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中药调控间充质干细胞外泌体治疗缺血性心脑血管疾病研究进展

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中国实验方剂学杂志 2024年第13期30卷 250-258页

作者：解冬张露张金生河南中医药大学郑州450046 河南中医药大学第三附属医院郑州450000

缺血性心脑血管疾病包括缺血性心脏病和缺血性脑血管病,具有高患病率、高致残率、高死亡率的特点,目前已成为全球死亡原因首位。缺血性心脏病和缺血性脑血管病的共同病因是血管狭窄、粥样硬化及梗死造成的局部供血减少,而其复杂的病理... 详细信息

缺血性心脑血管疾病包括缺血性心脏病和缺血性脑血管病,具有高患病率、高致残率、高死亡率的特点,目前已成为全球死亡原因首位。缺血性心脏病和缺血性脑血管病的共同病因是血管狭窄、粥样硬化及梗死造成的局部供血减少,而其复杂的病理过程涉及炎症、焦亡、凋亡、自噬等多种机制,干预单一的病理环节治疗作用有限,亟需寻找可同时干预多个病理环节的新的治疗策略或药物。间充质干细胞通过其旁分泌效应起到组织修复的作用,外泌体在其中扮演重要角色,间充质干细胞外泌体具有与母细胞相似的免疫调节和修复特性,同时可减少干细胞直接应用后的不良反应及输注毒性,其在治疗缺血性心脑血管疾病中具有广泛应用前景。中药及组方具有多成分、多靶标、多层次系统调节的作用特点,中药可通过对间充质干细胞源性外泌体的调控改善细胞微环境从而对缺血性心脑血管疾病发挥治疗作用,体现现代中医微观辨证的观点,是中医药现代化的又一重要领域。该文对间充质干细胞外泌体对缺血性心脑血管疾病的治疗作用及机制进行了综述,同时讨论了中药调控间充质外泌体在缺血性心脑血管疾病中的应用作用,为中医药防治缺血性心脑血管病提供新思路。

关键词：中医药间充质干细胞外泌体缺血性心脏病缺血性脑血管疾病

类风湿关节炎相关间质性肺病的中医辨治临床研究进展

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时珍国医国药 2024年第3期35卷 705-708页

作者：马唤云马龙赵佳璐王至婉河南中医药大学河南郑州450000 河南中医药大学第一附属医院河南郑州450046 呼吸疾病诊疗与新药研发河南省协同创新中心河南郑州450046 河南省中医药防治呼吸病重点实验室河南郑州450046

类风湿关节炎相关间质性肺病(RA-ILD)属于结缔组织病有关间质性肺部疾病的临床最常见疾病之一,其病情相对隐蔽,早期表现不易被发现或无症状,但晚期易进展成肺纤维化,且预后极差,是类风湿关节炎病人中最常见的死亡原因之一,严重危害患者... 详细信息

类风湿关节炎相关间质性肺病(RA-ILD)属于结缔组织病有关间质性肺部疾病的临床最常见疾病之一,其病情相对隐蔽,早期表现不易被发现或无症状,但晚期易进展成肺纤维化,且预后极差,是类风湿关节炎病人中最常见的死亡原因之一,严重危害患者健康。中药防治RA-ILD的研究近年来逐渐增多,且临床疗效显著,不良反应较少,因此,中西医结合疗法或将作为防治RA-ILD的首选手段,但仍有待进一步研究。该文旨在深入总结探讨近年来RA-ILD的中医辨证治疗,并对其优势和不足进行分析,以期为临床提供有价值的参考和为未来的研究工作提供借鉴。

关键词：类风湿关节炎间质性肺病辨证治疗综述

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中药调控食管癌相关信号通路研究进展

中国实验方剂学杂志 2024年第3期30卷 226-238页

作者：李闪闪魏丹丹裴俊文王红玲蒋士卿河南中医药大学郑州450000 河南中医药大学第一附属医院郑州450000 河南省肿瘤医院郑州450000 河南中医药大学第三附属医院郑州450000

食管癌是常见的消化道恶性肿瘤。目前,食管癌的发病机制尚未完全阐明。虽然手术、放疗、化疗、靶向治疗及免疫治疗等在食管癌的治疗中取得较好的临床疗效,仍存在并发症多、不良反应大等问题。中药作为中医药的重要组成部分,近年来众多... 详细信息

食管癌是常见的消化道恶性肿瘤。目前,食管癌的发病机制尚未完全阐明。虽然手术、放疗、化疗、靶向治疗及免疫治疗等在食管癌的治疗中取得较好的临床疗效,仍存在并发症多、不良反应大等问题。中药作为中医药的重要组成部分,近年来众多基础实验及临床研究证实了其治疗食管癌具有较好的效果。同时,中药多成分、多靶点的特点及食管癌发病机制尚未完全明确的现状,决定了中药防治食管癌存在相关作用机制不明等问题,需要从现代医学着手,从分子生物学、网络药理学等层面揭示中药防治疾病的作用机制。中医学认为食管癌的发生多归结于肝气郁结、痰瘀气滞、津亏热结、正气衰败、癌毒胶结等。查阅文献发现,中药复方主要为补益剂如六君子汤、润燥剂如启膈散及清热剂如复方苦参注射液等;中药单体以攻毒杀虫类、清热类、活血化瘀药及理气药等为主;与中医学所认为的食管癌发生的病因病机相挈合。研究发现,中药还可以通过调控磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)、神经源性位点缺口同源蛋白(Notch)、分泌型糖蛋白/β-链蛋白(Wnt/β-catenin)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、核转录因子-κB(NF-κB)、酪氨酸激酶2/转录激活因子3(JAK2/STAT3)等相关信号通路发挥促进细胞凋亡,促进细胞自噬,阻滞细胞周期,逆转细胞耐药等作用治疗食管癌,但缺乏系统认识。该文通过系统总结中药调控食管癌的相关信号通路,利于明确中药治疗在食管癌分子机制发生发展及侵袭转移等过程中的相关作用机制,以期为食管癌的治疗提供新靶点,新视角,新思路,促进中医药现代化发展。

关键词：食管癌中药信号通路研究进展

黄连及其炮制品对实热型口腔溃疡大鼠干预作用的代谢组学研究

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中国中药杂志 2024年第2期49卷 389-402页

作者：张振凯郑亚娟张冰贤王永祥张金英曹玉敏冯卫生郑晓珂周宁河南中医药大学河南郑州450046 河南省中药开发工程技术研究中心河南郑州450046 河南中医药大学呼吸疾病中医药防治省部共建协同创新中心河南郑州450046 豫药全产业链研发河南省协同创新中心河南郑州450046

采用UPLC-Q/TOF-MS技术,探究黄连及其3种炮制品对实热型口腔溃疡大鼠体内代谢的干预作用,揭示黄连3种炮制品的药效差异。将雄性SD大鼠随机分为假手术组、实热型口腔溃疡模型组、生黄连组、酒/姜/萸/黄连组、阳性药黄连上清片组。除假手... 详细信息

采用UPLC-Q/TOF-MS技术,探究黄连及其3种炮制品对实热型口腔溃疡大鼠体内代谢的干预作用,揭示黄连3种炮制品的药效差异。将雄性SD大鼠随机分为假手术组、实热型口腔溃疡模型组、生黄连组、酒/姜/萸/黄连组、阳性药黄连上清片组。除假手术组外,其他组连续灌胃2周党参-黄芪水煎液,实热造模期间记录大鼠肛温和饮水量,实热造模完成后结合乙酸进行口腔溃疡造模。苏木精-伊红(HE)观察口腔溃疡黏膜病理学变化;比色法检测血清中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的水平;ELISA检测大鼠血清中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量;收集血清样本,利用UPLC-Q/TOF-MS技术进行非靶向代谢组学分析,通过主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)构建代谢轮廓并筛选潜在生物标志物,应用Mev软件对标志物相对定量结果进行热图绘制和聚类分析,最后结合MBRole、KEGG和MetaboAnalyst等在线数据库进行通路富集分析和代谢网络构建。实验结果显示,造模后大鼠口腔黏膜病理损伤严重,血清中TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA水平显著升高,SOD、GSH-Px水平显著降低;给药后各指标均有回调趋势,以酒黄连的改善效果最佳。非靶向代谢组学最终鉴定出48个差异代谢物,包括正源模式下27个、负源模式下21个,富集得到甘油磷脂代谢、亚油酸代谢、酪氨酸代谢等5条共有通路。综上,黄连及其3种炮制品均可通过干预脂质代谢、氨基酸代谢等途径,改善实热型口腔溃疡大鼠机体的炎症反应和氧化应激损伤,其中酒黄连的治疗效果最显著。

关键词：黄连实热型口腔溃疡代谢组学 UPLC-Q/TOF-MS

基于PERK/ATF4/CHOP的益肾通络方抑制内质网应激改善肾小管上皮细胞凋亡的作用机制

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中国实验方剂学杂志 2024年第2期30卷 26-36页

作者：苏烜赵靓王萌萌丁婧张振强张效威徐江雁谢治深河南中医药大学中医药科学院郑州450046

目的:验证益肾通络方(YSTLP)对肾小管上皮细胞凋亡的影响,并基于内质网应激通路蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/活化转录因子4(ATF4)/转录因子C/EBP同源蛋白(CHOP)探讨其作用机制。方法:将db/db小鼠随机分为模型组、缬沙坦组(10 mg·kg^(... 详细信息

目的:验证益肾通络方(YSTLP)对肾小管上皮细胞凋亡的影响,并基于内质网应激通路蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/活化转录因子4(ATF4)/转录因子C/EBP同源蛋白(CHOP)探讨其作用机制。方法:将db/db小鼠随机分为模型组、缬沙坦组(10 mg·kg^(-1)·d^(-1))、YSTLP低、中、高剂量组(1、2.5、5 g·kg^(-1)·d^(-1))给予药物干预8周后取材。同窝的db/m小鼠作为正常组。体外培养人肾小管上皮细胞(HK-2),分为正常组、糖基化终产物(AGEs)组、AGEs+益肾通络方低、中、高质量浓度组(100、200、400 mg·L^(-1));原位末端标记(TUNEL)染色检测HK-2细胞的凋亡情况;细胞活力测定实验检测HK-2细胞存活率;钙离子荧光探针染色,以及荧光素酶报告基因法检测为折叠蛋白反应元件(UPRE)荧光素酶活力,检测内质网应激情况;免疫组化法(IHC)检测小鼠肾脏中磷酸化(p)-PERK蛋白的表达(p-PERK)、CHOP、ATF4的蛋白表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测小鼠肾脏、HK-2细胞中CHOP、X盒结合蛋白1(XBP1)的mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠肾脏、HK-2细胞中p-PERK、PERK、CHOP、ATF4、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、切割型胱天蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)的蛋白表达水平。结果:细胞实验中,与正常组比较,AGEs组HK-2细胞活力显著降低,凋亡率显著升高(P实验中,与正常组比较,模型组小鼠Bcl-2的蛋白表达水平显著降低(P<0.01),cleaved Caspase-3、Bax的蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,YSTLP组Bcl-2的蛋白表达水平呈剂量依赖性提升,cleaved Caspase-3、Bax的蛋白表达水平呈剂量依赖性降低(P<0.01)。与正常组比较,模型组小鼠CHOP、XBP1 mRNA表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01),p-PERK、CHOP、ATF4的蛋白表达水平明显提高(P<0.05);与模型组比较,YSTLP可显著降低CHOP、XBP1的mRNA表达水平(P<0.01),降低p-PERK、CHOP、ATF4的蛋白表达水平(P<0.01)。结论:YSTLP可有效抑制内质网应激、改善肾小管上皮细胞凋亡情况,其作用机制可能与调节PERK/AFT4/CHOP通路有关。

关键词：益肾通络方内质网应激凋亡机制蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/活化转录因子4(ATF4)/转录因子C/EBP同源蛋白(CHOP)信号通路

基于miR-1/HIF-1α轴研究六君子汤乙酸乙酯提取物调控食管癌细胞TE-1能量代谢的作用机制

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中华中医药学刊 2024年

作者：陈星周哲旭尚艺婉刘洋刘娅茹胡啸博菅佳宁肖小乔陈玉龙河南中医药大学河南省中医方证信号传导重点实验室

目的: 探索六君子汤乙酸乙酯提取物（Ethyl acetate extract of Liujunzi Decoction，EAELD）能否通过miR-1/HIF-1α轴调控食管癌细胞TE-1的能量代谢及其分子机制。方法：前期实验已建立稳定转染阻滞miR-1表达细胞株（miR-1 inhibitor... 详细信息

目的: 探索六君子汤乙酸乙酯提取物（Ethyl acetate extract of Liujunzi Decoction，EAELD）能否通过miR-1/HIF-1α轴调控食管癌细胞TE-1的能量代谢及其分子机制。方法：前期实验已建立稳定转染阻滞miR-1表达细胞株（miR-1 inhibitor，IN）及空白对照（miR-1 NC，NC），采用MTT法得到EAELD对NC的半数抑制浓度(IC50)及30%抑制浓度(IC30)，将其作为六高，六低浓度分别作用于IN与NC进行对比。实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测EAELD对于TE-1细胞miR-1、HIF-1α mRNA的影响。双荧光素酶基因报告实验验证miR-1、HIF-1α靶向关系。然后将实验分组分为NC、六低、六高、IN+六低、IN+六高，Seahorse能量代谢分析系统检测线粒体压力与糖酵解速率，蛋白免疫印迹法（Western Blot，WB）检测能量代谢相关分子蛋白表达水平变化。结果：MTT结果显示EAELD能够显著抑制NC增殖能力，呈浓度梯度依赖，选取20μg/mL(IC30)、40μg/mL(IC50)为低、高浓度组。RT-qPCR结果显示EAELD高浓度组显著促进miR-1的基因表达（P＜0.05），HIF-1α有下降趋势，无统计学差异。双荧光素酶基因报告实验显示与野生型（Wild type，WT）+阴性对照（mimics NC）组相比，WT+mimics荧光强度明显下降（P＜0.05），与突变型（Mutant，MUT）+ 阴性对照（mimics NC）组相比，MUT+mimics荧光强度无明显差别。将高、低浓度EAELD作用于IN时，MTT结果显示与NC相比，EAELD对于IN的抑制作用显著降低（P＜0.05）。Seahorse能量代谢结果显示与NC相比，EAELD高、低浓度组均可以抑制线粒体耗氧与糖酵解的比值（P＜0.01，P＜0.05）、糖酵解潜能（P＜0.01）、基础呼吸值、质子漏耗氧（P＜0.01，P＜0.05）、线粒体最大耗氧能力、备用呼吸能力（P＜0.01），高浓度组可以抑制基础糖酵解、补偿糖酵解、非线粒体耗氧、ATP合成耗氧（P＜0.01）。与NC+六低组相比，IN+六低组的基础糖酵解、线粒体与基础糖酵解的比值、糖酵解潜能（P＜0.05）、ATP合成耗氧（P＜0.01）显著升高；与NC+六高组相比，IN+六高基础糖酵解、补偿糖酵解（P＜0.05）、基础呼吸能力、质子漏耗氧、线粒体最大耗氧量、非线粒体耗氧显著升高（P＜0.01）。WB结果显示与NC相比，EAELD高、低浓度组可以显著降低HK2（P＜0.01）、GLUT1（P＜0.05、P＜0.01）、MCT1（P＜0.01、P＜0.05）蛋白相对表达量，高浓度组可以显著抑制PKM2（P＜0.05）、MCT2、MCT4（P＜0.01）的蛋白相对表达量；与NC+六低组相比，IN+六低组HK2、GLUT1、PKM2（P＜0.01）、p-PKM2、MCT1、MCT2（P＜0.05）的表达明显升高，与NC+六高组相比，IN+六高组可以显著促进HK2、GLUT1、PKM2、MCT4的表达（P＜0.05）。结论：六君子汤乙酸乙酯提取物可以通过下调能量代谢相关分子GLUT1、PKM2、p-PKM2、HK2、MCT1、MCT2、MCT4的蛋白表达抑制食管癌细胞TE-1的能量代谢，其部分机制与miR-1/HIF-1α轴有关。

关键词：六君子汤乙酸乙酯提取物食管癌能量代谢 miR-1/HIF-1α轴分子机制

丹酚酸F调控Bax/Caspase-3/GSDME信号通路改善肾小管上皮细胞焦亡作用机制

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中国实验方剂学杂志 2024年第9期30卷 56-64页

作者：石贤聪谢治深赵靓王佳俊段亚飞王潘张振强张效威徐江雁河南中医药大学中医药科学院郑州450046

目的:基于B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)/胱天蛋白酶-3(Caspase-3)/消皮素E(GSDME)通路探讨丹酚酸F改善高糖诱导的肾小管上皮细胞(HK-2)损伤的机制。方法:细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测不同浓度(2.5、5、10、20μmol·L^(-1))... 详细信息

目的:基于B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)/胱天蛋白酶-3(Caspase-3)/消皮素E(GSDME)通路探讨丹酚酸F改善高糖诱导的肾小管上皮细胞(HK-2)损伤的机制。方法:细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测不同浓度(2.5、5、10、20μmol·L^(-1))丹酚酸F对高糖诱导的HK-2细胞相对活力的影响及给予丹酚酸F不同干预时间条件下HK-2细胞的相对活力;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒和酶联免疫吸附测定法(ELISA)试剂盒分别检测细胞培养基上清中LDH和白细胞介素-1β(IL-1β)的含量;流式细胞术结合异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙啶(PI)和Hoechst 33342/PI染色检测丹酚酸F对高糖诱导的HK-2细胞PI阳性率的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)评价丹酚酸F对高糖诱导的HK-2细胞中Bax、Bcl-2、细胞色素C(Cyt C)、胱天蛋白酶-9(Caspase-9)、Caspase-3、GSDME蛋白表达及激活情况的影响。2,7-二氯二氢荧光素二乙酸酯荧光探针法(DCFH-DA)及线粒体膜电位(JC-1)考察丹酚酸F对高糖诱导的HK-2细胞中活性氧(ROS)产生及线粒体膜电位的影响。结果:与空白组比较,模型组细胞活力显著降低(P<0.01),乳酸脱氢酶、炎症因子IL-1β、PI阳性细胞比例均显著升高(P<0.01);Bax、Cyt C、Caspase-9、Caspase-3、GSDME蛋白表达显著升高(P<0.01),Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.01),HK-2细胞线粒体膜电位的降低,ROS产生过量蓄积。与模型组比较,丹酚酸F组有效改善高糖诱导所致HK-2细胞的损伤(P<0.05),明显降低细胞培养基上清中LDH及IL-1β含量(P<0.05,P<0.01),显著减少PI阳性细胞的比例(P<0.01);丹酚酸F组降低Bax、Cyt C、Caspase-9、Caspase-3、GSDME蛋白表达,明显升高Bcl-2蛋白表达(P<0.05,P<0.01),HK-2细胞线粒体膜电位的升高,ROS的过量蓄积减少。结论:丹酚酸F通过减少ROS的产生,改善线粒体膜电位失衡,抑制Bax/Caspase-3/GSDME信号通路介导的细胞焦亡发挥改善高糖诱导所致HK-2细胞损伤的作用。

关键词：丹酚酸F B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)/胱天蛋白酶-3(Caspase-3)/消皮素E(GSDME)信号通路肾小管上皮细胞细胞焦亡

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抵当汤治疗糖尿病及其并发症的研究进展

世界科学技术-中医药现代化 2024年 1-9页

作者：刘宾河南中医药大学

抵当汤来源于《伤寒杂病论》，主治下焦蓄血证，具有荡涤邪热、破血行瘀的作用，恰好符合糖尿病燥热内盛、瘀血停滞的病机特点，故临床广泛应用于糖尿病及其并发症的治疗。本文对抵当汤治疗糖尿病及其并发症的作用机制方面进行了综述。... 详细信息

抵当汤来源于《伤寒杂病论》，主治下焦蓄血证，具有荡涤邪热、破血行瘀的作用，恰好符合糖尿病燥热内盛、瘀血停滞的病机特点，故临床广泛应用于糖尿病及其并发症的治疗。本文对抵当汤治疗糖尿病及其并发症的作用机制方面进行了综述。研究发现，本方在治疗糖尿病及其并发症方面有较好的疗效，其作用机制可能与控制血糖、改善糖尿病患者胰岛β细胞功能和胰岛素抵抗、调节相关炎症因子与细胞凋亡、调控相关蛋白通路，进而达到保护血管内皮细胞、增强血管稳定性，改善血管通透性，延缓糖尿病大血管及微血管病变、改善神经传导速度等作用，但目前对抵当汤的作用机制研究的广度和深度尚显不足，且缺少长期的追踪观察与分析。本研究可为进一步深化抵当汤防治糖尿病及其并发症的研究提供更多的科研与临床支撑。

关键词：糖尿病抵当汤临床研究机制研究综述

中药调控肠道菌群防治缺血性脑卒中的现代生物学机制及特点分析

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中国实验方剂学杂志 2024年

作者：屈秉聪周天豹佘琳静苗明三白明河南中医药大学

卒中包括缺血性脑卒中和出血性脑卒中，具有高发病率、高致残率、高死亡率、高复发率、高经济负担的特点。缺血性脑卒中是最为常见的卒中类型，主要由颅内动脉闭塞引起，临床患者表现为偏瘫、失语、感觉障碍等神经功能缺损症状，同时常... 详细信息

卒中包括缺血性脑卒中和出血性脑卒中，具有高发病率、高致残率、高死亡率、高复发率、高经济负担的特点。缺血性脑卒中是最为常见的卒中类型，主要由颅内动脉闭塞引起，临床患者表现为偏瘫、失语、感觉障碍等神经功能缺损症状，同时常伴有便秘、消化道出血等胃肠道症状。肠道菌群在缺血性脑卒中的发病中扮演着重要角色，其潜在的生物学作用受到人们的广泛关注，肠道菌群不仅可以影响肠道屏障功能，还可以调节胃肠道免疫影响宿主机体的稳态。近年来，中药在防治脑缺血中表现出效果显著且不良反应较小的特点，中药通过调节肠道菌群结构及相关代谢，维持肠道菌群功能等方面改善脑缺血损伤作用的研究逐渐成为热点。通过调研近年来相关研究文献，以中药与肠道菌群相互作用为基础，探讨中药通过调节肠道菌群结构，影响肠道菌群代谢，调节机体免疫等多个角度发挥抗脑缺血损伤作用的机制，并进行归纳总结，为深入阐述肠道菌群在脑缺血中的作用及中药防治缺血性脑卒中的机制研究提供依据。

关键词：肠道菌群缺血性脑卒中中医药肠-脑轴