染组和非感染组患者及不同感染类型亚组患者间血清炎症因子水平差异。结果感染组和非感染组患者及不同感染类型患者间在年龄、性别、体质量、体质量指数(BMI)、原发疾病比较差异无统计学意义;感染组患者在入组即刻、入组后6h、24h后血清炎症因子指标均明显高于非感染组(P<0.05),且随着时间的推移,PCT、CRP在6h达到最高值,IL-2、IL-6、IL-8、TNF-α在入组后24h达到最高值,随后逐渐下降至正常水平,入组即刻、入组后6h、24h细菌感染患者的血清PCT、CRP、IL-2、IL-6、IL-8、TNF-α均明显高于真菌感染患者(P<0.05)。结论血清炎症因子能在一定程度上反应血流感染患者病原菌构成情况,应进一步对照临床病原菌谱,分析常见致病菌的不同炎症因子间的时效性、浓度水平相关性等,以期进一步提高血清炎症因子对血流感染的鉴别诊断价值。

关键词：血流感染血清炎症因子病原菌鉴别临床价值

人参皂苷Rg1通过miR-138-5p/SIRT1轴诱导骨髓间充质干细胞向髓核样细胞增殖分化

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中国现代应用药学 2022年第1期39卷 27-35页

作者：岳宗进刘汝银于露王新立冯仲锴李云朋河南省中医院脊柱科郑州450000

目的探讨人参皂苷Rg1诱导大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)向髓核样细胞(nucleus pulposus cells,NPCs)分化的机制。方法从成年SD大鼠中分离培养BMSCs。通过CCK-8法检测不同浓度人参皂苷Rg1(0,2.5,5,10,20μmol·L^(–1))对BMSCs生存活性的影响。将细胞分为空白组,5μmol·L^(–1)人参皂苷Rg1干预组和10μmol·L^(–1)人参皂苷Rg1干预组。培养48 h后通过流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blotting检测NPCs标志蛋白胶原蛋白2型(collagen type 2,COL2)、Aggrecan和配对盒基因(paired box gene 1,Pax1)的表达;将细胞分为空白组、人参皂苷Rg1干预组、人参皂苷Rg1干预+NC mimic组和人参皂苷Rg1干预+miR-138-5p mimic组;通过以上方法进行进一步检测miR-138-5p对人参皂苷Rg1诱导BMSCs分化的影响;双荧光素酶报告基因和RNA结合蛋白免疫沉淀法检测miR-138-5p和sirtuin-1(SIRT1)的靶向关系;转染pcDNA-SIRT1检测其对miR-138-5p诱导BMSCs分化的影响。结果2.5,5,10μmol·L^(–1)人参皂苷Rg1呈剂量依赖性增强BMSCs活力(P<0.05);与空白组比较,5μmol·L^(–1)和10μmol·L^(–1)人参皂苷Rg1干预组呈剂量依赖性抑制细胞凋亡(P<0.05),促进NPCs标志蛋白表达(P<0.05);与人参皂苷Rg1干预组相比,人参皂苷Rg1+miR-138-5p组BMSCs凋亡率增加(P<0.01),NPCs标志蛋白表达减少(P<0.01);此外,SIRT1是miR-138-5p的靶基因;与miR-138-5p mimic+pcDNA-3.1组相比,miR-138-5p mimic+pcDNA-SIRT1组细胞凋亡率降低(P<0.01),NPCs标志蛋白表达增加(P<0.01)。结论人参皂苷Rg1可通过调控miR-138-5p/SIRT1轴诱导BMSCs向NPCs增殖和分化。

关键词：骨髓间充质干细胞髓核样细胞 miR-138-5p SIRT1

当归甙调控FOXO1干预高血压模型大鼠的血管内皮功能障碍

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中国组织工程研究 2023年第23期27卷 3628-3634页

作者：张希倩谭高峰孙晓泽庞欣韩宇河南省中医院老年病科河南省郑州市450000 河南省中医院肾病科河南省郑州市450000 河南省中医院消化内科河南省郑州市450000

背景:当归甙可调控细胞氧化应激水平,但其在高血压诱导的内皮细胞氧化损伤中的作用尚不清楚。目的:探讨当归甙是否通过调控叉头框转录因子O1(Forkhead box O1,FOXO1)表达调控高血压诱导的血管内皮功能障碍。方法:(1)体内使用肾主动脉缩... 详细信息

背景:当归甙可调控细胞氧化应激水平,但其在高血压诱导的内皮细胞氧化损伤中的作用尚不清楚。目的:探讨当归甙是否通过调控叉头框转录因子O1(Forkhead box O1,FOXO1)表达调控高血压诱导的血管内皮功能障碍。方法:(1)体内使用肾主动脉缩窄法建立高血压大鼠模型,40只雄性SD大鼠随机分为4组:假手术组;高血压组;高血压+25 mg/kg当归甙组;高血压+50 mg/kg当归甙组。采用TUNEL染色检测大鼠胸主动脉内皮细胞凋亡情况。(2)体外利用50μmol/L H_(2)O_(2)刺激人脐静脉血管内皮细胞建立细胞氧化损伤模型,分为:对照组;H_(2)O_(2)组;H_(2)O_(2)+当归甙组(10,20,40μmol/L当归甙);H_(2)O_(2)+Vector(阴性对照载体)组;H_(2)O_(2)+pcDNA-FOXO1组;H_(2)O_(2)+当归甙(40μmol/L)+Scramble(阴性对照载体)组;H_(2)O_(2)+当归甙(40μmol/L)+si-FOXO1组。采用MTT和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡情况;采用ELISA检测血清和人脐静脉血管内皮细胞中血管紧张素Ⅱ、丙二醛和一氧化氮水平,以及胸主动脉组织和人脐静脉血管内皮细胞中血管细胞黏附分子1、细胞间黏附分子1和E-选择素水平;采用RT-qPCR和Western blot检测胸主动脉组织和人脐静脉血管内皮细胞中FOXO1 mRNA和蛋白表达。结果与结论:(1)在体内,与假手术组比较,高血压模型大鼠血压和细胞凋亡水平明显升高(P<0.05),FOXO1 mRNA和蛋白水平明显降低(P<0.05),血管紧张素Ⅱ、丙二醛、血管细胞黏附分子1、细胞间黏附分子1和E-选择素水平明显升高(P<0.05),一氧化氮水平明显降低(P<0.05)。当归甙以剂量依赖方式改善高血压大鼠血管功能障碍。(2)在体外,与对照组比较,H_(2)O_(2)组细胞增殖、FOXO1表达水平、一氧化氮水平明显降低(P<0.05),细胞凋亡及丙二醛、血管细胞黏附分子1、细胞间黏附分子1和E-选择素水平明显升高(P<0.05)。当归甙或FOXO1过表达可改善H_(2)O_(2)诱导的人脐静脉血管内皮细胞功能障碍;FOXO1干扰可逆转当归甙的作用。(3)结论:当归甙通过促进FOXO1表达改善高血压大鼠血管内皮功能障碍。

关键词：当归甙 FOXO1 高血压氧化应激内皮细胞功能障碍

加味桃仁承气汤对机械通气相关性肺损伤大鼠细胞自噬的影响

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天津医药 2023年第12期51卷 1349-1355页

作者：孙治霞王丽辉索红亮陈乾河南省中医院重症医学科 450002 河南省中医院心病科 450002

目的探究加味桃仁承气汤通过腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路对机械通气相关性肺损伤(VILI)大鼠细胞自噬的影响。方法将60只SPF级雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、加味桃仁承... 详细信息

目的探究加味桃仁承气汤通过腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路对机械通气相关性肺损伤(VILI)大鼠细胞自噬的影响。方法将60只SPF级雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、加味桃仁承气汤低剂量组(中药-L组,2.85 g/kg)、加味桃仁承气汤高剂量组(中药-H组,8.55 g/kg)和加味桃仁承气汤高剂量+AMPK抑制剂Compound C组(中药-H+CC组,加味桃仁承气汤8.55 g/kg+Compound C 250μg/kg),每组12只。于插管即刻和机械通气1 h、2 h与4 h时测定氧合指数(OI)。机械通气结束后收集肺泡灌洗液(BALF),酶联免疫吸附试验(ELISA)检测BALF中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-18水平;处死大鼠,取肺组织测定湿/干重(W/D)比值;HE染色观察各组大鼠肺组织病理学改变并进行肺损伤评分;透射电镜观察肺泡上皮细胞形态。RT-qPCR检测大鼠肺组织中的AMPK、mTORC1 mRNA表达水平;Western blot检测大鼠肺组织中AMPK、p-AMPK、mTORC1、p-mTORC1和自噬相关蛋白的表达情况。结果与Sham组相比,Model组大鼠肺组织病理损伤严重,肺W/D、BALF中TNF-α、IL-1β和IL-18水平、肺损伤评分、mTORC1 mRNA表达水平、pmTORC1蛋白表达升高(P<0.05);机械通气2 h、4 h时OI,肺组织AMPK mRNA表达水平,p-AMPK、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1蛋白表达降低(P<0.05)。与Model组相比,中药-H组大鼠肺组织病理损伤减轻,相关指标的变化趋势与上述相反(P<0.05),肺泡上皮细胞自噬小体增多。Compound C减弱了加味桃仁承气汤对VILI大鼠的保护作用(P<0.05)。结论加味桃仁承气汤可能通过激活AMPK/mTOR信号通路促进细胞自噬,减轻大鼠VILI。

关键词：呼吸机相关性肺损伤桃核承气汤自噬 AMP活化蛋白激酶类 TOR丝氨酸-苏氨酸激酶

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泌尿生殖道支原体属感染特点及耐药性分析

中国感染与化疗杂志 2014年第1期14卷 18-21页

作者：张正国贺庆伟胡玥河南省中医院检验科郑州450002

目的探讨泌尿生殖道支原体属感染状况及对抗菌药物的耐药情况，指导临床合理用药。方法采用支原体培养药敏试验试剂盒，对临床收集的1852例泌尿生殖道感染患者标本进行支原体属培养及10种抗菌药物的体外药敏试验。结果在1852例受检患者... 详细信息

目的探讨泌尿生殖道支原体属感染状况及对抗菌药物的耐药情况，指导临床合理用药。方法采用支原体培养药敏试验试剂盒，对临床收集的1852例泌尿生殖道感染患者标本进行支原体属培养及10种抗菌药物的体外药敏试验。结果在1852例受检患者标本中检出支原体阳性782例，总阳性率为42．2％。其中解脲脲原体（Uu）单一感染617例，占78．9％；人型支原体（Mh）单一感染28例，占3．6％；Uu和Mh混合感染137例，占17．5％。21～30岁年龄段患者支原体培养阳性率为42．9％，明显高于其他年龄段。药敏试验结果显示，Uu阳性者对交沙霉素、多西环素、米诺环素、克拉霉素较敏感，敏感率分别为95．7％、92．9％、92．8％和91．6％，而耐药率在70．0％以上的有大观霉素、阿奇霉素、环丙沙星、罗红霉素。结论治疗泌尿生殖道支原体属感染应首选交沙霉素和多西环素等敏感性高的药物，避免使用大观霉素、阿奇霉素等耐药性高的药物。临床上对疑似泌尿生殖道感染的患者进行支原体属的培养和药敏试验，对支原体属感染的抗菌治疗有重要的临床意义。

关键词：泌尿生殖道支原体药敏试验耐药性

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系统性红斑狼疮合并新型隐球菌性脑膜炎1例

中国感染与化疗杂志 2018年第3期18卷 325-327页

作者：胡玥张小倩李永伟河南省中医院检验科微生物室郑州450002

系统性红斑狼疮（systemiclupuserythematosus,SLE）是一种不明原因的,以产生多种自身抗体和多系统靶器官损害为特点的自身免疫性疾病.而新型隐球菌性脑膜炎则是由新型隐球菌引起的一种中枢神经系统的感染性疾病,好发于细胞免疫功能低下... 详细信息

系统性红斑狼疮（systemiclupuserythematosus,SLE）是一种不明原因的,以产生多种自身抗体和多系统靶器官损害为特点的自身免疫性疾病.而新型隐球菌性脑膜炎则是由新型隐球菌引起的一种中枢神经系统的感染性疾病,好发于细胞免疫功能低下者,如SLE、AIDS、糖尿病、恶性肿瘤、器官移植及大量使用糖皮质激素者.其临床表现与脑脓肿、脑肿瘤或结核性脑膜炎相似,但该病的治疗周期长,病死率高,临床上容易出现误诊而耽误病情.为了让临床医师提高对本病的认识和诊治水平,现将我们诊治的1例SLE合并隐球菌性脑膜炎病例报道如下.

关键词：系统性红斑狼疮新型隐球菌新型隐球菌性脑膜炎