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SIRT2调控自噬的作用机制研究现状

中国畜牧兽医 2024年第2期51卷 513-520页

作者：秦天苗房晓欢李俊杰河北农业大学动物科技学院保定071000 河北省牛羊胚胎技术创新中心保定071000

沉默调节蛋白2(Sirtuin 2,SIRT2)是一种能够调节蛋白质乙酰化修饰的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)依赖性去乙酰化酶,是沉默信息调节因子(Sirtuins)家族成员之一,具有多种生物学功能,其在神经退化、细胞分化、葡萄糖和脂质代谢、肿瘤发生... 详细信息

沉默调节蛋白2(Sirtuin 2,SIRT2)是一种能够调节蛋白质乙酰化修饰的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)依赖性去乙酰化酶,是沉默信息调节因子(Sirtuins)家族成员之一,具有多种生物学功能,其在神经退化、细胞分化、葡萄糖和脂质代谢、肿瘤发生、细胞自噬等过程中均发挥调节作用。细胞自噬是一种通过清除异常蛋白或细胞器来维持机体稳态的保护机制,具有促进细胞更新和保持质量的作用。细胞自噬可分为3种主要形式,包括巨自噬、微自噬和分子伴侣介导的自噬,均通过溶酶体来对受损的细胞器、错误折叠和聚集的蛋白质及其他大分子物质进行降解或回收。其中,巨自噬研究最多,分为非选择性巨自噬(即常说的自噬)和选择性巨自噬。线粒体自噬是真核细胞中选择性去除或降解受损和多余线粒体的主要途径,也是SIRT2在细胞中主要调控的一种选择性巨自噬。作者主要综述了SIRT2在自噬及线粒体自噬上的调控作用及机制,以期为后续更深入地研究SIRT2在哺乳动物生理上的更多调控功能及其在各类疾病上的治疗作用提供参考和方向。

关键词：沉默调节蛋白2(SIRT2) 自噬线粒体自噬调控机制

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羊GV期卵母细胞玻璃化冷冻保存研究进展

家畜生态学报 2024年第6期45卷 9-13页

作者：张迪房晓欢李俊杰王志刚河北农业大学动物科技学院河北保定071000 河北省牛羊胚胎技术创新中心河北保定071000

生发泡(germinal vesial,GV)期卵母细胞由于未形成极为敏感的纺锤体,对于冷冻卵母细胞以及长期保存地方家畜种质资源具有无可比拟的优势。研究人员对此进行了广泛的关注,基于此,本文综述了羊GV期卵母细胞玻璃化冷冻保存的意义,分析了目... 详细信息

生发泡(germinal vesial,GV)期卵母细胞由于未形成极为敏感的纺锤体,对于冷冻卵母细胞以及长期保存地方家畜种质资源具有无可比拟的优势。研究人员对此进行了广泛的关注,基于此,本文综述了羊GV期卵母细胞玻璃化冷冻保存的意义,分析了目前羊GV期卵母细胞冷冻保存过程中存在的问题,总结了有效提高卵母细胞冷冻效率的一些解决方法,对提高羊GV期卵母细胞冷冻保存效率具有一定的借鉴与参考。

关键词：绵羊山羊卵母细胞 GV期玻璃化冷冻

体细胞冷冻保存技术及其在动物遗传资源保护中的应用研究进展

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中国畜牧杂志 2024年第1期60卷 1-5页

作者：孙清漪房晓欢李俊杰河北农业大学动物科技学院河北保定071000 河北省牛羊胚胎技术创新中心河北保定071000

体细胞冷冻保存技术是指将体细胞置于超低温条件下,新陈代谢几乎停止,从而长期保存体细胞的一种技术,该技术对于体细胞克隆、诱导性多能干细胞等具有重要意义,同时也是建立动物体细胞库的关键技术。本文综述了体细胞冷冻保存原理与冷冻... 详细信息

体细胞冷冻保存技术是指将体细胞置于超低温条件下,新陈代谢几乎停止,从而长期保存体细胞的一种技术,该技术对于体细胞克隆、诱导性多能干细胞等具有重要意义,同时也是建立动物体细胞库的关键技术。本文综述了体细胞冷冻保存原理与冷冻损伤机制、新型冷冻保护剂、冷冻保存方法以及冷冻保存技术在动物遗传资源保护上的应用,以期为体细胞冷冻保存技术的研究与应用提供参考。

关键词：体细胞冷冻保存遗传资源保护进展

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瘦素及其受体在牦牛附睾的时空表达特性

农业生物技术学报 2024年第2期32卷 334-343页

作者：王晓艳崔燕余四九马睿何俊峰张虔龙敏甘肃农业大学动物医学院甘肃省牛羊胚胎工程技术研究中心

瘦素(leptin)及瘦素受体(leptin receptor, LEPR)在雄性动物生殖调控中发挥重要作用。为探究Leptin及LEPR在性成熟前后牦牛(Bos grunniens)附睾头、体、尾中的分布特点及表达动态，本研究采集性成熟前(幼年)及性成熟后(成年,老年)牦牛... 详细信息

瘦素(leptin)及瘦素受体(leptin receptor, LEPR)在雄性动物生殖调控中发挥重要作用。为探究Leptin及LEPR在性成熟前后牦牛(Bos grunniens)附睾头、体、尾中的分布特点及表达动态，本研究采集性成熟前(幼年)及性成熟后(成年,老年)牦牛附睾不同部位(头,体,尾)，利用qPCR、Western blot和免疫组织化学染色方法检测Leptin及LEPR在不同年龄牦牛附睾头、体、尾中的分布及表达水平。免疫组化结果显示，Leptin和LEPR主要表达在附睾上皮、基底细胞和平滑肌细胞，其中附睾上皮呈强阳性表达；q PCR结果显示，Leptin及LEPR在幼年牦牛附睾头、体和尾的基因表达量显著高于成年和老年(P0.05);Western blot结果显示，Leptin及LEPR蛋白在不同年龄牦牛附睾中均有表达，其表达量在幼年组最高，从幼年、成年及老年，依次呈递减趋势，且各年龄之间差异显著(P0.05);Leptin及LEPR蛋白在成年和老年附睾中的表达量为附睾尾>附睾头>附睾体，且各部位之间差异显著(P<0.05)。结果表明，牦牛性成熟前后附睾中的Leptin及LEPR表达量发生显著变化，并且性成熟后维持在一定水平持续表达至老年，在附睾不同区段的表达也存在差异，附睾尾表达相对最高，说明尾部环境具有较高的Leptin浓度。Leptin及LEPR在牦牛附睾中的时空表达差异提示二者对于牦牛精子的成熟、存储和能量保存方面具有重要意义，本研究为探究高原环境下雄性牦牛的生殖调控机制提供研究资料。

关键词：牦牛附睾瘦素(leptin) 瘦素受体(LEPR)

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奶牛乳源外泌体提取方法的优化及效果评价

动物营养学报 2024年第2期36卷 1265-1276页

作者：赵莹王靖雷王萌王立斌张倩李志杰马鑫余四九潘阳阳甘肃农业大学动物医学院兰州730070 甘肃省牛羊胚胎工程技术研究中心兰州730070

乳源外泌体在疾病治疗及载体效应等领域应用颇为广泛,但目前乳源外泌体的提取方法仍步骤繁琐,耗时长,难以推广应用。为建立省时、高效和稳定的乳源外泌体提取方法,本试验在前期已建立的差速超速离心法、凝乳酶法、乙酸法及蔗糖密度梯度... 详细信息

乳源外泌体在疾病治疗及载体效应等领域应用颇为广泛,但目前乳源外泌体的提取方法仍步骤繁琐,耗时长,难以推广应用。为建立省时、高效和稳定的乳源外泌体提取方法,本试验在前期已建立的差速超速离心法、凝乳酶法、乙酸法及蔗糖密度梯度离心法的基础上,通过增加离心速度、改变乙酸或凝乳酶用量、调整蔗糖密度梯度、减少离心步骤进行逐一优化。通过透射电子显微镜、纳米粒子跟踪分析、蛋白浓度检测、免疫印迹鉴定比较乳源外泌体形态结构、粒径大小、蛋白浓度、粒子浓度、特异性标记蛋白的差异,筛选出最优提取方法。结果显示:4种优化后提取方法均可分离获得具有典型“茶托”形状,介于30~200 nm的细胞外囊泡,但优化后的乙酸法提取乳源外泌体最多,视野密度高达80%以上,粒径大小为(151.0±47.2)nm,粒子浓度为6.2×10^(12)个/mL,均高于其他优化方法;优化后的乙酸法提取乳源外泌体的特异性标记蛋白[肿瘤易感基因101(TSG101)、热休克蛋白70(HSP70)、CD81和CD9]均表达量较高,其他3种优化方法提取到的乳源外泌体特异性标记蛋白发生不同程度降解,且提取乳源外泌体所得样品蛋白浓度均显著高于优化的乙酸法(P<0.05)。结果表明,优化后奶牛乳源外泌体乙酸提取法具有方法简单、耗时短、纯度高、特异性标记蛋白稳定等优点,该方法为外泌体需求量大的试验、医疗、工业生产等奠定一定基础。

关键词：乳源外泌体差速超速离心法乙酸凝乳酶提取鉴定

Hippo信号通路下游关键因子YAP和TEAD-1在牦牛胎盘发育中的表达与定位

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农业生物技术学报 2024年第6期32卷 1342-1352页

作者：钱文洁杜培岩李一娟周应聪姚颖李柳杨余志鹏柳民意张红强崔燕余四九樊江峰甘肃农业大学动物医学院甘肃省牛羊胚胎工程技术研究中心

Yes相关蛋白(Yes-associated protein, YAP)和TEA转录因子1 (TEA domain transcription factor 1,TEAD-1)是Hippo信号通路的核心因子，在调控细胞增殖和器官生长方面发挥重要作用。为检测YAP和TEAD-1在牦牛(Bos grunniens)胎盘不同发育时期的表达，探究Hippo信号通路在调控胎盘生长发育方面的生理作用，本研究采集妊娠牦牛胎盘组织样品，以胎儿头臀距为依据，将其分为不同发育阶段(5月龄)，采用qRT-PCR、Western blot和免疫组织化学(immunohistochemistry, IHC)技术对YAP和TEAD-1的表达情况进行了检测分析。结果显示，在牦牛胎盘组织中，YAP和TEAD-1主要表达于胎儿绒毛膜滋养巨细胞、柱状滋养细胞和母体子宫肉阜隐窝上皮细胞。随着妊娠的进行，YAP和TEAD-1mRNA及其蛋白在牦牛胎盘组织中的表达量有明显的变化，且YAP和TEAD-1的变化趋势基本一致。这种协同表达特性及其表达量与胎盘发育阶段的相关性，提示YAP和TEAD-1可能通过Hippo信号通路参与了牦牛胎盘发育的调控，并在胎盘组织生理功能的发挥和妊娠维持方面发挥重要作用。研究结果为阐明牦牛胎盘发育及妊娠调控机制提供理论依据。

关键词：牦牛胎盘 Yes相关蛋白(YAP) TEA转录因子1 (TEAD-1)

丝胶蛋白对承德无角黑山羊精液冷冻保存的影响

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畜牧兽医学报 2024年

作者：张文涛于洋齐雅天赵炜张洪军陶晨雨夏威李俊杰河北农业大学动物科技学院丰宁满族自治县农业农村局围场满族蒙古族自治县农业农村局河北省牛羊胚胎技术创新中心

旨在探究丝胶蛋白对承德无角黑山羊精液冷冻保存效果的影响。本试验采用假阴道法采集3只健康状态良好的承德无角黑山羊精液，随机分为6组，分别为对照组和在OptiXcell 2稀释液中添加不同浓度的（0.2%、0.4%、0.6%、0.8%、1%）丝胶蛋白... 详细信息

旨在探究丝胶蛋白对承德无角黑山羊精液冷冻保存效果的影响。本试验采用假阴道法采集3只健康状态良好的承德无角黑山羊精液，随机分为6组，分别为对照组和在OptiXcell 2稀释液中添加不同浓度的（0.2%、0.4%、0.6%、0.8%、1%）丝胶蛋白试验组，每组设置5个重复，精液稀释完后进行细管分装、平衡、冷冻；精液冷冻-解冻后检测精子活力、顶体完整率、质膜完整率、总抗氧化能力（T-AOC）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）活性、丙二醛（MDA）含量、线粒体膜电位、ATP含量等指标，并进行数据统计。结果显示，承德无角黑山羊精液冷冻稀释液中添加不同浓度丝胶蛋白均能够提高冻融后精子质量。其中，添加浓度为0.6%丝胶蛋白与其他各浓度相比，可显著提高精子冷冻-解冻后的精子活力、顶体完整率、质膜完整率以及线粒体膜电位和ATP含量，并且使抗氧化酶T-AOC、GSH-Px、SOD、CAT活性分别提高至（13.61±0.39） mmol·g-1、（26.52±1.30） U·mg-1、（165.45±11.10） U·mg-1、（13.76±0.30） U·mg-1，降低MDA值至（3.15±0.20） μmol·mg-1。综上，在冷冻稀释液中添加不同浓度的丝胶蛋白均可提高承德无角黑山羊冷冻精液品质，且最适添加浓度为0.6%。

关键词：丝胶蛋白承德无角黑山羊抗氧化剂精液冷冻

低氧诱导因子-1α对牦牛肾小管上皮细胞中自噬相关因子表达的调控

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中国兽医科学 2024年

作者：卢鸿琴崔燕白雪峰卢增华谢夏婷甘肃农业大学动物医学院甘肃省牛羊胚胎工程技术研究中心

本研究旨在探究长期高海拔低氧环境对牦牛肾小管上皮细胞（RTECs）中自噬相关因子表达的影响。通过应用免疫组织化学、免疫荧光、qRT-PCR、Western-blot试验，比较了成年牦牛和黄牛肾脏中HIF-1α的分布和表达情况。免疫组织化学和免疫... 详细信息

本研究旨在探究长期高海拔低氧环境对牦牛肾小管上皮细胞（RTECs）中自噬相关因子表达的影响。通过应用免疫组织化学、免疫荧光、qRT-PCR、Western-blot试验，比较了成年牦牛和黄牛肾脏中HIF-1α的分布和表达情况。免疫组织化学和免疫荧光染色结果显示，HIF-1α在成年牦牛和黄牛肾脏组织中均呈阳性表达，主要分布在肾小管，集合管上皮细胞、肾小管上皮细胞中。WB和qRT-PCR结果表明，成年牦牛肾脏中HIF-1α的表达显著高于黄牛（P<0.0001）。使用原代培养的牦牛RTECs，通过MDC自噬染色等试验方法，研究了HIF-1α药物抑制和过表达对自噬相关因子表达作用。使用药物DMOG诱导RTECs中的HIF-1α的表达上调时，BNIP3、Beclin-1蛋白和mRNA的表达量升高（P<0.0001），而caspase-3降低（P<0.0001）；使用药物LW6诱导HIF-1α的表达下调时，BNIP3、Beclin-1蛋白和mRNA的表达量降低（P<0.001），而caspase-3（P<0.0001）升高。(结论)研究结果表明HIF-1α是调控牦牛肾脏中自噬相关因子表达的重要基因。

关键词：牦牛低氧诱导因子-1α(HIF-1α) 肾小管上皮细胞(RTECs) 自噬

地西泮结合抑制剂在牦牛不同大小卵泡中的表达与定位

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2024年第8期52卷 11-17页

作者：王立斌王强龙潘阳阳黄振华赵天丁天翊刘敏清崔燕余四九甘肃农业大学动物医学院甘肃省牛羊胚胎工程技术研究中心甘肃兰州730070

【目的】研究地西泮结合抑制剂(diazepam binding inhibitor, DBI)在牦牛不同大小卵泡中的表达水平与定位,探讨DBI蛋白在牦牛卵泡发育过程中的调控作用。【方法】采集牦牛卵巢组织,分离不同大小(直径8 mm)的卵泡。采用实时荧光定量方法(... 详细信息

【目的】研究地西泮结合抑制剂(diazepam binding inhibitor, DBI)在牦牛不同大小卵泡中的表达水平与定位,探讨DBI蛋白在牦牛卵泡发育过程中的调控作用。【方法】采集牦牛卵巢组织,分离不同大小(直径8 mm)的卵泡。采用实时荧光定量方法(qRT-PCR)检测DBI基因mRNA在牦牛不同大小卵泡中的相对表达量,并利用蛋白免疫印迹技术(Western-blotting, WB)检测DBI蛋白的表达情况。采用免疫组织化学方法(immunohisto chemistry, IHC)定位DBI蛋白在雌性牦牛完整成熟卵泡中的分布情况。采用免疫荧光技术(immunofluorescence, IF)检测DBI在牦牛卵母细胞中的定位。【结果】DBI基因mRNA和DBI蛋白在牦牛不同大小卵泡中均表达,但表达水平存在显著差异(P程中具有重要作用。

关键词：牦牛地西泮结合抑制剂卵泡发育卵母细胞表达与定位