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基于NLRP3/Caspase-1/IL-1β通路探讨温阳解郁方调节小鼠海马突触可塑性的机制

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中国实验方剂学杂志 2024年第6期30卷 39-47页

作者：孟丹华佘楷杰孟晓莹巩子汉梁文青王英梁媛岳广欣中国中医科学院中医基础理论研究所北京100700 河南中医药大学基础医学院郑州450000

目的:探讨温阳解郁方改善“母婴分离+束缚应激(MS+RS)”抑郁小鼠神经炎症,保护突触可塑性的作用机制。方法:仔鼠出生第0天(PD0)随机分为空白组和造模组。造模采用母婴分离联合束缚应激21 d建立抑郁模型,PD21离乳后剔除雌鼠,随机分为模... 详细信息

目的:探讨温阳解郁方改善“母婴分离+束缚应激(MS+RS)”抑郁小鼠神经炎症,保护突触可塑性的作用机制。方法:仔鼠出生第0天(PD0)随机分为空白组和造模组。造模采用母婴分离联合束缚应激21 d建立抑郁模型,PD21离乳后剔除雌鼠,随机分为模型组、温阳组、解郁组、温阳解郁组、氟西汀组,每组15只,PD21~PD111各给药组药混饲料给药,给药剂量分别为5.85、12.03、16.71 g·kg^(-1),2.6 mg·kg^(-1)。糖水偏好、开放旷场、O迷宫及新物体识别行为学实验评估小鼠焦虑抑郁和学习记忆能力;免疫组化法(IHC)观察海马小胶质细胞离子钙接头蛋白-1(Iba-1);高效液相色谱法(HPLC)检测海马去甲肾上腺素(NE)、肾上腺素(E)含量;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测海马白细胞介素-18(IL-18)、白细胞介素-1β(IL-1β)含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马NOD样受体蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点蛋白(ASC)、胱天蛋白酶-1(Caspase-1)、IL-1β、突触素(Syn)、突触后致密物95(PSD95)蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组小鼠糖水偏好率、5 min中央运动时间、运动总距离、开臂停留时间和认知指数明显降低(P<0.05,P<0.01),IHC结果显示,小胶质细胞呈“阿米巴”激活态,Iba1明显增加,海马NE、E含量显著减少(P<0.01),IL-1β和IL-18含量显著增加(P<0.01),PSD95、Syn蛋白表达明显减少(P<0.05,P<0.01),NLRP3、ASC、Caspase-1和IL-1β蛋白表达明显增加(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,温阳解郁组和氟西汀组小鼠糖水偏好率、认知指数增加,5 min中央运动时间、开臂停留时间、认知指数明显增加(P<0.05,P<0.01),小胶质细胞形态恢复正常,Iba1明显降低,海马NE、E含量明显增加(P<0.05,P<0.01)、IL-1β和IL-18含量显著降低(P<0.01),PSD95、Syn蛋白表达显著增加(P<0.01)、NLRP3、ASC、Caspase-1和IL-1β蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01),各中药组以温阳解郁方效果最佳。结论:温阳解郁方可能通过调节NLRP3炎症通路,缓解小胶质细胞诱导的神经炎症,增加海马神经递质含量,并改善突触可塑性,减轻MS+RS小鼠抑郁样行为,其综合效果优于温阳方和解郁方。

关键词：温阳解郁方 NOD样受体蛋白3(NLRP3) 小胶质细胞神经炎症突触可塑性

基于HMGB1-TLR2/TLR4-NF-κB通路探索氧化苦参碱对小鼠微小隐孢子虫感染的影响

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中国血吸虫病防治杂志 2024年第3期36卷 286-293页

作者：史洁汲蕊管志玉张晓宁逯一龙山东第二医科大学基础医学院山东潍坊261053 山东省第二医科大学中医学院山东潍坊261053

目的探讨高迁移率族蛋白B1(high mobility group box protein B1,HMGB1)-Toll样受体2(Toll-like receptor 2,TLR2)/TLR4-核因子κB(nuclear factorκB,NF-κB)通路在微小隐孢子虫感染致肠黏膜损伤中的作用,以及氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)对小鼠微小隐孢子虫感染的干预作用。方法 4周龄SPF级BALB/c小鼠40只随机分成4组,分别为对照组、感染组、甘草酸(glycyrrhizin,GA)组及OMT组。感染组、GA组及OMT组小鼠给予地塞米松免疫抑制1周后,每只灌胃1×10^(5)个微小隐孢子虫卵囊建立微小隐孢子虫肠道感染小鼠模型。模型建立成功后,GA组小鼠连续2周腹腔注射GA 25.9 mL/(kg·d),OMT组连续2周经口灌胃OMT 50 mg/(kg·d);对照组正常饮食、饮水。治疗2周后剖杀各组小鼠,取空肠近端组织。采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察小鼠肠黏膜病理变化,测量肠绒毛高度、肠隐窝深度及两者比值;采用免疫组织化学染色检测小鼠肠上皮细胞中闭合蛋白(occludin)和紧密粘连蛋白1(zonula occludens protein 1,ZO1)表达水平,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测小鼠空肠组织中HMGB1、TLR2、TLR4、髓样分化因子88(myeloid differentiation primary response gene 88,MyD88)、NF-κB p65 mRNA相对表达量。结果 HE染色结果显示,与对照组比较,感染组小鼠肠绒毛明显萎缩变短、脱落,黏膜下层水肿;GA组和OMT组小鼠肠绒毛结构趋于完整,排列趋于整齐。各组小鼠肠绒毛高度(F=6.207,P=0.000 5)、肠隐窝深度(F=6.903,P=0.000 3)及两者比值(F=37.190,P 0.05);OMT组小鼠肠隐窝深度[(121.5±27.3)μm]显著低于感染组[(185.0±35.9)μm](t=4.133,P 0.05)。感染组小鼠肠绒毛高度与肠隐窝深度比值[(1.8±0.2)]显著低于对照组[(3.1±0.3)](t=10.540,P 0.05)。免疫组织化学染色结果显示,各组小鼠肠上皮细胞中occludin(F=28.031,P 0.05)。感染组小鼠肠上皮细胞中ZO1阳性表达率[(14.4±1.8)%]显著低于对照组[(24.2±2.8)%](t=4.485,P 0.05)。qPCR检测结果显

关键词：微小隐孢子虫高迁移率族蛋白B1 Toll样受体核因子κB 氧化苦参碱甘草酸肠黏膜屏障小鼠

黄精乌鸡膏营养组分及其对不同免疫状态小鼠肠道黏膜形态和免疫性能的影响

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食品与发酵工业 2024年第13期50卷 55-63,71页

作者：张敏冯景刘喆李玉龙陕西中医药大学基础医学院陕西咸阳712046

为探究黄精乌鸡膏(jellied black-bone chicken with rhizoma polygonati,JBR)营养组分及免疫调控作用,该研究采用代谢组方法检测了JBR营养和功能性物质组成状况,用于探讨其潜在生物学调节作用,进而分析了JBR对不同免疫状态C57BL/6小鼠... 详细信息

为探究黄精乌鸡膏(jellied black-bone chicken with rhizoma polygonati,JBR)营养组分及免疫调控作用,该研究采用代谢组方法检测了JBR营养和功能性物质组成状况,用于探讨其潜在生物学调节作用,进而分析了JBR对不同免疫状态C57BL/6小鼠体重、肠道黏膜形态及免疫性能的影响。结果表明,相比普通乌鸡膏,JBR中多种必须氨基酸和功能性物质含量显著提高,KEGG通路分析显示JBR具有调控营养代谢和免疫性能的潜在作用。动物试验结果显示,JBR可显著改善环磷酰胺处理及脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)攻毒导致的小鼠肠黏膜损伤,因此可对环磷酰胺导致的小鼠体重降低产生显著缓解效应。此外,JBR可抑制环磷酰胺+LPS攻毒导致的脾脏NF-κB高表达,并可降低环磷酰胺+LPS处理导致的脾脏和血清TNF-α高表达,抑制免疫抑制小鼠的急性炎症反应并缓解炎症导致的脾脏组织损伤,脾淋巴细胞增殖活性、外周血半数溶血值和NK细胞活力等免疫指标均显示JBR可显著提高免疫抑制小鼠的免疫功能,并可改善LPS攻毒导致的免疫异常。JBR具有调控营养代谢和免疫性能作用,可显著改善免疫抑制小鼠的小肠黏膜组织形态和免疫性能,有利于免疫抑制小鼠更好的应对LPS诱导的脾脏急性炎症反应,缓解急性炎症导致的脾脏损伤。

关键词：黄精乌鸡膏代谢组 C57BL/6小鼠肠道黏膜形态免疫功能

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黄连解毒汤对APP/PS1转基因小鼠大脑皮质中TREM2/Akt/GSK3β通路的影响

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中国中药杂志 2024年第7期49卷 1924-1931页

作者：王瑞芳宋军营赵焕东贾亚泉袁永丁蕊王孟菲张振强河南中医药大学中医药科学院河南郑州450046 河南中医药大学第一临床医学院河南郑州450046 河南中医药大学第二临床医学院河南郑州450046

基于“毒损脑络”阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)中医病机,黄连解毒汤治疗AD的机制还不清楚。该研究旨在探讨黄连解毒汤调节髓样细胞触发受体2(triggering receptor expressed on myeloid cells 2,TREM2)/苏氨酸蛋白激酶(protei... 详细信息

基于“毒损脑络”阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)中医病机,黄连解毒汤治疗AD的机制还不清楚。该研究旨在探讨黄连解毒汤调节髓样细胞触发受体2(triggering receptor expressed on myeloid cells 2,TREM2)/苏氨酸蛋白激酶(protein kinase B,Akt)/糖原合酶激酶3β(glycogen synthase kinase 3β,GSK3β)通路改善APP/PS1转基因小鼠认知障碍机制。将9月龄APP/PS1小鼠采用随机数字表法分为模型组,黄连解毒汤低、中、高(2.5、5、10 g·kg^(-1))组和盐酸多奈哌齐0.75 mg·kg^(-1)组,同月龄C57BL/6J小鼠为正常组。连续给药1个月后,采用Morris水迷宫检测小鼠的学习记忆能力,苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠皮质区神经细胞形态,免疫荧光检测β淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)_(1-42)、CD86及精氨酸酶1(arginase 1,Arg1)表达情况,实时荧光定量PCR检测小鼠皮质区白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6和IL-10 mRNA水平,Western blot法检测小鼠皮质TREM2、磷酸酰肌醇3-激酶(phosphoinositide-3 kinase,PI3K)、Akt、GSK3β和β-连环蛋白(beta-catenin,β-catenin)的蛋白表达。结果表明,与正常组相比,模型组小鼠逃避潜伏期显著延长,目标象限停留时间和穿越平台次数显著减少(P<0.01),模型组小鼠皮质内神经元数量明显减少,并出现核固缩现象,且Aβ_(1-42)及CD86表达明显增多,组织内IL-1β和IL-6 mRNA水平显著升高,IL-10稍有升高,Arg1则明显下降,皮质区TREM2、p-PI3K(Y607)、p-Akt(T308)、p-GSK3β(Ser9)和β-catenin蛋白表达明显下调;与模型组相比,给药组小鼠逃避潜伏期均明显缩短,穿越平台次数和目标象限停留时间明显增加,小鼠皮质区神经元数量增多、核固缩现象改善,Aβ_(1-42)沉积明显减少,IL-1β和IL-6 mRNA和CD86水平显著下降,而IL-10及Arg1显著上升,各给药组小鼠皮质区TREM2、p-PI3K(Y607)、p-Akt(T308)、p-GSK3β(Ser9)和β-catenin蛋白表达显著上调。综上所述,黄连解毒汤减少Aβ_(1-42)表达和脑内炎症保护神经元,从而改善APP/PS1小鼠的学习记忆能力,可能与TREM2/Akt/GSK3β信号通路有关。

关键词：阿尔茨海默病黄连解毒汤神经炎症 TREM2 GSK3β

基于BDNF/Akt/mTOR信号通路探讨温阳解郁方调控海马神经元凋亡和突触可塑性的机制

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中国实验方剂学杂志 2024年第6期30卷 48-57页

作者：孟丹华佘楷杰孟晓莹巩子汉梁文青王英梁媛岳广欣中国中医科学院中医基础理论研究所北京100700 河南中医药大学基础医学院郑州450000

目的:探讨温阳解郁方调节“母婴分离+束缚应激(MS+RS)”抑郁小鼠海马神经元凋亡改善突触可塑性的机制。方法:仔鼠出生第0天(PD0)随机分为空白组10只和造模组50只。造模采用MS+RS建立抑郁模型,PD21离乳后随机分为模型组、温阳组、解郁组... 详细信息

目的:探讨温阳解郁方调节“母婴分离+束缚应激(MS+RS)”抑郁小鼠海马神经元凋亡改善突触可塑性的机制。方法:仔鼠出生第0天(PD0)随机分为空白组10只和造模组50只。造模采用MS+RS建立抑郁模型,PD21离乳后随机分为模型组、温阳组、解郁组、温阳解郁组、氟西汀组,每组10只,PD21~PD111分组给药。糖水偏好、开放旷场、O迷宫及新物体识别行为实验评估小鼠焦虑抑郁和学习记忆能力;免疫组化法(IHC)检测小鼠海马突触后致密物95(PSD95)表达情况;原位末端标记法(TUNEL)染色检测小鼠海马神经元凋亡情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马脑源性神经营养因子(BDNF)、磷酸化酪氨酸蛋白激酶/酪氨酸蛋白激酶(p-TrkB/TrkB)、磷酸化蛋白激酶B/蛋白激酶B(p-Akt/Akt)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR/mTOR)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、突触后致密蛋白95(PSD95)、突触素(Syn)蛋白表达情况。结果:与空白组比较,模型组小鼠糖水偏好程度、中央区停留时间、运动总距离、开臂停留时间和认知指数显著减少(P<0.01),IHC结果显示海马PSD95表达明显减少,海马神经元凋亡数量增加(P<0.01),BDNF、p-TrkB/TrkB、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR、Bcl-2、p-mTOR/mTOR、PSD95、Syn蛋白表达显著减少(P<0.01),Bax、Caspase-3蛋白含量明显增加(P<0.05);与模型组比较,温阳解郁组和氟西汀组糖水偏好程度、5 min中央运动时间、5 min开臂停留时间和认知指数明显增加(P<0.05,P<0.01),海马PSD95表达明显增加、海马凋亡指数显著增加(P<0.01),BDNF、p-TrkB/TrkB、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR、Bcl-2、PSD95、Syn蛋白含量显著增加(P<0.01),Bax、Caspase-3蛋白含量显著减少(P<0.01)。结论:温阳解郁方可以通过BDNF/Akt/mTOR信号通路,改善模型组小鼠神经元凋亡情况,保护海马突触结构和功能,缓解模型组小鼠抑郁样行为,其综合疗效及分子机制效果优于温阳方和解郁方。

关键词：温阳解郁方脑源性神经营养因子(BDNF)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR) 海马神经元凋亡突触可塑性

基于生物信息学研究宫内生长受限的免疫机制及中药预测

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中国免疫学杂志 2024年第2期40卷 225-232页

作者：杜志欣刘岳轩张一格江煜张桐杨丽萍河南中医药大学医学院郑州450046 河南中医药大学第二临床医学院郑州450046

目的:基于生物信息学技术对宫内生长受限(IUGR)的芯片数据进行基因集富集分析(GSEA)以及关键差异基因的免疫浸润分析,并预测相关的作用中药。方法:从基因表达数据库(GEO)中获取GSE12216芯片数据,运用R软件筛选出差异表达基因(DEGs)。利... 详细信息

目的:基于生物信息学技术对宫内生长受限(IUGR)的芯片数据进行基因集富集分析(GSEA)以及关键差异基因的免疫浸润分析,并预测相关的作用中药。方法:从基因表达数据库(GEO)中获取GSE12216芯片数据,运用R软件筛选出差异表达基因(DEGs)。利用R包对数据集所有基因进行GSEA的基因本体论(GO)与京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析以及DEGs的GO和KEGG分析;通过STRING数据库构建DEGs蛋白交互作用网络以及Cytohubba筛选关键基因;对关键基因进行ROC分析判断关键基因的诊断价值;通过单样本基因集富集分析(ssGSEA)算法获得24种免疫细胞在IUGR的含量及比例进行分析;通过Spearman统计方法计算关键基因表达与免疫细胞浸润的相关性,并利用Coremine数据库对免疫相关的关键基因进行中药预测。结果:共获得228个IUGR与正常胎盘的DEGs;GSEA结果显示IUGR样本的基因表达改变主要涉及趋化因子与受体以及溶酶体信号通路等过程;DEGs的GO和KEGG分析显示DEGs主要富集在肿瘤坏死因子(TNF)信号通路、缺氧诱导因子1(HIF-1)信号通路和Janus激酶/信号转导与转录激活子(JAK/STAT)信号通路;Cytohubba共筛选出10个关键基因:CSF2、IRAK1、PTGS2、FLT1、CHUK、CXCL12、FOS、LEP、CXCL2以及RELB;ROC分析显示这10个基因均有较高的诊断价值;免疫细胞的浸润矩阵分析结果表明,在IUGR胎盘组织中自然杀伤T细胞(NKT)以及单核细胞变化显著。免疫浸润与关键基因的相关性分析发现CSF2、IRAK1、PTGS2、CHUK、CXCL12、CXCL2以及RELB 7个基因与免疫浸润有相关性,中药预测发现,人参、黄芪与IUGR相关免疫浸润的关系最为密切。结论:NKT细胞与单核细胞在IUGR的发生发展中具有重要作用;共鉴定出7个与免疫浸润相关的关键基因;人参及黄芩可作为IUGR治疗的药物来源。

关键词：生物信息学宫内生长受限 GSEA 免疫浸润中药预测

六君子汤干预4NQO诱导食管癌模型小鼠的血清代谢组学研究

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中国中药杂志 2024年第2期49卷 461-470页

作者：尚艺婉陈星武颖烁周哲旭刘洋刘娅茹胡啸博陈玉龙河南中医药大学中医学院(仲景学院) 河南郑州450046 南阳医学高等专科学校河南南阳473000 河南中医药大学河南省方证信号传导重点实验室河南郑州450046

基于血清代谢组学探讨六君子汤治疗4-硝基喹啉-N-氧化物(4-nitroquinoline-N-oxide,4NQO)诱导食管癌模型小鼠的作用机制。选取35~45日龄小鼠100只,随机分为空白组、模型组、六君子汤低浓度组、六君子汤中浓度组、六君子汤高浓度组。除... 详细信息

基于血清代谢组学探讨六君子汤治疗4-硝基喹啉-N-氧化物(4-nitroquinoline-N-oxide,4NQO)诱导食管癌模型小鼠的作用机制。选取35~45日龄小鼠100只,随机分为空白组、模型组、六君子汤低浓度组、六君子汤中浓度组、六君子汤高浓度组。除空白组外,其余小鼠自由饮用100μg·mL^(-1)的4NQO溶液16周,构建食管癌小鼠模型。六君子汤低、中、高浓度组分别用药物质量分数为18.2、36.4、54.6 g·kg^(-1)的定制饲料喂养,称量各组小鼠体质量和脏器质量计算脏器指数;采用苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察各组小鼠食管组织病理改变;超高效液相色谱-串联质谱(ultra performance liquid chromatography-mass spectrometry,UPLC-MS/MS)进行小鼠血清样本的代谢物采集,筛选潜在生物标志物及分析相关代谢通路。结果显示,模型组小鼠脾脏、胃脏器指数明显降低,肺、食管、肾的脏器指数明显升高,与模型组相比,六君子汤各浓度脏器指数无明显变化;HE结果显示,六君子汤能改善小鼠食管癌细胞浸润性生长及癌变情况;血清代谢组学分析筛选出9种六君子汤干预食管癌小鼠的潜在生物标志物,分别为尿刊酸(urocanic acid,UCA)、1-油酰甘油磷酸丝氨酸(1-oleoylglycerophosphoserine)、11-脱氧前列腺素E1(11-deoxy prostaglandin E1)、多肽链Leu-Glu-Lys-Glu、(±)4-羟基-5E,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z-二十二碳六烯酸[(±)4-HDHA]、脲基琥珀酸(ureidosuccinic acid)、泛酸[(2R)-2,4-dihydroxy-3,3-dimethylbutanoic acid]、犬尿酸(kynurenic acid)和双环前列腺素E2(bicyclo prostaglandin E2),涉及的通路包括组氨酸、嘧啶、丙氨酸、天门冬氨酸、谷氨酸、泛酸和色氨酸代谢及辅酶a生物合成等。六君子汤对4NQO诱导的食管癌模型小鼠发挥治疗作用,其作用机制可能与调节小鼠体内氨基酸代谢、炎症反应和免疫功能有关。

关键词：六君子汤食管癌血清代谢组学 4-硝基喹啉-N-氧化物

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苍龟探穴针法临床应用及其特色

世界中医药 2024年第14期19卷 2143-2147页

作者：张优雅华金双陈放龚佳佳河南中医药大学郑州450046 河南中医药大学中医学院/仲景学院郑州450046

苍龟探穴针法首见于明代徐凤所著的《金针赋》,为“飞经走气”四法之一,以“一退三进,钻剔四方”为技术关键,临床实践已经证实该针法的有效性和安全性,其具有常规针刺手法无法比拟的优势,广泛应用于运动系统、消化系统、神经系统、生殖... 详细信息

苍龟探穴针法首见于明代徐凤所著的《金针赋》,为“飞经走气”四法之一,以“一退三进,钻剔四方”为技术关键,临床实践已经证实该针法的有效性和安全性,其具有常规针刺手法无法比拟的优势,广泛应用于运动系统、消化系统、神经系统、生殖系统、五官科类病症,疗效显著。本文对苍龟探穴针法的渊源、演变、临床应用规律、手法特色进行归纳总结,旨在深入探讨古典针法之精髓,以期为古典针法的进一步推广应用提供理论支撑。

关键词：飞经走气苍龟探穴针法渊源演变理论研究手法特色临床应用

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中药单体激活棕色脂肪组织治疗肥胖研究进展

中国中西医结合杂志 2024年第6期44卷 752-757页

作者：李萍张瑞航锁梦涵尹娜河南中医药大学医学院郑州450046 河南中医药大学第二临床医学院郑州450046

肥胖是一种由遗传、环境、心理和社会因素引起的慢性代谢性疾病,其特征是白色脂肪组织(white adipose tissue,WAT)和棕色脂肪组织(brown adipose tissue,BAT)的不平衡。根据调查,中国成年女性总体肥胖的比例为14.4%,男性为16.0%,超过1/... 详细信息

肥胖是一种由遗传、环境、心理和社会因素引起的慢性代谢性疾病,其特征是白色脂肪组织(white adipose tissue,WAT)和棕色脂肪组织(brown adipose tissue,BAT)的不平衡。根据调查,中国成年女性总体肥胖的比例为14.4%,男性为16.0%,超过1/7居民已达到整体肥胖标准.

关键词：棕色脂肪组织中药单体慢性代谢性疾病肥胖标准白色脂肪组织治疗肥胖 WAT