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戊型肝炎病毒摩洛哥株非编码区基因序列鉴定及基因型分型

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中华微生物学和免疫学杂志 2004年第10期24卷 828-833页

作者：陈国兵孟继鸿东南大学基础医学院病原生物学与免疫学系南京210009

目的　检测戊型肝炎病毒 (HEV)摩洛哥株非编码区 (UTR)序列 ,探讨HEV非编码区序列能否作为其基因型分型的依据。方法　使用基于RNA连接酶的cDNA末端快速扩增法 (RLM RACE)扩增HEV摩洛哥株 5′和 3′端片段并测序。所得序列使用LASERGENE... 详细信息

目的　检测戊型肝炎病毒 (HEV)摩洛哥株非编码区 (UTR)序列 ,探讨HEV非编码区序列能否作为其基因型分型的依据。方法　使用基于RNA连接酶的cDNA末端快速扩增法 (RLM RACE)扩增HEV摩洛哥株 5′和 3′端片段并测序。所得序列使用LASERGENE和PHYLIP软件包与其他 2 9株HEV序列比较。结果　只有基于甲基化帽子结构的RLM RACE扩增出了 5′端片段。HEV摩洛哥株 5′端UTR有 2 6个核苷酸 ,3′端polyA之前有 6 5个核苷酸。基于 3′端UTR序列的进化树与基于全基因序列的进化树不全相同。HEV 3′端至少需要 10 0个左右核苷酸长的序列才可进行HEV基因型分型。结论　HEV摩洛哥株 5′端有甲基化帽子结构。HEV 3′端UTR序列不能完全代替全基因组序列进行基因型分型。部分序列替代全基因组进行基因型分型时需要考虑其部位和长度因素。

关键词： HEV 分型戊型肝炎病毒基因型非编码区基因序列核苷酸 RACE cDNA末端快速扩增进化树

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人、猪、禽戊型肝炎病毒血清学关系的研究

中华微生物学和免疫学杂志 2007年第7期27卷 581-586页

作者：梁久红孟继鸿东南大学基础医学院病原生物学和免疫学系南京210009

目的研究人、猪、禽戊型肝炎病毒(HEV)的血清学关系。方法应用ELISA分别以人、猪、禽HEV ORF2重组蛋白p166human、p166swine、p268avian检测人、猪、鸡血清及其他标本中抗- HEV IgG,用SAS软件进行统计学分析,同时进行序列同源性比较。结... 详细信息

目的研究人、猪、禽戊型肝炎病毒(HEV)的血清学关系。方法应用ELISA分别以人、猪、禽HEV ORF2重组蛋白p166human、p166swine、p268avian检测人、猪、鸡血清及其他标本中抗- HEV IgG,用SAS软件进行统计学分析,同时进行序列同源性比较。结果p166human和p166swine对HEV实验感染动物血清、HEV ORF2重组蛋白免疫血清和单克隆抗体均呈阳性反应,而p268avian均呈阴性反应。以p166human、p166swine、p268avian检测人、猪、鸡血清抗-HEV IgG,戊型肝炎患者血清检出率分别为98.5%、97.7%和1.5%,正常人血清为10.0%、10.0%和4.0%,猪血清为26.9%、25.6%和1.3%,鸡血清为4.3%、2.2%和33.3%。p268avian与p166human或p166swine的检出率差异有统计学意义(P学关系密切,而禽HEV与人、猪HEV抗原性差异有统计学意义,无血清学相关性。因此禽HEW与人、猪HEV的关系应予进一步考证。

关键词：人戊型肝炎病毒猪戊型肝炎病毒禽戊型肝炎病毒血清学关系

赖氨大黄酸对糖尿病大鼠肝脏的保护作用及其机制

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吉林大学学报（医学版） 2014年第3期40卷 499-503,I0001页

作者：刘晓庆甄永占郝晓方王梅梅章广玲河北联合大学基础医学院病原生物学与免疫学教研室河北唐山063000 河北联合大学基础医学院组织学与胚胎学教研室河北唐山063000

目的:探讨赖氨大黄酸(RHL)对糖尿病模型大鼠肝脏的保护作用,阐明RHL对肝脏的保护作用机制。方法:通过腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立大鼠糖尿病模型。将40只大鼠随机分为对照组、糖尿病模型组、25和50mg·kg-1 RHL治疗组,每组10只。采用... 详细信息

目的:探讨赖氨大黄酸(RHL)对糖尿病模型大鼠肝脏的保护作用,阐明RHL对肝脏的保护作用机制。方法:通过腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立大鼠糖尿病模型。将40只大鼠随机分为对照组、糖尿病模型组、25和50mg·kg-1 RHL治疗组,每组10只。采用硫代巴比妥酸法检测肝脏组织中丙二醛(MDA)水平,联苯三酚自氧化法和NADPH偶联法分别检测超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性;HE染色观察肝脏组织病理学变化;Nile red染色观察肝脏组织脂肪水平;Western blotting法检测脂肪合成相关蛋白表达水平。结果:与对照组比较,糖尿病模型组大鼠体质量减低,血糖、总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)水平升高(P<0.05),肝脏组织中SOD和GSH-Px活性降低(P<0.05),肝脏组织出现大量脂肪空泡和脂肪蓄积。糖尿病模型大鼠脂肪合成信号通路ERK1/2-SREBP-1c被激活;与模型组比较,25和50mg·kg-1 RHL治疗组大鼠脂肪合成信号通路被抑制。与模型组比较,RHL治疗组大鼠体质量无显著变化,但血糖、TG和TC水平显著降低(P<0.05),SOD和GSH-Px活性显著升高(P<0.05)。与糖尿病模型组比较,RHL治疗组大鼠肝脏组织中的脂肪空泡和脂肪蓄积明显减少。结论:RHL能抑制氧化应激、肝脏脂肪变性和脂肪蓄积从而发挥对糖尿病大鼠肝脏的保护作用。

关键词：赖氨大黄酸糖尿病肝脏脂肪肝

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人蠕形螨病:一种新现的螨源性皮肤病

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2016年第5期34卷 456-462,472页

作者：赵亚娥西安交通大学基础医学院病原生物学与免疫学系西安710061

人类发现蠕形螨已有175年的历史,但因蠕形螨在人群中的感染率高而发病率低以及感染螨荷与临床症状不完全相关,使得临床医生一直质疑蠕形螨的致病性。近几十年来,随着国内外有关蠕形螨感染引起皮肤损害的病例不断报道,其致病性逐渐引起... 详细信息

人类发现蠕形螨已有175年的历史,但因蠕形螨在人群中的感染率高而发病率低以及感染螨荷与临床症状不完全相关,使得临床医生一直质疑蠕形螨的致病性。近几十年来,随着国内外有关蠕形螨感染引起皮肤损害的病例不断报道,其致病性逐渐引起了人们的关注。国内人们对蠕形螨的致病性认识不足,仅限于酒渣鼻与蠕形螨感染可能存在关联,蠕形螨感染引起的丘疹、脓疱等面部其他部位出现的损害基本处于误诊和漏诊状况。本文主要介绍蠕形螨病的发现过程、典型病例、致病机制、临床诊断和治疗,旨在提高全社会尤其是临床皮肤病医生对蠕形螨病的认识和重视。

关键词：新现蠕形螨病典型病例致病机制诊断治疗

探讨BCG初次免疫结核杆菌DNA疫苗加强免疫方案的效应

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第7期23卷 591-594页

作者：唐权窦骏赵枫姝禇莉莉潘猛王永仿东南大学基础医学院病原生物学与免疫学系江苏南京210009

目的:探讨BCG初次免疫(BCG-prime),结核杆菌共表达DNA疫苗加强免疫(DNA疫苗-boost)的策略对小鼠的免疫效果。方法:将BCG及结核杆菌重组DNA疫苗依次免疫小鼠,通过检测CTL和NK细胞的杀伤活性和特异性淋巴细胞增殖,以及小鼠血清抗体及细胞... 详细信息

目的:探讨BCG初次免疫(BCG-prime),结核杆菌共表达DNA疫苗加强免疫(DNA疫苗-boost)的策略对小鼠的免疫效果。方法:将BCG及结核杆菌重组DNA疫苗依次免疫小鼠,通过检测CTL和NK细胞的杀伤活性和特异性淋巴细胞增殖,以及小鼠血清抗体及细胞因子的水平,观测BCG-prime、共表达结核杆菌Ag85A/GM-CSFDNA疫苗boost策略对小鼠的免疫效果。结果:采用prime-boost免疫策略组的小鼠CTL的杀伤活性明显增强、特异性淋巴细胞明显增殖、IFN-γ的水平明显增高,NK细胞杀伤活性与对照组相比也有一定提高,但未超过BCG单独免疫效果。免疫小鼠血清特异性抗体的滴度超过单独DNA疫苗免疫组。结论:在采用BCG-prime-结核杆菌DNA疫苗boost免疫策略后,能增强对小鼠的免疫效应,尤其是Th1型细胞免疫反应增强明显,为进一步在动物体内进行保护性效应试验的研究提供了实验依据。

关键词：结核杆菌抗原85A BCG DNA疫苗 prime-boost免疫策略

慢性HBV感染者组织学免疫耐受状态无创诊断指标及相关模型的建立与评价

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临床肝胆病杂志 2025年第12期40卷 2392-2398页

作者：杜欣雨李嘉蒋贝赵坤宇胡月王凤梅鲁凤民郑州大学医学科学院精准医学中心郑州 450052 天津市第二人民医院肝病科天津 300192 天津市第二人民医院天津市肝病医学研究所天津 300192 北京大学人民医院北京大学肝病研究所北京 100044 天津市第一中心医院肝内科天津 300192 北京大学基础医学院病原生物学系暨北京大学感染病研究中心北京 100191

目的慢性HBV感染自然史多有组织学意义上的免疫耐受状态，免疫耐受状态一旦打破，需立即启动抗病毒治疗。通过对免疫介导的肝损伤与HBV病毒学指标进行相关性分析，精准定义肝组织学免疫耐受状态的患者。方法以2010年1月—2022年12月中... 详细信息

目的慢性HBV感染自然史多有组织学意义上的免疫耐受状态，免疫耐受状态一旦打破，需立即启动抗病毒治疗。通过对免疫介导的肝损伤与HBV病毒学指标进行相关性分析，精准定义肝组织学免疫耐受状态的患者。方法以2010年1月—2022年12月中国人民解放军总医院第五医学中心、天津市第二人民医院、上海瑞金医院和浙江省台州医院收集的HBeAg阳性且HBV DNA>2×106 IU/mL未经抗病毒治疗的577例慢性乙型肝炎患者为研究对象。通过肝组织活检确定肝损伤情况，检测血清ALT、AST水平及病毒学指标。分析现有各大指南无创指标特别是HBV DNA载量界值不同的情况下，肝组织免疫耐受状态患者所占比例。进一步尝试以与肝组织免疫病理损伤程度相关性消失时的血清HBV DNA为新的阈值，联合多因素指标建立组织学免疫耐受状态的诊断模型。计量资料两组间比较采用Mann-Whitney U检验。计数资料两组间比较采用χ2检验。采用Spearman法进行相关性分析。采用二元Logistic回归分析建立多因素诊断模型，并应用受试者工作特征曲线下面积（AUC）明确各模型的诊断效能，AUC的比较采用Z检验。结果中国2022版、EASL 2017版、AASLD 2018版、APASL 2015版慢性乙型肝炎防治指南病毒学无创指标所鉴定出的免疫耐受状态患者中符合本研究定义（HBV DNA>2×106 IU/mL）的组织学免疫耐受状态的比例分别为47.0%、38.5%、36.0%、44.6%，均未超过50%。当将血清HBV DNA阈值升至>2×108 IU/mL时，尽管免疫介导的肝损伤与HBV DNA相关性消失（r=-0.029，P=0.704），此时肝组织免疫耐受状态患者所占比例也仅为52.0%。在血清HBV DNA>1×108的HBeAg阳性患者队列（n=251）中，显著肝损伤组（n=140）和无显著肝损伤组（n=111）HBsAg、HBeAg、HBV DNA、ALT及AST水平比较，差异均有统计学意义（P值均学免疫耐受状态的独立影响因素（P值均2×108 IU/mL的HBeAg阳性慢性HBV感染者中，AST>30.5 U/L时，提示组织学免疫耐受状态可能被“打破”。

关键词：乙型肝炎, 慢性免疫耐受诊断

载体和基因片段的选择对戊型肝炎病毒基因免疫抗原表达的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2006年第1期22卷 22-25页

作者：房雪峰王立新孟继鸿董晨田华翟理杰东南大学基础医学院病原生物学和免疫学系江苏南京210009

目的比较不同载体和不同大小的目的基因片段对戊型肝炎病毒(HEV)基因免疫抗原表达的影响,为基于HEV中和抗原表位的HEV基因免疫提供一定的依据。方法将含Ⅳ型HEV中国株中和抗原表位的p166和p179片段编码基因分别克隆入pTR421和pCDNA3.1... 详细信息

目的比较不同载体和不同大小的目的基因片段对戊型肝炎病毒(HEV)基因免疫抗原表达的影响,为基于HEV中和抗原表位的HEV基因免疫提供一定的依据。方法将含Ⅳ型HEV中国株中和抗原表位的p166和p179片段编码基因分别克隆入pTR421和pCDNA3.1两种真核表达载体,用脂质体介导基因转染HepG2人肝癌细胞系,经间接免疫荧光和Western blot分析以及将质粒注射小鼠局部肌肉组织后经免疫组织化学染色检测,分析目的基因在体内外的表达水平。结果成功构建了pTR421-166、pTR421-179、pCDNA3.1-166和pCDNA3.1-179四种重组质粒,经限制性内切酶双酶切和核苷酸测序鉴定,编码基因正确无误;pTR421-179转染的细胞以及注射小鼠的局部肌肉组织可以检测到p179的表达,而pCDNA3.1-179、pCDNA3.1-166以及pTR421-166均检测不到目的基因在体内、外的抗原表达。结论载体和目的基因片段的选择显著影响HEV抗原在体内、外的表达,直接关系到基因免疫的成功与否。

关键词：戊型肝炎病毒基因免疫中和抗原表位基因表达

氧化苦参碱治疗小鼠胶原诱导性关节炎的作用机制

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中国中药杂志 2021年第22期46卷 5895-5901页

作者：詹静慧王佩佩崔振华岳晓琪张艳丽宁夏医科大学基础医学院病原生物学与免疫学系宁夏银川750004

苦参为豆科槐属植物苦参Sophorae flavescenstis的干燥根,具有抗炎、镇痛、抑菌、抗病毒、抗肿瘤等药理活性,在医药领域有广泛应用。该实验以苦参中的有效成分氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)为研究对象,探究氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)经“... 详细信息

苦参为豆科槐属植物苦参Sophorae flavescenstis的干燥根,具有抗炎、镇痛、抑菌、抗病毒、抗肿瘤等药理活性,在医药领域有广泛应用。该实验以苦参中的有效成分氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)为研究对象,探究氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)经“TLR9-MyD88-STAT3”通路对胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)小鼠B细胞的功能影响从而发挥抗类风湿关节炎的作用。构建牛Ⅱ型胶原和完全弗氏佐剂诱导的DBA/1J胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)小鼠模型,首次免疫后第15天腹腔注射OMT,持续30 d,每隔3 d监测CIA小鼠的关节肿胀度及关节评分;HE染色法观察关节组织病理学情况;采用免疫磁珠分离法(MACS)分选出CIA小鼠脾脏B淋巴细胞;运用ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)法检测小鼠血清IL-21的表达水平;Western blot检测B淋巴细胞上Toll样受体9(Toll-like receptors 9,TLR9)、信号转导及转录激活因子3(signal transducers and activators of transcription 3,STAT3)、磷酸化信号转导及转录激活因子3(phosphorylated signal transducers and activators of transcription3,p-STAT3)和白细胞介素21(interleukin-21,IL-21)的表达水平;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测B淋巴细胞上TLR9、STAT3、IL-21 mRNA的表达水平。结果表明OMT缓解CIA小鼠足爪肿胀度、降低关节炎指数、减轻滑膜炎性细胞浸润及增生程度,降低炎症因子水平,同时抑制B淋巴细胞中TLR9、STAT3、p-STAT3、IL-21的表达。因此,OMT可能通过调节B淋巴细胞上TLR9-STAT3通路从而缓解类风湿关节炎,为临床应用氧化苦参碱治疗类风湿关节炎提供有价值的依据。

关键词：类风湿关节炎 B淋巴细胞氧化苦参碱胶原诱导性关节炎

IL-21 gpi和sGM-CSF共同修饰的瘤苗构建及其抗肿瘤效应

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中国免疫学杂志 2009年第6期25卷 508-512页

作者：赵枫姝胡卫华窦骏褚莉莉何向锋余方流吴昀刘春生东南大学基础医学院病原生物学及免疫学系南京210009

目的:构建膜锚定IL-21和分泌性GM-CSF(sGM-CSF)双表达瘤苗,并对其抗肿瘤效应及其机制作初步探讨。方法:用分子生物学方法构建双表达IL-21 gpi和sGM-CSF重组质粒,将鉴定过的重组质粒以脂质体转染B16F10细胞制成瘤苗,用流式细胞仪检测转... 详细信息

目的:构建膜锚定IL-21和分泌性GM-CSF(sGM-CSF)双表达瘤苗,并对其抗肿瘤效应及其机制作初步探讨。方法:用分子生物学方法构建双表达IL-21 gpi和sGM-CSF重组质粒,将鉴定过的重组质粒以脂质体转染B16F10细胞制成瘤苗,用流式细胞仪检测转染瘤苗IL-21 gpi和sGM-CSF的表达。以瘤苗治疗荷瘤鼠,经观察小鼠肿瘤体积、生存率来分析瘤苗的抗瘤性,并检测了瘤苗治疗鼠的细胞免疫活性。结果:正确构建了pRSC/IL-21 gpi-sGM-CSF重组质粒,转染细胞可很好地表达膜锚定IL-21和分泌性GM-CSF,制备的瘤苗能有效地发挥抗肿瘤效应,其机制与瘤苗治疗鼠的脾细胞增殖活性、NK细胞及CD8+细胞细胞毒活性增强有关。结论:成功构建了具有抗肿瘤活性的膜锚定IL-21和分泌性GM-CSF双表达瘤苗,为进一步抗肿瘤免疫治疗研究奠定了基础。

关键词：瘤苗 IL-21 GPI GM-CSF