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数字PCR及其在现代医学分子诊断中的应用

中国生物化学与分子生物学报 2017年第9期33卷 861-866页

作者：胡思宏鲍登克万绍贵河南大学肿瘤标志物与液体活检实验室河南开封475000

数字PCR(digital PCR,d PCR)技术被认为是精确定量核酸分子的全新技术手段,因为具有较高的灵敏度和特异性等特点而得到迅速发展。数字PCR在临床上的多个领域展现出良好的应用前景,比如肿瘤液体活检、器官移植物损伤评估、无创产前筛查... 详细信息

数字PCR(digital PCR,d PCR)技术被认为是精确定量核酸分子的全新技术手段,因为具有较高的灵敏度和特异性等特点而得到迅速发展。数字PCR在临床上的多个领域展现出良好的应用前景,比如肿瘤液体活检、器官移植物损伤评估、无创产前筛查、病原微生物分子诊断以及二代测序文库质控和结果验证等。本文就数字PCR在上述领域中的应用研究及其进展进行综述。

关键词：数字PCR 液体活检器官移植无创产前筛查病原微生物分子诊断二代测序

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华蟾毒它灵通过线粒体途径引起肝癌细胞凋亡

中国病理生理杂志 2021年第4期37卷 646-653页

作者：潘越胡思宏王佳鑫李柯金张亚霖余诗佳刘红亮鲍登克杨虎山河南大学药学院肿瘤标志物与液体活检实验室河南开封475004 信阳职业技术学院河南信阳464000

目的:探讨华蟾毒它灵对肝癌细胞增殖的影响,并初步探讨其可能的分子机制。方法:采用MTT法和乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性检测法检测华蟾毒它灵对肝癌细胞株SNU-739存活和毒性的影响。通过细胞集落形成实验和EdU细胞增殖实验研究华蟾毒它灵对... 详细信息

目的:探讨华蟾毒它灵对肝癌细胞增殖的影响,并初步探讨其可能的分子机制。方法:采用MTT法和乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性检测法检测华蟾毒它灵对肝癌细胞株SNU-739存活和毒性的影响。通过细胞集落形成实验和EdU细胞增殖实验研究华蟾毒它灵对SNU-739细胞增殖的作用。利用DAPI染色、TUNEL染色和流式细胞术检测华蟾毒它灵对SNU-739细胞凋亡的影响。采用RT-qPCR和Western blot法检测细胞凋亡相关因子Bcl-2、Bax的水平及NF-κB p65活化的情况。通过JC-1荧光探针试剂盒和ATP检测试剂盒研究华蟾毒它灵对SNU-739细胞线粒体功能的影响。利用裸鼠体外成瘤实验研究华蟾毒它灵在体内对肝癌组织生长的影响。结果:MTT和LDH检测结果表明华蟾毒它灵可抑制肝癌细胞的活性(P实验和EdU细胞增殖实验结果表明华蟾毒它灵可显著抑制肝癌细胞增殖(P实验表明华蟾毒它灵能够明显抑制体内肝肿瘤组织的生长(P<0.05)。结论:华蟾毒它灵能抑制肝癌细胞的增殖,并通过线粒体途径促进肝癌细胞凋亡。

关键词：华蟾毒它灵肝细胞癌细胞增殖细胞凋亡线粒体

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线粒体功能异常与肿瘤

生理科学进展 2020年第4期51卷 283-288页

作者：李雨佳庞米米鲍登克河南大学药学院肿瘤标志物与液体活检实验室河南省人民医院开封475004

线粒体是一种存在于大多数细胞中的由两层膜包被的产能细胞器,是细胞进行有氧呼吸的主要场所,被称为“power house”。线粒体在细胞内的分布与细胞内的能量需求、活性氧(reactive oxygen species,ROS)的生成、细胞凋亡及钙稳态等过程密... 详细信息

线粒体是一种存在于大多数细胞中的由两层膜包被的产能细胞器,是细胞进行有氧呼吸的主要场所,被称为“power house”。线粒体在细胞内的分布与细胞内的能量需求、活性氧(reactive oxygen species,ROS)的生成、细胞凋亡及钙稳态等过程密切相关。越来越多的研究表明,线粒体功能异常参与调控多种生理病理过程,如:细胞存活与增殖,迁移与侵袭。同时,肿瘤细胞所表现出的无限增殖、代谢异常、凋亡抑制、强侵袭及易转移等恶性表型也与线粒体功能异常关系密切。本文将对线粒体功能异常与肿瘤的关系进行综述。

关键词：线粒体功能异常肿瘤

红细胞计数在子宫内膜样腺癌预后预测中的应用

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红细胞计数在子宫内膜样腺癌预后预测中的应用

2018年中国肿瘤标志物学术大会暨第十二届肿瘤标志物青年科学家论坛

作者：鲁蒙蒙郑娇娇万绍贵河南大学肿瘤标志物与液体活检实验室

目的研究分析红细胞(RBC)计数在子宫内膜样腺癌患者中预后预测的应用价值。方法回顾性分析349例子宫内膜样腺癌患者的临床资料,对RBC计数值可能影响子宫内膜样腺癌患者预后的风险进行统计分析。结果以ROC诊断曲线分析得出的RBC计数分界...

目的研究分析红细胞(RBC)计数在子宫内膜样腺癌患者中预后预测的应用价值。方法回顾性分析349例子宫内膜样腺癌患者的临床资料,对RBC计数值可能影响子宫内膜样腺癌患者预后的风险进行统计分析。结果以ROC诊断曲线分析得出的RBC计数分界值(4.04×1012/L)为分界点,将患者分为高水平RBC组(>4.04×1012/L)和低水平RBC组(≤4.04×1012/L)。其中高水平RBC患者193例,低水平的RBC 156例。单因素COX分析和多因素COX分析表明低水平RBC是子宫内膜样腺癌患者不良预后的独立危险因素。Kaplan–Meier生存分析表明低水平RBC的患者生存率显著低于高水平组(log-rank P=0.004)。进一步分析表明低水平RBC与年龄>53岁的患者(log-rank P=0.002),手术-病理分期I-II的患者(log-rank P=0.006),肌层浸润深度≤1/2的患者(log-rank P=0.025),淋巴结未转移患者(log-rank P=0.005),绝经患者(log-rank P=0.004)生存预后有显著的统计学意义。结论低水平RBC(≤4.04×1012/L)可能是子宫内膜样腺癌预后风险预测的一个潜在的新型标志物。

关键词：

组织特异性线粒体DNA突变体的检测方法的建立

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组织特异性线粒体DNA突变体的检测方法的建立

2017年中国肿瘤标志物学术大会暨第十一届肿瘤标志物青年科学家论坛

作者：胡思宏陈楠万绍贵河南大学肿瘤标志物与液体活检实验室

【研究目的】:有研究表明线粒体DNA(mt DNA)存在一定的组织器官特异性,比如mtDNA DLoop区域的60,72和94位点均存在肝肾组织特有的突变位点。同时,mtDNA D-Loop区是一个具有高度多态性和突变性的区域,尤其在肝癌中突变率较高。我们前期... 详细信息

【研究目的】:有研究表明线粒体DNA(mt DNA)存在一定的组织器官特异性,比如mtDNA DLoop区域的60,72和94位点均存在肝肾组织特有的突变位点。同时,mtDNA D-Loop区是一个具有高度多态性和突变性的区域,尤其在肝癌中突变率较高。我们前期研究表示mtDNA D-Loop区72和94位点在肝癌组织样本中突变频率显著高于癌旁组织。本研究旨在建立针对mtDNA D-Loop区的72和94位点突变体的各种检测方法,为进一步研究肝脏组织特有的突变位点在肝癌诊断与预后中的临床意义奠定基础。【研究方法】:1.针对mtDNA D-Loop区的72、94位点突变,本研究利用Taqman水解探针熔解曲线技术和荧光PCR仪,对样本进行初步检测;2.针对D-Loop区的94位点,利用数字PCR仪结合MGB探针法,对未检测出存在94突变的样本进行再检测;3.针对72位点突变,利用数字PCR仪结合evagreen染料法,对未检测出存在72突变的样本进行再检测。【研究结果】:建立的检测方法可以成功的检测出样本中存在的突变,其中:Taqman水解探针熔解曲线技术可以检测出突变频率为5%的72位点突变体,突变频率为5%的94位点突变体;MGB探针法可以检测出低至0.1%的94位点突变体;evagreen染料法也可以检测出低拷贝的72位点突变体。【研究结论】:本研究建立的方法可以对mt DNA D-Loop区72、94位点的突变进行准确的检出,具有操作简单、鉴定快速、成本经济、灵敏度高、通量高、适宜在临床中应用等特点。

关键词：线粒体DNA 稀有突变数字PCR MGB探针 Taqman水解探针

伊维菌素调节NF-κB/IL-6信号轴诱导食管鳞癌细胞凋亡的机制研究

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伊维菌素调节NF-κB/IL-6信号轴诱导食管鳞癌细胞凋亡的机制研究

2019年中国肿瘤标志物学术大会暨第十三届肿瘤标志物青年科学家论坛

作者：鲁蒙蒙许娜娜万绍贵河南大学肿瘤标志物与液体活检实验室

目的抗寄生虫药物伊维菌素的抗肿瘤作用多有报道,但是其在食管鳞癌中是否具有抗肿瘤作用未见研究报道。炎症相关信号通路NF-κB是食管鳞癌潜在的抗肿瘤药物靶点,本实验的目的是研究伊维菌素作为潜在的NF-κB抑制剂在食管鳞癌中的抗肿瘤...

目的抗寄生虫药物伊维菌素的抗肿瘤作用多有报道,但是其在食管鳞癌中是否具有抗肿瘤作用未见研究报道。炎症相关信号通路NF-κB是食管鳞癌潜在的抗肿瘤药物靶点,本实验的目的是研究伊维菌素作为潜在的NF-κB抑制剂在食管鳞癌中的抗肿瘤作用和机制。方法用0,5,10,15μmol/L伊维菌素分别作用于食管癌细胞系KYSE70、KYSE30,48h后,通过CCK8试验检测食管癌细胞的生存率

关键词：

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TLR9基因敲除小鼠的构建及表型初步鉴定

TLR9基因敲除小鼠的构建及表型初步鉴定

2019年中国肿瘤标志物学术大会暨第十三届肿瘤标志物青年科学家论坛

作者：庞米米鲍登克万绍贵河南大学肿瘤标志物与液体活检实验室

目的 TLR9是Toll样受体家族的重要成员,是进化上高度保守的一类跨膜蛋白,其配体是细菌和病毒DNN中的CpG基序或人工合成的寡脱氧核苷酸(CpG-ODN)基序。近年研究发现,TLR9不仅表达于浆细胞样树突细胞、记忆性B淋巴细胞、T细胞等免疫细胞,...

目的 TLR9是Toll样受体家族的重要成员,是进化上高度保守的一类跨膜蛋白,其配体是细菌和病毒DNN中的CpG基序或人工合成的寡脱氧核苷酸(CpG-ODN)基序。近年研究发现,TLR9不仅表达于浆细胞样树突细胞、记忆性B淋巴细胞、T细胞等免疫细胞,在多种肿瘤细胞中也有表达,如肺癌,乳腺癌,胃癌和前列腺癌等。TLR9在免疫、炎症相关性疾病及肿瘤发生发展中具有重要作用。

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缺氧通过TLR9通路促进TAMs浸润和HCC进展的作用研究

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缺氧通过TLR9通路促进TAMs浸润和HCC进展的作用研究

2022CCTB中国肿瘤标志物学术大会暨中国整合肿瘤学大会暨第十六届肿瘤标志物青年科学家论坛暨中国肿瘤标志物产业创新大会

作者：司娇阳王佳鑫姚晓娟梁怡宣廖子谦鲍登克河南大学药学院肿瘤标志物与液体活检实验室开封市生物标志物与肿瘤液体活检重点实验室

目的:初步探索TLR9通路在缺氧诱导TAMs浸润和肝癌进展中的作用,研究结果将为深入探究肝癌微环境中缺氧与TAMs相互作用的分子机制提供新的见解。方法:通过Western blot、qRT-PCR、IHC和公共数据库等分析缺氧标志分子HIF-1α和M2型TAMs标... 详细信息

目的:初步探索TLR9通路在缺氧诱导TAMs浸润和肝癌进展中的作用,研究结果将为深入探究肝癌微环境中缺氧与TAMs相互作用的分子机制提供新的见解。方法:通过Western blot、qRT-PCR、IHC和公共数据库等分析缺氧标志分子HIF-1α和M2型TAMs标志物CD163在肝癌组织样本中的表达及其相关性,并分析其与肝癌患者预后的关系。构建原位肝癌小鼠模型,采用HE、qRT-PCR、IHC等实验分析小鼠组织中缺氧对TAMs浸润和肝癌进展的影响。采用Western blot、IF、FCM等实验方法分析肝癌细胞缺氧对TAMs M2型极化和募集的影响。通过Western blot、FCM等实验探讨缺氧通过TLR9通路诱导TAMs M2型极化的作用机制。结果:1、Western blot、qRT-PCR、IHC等实验结果发现肝癌患者肿瘤组织中HIF-1α和M2型TAMs在HCC组织中浸润显著增加。公共数据库分析发现,在肝癌组织中HIF-1α与CD163的表达呈显著正相关,并与肝癌患者预后较差相关;2、构建原位肝癌小鼠模型结果表明,缺氧促进TAMs浸润和肝癌进展。3、qRT-PCR、Western blot、IF和FCM实验结果发现肝癌细胞缺氧促使TAMs向M2型极化,同时采用迁移实验证实了肝癌细胞缺氧促进TAMs募集;4、Western blot实验结果发现肝癌细胞缺氧条件培养基孵育巨噬细胞后,明显增加了TLR9及其下游相关分子的磷酸化水平;使用TLR9干涉片段或拮抗剂(ODN INH-18)能够显著抑制缺氧条件培养基介导的TAMs M2型极化。结论:缺氧通过激活TLR9通路促进TAMs的浸润和肝癌进展。

关键词：肝癌缺氧肿瘤相关巨噬细胞 TLR9 肿瘤微环境

TFAM通过mtDNA-cGAS-STING介导的自噬促进食管癌增殖的机制研究

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TFAM通过mtDNA-cGAS-STING介导的自噬促进食管癌增殖的机制研究

2022CCTB中国肿瘤标志物学术大会暨中国整合肿瘤学大会暨第十六届肿瘤标志物青年科学家论坛暨中国肿瘤标志物产业创新大会

作者：韩静如杨笑天李雨佳杨琪陈慧吴远远鲍登克河南大学药学院肿瘤标志物与液体活检实验室开封市生物标志物与肿瘤液体活检重点实验室河南大学生命与科学学院

目的:食管鳞状细胞癌是最常见的食管癌组织学亚型,也是中国食管癌发病的主要类型,因此研究食管癌发病机制以及寻找调控食管癌进展的信号通路至关重要。大量研究表明,线粒体功能障碍在癌症的发生和发展中有着多重作用,而线粒体转录因子A ... 详细信息

目的:食管鳞状细胞癌是最常见的食管癌组织学亚型,也是中国食管癌发病的主要类型,因此研究食管癌发病机制以及寻找调控食管癌进展的信号通路至关重要。大量研究表明,线粒体功能障碍在癌症的发生和发展中有着多重作用,而线粒体转录因子A (TFAM)是调节线粒体DNA(mtDNA)复制、转录和生物发生的关键因子,TFAM下调会导致mtDNA由线粒体释放到胞浆诱发mtDNA应激。本研究的目的在于揭示TFAM在食管癌发生发展中的作用及其潜在的分子机制。方法:本研究首先通过检测线粒体膜电位、ATP生成以及ROS生成来分析TFAM下调与线粒体功能障碍之间的关系;采用共聚焦显微镜、ddPCR等检测mtDNA应激形态以及胞浆mtDNA拷贝数,并通过靶向抑制mPTP和VDAC1来进一步研讨mtDNA释放机制;通过RNA-seq测序、Western blot、透射电镜以及共聚焦显微镜等方法进一步研究mtDNA应激在TFAM介导的自噬和食管癌细胞生长中的作用及机制。结果:1)JC-1染色、ATP以及ROS生成实验结果显示,TFAM下调导致线粒体功能障碍。2)共聚焦和ddPCR结果显示TFAM下调导致线粒体拟核呈异常分布,且增加了胞浆mtDNA拷贝数,阻断mPTP孔后显著抑制了胞浆mtDNA积聚。3)Western blot和透射电镜结果显示mtDNA参与了自噬的发生,RNA-seq、共聚焦结果进一步证明mtDNA通过影响cGAS-TING通路促进食管癌细胞自噬。4)靶向抑制cGAS-STING通路或清除胞浆mtDNA后,显著抑制了自噬的发生和食管癌进展。结论:本研究系统阐述了TFAM缺失介导的mtDNA应激促进食管癌发生的作用及潜在机制研究,为临床上治疗食管癌提供了新思路。

关键词： TFAM mtDNA cGAS-STING 自噬食管癌