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人β-防御素3转染脂肪干细胞成骨分化潜能及抗牙周炎致病菌的作用

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实用临床医药杂志 2022年第12期26卷 4-9页

作者：蒋莉莉张艳东胡硕红河北省张家口宣钢医院口腔科河北张家口075100 河北北方学院附属第二医院重症科河北张家口075100 海南省海口市总医院口腔科海南海口570100

目的探讨人β-防御素3(hβD-3)转染脂肪干细胞(ADSCs)成骨分化潜能及体外抗牙周炎致病菌的作用。方法体外提取人腹部脂肪组织,分离后用流式细胞仪鉴定人脂肪干细胞(hADSCs)免疫表型(CD29/CD44),体外培养hADSCs,将细胞分为对照组、空载... 详细信息

目的探讨人β-防御素3(hβD-3)转染脂肪干细胞(ADSCs)成骨分化潜能及体外抗牙周炎致病菌的作用。方法体外提取人腹部脂肪组织,分离后用流式细胞仪鉴定人脂肪干细胞(hADSCs)免疫表型(CD29/CD44),体外培养hADSCs,将细胞分为对照组、空载组与实验组(按hβD-3-hADSCs接种密度分为低密度组、中密度组和高密度组),对照组不作处理,空载组转染不含hβD-3基因的慢病毒载体,实验组利用质粒构建含hβD-3基因的慢病毒载体并转染hADSCs。空载组与实验组均加入成骨分化诱导液,对照组不作处理,在诱导7、14 d后,应用实时荧光定量聚合酶链反应检测3组细胞中成骨相关基因[碱性磷酸酶(ALP)、Ⅰ-型胶原蛋白(Col-Ⅰ)、骨桥蛋白(OPN)、骨钙素(OCN)]的表达量,以评价hADSCs的分化能力。测量抑菌圈的直径,设置抗生素阳性对照(米诺环素组、环丙沙星组),检测转染后的hADSCs对牙周致病菌葡萄球菌、卟啉单胞菌的抑菌活性。结果诱导7、14 d时,空载组与实验组的ALP、Col-Ⅰ、OPN、OCN mRNA相对表达量均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);空载组与实验组诱导14 d时的ALP、Col-Ⅰ、OPN、OCN mRNA相对表达量高于诱导7 d时,差异有统计学意义(P<0.05)。葡萄球菌抑菌实验中,低密度组抑菌圈小于米诺环素组与环丙沙星组,中密度组抑菌圈大于环丙沙星组,高密度组抑菌圈大于米诺环素组与环丙沙星组,差异有统计学意义(P<0.05)。卟啉单胞菌抑菌实验中,低密度组抑菌圈小于米诺环素组与环丙沙星组,中密度组抑菌圈大于米诺环素组,高密度组抑菌圈大于米诺环素组与环丙沙星组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论hβD-3转染可促进hADSCs成骨分化,且对牙周致病菌葡萄球菌、卟啉单胞菌均有较好的抗菌活性。

关键词：人β-防御素3 脂肪干细胞成骨分化牙周炎致病菌

重组人转化生长因子-β1对大鼠正畸牙移动模型成骨细胞分化及ERK/MAPK信号通路的影响

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口腔医学研究 2023年第2期39卷 118-123页

作者：林维龙吴晓沛何薇薇安峰河北北方学院附属第一医院口腔科河北张家口075000 张家口学院医学院口腔医学教研室河北张家口075000

目的:探讨重组人转化生长因子-β1(rhTGF-β1)对大鼠正畸牙移动模型细胞外信号调节激酶(ERK)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路及成骨细胞分化的影响。方法:将SD大鼠随机分为:对照组、模型组、rhTGF-β1低剂量组、rhTGF-β1中剂量组、r... 详细信息

目的:探讨重组人转化生长因子-β1(rhTGF-β1)对大鼠正畸牙移动模型细胞外信号调节激酶(ERK)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路及成骨细胞分化的影响。方法:将SD大鼠随机分为:对照组、模型组、rhTGF-β1低剂量组、rhTGF-β1中剂量组、rhTGF-β1高剂量组。模型组、rhTGF-β1低、中、高剂量组建立大鼠正畸牙移动模型,各组从造模第1天开始给药,rhTGF-β1(低、中、高)剂量组于双侧上颌第一磨牙近中牙龈黏膜下分别注射1.25、2.5、5 ng/mL的rhTGF-β1溶液0.1 mL,对照组注射0.1 mL生理盐水,每2 d给药1次,持续14 d。游标卡尺测量大鼠上颌第一磨牙移动距离;苏木精-伊红染色观察大鼠牙周及牙槽骨组织病理形态;酶联免疫吸附法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)水平;Western blot检测大鼠牙周及牙槽骨组织成骨相关蛋白[骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)、Runt相关转录因子2(Runx2)]和ERK/MAPK通路相关蛋白表达。结果:与对照组相比,模型组大鼠牙张力侧牙周组织膜纤维拉伸变长,组织间隙变宽,基质增生,成骨细胞数量大量减少近乎消失,呈现病理损伤,上颌第一磨牙移动距离、血清TNF-α、IL-6、RANKL、牙周及牙槽骨组织p-ERK1/2/ERK1/2、p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白表达水平明显升高,血清OPG、牙周及牙槽骨组织OCN、OPN、Runx2蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与模型组相比,rhTGF-β1低、中、高剂量组大鼠牙张力侧牙周及牙槽骨组织病理损伤逐步减轻,血清TNF-α、IL-6、RANKL、牙周及牙槽骨组织p-ERK1/2/ERK1/2、p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白表达水平依次降低,上颌第一磨牙移动距离、血清OPG、牙周及牙槽骨组织OCN、OPN、Runx2蛋白表达水平依次升高(P<0.05),且各组之间呈剂量依赖性。结论:rhTGF-β1可减轻大鼠正畸牙移动模型炎症反应,促使成骨分化,加速正畸牙移动,可能与抑制ERK/MAPK信号通路激活有关。

关键词：重组人转化生长因子-β1 大鼠正畸牙移动模型 ERK/MAPK信号通路成骨细胞分化

VEGF/VEGFR2通路在牙髓血运重建术模型大鼠牙髓血管新生中的作用

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中国老年学杂志 2023年第17期43卷 4246-4250页

作者：王芹李立恒王钟华河北北方学院附属第一医院口腔科河北张家口075000

目的探究血管内皮生长因子(VEGF)/VEGF受体(VEGFR)2在牙髓血运重建术(REPs)中的表达变化,揭示其调控牙髓血管新生的机制。方法取雄性SD大鼠25只,随机分为正常对照组、根尖周炎组、REPs术后7、14、28 d组,每组5只;正常对照组不做任何处理... 详细信息

目的探究血管内皮生长因子(VEGF)/VEGF受体(VEGFR)2在牙髓血运重建术(REPs)中的表达变化,揭示其调控牙髓血管新生的机制。方法取雄性SD大鼠25只,随机分为正常对照组、根尖周炎组、REPs术后7、14、28 d组,每组5只;正常对照组不做任何处理,根尖周炎组于左右两侧下颌第一磨牙处行牙髓摘除术,REPs术后7、14、28 d组在根尖周炎组基础上行REPs。苏木素-伊红(HE)染色观察左侧牙根尖及牙周组织形态变化;免疫组化染色法检测左侧牙根尖及牙周组织VEGF阳性表达情况;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测右侧牙根尖周组织肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β水平;以Western印迹检测右侧牙根尖周组织VEGFR2、骨桥蛋白(OPN)、整合素(αv)β3蛋白表达。结果与正常组相比,根尖周炎组可见牙根管壁薄、根尖孔呈开放状态、根管内坏死物质较多、根尖周炎性细胞浸润等病理现象,根尖周组织TNF-α及IL-1β水平、VEGF阳性表达水平、VEGFR2蛋白表达均显著升高,OPN、αvβ3蛋白表达均显著降低(均P<0.05);与根尖周炎组相比,REPs术后7、14、28 d组根管壁逐渐增厚、根尖孔逐渐闭合,根管内矿化基质、致密结缔组织逐渐生成,根尖周围骨细胞沉积逐渐明显,根尖周组织VEGF阳性表达水平、VEGFR2、OPN、αvβ3蛋白表达显著均增高,TNF-α及IL-1β水平显著均降低(均P<0.05)。结论REPs术可通过激活VEGF/VEGFR2通路,上调OPN、αvβ3蛋白表达,促进牙根生长及牙髓再生。

关键词：血管内皮生长因子(VEGF) VEGF受体(VEGFR)2 牙髓血运重建术牙髓血管新生牙周炎

环状RNA hsa_circ_0085576调控微小RNA-498/B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒整合位点1轴对口腔鳞状细胞癌细胞迁移和侵袭的影响

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国际口腔医学杂志 2024年第1期51卷 60-67页

作者：李立恒王蕊王晓明张智轶张璇安峰王芹张凡河北北方学院附属第一医院口腔科张家口075000 河北北方学院附属第一医院病理科张家口075000

目的探究环状RNA hsa_circ_0085576对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法使用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白印迹法检测OSCC细胞中hsa_circ_0085576、微小RNA-498(miR-498)以及B细胞特异性莫洛尼鼠... 详细信息

目的探究环状RNA hsa_circ_0085576对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法使用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白印迹法检测OSCC细胞中hsa_circ_0085576、微小RNA-498(miR-498)以及B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒整合位点1(BMI-1)的表达水平。使用CCK-8、划痕实验、Transwell实验以及qRT-PCR、蛋白印迹法分别检测SCC-15细胞增殖活力、迁移及侵袭能力以及相关基因和蛋白的相对表达量。结果OSCC细胞中hsa_circ_0085576与BMI-1表达上调,miR-498表达下调(P<0.05)。下调hsa_circ_0085576表达或过表达miR-498后SCC-15细胞的增殖活性、划痕愈合率、侵袭细胞数目以及细胞周期蛋白D1、波形蛋白表达水平下调,miR-498和E-钙黏蛋白表达水平上调(P<0.05);抑制miR-498表达可减弱下调hsa_circ_0085576表达对OSCC细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用;上调BMI-1表达可减弱过表达miR-498对OSCC细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用。结论下调hsa_circ_0085576表达可通过激活miR-498/BMI-1轴抑制OSCC细胞增殖、迁移及侵袭。

关键词：环状RNA hsa_circ_0085576 微小RNA-498 B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒整合位点1 口腔鳞状细胞癌

SSTF上调miR-495表达减缓高糖诱导的视网膜神经节细胞氧化损伤和凋亡

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医学研究与战创伤救治 2023年第6期36卷 573-578页

作者：白玫苗得雨李雅丽李亚坤吕建东郭向东吴忧河北北方学院附属第二医院眼科张家口075100 河北宣钢医院药剂科张家口075100 河北北方学院附属第二医院中医科张家口075100 河北省秦皇岛市第二医院眼科秦皇岛066600

目的探讨黄岑茎叶总黄酮(SSTF)对高糖诱导的视网膜神经节细胞(RGC-5)损伤的保护机制。方法根据处理方法不同将RGC-5细胞分成高糖(HG)组、对照(Con)组、HG+SSTF-低剂量(L)组、HG+SSTF-中剂量(M)组、HG+SSTF-高剂量(H)组、HG+miR-NC组、HG... 详细信息

目的探讨黄岑茎叶总黄酮(SSTF)对高糖诱导的视网膜神经节细胞(RGC-5)损伤的保护机制。方法根据处理方法不同将RGC-5细胞分成高糖(HG)组、对照(Con)组、HG+SSTF-低剂量(L)组、HG+SSTF-中剂量(M)组、HG+SSTF-高剂量(H)组、HG+miR-NC组、HG+miR-495组、HG+SSTF+anti-miR-NC组、HG+SSTF+anti-miR-495组,每组设置9复孔。检测MDA含量以及CAT、SOD活性。流式细胞术检测细胞凋亡。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-495表达。结果HG组RGC-5细胞凋亡率、MDA含量高于Con组(P<0.05),CAT、SOD的活性、miR-495表达低于Con组(P<0.05)。HG+SSTF-L组、HG+SSTF-M组、HG+SSTF-H组RGC-5细胞凋亡率、MDA含量低于HG组(P<0.05),CAT和SOD的活性、miR-495表达高于HG组(P<0.05)。HG+miR-495组RGC-5细胞凋亡率[(14.96±1.26)%]、MDA含量[(4.62±0.44)μmol/g]分别低于HG+miR-NC组[(33.28±2.25)%、(9.73±0.81)μmol/g],差异有统计学意义(P<0.05),CAT、SOD的活性、miR-495表达水平高于HG+miR-NC组(P<0.05)。HG+SSTF+anti-miR-495组RGC-5细胞凋亡率[(22.21±2.18%)]、MDA含量[(8.07±0.75)μmol/g]高于HG+SSTF+anti-miR-NC组[(9.19±0.84)%、(3.59±0.32)μmol/g],差异有统计学意义(P<0.05),CAT和SOD的活性、miR-495表达水平低于HG+SSTF+anti-miR-NC组(P<0.05)。结论SSTF通过上调miR-495表达减缓高糖诱导的视网膜神经节细胞氧化损伤和凋亡。

关键词：视网膜神经节细胞黄岑茎叶总黄酮 miR-495 细胞凋亡

25-羟维生素D在不同程度儿童龋齿中的变化及与病情程度的相关性

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临床误诊误治 2022年第5期35卷 126-128页

作者：翟浩张惠芳王丽娜王钟华张家口市第一医院口腔科河北张家口075000 河北北方学院附属第一医院口腔科河北张家口075000

目的探讨25-羟维生素D在不同程度儿童龋齿中的变化及与病情程度的相关性。方法选取2019年2月—2020年10月我院龋齿儿童116例纳入龋齿组,另选取同期本院无龋齿儿童100例纳入对照组,测定2组空腹血清25-羟维生素D水平。龋齿组据龋失补牙数... 详细信息

目的探讨25-羟维生素D在不同程度儿童龋齿中的变化及与病情程度的相关性。方法选取2019年2月—2020年10月我院龋齿儿童116例纳入龋齿组,另选取同期本院无龋齿儿童100例纳入对照组,测定2组空腹血清25-羟维生素D水平。龋齿组据龋失补牙数又分为A组(2~3个)、B组(4~7个)、C组(8~11个),比较3组血清25-羟维生素D水平,并分析患儿维生素D缺乏与龋齿严重程度的关系。结果龋齿组血清25-羟维生素D缺乏程度高于对照组,25-羟维生素D水平显著低于对照组(P<0.01)。A组血清25-羟维生素D水平显著高于B组及C组,B组血清25-羟维生素D水平显著高于C组(P<0.01)。龋齿患儿血清25-羟维生素D水平与龋齿严重程度呈负相关(r=-0.462,P<0.05)。结论龋齿患儿血清25-羟维生素D降低,且随着病情程度的加重明显下降,同时其水平与龋齿严重程度呈负相关。

关键词：龋齿儿童 25-羟维生素D 病情程度相关性

慢病毒介导睫状神经营养因子基因修饰嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤

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中国组织工程研究 2019年第17期23卷 2709-2715页

作者：马洁华张丹霍艳丽魏亚伟孙琳赵宇河北北方学院人体解剖学教研室河北省张家口市075000 河北张家口市第一医院口腔科河北省张家口市075000

背景:以往研究证实,睫状神经营养因子与嗅鞘细胞单独应用均对脊髓损伤具有一定的治疗作用,但两者联合应用是否有更好的治疗效果尚未见报道。目的:慢病毒介导睫状神经营养因子基因修饰嗅鞘细胞移植对大鼠脊髓损伤的作用及其相关机制。方... 详细信息

背景:以往研究证实,睫状神经营养因子与嗅鞘细胞单独应用均对脊髓损伤具有一定的治疗作用,但两者联合应用是否有更好的治疗效果尚未见报道。目的:慢病毒介导睫状神经营养因子基因修饰嗅鞘细胞移植对大鼠脊髓损伤的作用及其相关机制。方法:①体外实验:实验分为4组,对照组进行脊髓神经元细胞单独培养,模型组进行脊髓神经元细胞单独培养,正常嗅鞘细胞共培养组采用Transwell小室进行脊髓神经元细胞与正常嗅鞘细胞共培养,过表达嗅鞘细胞共培养组采用Transwell小室进行脊髓神经元细胞与睫状神经营养因子过表达嗅鞘细胞共培养,后3组给予海仁藻酸建立神经元细胞损伤模型。共培养12 h后,采用CCK8法检测细胞活力,qRT-PCR与Western blot检测脊髓神经元细胞中BAX、BCL-2、Caspase3、CNTF的表达;②体内实验:实验分为4组,假手术组、模型组、治疗组、联合治疗组,后3组采用改良Allen’s重物打击法制作脊髓损伤大鼠模型,造模1周后,治疗组、联合治疗组分别在损伤区上、下1 mm处各注射5μL嗅鞘细胞悬液或睫状神经营养因子过表达嗅鞘细胞悬液,假手术组与模型组大鼠依照同样的方法注射等量培养基;③治疗后4周,采用BBB评分与爬网格实验评估大鼠运动能力、苏木精-伊红染色检测脊髓损伤的病理进展、qRT-PCR与Western blot检测脊髓组织中BAX、BCL-2、Caspase3、CNTF的表达。结果与结论:①睫状神经营养因子基因修饰的嗅鞘细胞能显著抑制细胞损伤以及脊髓损伤(P<0.001);显著提高睫状神经营养因子的表达水平(P <0.01)以及显著降低凋亡相关分子BAX、BCL-2、Caspase3的表达水平(P <0.01);②睫状神经营养因子基因修饰的嗅鞘细胞移植能够改善脊髓损伤引起的运动功能下降,其机制可能与下调BAX、BCL-2、Caspase3表达,降低脊髓神经元细胞凋亡相关。

关键词：脊髓损伤嗅鞘细胞脊髓神经元细胞睫状神经营养因子神经元细胞凋亡

手术联合^(125)I粒子治疗口腔涎腺腺样囊性癌患者可能作用机制分析

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河北医学 2022年第1期28卷 33-37页

作者：李立恒周军张敏王芹安峰张丽娟汪佳张凡河北北方学院附属第一医院河北张家口075000 河北省张家口市第一医院口腔科河北张家口075000 张家口学院临床学院河北张家口075000

目的:探讨手术联合^(125)I粒子近距离置入治疗对口腔涎腺腺样囊性癌(ACC)患者相关生长因子及临床疗效的影响。方法:选择2016年4月至2018年3月收治的符合条件的ACC患者80例,采用随机数字表法分为观察组41例和对照组39例。对照组行单纯手... 详细信息

目的:探讨手术联合^(125)I粒子近距离置入治疗对口腔涎腺腺样囊性癌(ACC)患者相关生长因子及临床疗效的影响。方法:选择2016年4月至2018年3月收治的符合条件的ACC患者80例,采用随机数字表法分为观察组41例和对照组39例。对照组行单纯手术治疗,观察组采用手术联合^(125)I粒子近距离置入治疗。随访3年,比较两组临床疗效;治疗前、治疗6个月,采用酶联免疫法检测血清血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFEG)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)含量。结果:随访3年,与对照组比较,观察组ACC患者缓解率、控制率高于对照组,差异有统计学意义(82.93%vs 58.97%,92.86%vs 74.36%)(χ^(2)=5.598,4.932,P<0.05)。治疗6个月,与对照组比较,观察组ACC患者血清VEGF、bFEG、MMP-9含量低于对照组,差异有统计学意义[(238.54±36.25 vs 266.46±32.23)pg/m,(215.42±34.25 vs 276.26±36.12)pg/mL,(493.24±24.36 vs 524.12±30.43)pg/mL](t=3.634,7.732,5.023,P<0.05)。结论:手术联合^(125)I粒子治疗有助于提高ACC患者临床疗效,其作用机制可能与降低血清VEGF、bFEG、MMP-9含量有关。

关键词：腺样囊性癌碘-125粒子血管内皮生长因子碱性成纤维细胞生长因子基质金属蛋白酶-9

miR-498靶向磷酸烯醇丙酮酸羧激酶1对口腔鳞状细胞癌细胞生长的影响

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实用医学杂志 2022年第11期38卷 1339-1345页

作者：李立恒王蕊王芹张智轶安峰张璇王晓明张凡河北北方学院附属第一医院口腔科河北张家口075000 河北北方学院附属第一医院病理科河北张家口075000

目的探讨miR⁃498靶向磷酸烯醇丙酮酸羧激酶1(PCK1)对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞生长的影响。方法qRT⁃PCR检测150例OSCC患者肿瘤组织及OSCC细胞系HSC⁃3、SCC⁃15、SCC⁃9中miR⁃498表达;将miR⁃498 mimics和anti⁃miR⁃498分别转染于SCC⁃15细胞,qRT⁃PCR检测细胞中miR⁃498水平,western blot检测细胞中PCK1蛋白表达,CCK⁃8检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞迁移与侵袭;双荧光素酶报告基因检测miR⁃498与PCK1的靶向关系;共转染miR⁃498和PCK1进一步验证miR⁃498和PCK1对SCC⁃15细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭的影响。结果与人正常口腔角质细胞HOK(1.03±0.14)比较,人OSCC细胞系HSC⁃3(2.05±0.21)、SCC⁃15(2.75±0.31)、SCC⁃9(2.31±0.28)中miR⁃498的表达水平显著升高(F=53.639,P<0.001),且SCC⁃15细胞中miR⁃498的表达量最高,因此,选择SCC⁃15细胞进行后续研究。与对照组和miR⁃NC组比较,miR⁃498 mimics组SCC⁃15细胞迁移与侵袭数目显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05);与对照组和anti⁃miR⁃NC组比较,anti⁃miR⁃498组SCC⁃15细胞迁移与侵袭数目显著降低,细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。miR⁃498 mimics组(0.23±0.02)SCC⁃15细胞中PCK1蛋白表达水平显著低于对照组(0.51±0.08)和miR⁃NC组(0.49±0.06,P<0.05);anti⁃miR⁃498组(1.03±0.05)SCC⁃15细胞中PCK1蛋白表达水平显著高于对照组(0.51±0.08)和anti⁃miR⁃NC组(0.48±0.07,P<0.05)。miR⁃498靶向负调控PCK1表达,上调PCK1表达可逆转过表达miR⁃498对SCC⁃15细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。结论miR⁃498通过靶向抑制PCK1表达促进SCC⁃15细胞增殖、迁移、侵袭,抑制细胞凋亡,可能为OSCC的临床诊治提供新的分子靶标。

关键词： miR⁃498 磷酸烯醇丙酮酸羧激酶1 口腔鳞状细胞癌细胞增殖细胞侵袭细胞凋亡