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特应性皮炎脾虚湿蕴病证结合动物模型的构建与评价

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中药新药与临床药理 2024年第6期35卷 862-869页

作者：钟婷靖刘秦黎雄刘俊峰莫秀梅陈达灿晏烽根广州中医药大学第二临床医学院广东广州510006 广州中医药大学第二附属医院(省部共建中医湿证国家重点实验室) 广东广州510120 广东省中医药防治难治性慢病重点实验室广东广州510120 粤港澳中医药与免疫疾病研究联合实验室广东广州510120

目的通过比较2,4-二硝基氯苯(2,4-Dinitrochlorobenzene,DNCB)诱导特应性皮炎(Atopic Dermatitis,AD)小鼠疾病模型、“外湿+饮食失节+番泻叶灌胃”复合因素诱导脾虚湿蕴证小鼠模型,以及两者病证结合模型,建立特应性皮炎脾虚湿蕴病证结... 详细信息

目的通过比较2,4-二硝基氯苯(2,4-Dinitrochlorobenzene,DNCB)诱导特应性皮炎(Atopic Dermatitis,AD)小鼠疾病模型、“外湿+饮食失节+番泻叶灌胃”复合因素诱导脾虚湿蕴证小鼠模型,以及两者病证结合模型,建立特应性皮炎脾虚湿蕴病证结合小鼠研究模型,探索该方法的可行性。方法采用“外湿+饮食失节+番泻叶灌胃”复合因素造模方法,探索构建小鼠(Balb/c)脾虚湿蕴证,进一步应用DNCB诱导Balb/c小鼠出现特应性皮炎样病变,建立脾虚湿蕴证特应性皮炎病证结合模型。观察各组小鼠一般情况及体质量,进行脾虚、湿证症状评分;通过比较各组皮损程度、EASI评分、经皮水分散失(TEWL)值、脾脏系数和胸腺系数评价小鼠特应性皮炎严重程度;测定小鼠肌酐、葡萄糖、总胆固醇、甘油三酯、胃泌素、淀粉酶水平。结果(1)在脾虚湿蕴证造模期间,与正常组比较,脾虚湿蕴证组、脾虚湿蕴型特应性皮炎组小鼠出现肥胖、精神萎靡、毛发污秽油腻、腹泻、肛周清洁度差等情况。在结合施加特应性皮炎模型后,与正常组比较,特应性皮炎组(P0.05)更高。(3)与正常组比较,特应性皮炎组的脾脏系数升高(P0.05)、胸腺系数都降低(P0.05)、甘油三酯(P>0.05)、胃泌素(P0.05)、葡萄糖(P0.05)、甘油三酯(P>0.05)、胃泌素(P0.05)。结论“外湿+饮食失节+番泻叶灌胃”复合因素结合DNCB诱导特应性皮炎脾虚湿蕴病证结合小鼠模型既可表现出明显的脾虚湿蕴证中医指征,也可表现出特应性皮炎病样特征,可作为可靠的特应性皮炎脾虚湿蕴证中医病证结合动物模型,为后续脾虚湿蕴型特应性皮炎病理机制探讨、中药复方药效评价、药理机制探讨等方面研究提供参考。

关键词：特应性皮炎脾虚湿蕴证病症结合动物模型高脂饲料小鼠

苓桂术甘汤联合基质金属蛋白酶响应型多柔比星逐级靶向脂质体抗原发性肝癌作用研究

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中国新药杂志 2024年第11期33卷 1155-1163页

作者：孔亮曹慧敏郭睿博张璐李学涛贾连群辽宁中医药大学药学院大连116600 辽宁中医药大学中医脏象理论及应用教育部重点实验室沈阳110847

目的:探讨苓桂术甘汤联合基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP)响应型多柔比星(doxorubicin,DOX)逐级靶向脂质体抗原发性肝癌的协同增效作用。方法:以HepG2细胞为体外细胞模型,利用在线SynergyFinder软件分析苓桂术甘汤联合MM... 详细信息

目的:探讨苓桂术甘汤联合基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP)响应型多柔比星(doxorubicin,DOX)逐级靶向脂质体抗原发性肝癌的协同增效作用。方法:以HepG2细胞为体外细胞模型,利用在线SynergyFinder软件分析苓桂术甘汤联合MMP酶响应型DOX逐级靶向脂质体的协同指数;50只3周龄SPF级C57BL/6小鼠随机分为2组,空白对照组(n=10)和造模组(n=40)。采用腹腔注射二乙基亚硝胺(diethylnitrosamine,DEN)和高脂饮食相结合建立原发性肝癌小鼠模型,模型制备成功后将小鼠分为模型组(Model)、苓桂术甘汤组(LGZGT)、脂质体组(Lip)及联合干预组(LGZGT+Lip),各治疗组小鼠分别灌胃给予苓桂术甘汤,腹腔注射给予脂质体,其余各组予等量生理盐水,连续8周。考察小鼠体重、肝脏指数;甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)水平,谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、γ-谷氨酰转移酶(γ-glutamyl transferase,γ-GT)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)活性;苏木素伊红(hematoxylin eosin,HE)染色、马松(Masson)染色观察肝脏病理变化;免疫组织化学染色、原位末端标记法(terminal-deoxynucleoitidyl transferase mediated nick end labeling,TUNEL)染色观察肿瘤细胞增殖、凋亡情况。结果:两药联合协同指数评分结果显示,两药联合应用零相互作用效力(zero interaction potency,ZIP)值为2.697,具有协同增效作用。体内药效学结果显示,苓桂术甘汤,脂质体及联合干预后,均能降低小鼠肝脏指数、AFP和CEA表达水平以及ALT,AKP,AST,γ-GT活性,改善肝脏病理损伤、肝纤维化,抑制肝癌细胞增殖及促进肝癌细胞凋亡,且LGZGT+Lip组的干预能力最强。结论:苓桂术甘汤与MMP响应型DOX逐级靶向脂质体联合应用于原发性肝癌的治疗,具有协同增效作用,为临床原发性肝癌的治疗提供了新思路。

关键词：苓桂术甘汤基质金属蛋白酶多柔比星逐级靶向脂质体原发性肝癌协同增效

补肾温阳化瘀方调节SIRT1-FoxO1介导的细胞自噬治疗子宫内膜异位症的机制研究

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中华中医药杂志 2024年第5期39卷 2542-2548页

作者：孟鑫付欣平安铭立刘慧敏马艺鸣陈景伟河北中医药大学中西医结合研究所河北省中西医结合肝肾病证研究重点实验室石家庄050200 河北省中西医结合生殖疾病协同创新中心石家庄050200

目的:探讨SIRT1-FoxO1介导的细胞自噬在子宫内膜异位症(EMs)发展中的机制以及补肾温阳化瘀方治疗EMs的疗效与可能的作用机制。方法:将12Z细胞分为CON组、DMSO组(+同体积DMSO)及EX527组(+SIRT1抑制剂),采用划痕实验检测各组细胞的迁移能... 详细信息

目的:探讨SIRT1-FoxO1介导的细胞自噬在子宫内膜异位症(EMs)发展中的机制以及补肾温阳化瘀方治疗EMs的疗效与可能的作用机制。方法:将12Z细胞分为CON组、DMSO组(+同体积DMSO)及EX527组(+SIRT1抑制剂),采用划痕实验检测各组细胞的迁移能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,采用免疫荧光及Western Blot分别检测SIRT1、FoxO1及自噬相关因子蛋白定位及含量表达。将100只大鼠随机分为假手术组、模型组、中药组、中药+EX527组及EX527组。EMs造模成功后,中药组及中药+EX527组给予补肾温阳化瘀方灌胃,假手术组、模型组及EX527组同体积纯净水灌胃;中药+EX527组、EX527组给予腹腔注射EX527溶剂,其余各组给予腹腔注射同体积0.9%氯化钠溶液,连续3周。免疫组化与Western Blot分别检测SIRT1、FoxO1及自噬相关因子蛋白定位及含量表达。结果:细胞实验中,与CON组或DMSO组比较,EX527组的迁移能力和侵袭能力明显增强,SIRT1水平显著下降(P实验中,与假手术组比较,模型组与EX527组的SIRT1水平显著下降(P<0.05),FoxO1及自噬相关因子水平显著上升(P<0.01),中药组及中药+EX527组的SIRT1水平显著升高(P<0.01),FoxO1及自噬相关因子水平则显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论:SIRT1通过介导FoxO1负向调控细胞自噬水平,补肾温阳化瘀方可能通过上调SIRT1,抑制FoxO1介导的自噬,从而起到治疗EMs的作用。

关键词：子宫内膜异位症补肾温阳化瘀方 SIRT1-FoxO1 细胞自噬

槲皮素对黄药子致肝损伤小鼠的保护作用及其机制

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中草药 2024年第10期55卷 3345-3353页

作者：王欣张雨涵史磊磊上官惠子宋佳莲安宇宇谢允东刘继平陕西中医药大学陕西咸阳712046 陕西省食品药品安全监测重点实验室陕西咸阳712046 陕西省中医药管理局中药药效机制与物质基础重点研究室陕西咸阳712046

目的探究槲皮素对黄药子致肝损伤的保护作用及其机制。方法将48只昆明小鼠随机分为对照组、模型组、水飞蓟宾(100 mg/kg)组和槲皮素高、中、低剂量(80、50、20 mg/kg)组。对照组ig 0.5%羧甲基纤维素钠溶液,其余各组小鼠ig相应药物及黄... 详细信息

目的探究槲皮素对黄药子致肝损伤的保护作用及其机制。方法将48只昆明小鼠随机分为对照组、模型组、水飞蓟宾(100 mg/kg)组和槲皮素高、中、低剂量(80、50、20 mg/kg)组。对照组ig 0.5%羧甲基纤维素钠溶液,其余各组小鼠ig相应药物及黄药子醇提物(2 g/kg),1次/d,连续30 d。实验结束后称定小鼠体质量和肝脏质量,计算肝脏指数;测定血浆中天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性及丙二醛(malonaldehyde,MDA)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)、IL-1β水平;苏木素-伊红(hematoxylin-eosin staining,HE)染色观察肝脏组织病理学变化;TUNEL染色法检测肝脏细胞凋亡情况;采用Western blotting检测肝脏核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)、磷酸化核因子-κB p65(phosphorylated nuclear factor-κB p65,p-NF-κB p65)、血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)、多药耐药相关蛋白2(multidrug resistance-associated protein 2,MRP2)、尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶1A1(uridine diphosphate-glucuronosyltransferase 1A1,Ugt1a1)、P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达;采用qRT-PCR检测肝脏MRP2、P-gp、Ugt1a1的mRNA表达。结果与模型组比较,槲皮素显著降低小鼠肝脏指数及肝功能(P<0.05、0.01),减轻肝脏组织病理变化,降低血浆中MDA水平(P<0.05、0.01),升高SOD活性(P<0.01),降低TNF-α、IL-1β水平(P<0.05、0.01),升高IL-10水平(P<0.01),抑制肝脏p-NF-κB p65、Bax蛋白表达(P<0.05、0.01),促进Nrf2、HO-1及药物转运体蛋白表达(P<0.05、0.01),并上调MRP2、P-gp、Ugt1a1的mRNA表达(P<0.01)。结论槲皮素对黄药子诱导的肝损伤有一定保护作用,其作用机制可能与减轻炎症、抑制细胞凋亡、调控Nrf2及药物转运体的表达相关。

关键词：槲皮素黄药子肝损伤炎症凋亡核因子E2相关因子2 药物转运体

牛蒡子-甘草药对指纹图谱的建立及其抗炎活性谱效关系研究

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中草药 2024年第4期55卷 1237-1247页

作者：邢耀莹王姿杨王露杨苗苗庞哲赵宁崔治家邵晶甘肃中医药大学甘肃兰州730000 西北中藏药省部共建协同创新中心甘肃兰州730000 国家中医药管理局三级实验室(中药化学重点实验室) 甘肃兰州730000 甘肃省中医药研究中心甘肃兰州730000 甘肃省中药药理与毒理学重点实验室甘肃兰州730000 甘肃省中药制药工艺工程研究中心甘肃兰州730000

目的建立牛蒡子-甘草药对的HPLC指纹图谱,研究探讨牛蒡子-甘草药对抗炎活性的谱效关系。方法采用HPLC法建立牛蒡子-甘草药对的指纹图谱,结合聚类分析与主成分分析(principal component analysis,PCA)对收集到的18批牛蒡子-甘草药对进行... 详细信息

目的建立牛蒡子-甘草药对的HPLC指纹图谱,研究探讨牛蒡子-甘草药对抗炎活性的谱效关系。方法采用HPLC法建立牛蒡子-甘草药对的指纹图谱,结合聚类分析与主成分分析(principal component analysis,PCA)对收集到的18批牛蒡子-甘草药对进行质量评价;以脂多糖刺激RAW264.7细胞制备炎性细胞模型,以一氧化氮分泌量为指标考察18批牛蒡子-甘草药对的抗炎活性,采用灰色关联度分析(gray correlation analysis,GCA)和偏最小二乘法回归(partial least squares regression,PLSR)分析HPLC共有峰与炎性指标间的谱效相关性。结果指纹图谱研究共标定38个共有峰,经混合对照品指认出13个成分,聚类分析与PCA结果一致,综合评价结果显示,样品S7质量最佳。GCA结果显示,牛蒡子-甘草药对HPLC指纹图谱各共有峰抗炎活性关联度为F5(甘草苷)>F17(甘草酸)>F1>F3>F4>F9>F11(异甘草苷)>F13(牛蒡子苷)>F19>F23>F21(牛蒡苷元)>F14;通过PLSR分析发现,牛蒡子-甘草药对38个共有峰中17个特征峰(VIP>1)与其抗炎作用显著相关,且F21(VIP>1.5)贡献较大。结论建立的牛蒡子-甘草药对HPLC指纹图谱可用于其质量评价,谱效相关性研究初步筛选出的17个成分可作为其抗炎作用有效成分群,为牛蒡子-甘草药对抗炎活性物质基础与作用机制的阐释提供研究基础和科学依据。

关键词：牛蒡子-甘草药对指纹图谱抗炎作用谱效关系灰色关联度聚类分析主成分分析偏最小二乘法回归分析质量评价甘草苷甘草酸异甘草苷牛蒡子苷牛蒡苷元

白桦脂酸及其衍生物的抗肿瘤作用和机理研究进展

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中药药理与临床 2024年第6期40卷 109-115页

作者：赵欢林雪燕牛圆圆陈雨慧余悦李东晓徐超群成都中医药大学药学院成都610041 四川省中医药科学院中药材品质及创新中药研究四川省重点实验室/中药新药创制与质量评价川渝共建重点实验室成都610041

白桦脂酸(Betulinic acid,BA)为羽扇豆烷型五环三萜类化合物,在马甲子、杜仲和酸枣仁等多种中药中均含量较高。既有研究显示白桦脂酸具有抗肿瘤、抗炎、抗HIV、抗疟疾、抗菌和抗氧化等多种生物活性,尤其是在抗肿瘤方面,因其低毒、高效... 详细信息

白桦脂酸(Betulinic acid,BA)为羽扇豆烷型五环三萜类化合物,在马甲子、杜仲和酸枣仁等多种中药中均含量较高。既有研究显示白桦脂酸具有抗肿瘤、抗炎、抗HIV、抗疟疾、抗菌和抗氧化等多种生物活性,尤其是在抗肿瘤方面,因其低毒、高效的特点而受到广泛重视,相关机理研究也较多,包括线粒体途径、Sp转录因子途径以及自噬等,但总体并不清晰。本文对白桦脂酸抗肿瘤作用机制进行综述,分瘤种厘清现有发现,分析研究热点,以期为白桦脂酸和以白桦脂酸及其类似物为主要药效成分的抗肿瘤药物研究提供参考。

关键词：白桦脂酸抗肿瘤五环三萜线粒体细胞周期自噬凋亡

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多籽五层龙中1个新的木栓烷型三萜

中草药 2024年第6期55卷 1884-1889页

作者：牛琦许浩楠王浩鑫陈林谢红茜丁祖霄左爱学江志勇云南中医药大学云南省傣医药彝医药重点实验室云南省高校民族药现代研究重点实验室云南昆明650500 昆明医科大学药学院云南昆明650500

目的对多籽五层龙Salacia polysperma枝叶进行化学成分研究。方法采用正反相硅胶柱色谱、MCI、Sephadex LH-20柱色谱以及半制备高效液相色谱等分离手段进行分离纯化,根据1D和2D NMR、MS、IR等波谱数据和理化性质对化合物进行结构鉴定。... 详细信息

目的对多籽五层龙Salacia polysperma枝叶进行化学成分研究。方法采用正反相硅胶柱色谱、MCI、Sephadex LH-20柱色谱以及半制备高效液相色谱等分离手段进行分离纯化,根据1D和2D NMR、MS、IR等波谱数据和理化性质对化合物进行结构鉴定。采用分光光度法测定化合物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用。结果从多籽五层龙枝叶90%乙醇提取物的石油醚萃取部分中分离鉴定了7个化合物,分别为3α,27,28-三羟基木栓烷(1)、kokoonol(2)、28-hydroxyfriedelan3-one-29-oic acid(3)、maytenfolone(4)、黑蔓醇酯乙(5)、α-香树脂素(6)、赤桐甾醇(7)。化合物3表现出较好的α-葡萄糖苷酶抑制活性,半数抑制浓度(median inhibition concentration,IC50)值为15.1μmol/L。化合物1、2、4也具有一定的α-葡萄糖苷酶抑制作用,IC50值分别为57.8、39.4、27.6μmol/L,其余化合物在100μmol/L的较高浓度下未显示出对α-葡萄糖苷酶的抑制作用。结论化合物1为1个新的木栓烷型三萜,命名为多籽五层龙醇(polysperol);所有化合物均为首次从该植物中分离得到。化合物3具有较好的α-葡萄糖苷酶抑制活性。

关键词：多籽五层龙 3α,27,28-三羟基木栓烷 α-葡萄糖苷酶 28-hydroxyfriedelan-3-one-29-oic acid 多籽五层龙醇

黄草乌法呢基焦磷酸合酶基因(AvFPS)的克隆及功能验证

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中国中药杂志 2024年第16期49卷 4387-4395页

作者：王雪李国栋王宝婕徐福荣马晓惠云南中医药大学、云南省教育厅民族药物质基准研究重点实验室云南昆明650500

黄草乌为云南的道地药材,其富含滇乌碱等二萜生物碱,二萜生物碱是其主要活性成分。法呢基焦磷酸合酶(FPS)是萜类生物合成途径中的一个关键酶,在二萜生物碱生物合成中发挥重要作用,其功能研究有助于揭示二萜生物碱合成的分子机制。该研... 详细信息

黄草乌为云南的道地药材,其富含滇乌碱等二萜生物碱,二萜生物碱是其主要活性成分。法呢基焦磷酸合酶(FPS)是萜类生物合成途径中的一个关键酶,在二萜生物碱生物合成中发挥重要作用,其功能研究有助于揭示二萜生物碱合成的分子机制。该研究基于黄草乌转录组数据,筛选到1条FPS基因(AvFPS),克隆其全长序列并进行了生物信息学分析、功能验证以及基因表达分析。AvFPS开放阅读框(ORF)为1056 bp,编码351个氨基酸,相对分子质量约为41 kDa,其具有异戊烯基转移酶的2个典型保守功能域“DDIMD”和“DDYXD”。在大肠杆菌中表达AvFPS重组蛋白,用纯化重组蛋白进行体外酶促反应,结果表明,AvFPS能够催化法呢基焦磷酸(farnesyl pyrophosphate,FPP)的合成。qRT-PCR分析结果表明,AvFPS基因在黄草乌根、茎、叶和花中均有表达,在根中表达量最高;经MeJA诱导后,AvFPS的表达量明显上调。该研究明确了AvFPS的催化功能,揭示了AvFPS在不同组织以及经MeJA诱导不同时间段的表达模式,为更深入了解FPS基因在二萜类成分生物合成途径中的功能提供了参考。

关键词：黄草乌法呢基焦磷酸合酶功能验证表达分析

马甲子干预实验性结肠炎相关结直肠癌前期病变的网络药理学及实验研究

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中药药理与临床 2024年第3期40卷 65-74页

作者：赵欢胡竟一白筱璐雷玲吴瑕林雪燕牛圆圆陈雨慧余悦李东晓徐超群成都中医药大学药学院成都610041 四川省中医药科学院中药材品质及创新中药研究四川省重点实验室/中药新药创制与质量评价川渝共建重点实验室成都610041

目的:研究马甲子(Paliurus ramosissimus,PR)对结肠炎相关结直肠癌(colitis-associated colorectal cancer,CAC)前期病变的干预作用,探索作用机制。方法:采用基因功能注解(GO)、基因数据库(KEGG)富集分析和分子对接等方法,分析马甲子提... 详细信息

目的:研究马甲子(Paliurus ramosissimus,PR)对结肠炎相关结直肠癌(colitis-associated colorectal cancer,CAC)前期病变的干预作用,探索作用机制。方法:采用基因功能注解(GO)、基因数据库(KEGG)富集分析和分子对接等方法,分析马甲子提取物中主要药效成分白桦脂酸干预CAC前期病变的潜在靶点和通路;采用腹腔注射氧化偶氮甲烷(Azoxymethane,AOM)及经饮水摄入葡聚糖硫酸钠(Dextran sulfate sodium,DSS)对小鼠进行循环处理方式,建立实验性CAC前期病变小鼠模型,连续42 d灌胃给予马甲子提取物205、820 mg/kg,观察其对小鼠模型疾病活动指数(DAI)、结直肠组织病理等的影响,ELISA法检测血清中癌胚抗原(CEA)、白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,q RT-PCR法检测结直肠组织中信号转导和转录激活子3(Stat3)m RNA表达。结果:网络药理学研究筛选出157个白桦脂酸干预CAC的潜在作用靶点,对激素的反应、跨膜受体蛋白酪氨酸激酶信号通路、细胞迁移的正向调节、等874个生物过程,激酶结合、蛋白激酶活性等75个分子功能,膜筏、谷氨酸能突触等37个细胞组分,涉及的主要通路有癌症通路、癌症中的蛋白聚糖、脂质和动脉粥样硬化、前列腺癌、JAK-STAT信号通路;白桦脂酸与IL-1β、STAT3等靶点亲和力均实验性CAC癌前病变,其作用机制与炎症抑制及下调STAT3等有关。

关键词：马甲子白桦脂酸结肠炎相关结直肠癌网络药理学分子对接癌胚抗原信号转导和转录激活子3

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