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白细胞介素-4对肠道期旋毛形线虫感染的保护作用

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2024年第3期42卷 354-359,366页

作者：骆泽妮吴安琪汪志锴潘晋孙希萌首都医科大学基础医学院病原生物学系北京100069 首都医科大学基础医学院北京100069

目的探讨小鼠白细胞介素-4 (IL-4)对肠道期旋毛形线虫感染的保护作用。方法消化旋毛虫保种小鼠肌肉,收集肌幼虫,超声破碎后离心,取上清制备旋毛虫抗原。将10只野生型BALB/c小鼠随机分成未感染组和野生感染组,每组5只;另取4只IL-4敲除(... 详细信息

目的探讨小鼠白细胞介素-4 (IL-4)对肠道期旋毛形线虫感染的保护作用。方法消化旋毛虫保种小鼠肌肉,收集肌幼虫,超声破碎后离心,取上清制备旋毛虫抗原。将10只野生型BALB/c小鼠随机分成未感染组和野生感染组,每组5只;另取4只IL-4敲除(IL-4KO) BALB/c小鼠作为IL-4KO感染组。野生感染组和IL-4KO感染组每鼠灌胃旋毛虫肌幼虫400条,未感染组灌胃等体积PBS。感染旋毛虫后8 d,采集各组小鼠眼眶静脉血,离心收集血清,ELISA检测单核细胞趋化因子1 (MCP-1)含量。剖取十二指肠和近端空肠,制备石蜡切片后进行苏木精-伊红(HE)染色,使用Aperio ImageScope 12.4.3测量测量十二指肠、空肠的肠绒毛和隐窝的长度与杯状细胞的数量和大小,计算肠绒毛长度/隐窝长度的比值(V/C)和杯状细胞数/绒毛长度的比值(GC/V)。分离肠系膜淋巴结中的淋巴细胞,与旋毛虫抗原(10μg/ml)共培养72 h,收集细胞上清,高通量液相蛋白芯片(Luminex)技术检测IL-1β、IL-12p70、IL-2、IL-5、IL-6、干扰素γ (IFN-γ)、肿瘤坏死因子α (TNF-α)的含量。使用SPSS 26.0统计软件对数据进行分析,两两比较采用独立样本t检验,多样本比较采用单因素方差分析。结果 ELISA结果显示,未感染组、野生感染组、 IL-4KO感染组小鼠血清中MCP-1含量分别为(344.90±21.80)、(350.50±38.30)、(467.94±190.01) pg/ml,IL-4KO感染组高于野生感染组(t=0.681,P 0.05)外,IL-4KO感染组均高于野生感染组(F=5.52、24.73、48.72、5.00、123.10、50.55,P 免疫保护作用,能够降低小鼠血清中MCP-1含量,减缓十二指肠及空肠的炎症反应,抑制炎性细胞因子的分泌。

关键词：旋毛形线虫白细胞介素-4 肠道期感染抵抗作用

结核杆菌DnaA蛋白在耻垢分枝杆菌中的同源表达

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中国生物工程杂志 2010年第8期30卷 72-75页

作者：周爱萍陈艳炯李薇张旭燕徐纪茹西安交通大学医学院免疫学与病原生物学系西安710061

目的:在耻垢分枝杆菌中表达重组结核杆菌DnaA蛋白并对表达产物进行鉴定。方法:用PCR的方法扩增结核杆菌dnaA基因并克隆至表达载体pMF406中,构建重组大肠杆菌-分枝杆菌穿梭质粒pMF-dnaA。经双酶切及测序鉴定后,用电转化的方法将重组质粒... 详细信息

目的:在耻垢分枝杆菌中表达重组结核杆菌DnaA蛋白并对表达产物进行鉴定。方法:用PCR的方法扩增结核杆菌dnaA基因并克隆至表达载体pMF406中,构建重组大肠杆菌-分枝杆菌穿梭质粒pMF-dnaA。经双酶切及测序鉴定后,用电转化的方法将重组质粒转至耻垢分枝杆菌mc2155中。用0.02%乙酰胺诱导重组耻垢分枝杆菌,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blotting检测和鉴定。结果:重组耻垢分枝杆菌构建成功,SDS-PAGE及Western blotting结果显示该重组耻垢杆菌可以实现结核杆菌DnaA蛋白的同源高效表达。结论:结核杆菌DnaA蛋白的同源表达为结核杆菌DNA复制机制的研究奠定了基础。

关键词：结核分枝杆菌耻垢分枝杆菌 DnaA蛋白同源表达

氧化苦参碱调节CIA小鼠滤泡辅助性T细胞的研究

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中国免疫学杂志 2020年第19期36卷 2371-2374页

作者：曹干王宁萍崔振华王佩佩杨勇娅张艳丽(指导) 宁夏医科大学基础医学院病原生物学与免疫学系银川750004 周口市中心医院周口466000

目的:探讨氧化苦参碱(OMT)对胶原诱导性关节炎(CIA)小鼠滤泡辅助性T(Tfh)细胞比例和功能的影响。方法:构建牛Ⅱ型胶原和完全弗氏佐剂诱导的DBA/1J CIA小鼠模型,于首次免疫后第15天腹腔注射不同剂量的OMT,持续30 d。监测CIA小鼠的关节肿... 详细信息

目的:探讨氧化苦参碱(OMT)对胶原诱导性关节炎(CIA)小鼠滤泡辅助性T(Tfh)细胞比例和功能的影响。方法:构建牛Ⅱ型胶原和完全弗氏佐剂诱导的DBA/1J CIA小鼠模型,于首次免疫后第15天腹腔注射不同剂量的OMT,持续30 d。监测CIA小鼠的关节肿胀程度及关节炎评分;HE染色观察小鼠踝关节组织病理变化;提取脾细胞用流式细胞术检测Tfh细胞比例;采集小鼠眼球血,ELISA法测定小鼠血清Ⅱ型胶原抗体(CⅡ-Ab)和IL-21含量。结果:OMT可明显缓解CIA小鼠足爪肿胀,降低关节炎指数,减轻关节滑膜增生和炎症细胞浸润,降低脾Tfh细胞比例,抑制血清IL-21和CⅡ-Ab表达。结论:OMT可能通过调节Tfh细胞缓解RA。

关键词： CIA 氧化苦参碱类风湿关节炎 Tfh

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硫酸酯酶2与肝细胞癌关系的研究进展

中华肝胆外科杂志 2021年第1期27卷 74-77页

作者：韩少山刘润坤韩蕾刘青光西安交通大学第一附属医院肝胆外科 710061 西安交通大学医学部基础医学院病原生物学与免疫学系 710061

细胞分泌的硫酸酯酶2是一种内源性硫酸酯酶,可水解细胞外基质中或细胞膜外表面硫酸乙酰肝素链上的硫酸基团,可使结合在硫酸乙酰肝素蛋白聚糖上的生长因子解离,提高局部生长因子浓度,激活下游信号。硫酸酯酶2在多种肿瘤中高表达,在肝细... 详细信息

细胞分泌的硫酸酯酶2是一种内源性硫酸酯酶,可水解细胞外基质中或细胞膜外表面硫酸乙酰肝素链上的硫酸基团,可使结合在硫酸乙酰肝素蛋白聚糖上的生长因子解离,提高局部生长因子浓度,激活下游信号。硫酸酯酶2在多种肿瘤中高表达,在肝细胞癌中硫酸酯酶2表达升高与不良预后有关。硫酸酯酶2可通过激活肝癌细胞内多条信号通路促进肿瘤进展。抑制肝癌细胞硫酸酯酶2的活性,可抑制肝癌细胞的增殖、迁移及成瘤能力。本文就硫酸酯酶2与肝细胞癌关系的研究进展进行综述。

关键词：癌,肝细胞硫酸酯酶2 信号通路

小鼠FcγR Ⅱb胞外区重组蛋白的原核表达及对小鼠SLE模型的治疗作用研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2015年第11期35卷 806-811页

作者：雷泽华曹秀琴杨志伟宁夏医科大学基础医学院病原生物学与免疫学系银川750004 宁夏医科大学基础医学院生育力保持省部级共建教育部重点实验室银川750004

目的构建小鼠Fcγ receptor Ⅱb（FcγR Ⅱb ）胞外区蛋白原核表达载体pET-FcγRⅡb，诱导表达并纯化，观察其在系统性红斑狼疮（SLE）疾病中的预防与治疗作用。方法PCR扩增获得小鼠FcγR Ⅱb 基因，并将其定向克隆至原核表达载体pET-32... 详细信息

目的构建小鼠Fcγ receptor Ⅱb（FcγR Ⅱb ）胞外区蛋白原核表达载体pET-FcγRⅡb，诱导表达并纯化，观察其在系统性红斑狼疮（SLE）疾病中的预防与治疗作用。方法PCR扩增获得小鼠FcγR Ⅱb 基因，并将其定向克隆至原核表达载体pET-32a（＋），构建原核表达重组质粒小鼠pET-FcγR Ⅱb ，经PCR、限制性内切酶鉴定及测序分析正确后，转化大肠杆菌BL21（DE3），IFFG进行诱导蛋白表达，确定最佳诱导条件，经Western blot鉴定正确后，纯化目的蛋白。ELISA法检测纯化蛋白与小鼠血清中免疫复合物的结合能力。将MRL／lpr SLE小鼠预防组（周龄12周左右）和治疗组（周龄19周左右）各40只随机分成蛋白液60μl（4．8μg）、120μl组（9．6μg）、180μl（14．4μg）组以及对照PBS组4组，每组10只，通过尾静脉注射将蛋白液注射进入MRL／lpr SLE小鼠体内，连续注射4周，每周1次。注射完成后，观察1周并收集血清，用ELISA法对预防组与治疗组SLE小鼠的可溶性FcγR Ⅱb的含量以及小鼠抗双链DNA抗体含量进行检测。结果扩增出了小鼠FcγR Ⅱb基因，成功构建原核表达重组质粒小鼠pET—FcγRⅡb，IPTG诱导表达并纯化出重组蛋白。重组蛋白与小鼠血清具有结合力；预防组和治疗组蛋白组（含60μl、120μl和180μl组）分别与预防对照组和治疗对照组相比可溶性FcγRⅡb含量增加（P〈0．05），蛋白组（含60μl、120μl和180μl组）两两比较，差异有统计学意义（P均〈0．05）；小鼠抗双链DNA抗体含量检测结果显示预防组和治疗组蛋白组（含60μl、120μl和180μl组）分别与预防和治疗对照组相比，小鼠抗双链DNA抗体含量降低（P〈0．05）；预防和治疗蛋白组（含60μl、120μl和180μl组）分别进行两两比较后发现随着蛋白注射剂量的增加，小鼠抗双链DNA抗体含量逐渐降低（P〈0．05）。结论获得重组小鼠FcγR Ⅱb胞外区可溶性蛋白，初步证实其对SLE模型鼠具有一定的预防和治疗作用。

关键词：小鼠FcγR Ⅱb 可溶性治疗和预防 SLE

抗戊型肝炎病毒重组蛋白单克隆抗体的制备和初步应用

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南京医科大学学报（自然科学版） 2002年第5期22卷 368-369,385页

作者：赵宇陈文学孟继鸿季晓辉东南大学基础医学院病原生物学与免疫学系江苏南京210009 南京医科大学病原生物与免疫学教研室江苏南京210029

目的:制备抗-戊型肝炎病毒的单克隆抗体,并将其用于分析戊型肝炎病毒不同毒株结构蛋白的抗原表位。方法:采用来自墨西哥株(Mexicanstrain)的戊型肝炎病毒重组蛋白(p166Mex)免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经酶联... 详细信息

目的:制备抗-戊型肝炎病毒的单克隆抗体,并将其用于分析戊型肝炎病毒不同毒株结构蛋白的抗原表位。方法:采用来自墨西哥株(Mexicanstrain)的戊型肝炎病毒重组蛋白(p166Mex)免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经酶联免疫吸附试验(ELISA)法筛选阳性克隆,并将获得的单克隆抗体与戊型肝炎病毒缅甸株(Burmastrain)和美国株(USAstrain)的重组蛋白(p166Bur、p166US)进行交叉反应测定。结果:最终获得4株能稳定分泌抗-p166Mex的杂交瘤细胞株,即D8G10、E5E12、D4A3、B7E6。其中D8G10,E5E12和B7E6细胞株的培养上清液,还能分别与p166Bur和p166US重组蛋白发生阳性反应。结论:利用已获得的抗-p166Mex单克隆抗体,初步确定3种不同的戊型肝炎病毒重组蛋白(p166Bur、p166US、p166Mex)含有一种共同的抗原表位。

关键词：戊型肝炎病毒重组蛋白单克隆抗体抗原表位制备

问号钩端螺旋体侵入单核-巨噬细胞方式及其吞噬泡形成差异性研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2010年第10期30卷 881-886页

作者：王欢王艳芳丁士标严杰林旭瑷浙江大学医学院病原生物学系杭州310058 杭州师范大学基础医学部 310036

目的探讨问号钩端螺旋体（简称钩体）侵入人或鼠单核-巨噬细胞方式及其吞噬泡形成差异性.方法采用透射电镜观察问号钩体黄疸出血群赖型赖株侵入小鼠单核-巨噬样细胞J774A.1和佛波酯（PMA）激活的人单核细胞THP-1后吞噬泡形成情况.采... 详细信息

目的探讨问号钩端螺旋体（简称钩体）侵入人或鼠单核-巨噬细胞方式及其吞噬泡形成差异性.方法采用透射电镜观察问号钩体黄疸出血群赖型赖株侵入小鼠单核-巨噬样细胞J774A.1和佛波酯（PMA）激活的人单核细胞THP-1后吞噬泡形成情况.采用免疫荧光联合激光共聚焦显微镜及荧光分光光度仪等方法,观察细胞内吞抑制剂单丹磺酰尸胺（MDC）、氧化酚砷（PAO）阻断及内吞相关网格蛋白抗体封闭前后,J774A.1细胞和PMA激活的THP-1细胞内问号钩体赖株数量的变化.结果 J774A.1细胞内问号钩体存在于吞噬泡内,THP-1细胞内问号钩体无吞噬泡膜包绕.MDC和PAO能以剂量依赖方式抑制J774A.1和THP-1细胞内吞问号钩体,其中10 μmol/L以上MDC和1 μmol/L以上PAO阻断的J774A.1和THP-1细胞内问号钩体数量明显少于未阻断细胞（P＜0.05）.网格蛋白抗体封闭后,J774A.1和THP-1细胞内问号钩体数量也明显减少（P＜0.05）.结论问号钩体以网格蛋白依赖性内吞途径侵入人或鼠单核-巨噬细胞.人或鼠单核-巨噬细胞内问号钩体吞噬泡形成有明显差异,这可能是人或鼠感染问号钩体后发病情况不同的原因之一.

关键词：问号钩端螺旋体单核一巨噬细胞网格蛋白抗体内吞阻断

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嗜吞噬细胞无形体表面蛋白P44研究进展

中国人兽共患病学报 2020年第12期36卷 1038-1043页

作者：张秋宇王峰孙乐陈施华岳磊严敏昆明医科大学基础医学院病原生物学与免疫学系昆明650500 中国医学科学院医学生物学研究所昆明650118

P44是嗜吞噬细胞无形体p44/msp2基因家族编码的膜表面含量最多、研究最广泛的蛋白。其作为一个穿孔蛋白广泛参与病原体感染早期的黏附、入侵、免疫逃逸及新陈代谢等多种复杂生理活动,与嗜吞噬细胞无形体的致病机制密切相关,已成为当下... 详细信息

P44是嗜吞噬细胞无形体p44/msp2基因家族编码的膜表面含量最多、研究最广泛的蛋白。其作为一个穿孔蛋白广泛参与病原体感染早期的黏附、入侵、免疫逃逸及新陈代谢等多种复杂生理活动,与嗜吞噬细胞无形体的致病机制密切相关,已成为当下研究的热点分子。本文就该蛋白分子的主要生理功能、分子生物学特性等方面对其进行全面阐述。

关键词：嗜吞噬细胞无形体 p44/msp2 穿孔蛋白免疫逃逸

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黑胸大蠊不同发育阶段可溶性抗原特征分析

中国人兽共患病杂志 2004年第4期20卷 291-294页

作者：徐绍锐汪世平吴仕筠吕志跃李文凯彭先楚何卓中南大学湘雅基础医学院病原生物学系长沙410078

为了对黑胸大蠊的不同发育阶段蛋白质抗原进行免疫生化特性分析 ,采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS -PAGE)对黑胸大蠊不同发育阶段可溶性蛋白质组分进行分离鉴定通过酶联免疫印迹 (ELIB)技术分析不同发育阶段抗原的免疫学特性... 详细信息

为了对黑胸大蠊的不同发育阶段蛋白质抗原进行免疫生化特性分析 ,采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS -PAGE)对黑胸大蠊不同发育阶段可溶性蛋白质组分进行分离鉴定通过酶联免疫印迹 (ELIB)技术分析不同发育阶段抗原的免疫学特性。四种抗原蛋白经SDS -PAGE后银染色 ,均得到清晰的蛋白显色带。卵抗原、若虫抗原、雄成虫抗原、雌成虫抗原分别可见 13、2 8、2 6和 4 1条蛋白区带 ,其中主带分别为 2、10、10、13条 ,分子量大多位于 10kDa - 97kDa范围。具有免疫原性的蛋白质大多分布在 4 3kDa以上分子量范围 ,四种抗原组分相互之间有交叉抗原的存在。结果表明不同发育阶段黑胸大蠊的蛋白质组分从卵 -若虫 -成虫出现次第增多现象并趋于复杂化 ,这对研究黑胸大蠊的发育生物学特征具有一定的潜在意义。

关键词：黑胸大蠊可溶性抗原特征酶联免疫印迹十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳