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基于OPG/RANKL/RANK信号通路探讨桂枝芍药知母汤对胶原诱导性关节炎大鼠的影响

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北京中医药大学学报 2024年第1期47卷 70-80页

作者：杨双庆马俊福孟庆良丁明辉刘亚伟张苏丹王妍琦李锦锦李玉洁冼锦忠河南中医药大学骨伤学院郑州450046 河南省中医院西安市第五医院

目的基于护骨因子(OPG)/NF-κB受体激活蛋白配体(RANKL)/NF-κB受体激活蛋白(RANK)信号通路探究桂枝芍药知母汤对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠骨破坏与骨保护相关因子的影响。方法60只雌性Wistar大鼠按照体质量随机分为6组,正常组、模型... 详细信息

目的基于护骨因子(OPG)/NF-κB受体激活蛋白配体(RANKL)/NF-κB受体激活蛋白(RANK)信号通路探究桂枝芍药知母汤对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠骨破坏与骨保护相关因子的影响。方法60只雌性Wistar大鼠按照体质量随机分为6组,正常组、模型组、雷公藤多苷组(0.01 g/kg)、桂枝芍药知母汤低剂量组(8.6 g/kg)、桂枝芍药知母汤中剂量组(17.2 g/kg)、桂枝芍药知母汤高剂量组(34.4 g/kg),每组10只。除正常组外,其他大鼠第1、8天使用牛Ⅱ型胶原蛋白(100μg)复制CIA模型,在大鼠左足足底和尾根部位注射。造模成功后灌胃给药4周。监测大鼠一般状态、体质量及关节炎指数(AI)评分,酶联免疫吸附测定法检测大鼠血清中RANKL、OPG的含量,实时荧光PCR法与蛋白质印迹法分别测定踝关节中RANKL、RANK、OPG mRNA与蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组一般状态欠佳,足趾肿胀明显,AI评分升高,血清RANKL含量升高、OPG含量降低,踝关节RANKL、RANK mRNA与蛋白表达均升高(均P<0.05)。与模型组比较,桂枝芍药知母汤各剂量组大鼠足趾肿胀程度与AI评分下降,血清RANKL含量降低、OPG含量升高,踝关节中RANKL、RANK mRNA与蛋白表达均降低,OPG mRNA与蛋白表达均升高,踝关节RANKL/OPG值降低(均P<0.05)。结论桂枝芍药知母汤能够改善CIA模型大鼠关节的骨破坏情况,其作用机制可能与降低RANKL水平、降低RANKL/OPG值、调控骨平衡有关。

关键词：桂枝芍药知母汤护骨因子/NF-κB受体激活蛋白配体/NF-κB受体激活蛋白信号通路胶原诱导性关节炎骨代谢骨平衡大鼠

孟庆良治疗长期应用免疫抑制剂继发性闭经经验

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辽宁中医杂志 2024年

作者：陈宇华王一晨孟庆良河南中医药大学骨伤学院河南省中医院

孟庆良教授以肾虚毒蕴为主要病机，按“血枯”“月水不来”的理论来辨证论治长期应用免疫抑制剂导致的继发性闭经，并将其分为脾肾阳虚、气血亏虚、肝郁血瘀及痰湿阻络四个证型。在临床中，孟庆良教授通过辨证与辨病相结合，以四二五合... 详细信息

孟庆良教授以肾虚毒蕴为主要病机，按“血枯”“月水不来”的理论来辨证论治长期应用免疫抑制剂导致的继发性闭经，并将其分为脾肾阳虚、气血亏虚、肝郁血瘀及痰湿阻络四个证型。在临床中，孟庆良教授通过辨证与辨病相结合，以四二五合方为基础，灵活加减用药，调整月经周期，并取得了显著疗效。现将孟庆良教授运用四二五合方治疗长期应用免疫抑制剂导致继发性闭经的经验加以总结，以期为临床开辟新思路，提供新方法。

关键词：女性免疫抑制剂闭经血枯四二五合方孟庆良

独活寄生汤抑制NLRP3炎性小体活化治疗痛风性关节炎

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中国组织工程研究 2024年第32期28卷 5182-5189页

作者：陶广义王政臻黄家俊吴迪友王鑫伟杨顺杨彬黄俊卿河南中医药大学骨伤学院河南省郑州市450046 河南省中医院/河南中医药大学第二附属医院河南省郑州市450000

背景:研究发现NLRP3炎症小体的激活是痛风性关节炎发病的重要因素,通过调控PTEN诱导激酶1(PTEN-induced kinas 1,PINK1)/Parkin信号通路能有效抑制NLPR3炎性小体的活化。目的:探究独活寄生汤对PINK1/Parkin/NLRP3信号通路的影响。方法:... 详细信息

背景:研究发现NLRP3炎症小体的激活是痛风性关节炎发病的重要因素,通过调控PTEN诱导激酶1(PTEN-induced kinas 1,PINK1)/Parkin信号通路能有效抑制NLPR3炎性小体的活化。目的:探究独活寄生汤对PINK1/Parkin/NLRP3信号通路的影响。方法:①动物实验:将雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、阳性对照组(秋水仙片0.3 mg/kg)和独活寄生汤低、中、高剂量组(分别给予6.9,13.8,27.6 g/kg),除对照组外其余各组大鼠通过右后踝关节腔注射尿酸单钠盐晶体混悬液构建大鼠痛风性关节炎模型。②细胞实验:将人单核细胞(THP-1)分为空白对照组、模型组、独活寄生汤含药血清组、PINK1 siRNA+独活寄生汤含药血清组,除空白对照组外其余各组细胞采用尿酸钠刺激建立体外痛风性关节炎模型。③观察大鼠踝关节肿胀度、关节周径、步态评分、关节炎症指数和病理分级程度;酶联免疫吸附法检测尿酸、C-反应蛋白、NLRP3和白细胞介素1β水平;免疫印迹法检测PINK1/Parkin/NLRP3通路相关蛋白表达水平;四甲基偶氮唑蓝法检测细胞活性;免疫荧光双染检测线粒体自噬水平;免疫荧光检测NLRP3和白细胞介素1β表达。结果与结论:①与对照组比较,模型组大鼠在6-48 h的踝关节肿胀度、踝关节周径升高(P<0.05),在24和48 h时的步态评分与关节炎症指数升高(P<0.05),血清尿酸和C-反应蛋白水平、病理分级程度、滑膜组织中PINK1、Parkin和NLRP3蛋白表达及白细胞介素1β水平均升高(P<0.05);与模型组比较,独活寄生汤各剂量组大鼠上述指标中除PINK1和Parkin蛋白表达升高(P<0.05)外,其他指标均降低(P<0.05)。②与模型组比较,独活寄生汤含药血清组细胞NLRP3活性、白细胞介素1β水平和线粒体外膜转位蛋白20(TOM20)蛋白水平降低(P<0.05),而增殖抑制率、PINK1、Parkin和LC3B蛋白水平增加(P<0.05);细胞线粒体自噬水平升高(P<0.05),而NLRP3和白细胞介素1β蛋白水平降低(P<0.05)。③与独活寄生汤含药血清组相比,PINK1 siRNA+独活寄生汤含药血清组细胞线粒体自噬水平降低(P<0.05),NLRP3和白细胞介素1β表达水平升高(P<0.05)。④结果表明,独活寄生汤通过调控PINK1/Parkin信号通路抑制NLRP3炎性小体活化,进而对痛风性关节炎起到治疗作用。

关键词：独活寄生汤痛风性关节炎 PTEN诱导激酶1 Parkin NLRP3

骆驼蓬草的化学成分及抗类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞活性

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中药材 2024年 1975-1980页

作者：展俊平王慧莲黄硕谷慧敏孟庆良苗喜云周子朋河南省中医院/河南中医药大学第二附属医院河南中医药大学骨伤学院

目的:研究骆驼蓬草的化学成分及体外抗类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞活性。方法:采用硅胶、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶对骆驼蓬草提取物进行分离鉴定。通过MTT法测试化合物体外抗类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞活性。结果:从骆驼蓬草中分... 详细信息

目的:研究骆驼蓬草的化学成分及体外抗类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞活性。方法:采用硅胶、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶对骆驼蓬草提取物进行分离鉴定。通过MTT法测试化合物体外抗类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞活性。结果:从骆驼蓬草中分离得到21个化合物,分别鉴定为:刺芒柄花素(1)、异香草酸(2)、香草酸(3)、香草醛(4)、dihydroisoquinolone(5)、草夹竹桃苷(6)、schizandriside(7)、三裂鼠尾草素(8)、脱氢双没食子酸(9)、lysidicichin(10)、木香内酯(11)、去氢木香内酯(12)、puberulin(13)、4-甲氧基桂皮酸(14)、3,4-二甲氧基桂皮酸(15)、meridinol(16)、neroplomacrol(17)、isoshonanin(18)、fraxidin(19)、calanthoside(20)、digiferruginol(21)。化合物5、17、20对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞具有抑制作用。结论:以上化合物均为首次从该植物中分离鉴定,化合物5、17、20具有体外抗类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞活性。

关键词：骆驼蓬草化学成分分离鉴定类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞

人工智能在脊柱畸形领域研究热点的可视化分析

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中国组织工程研究 2024年第30期28卷 4915-4920页

作者：陶广义王琳梓杨彬黄俊卿河南中医药大学骨伤学院河南省郑州市450000 河南省中医院/河南中医药大学第二附属医院疼痛科河南省郑州市450000

背景:随着人工智能技术在治疗脊柱畸形领域的不断完善与进步,已有大量的研究投入到该领域当中,但主要研究现状、热点和发展趋势尚不明确。目的:采用文献计量学的方法可视化分析人工智能在脊柱畸形领域的相关文献,明确该领域的研究热点... 详细信息

背景:随着人工智能技术在治疗脊柱畸形领域的不断完善与进步,已有大量的研究投入到该领域当中,但主要研究现状、热点和发展趋势尚不明确。目的:采用文献计量学的方法可视化分析人工智能在脊柱畸形领域的相关文献,明确该领域的研究热点和不足,为今后研究工作研究提供参考。方法:在Web of Science核心集数据库检索建库至2023年收录的人工智能在脊柱畸形领域相关文献,通过Citespace 5.6.R5和VOSviewer 1.6.19软件对文献数据进行可视化分析。结果与结论:(1)共纳入文献165篇,此领域年发文量呈波动上升趋势,发文量最多的作者是Lafage V,发文量最多的国家是中国。(2)关键词分析结果显示,青少年早发性脊柱侧弯、深度学习、分类、精度和机器人是该研究领域的主要高频关键词。(3)文献共被引和高被引文献深度分析结果显示,人工智能在脊柱畸形领域有3大热点,包括利用U型架构(深度学习卷积神经网络的一种成熟模式)来自动测量影像学参数(Cobb角、棘旁肌准确分割等)、多视图相关网络架构(即脊柱曲度评估框架)及机器人引导脊柱手术。(4)在人工智能治疗脊柱畸形领域,基因组学等机制研究十分薄弱,未来可利用无监督分层聚类等机器学习技术,运用全基因组关联分析等基因组学研究方法,来进行脊柱畸形领域的易感基因等基础机制研究。

关键词：脊柱畸形人工智能卷积神经网络全基因组分析 Citespace VOSviewer 可视化文献计量学

基于NF-κB/NLRP3信号通路探讨益气通脉方干预ApoE-∕-小鼠肝脏炎症及脂质沉积的影响

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中国实验方剂学杂志 2024年第15期30卷 64-72页

作者：陈雨晗任权娜汪坤宿婷婷杨艳华马鸣张雨赵旭河南中医药大学药学院郑州450000 河南省中医院/河南中医药大学第二附属医院郑州450002

目的:探究益气通脉方(YQTM)通过调控核转录因子-κB(NF-κB)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路对载脂蛋白E-∕-敲除(Apo E-∕-)小鼠肝脏炎症的影响。方法:将40只Apo E-∕-小鼠随机分为模型组、阿托伐他汀组(阳性药组)、YQTM低、中、高剂量... 详细信息

目的:探究益气通脉方(YQTM)通过调控核转录因子-κB(NF-κB)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路对载脂蛋白E-∕-敲除(Apo E-∕-)小鼠肝脏炎症的影响。方法:将40只Apo E-∕-小鼠随机分为模型组、阿托伐他汀组(阳性药组)、YQTM低、中、高剂量组(0.39、0.78、1.56 g·kg^(-1))。各给药组在高脂饲料喂养基础上分别给予相应剂量药物灌胃,连续12周。8只C57BL/6J小鼠为空白组,普通饲料喂养。12周后,采用油红O(oil red O)染色、马松(Masson)染色法观察小鼠主动脉病变情况并判断是否造模成功;oil red O染色观察小鼠肝脏中脂肪沉积;苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠肝脏组织病变情况;Masson染色观察小鼠肝脏胶原蛋白纤维分布;酶标仪检测小鼠血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)的表达水平;肝脏中TC、TG水平;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠肝脏白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)的表达水平;免疫组化法(IHC)观察小鼠肝脏NF-κB、NLRP3的表达区域;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠肝脏中NF-κB、NF-κB抑制蛋白(IκB)、IκB激酶β(IKKβ)、磷酸化(p)-NF-κB、pIκB、p-IKKβ、NLRP3和胱天蛋白酶-1(Caspase-1)蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组小鼠主动脉脂质沉积严重,肝脏细胞内脂肪滴积大量聚集且细胞质内充满脂肪空泡(P<0.01),小鼠血清中TG、TC、LDL-C、AST和ALT水平均显著升高(P<0.01),肝脏中TG、TC水平升高(P<0.01);肝组织IL-1β和IL-18含量,肝脏NF-κB、IκB、IKKβ、p-NF-κB、p-IκB、p-IKKβ、NLRP3和Caspase-1蛋白表达水平均显著升高(P<0.01);与模型组比较,YQTM各剂量组小鼠主动脉斑块减轻,肝脏内脂肪聚集减少,炎症细胞浸润得到缓解(P<0.05,P<0.01)。小鼠血清中TG、TC、LDL-C、AST和ALT水平均明显降低(P<0.05,P<0.01);肝脏中TG、TC水平有所减少;肝组织 L^(-1)β、IL-18水平,肝脏NF-κB、IκB、IKKβ、p-NF-κB、p-IκB、p-IKKβ、NLRP3和Caspase-1蛋白表达水平均明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:YQTM对Apo E-∕-小鼠肝脏炎症的干预机制可能是与下调NF-κB/NLRP3信号通路有关。

关键词：益气通脉方动脉粥样硬化肝脏炎症核转录因子-κB(NF-κB)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路

基于PI3K/Akt/GPX4铁死亡信号通路探究补肾壮骨汤含药血清外泌体对H_(2)O_(2)处理成骨细胞增殖分化的影响

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中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志 2024年第3期17卷 230-239页

作者：张诚郭闯豪刘汝银岳宗进杨佳欣河南中医药大学骨伤学院郑州450046 河南省中医院(河南中医药大学第二附属医院)脊柱科郑州450002

目的探究补肾壮骨汤含药血清外泌体对过氧化氢(hydrogen peroxide,H_(2)O_(2))处理成骨细胞增殖分化的影响及作用机制。方法提取与鉴定补肾壮骨汤含药血清外泌体。体外培养MC3T3-E1细胞,将细胞分为对照组、H_(2)O_(2)组、补肾壮骨汤含... 详细信息

目的探究补肾壮骨汤含药血清外泌体对过氧化氢(hydrogen peroxide,H_(2)O_(2))处理成骨细胞增殖分化的影响及作用机制。方法提取与鉴定补肾壮骨汤含药血清外泌体。体外培养MC3T3-E1细胞,将细胞分为对照组、H_(2)O_(2)组、补肾壮骨汤含药血清外泌体组(50和100μg/mL)、LY294002+补肾壮骨汤含药血清外泌体(100μg/mL)组。细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK-8)法检测细胞存活率。5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(5-Ethynyl-2′-deoxyuridine,EDU)染色检测细胞增殖情况。免疫印迹检测磷脂酰肌醇3激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)与蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)的磷酸化水平和谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)蛋白表达。比色法检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平及碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性。二氢乙锭(dihydroethidium,DHE)染色检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。FerroOrange探针检测二价铁离子(ferrousion,Fe^(2+))水平。茜素红染色观察成骨细胞矿化。荧光定量逆转录聚合酶链反应(quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测破骨细胞抑制因子(osteoclastogenesis inhibitory factor,OCIF)、Ⅰ型胶原蛋白(collagen typeⅠ,COL1)和骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP2)mRNA表达。结果与对照组比较,H_(2)O_(2)组细胞存活率、增殖率、GSH水平、ALP活性、矿化结节形成及OCIF、COL1和BMP2 mRNA水平和磷酸化(phosphorylated,p)PI3K(p-PI3K)、p-Akt、GPX4蛋白表达显著降低(P<0.01),ROS、Fe^(2+)和MDA水平则显著升高(P<0.01)。与H_(2)O_(2)组比较,补肾壮骨汤含药血清外泌体组细胞存活率、增殖率、GSH水平、ALP活性、矿化结节形成及OCIF、COL1和BMP2 mRNA水平和p-PI3K、p-Akt、GPX4蛋白表达显著升高(P<0.01),ROS、Fe^(2+)和MDA水平显著降低(P<0.01)。Akt信号抑制剂LY294002减弱了补肾壮骨汤含药血清外泌体对H_(2)O_(2)处理MC3T3-E1细胞的保护作用。结论补肾壮骨汤含药血清外泌体通过激活PI3K/Akt/GPX4信号通路,减弱H_(2)O_(2)对细胞增殖和成骨分化的抑制作用。

关键词：补肾壮骨汤外泌体成骨细胞铁死亡细胞增殖成骨分化

CA9作为激素性股骨头坏死中软骨铁死亡特征基因的生物信息学鉴定

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中国组织工程研究 2024年第27期28卷 4293-4299页

作者：余鹏孟东方李慧英张向北河南中医药大学骨伤学院河南省郑州市450002 河南中医药大学第一附属医院骨伤科河南省郑州市450002

背景:激素性股骨头坏死中骨代谢的紊乱与铁死亡密切相关,同时激素性股骨头坏死的病理过程中伴随着软骨的损伤与退变。但关于铁死亡与软骨之间的关系和具体调控靶点尚不明确。目的:运用生物信息学和机器学习方法筛选靶向软骨的铁死亡特... 详细信息

背景:激素性股骨头坏死中骨代谢的紊乱与铁死亡密切相关,同时激素性股骨头坏死的病理过程中伴随着软骨的损伤与退变。但关于铁死亡与软骨之间的关系和具体调控靶点尚不明确。目的:运用生物信息学和机器学习方法筛选靶向软骨的铁死亡特征基因,探究铁死亡与软骨之间的关系,为研究和治疗激素性股骨头坏死提供新的思路与方法。方法:通过GEO数据库和FerrDb数据库下载相关疾病数据集和铁死亡相关基因,采用R语言对疾病数据集进行归一化处理和差异分析,筛选出铁死亡相关差异基因。对铁死亡相关差异基因进行GO功能富集分析和KEGG信号通路富集分析,同时根据铁死亡相关差异基因的PPI网络和机器学习方法筛选铁死亡特征基因。最后,将兔子分为正常组和模型组,正常组给予相同剂量的生理盐水模拟造模药物,模型组采用改良马血清联合注射用甲泼尼龙构建兔激素性股骨头坏死模型,造模成功后,验证不同组别间特征基因的表达,分析软骨中铁死亡的表型。结果与结论:①通过对数据集的归一化处理和差异分析,最终获得1315个差异表达基因,通过FerrDb数据库获取379个铁死亡相关基因。二者取交集后,最终获得19个铁死亡差异表达基因。②GO分析铁死亡相关差异基因主要涉及细胞迁移和细胞对氧化应激反应等生物过程;涉及激酶复合物、氨基酸复合体和细胞质膜等细胞组分;涉及激酶活性、受体活性和蛋白结合等分子功能。KEGG分析铁死亡相关差异基因主要在FoxO信号通路、血管内皮生长因子信号通路和FcγR介导的吞噬作用中富集。③通过PPI网络和机器学习筛选出铁死亡特征基因CA9。④特征基因的GSEA分析发现,CA9在脂肪酸代谢、O-GlcNAc糖基化修饰等生物过程中上调表达,而在神经活性配体受体相互作用方面被抑制。⑤RT-PCR和Western blot检测结果显示,与正常组对比,模型组中的ACSL4,CA9 mRNA和蛋白表达水平显著增高(P<0.05),SLC7A11和GPX4 mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05),与数据集中特征基因的表达水平吻合。结果表明,激素性股骨头坏死的软骨与铁死亡密切相关,靶向特征基因CA9可以为研究和治疗激素性股骨头坏死提供一定的思路与方向。

关键词：激素性股骨头坏死软骨铁死亡生物信息学特征基因生物标志物 CA9 ACSL4 SLC7A11 GPX4

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桡骨远端骨折临床治疗方法研究进展

世界中医药 2024年第12期19卷 1870-1874页

作者：王文庆曹玉净吕秋霞李东方李明李家乐钱亚男河南中医药大学骨伤学院郑州450000 河南省中医院郑州450003

桡骨远端骨折是临床常见的上肢骨折,老年患者居多,其治疗方法较多,主要分为保守治疗与手术治疗。保守治疗主要通过中医正骨手法复位和复位后联合小夹板、高分子石膏材料外固定。手术主要包括经皮克氏针内固定术、切开复位钢板内固定术... 详细信息

桡骨远端骨折是临床常见的上肢骨折,老年患者居多,其治疗方法较多,主要分为保守治疗与手术治疗。保守治疗主要通过中医正骨手法复位和复位后联合小夹板、高分子石膏材料外固定。手术主要包括经皮克氏针内固定术、切开复位钢板内固定术、外固定架固定术、腕关节镜技术、腕关节置换术、髓内钉固定术。以上治疗方法的适应证、操作难度、临床疗效各不相同,治疗其相适应类型的桡骨远端骨折可单独应用,也可以2种或多种方法联合治疗。随着数字骨科发展,3D打印技术也广泛应用于桡骨远端骨折治疗。

关键词：桡骨远端骨折上肢骨折保守治疗手术治疗手法复位手术方法适应证并发症