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TaMAPK5蛋白的抗体制备及其在小麦与叶锈菌互作过程中的表达特征

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华北农学报 2024年第5期39卷 186-192页

作者：邵文先王冬梅河北农业大学生命科学学院华北作物改良与调控国家重点实验室河北省植物生理与分子病理学重点实验室河北保定071001

为了深入探究TaMAPK5在小麦与叶锈菌互作过程中发挥的功能,克隆了TaMAPK5基因的CDS区,构建了原核表达载体pET28a-TaMAPK5,转化到大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)中,对目的蛋白诱导表达的异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)最佳浓度、诱导时间和诱导温... 详细信息

为了深入探究TaMAPK5在小麦与叶锈菌互作过程中发挥的功能,克隆了TaMAPK5基因的CDS区,构建了原核表达载体pET28a-TaMAPK5,转化到大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)中,对目的蛋白诱导表达的异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)最佳浓度、诱导时间和诱导温度进行了探索,并通过Ni-NTA亲和层析对目的蛋白进行了纯化,将纯化后的重组蛋白免疫新西兰兔制备TaMAPK5多克隆抗体。结果表明,TaMAPK5的CDS区全长为1110 bp,TaMAPK5重组蛋白在16℃经终浓度为0.050 mmol/L的IPTG诱导48 h效果最好。将该重组蛋白作为抗原免疫新西兰兔,成功制备了可以特异性识别TaMAPK5的多克隆抗体,抗体效价为1∶51200。Western Blot结果表明,在小麦与叶锈菌不亲和组合中TaMAPK5受叶锈菌侵染诱导表达。成功表达、纯化了TaMAPK5重组蛋白并制备了其多克隆抗体,揭示了TaMAPK5蛋白可能正调控小麦抵抗叶锈菌侵染反应。

关键词：小麦 TaMAPK5 原核表达蛋白纯化多克隆抗体

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亲环素D介导的线粒体通透性转换孔开放对骨肉瘤MG63细胞生物学行为的影响

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郑州大学学报（医学版） 2024年第5期59卷 602-607页

作者：刘一夏德佳赵柔王旭彤赵岳马玉芳王文军张玲华北理工大学公共卫生学院儿少卫生与妇幼保健学教研室河北唐山063000 济宁医学院护理学院妇儿护理学教研室山东济宁272000 济南大家医学检验有限公司临床实验室济南250104 济宁医学院附属医院医学检验科山东济宁272000 滨州医学院公共卫生学院儿少卫生与妇幼保健学教研室山东烟台264003 潍坊护理职业学院党政办公室山东潍坊262500

目的:探讨干扰线粒体关键蛋白亲环素D(CypD)对骨肉瘤MG63细胞增殖、迁移、凋亡等生物学行为的影响。方法:构建3种转染不同siRNA的MG63细胞系,分别为CypD-siRNA1、CypD-siRNA2和CypD-siRNA3组,采用qRT-PCR和Western blot检测3组细胞中Cyp... 详细信息

目的:探讨干扰线粒体关键蛋白亲环素D(CypD)对骨肉瘤MG63细胞增殖、迁移、凋亡等生物学行为的影响。方法:构建3种转染不同siRNA的MG63细胞系,分别为CypD-siRNA1、CypD-siRNA2和CypD-siRNA3组,采用qRT-PCR和Western blot检测3组细胞中CypD的表达水平,筛选用于后续实验的CypD-siRNA。将MG63细胞分为阴性对照组(转染siRNA-NC)和敲减组(转染CypD-siRNA2)。采用CCK-8法和平板克隆实验检测细胞的增殖能力,Transwell小室实验检测细胞的迁移能力;采用MitoSOX Red检测线粒体活性氧(mROS)水平,钙黄绿素-钴评价线粒体通透性转换孔的开放状态;采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot法检测细胞迁移和凋亡相关蛋白的表达。结果:与CypD-siRNA1组和CypD-siRNA3组相比,CypD-siRNA2组中CypD mRNA和蛋白表达水平下降(P<0.05)。与阴性对照组相比,敲减组细胞克隆形成数和迁移数减少,细胞增殖能力下降,细胞凋亡率升高,N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平降低(P<0.05),Bax/Bcl-2、Cleaved Caspase 3/Caspase 3以及E-cadherin和细胞色素C蛋白表达水平升高(P<0.05)。敲减组细胞mROS水平高于阴性对照组,而线粒体通透性转换孔开放程度低于阴性对照组(P<0.05)。结论:敲减CypD表达可上调MG63细胞氧化应激水平,抑制其增殖、迁移能力,并通过线粒体途径诱导其凋亡。

关键词：骨肉瘤亲环素D 线粒体通透性转换孔生物学行为 MG63细胞

玉米ACO基因家族生物信息学及表达模式分析

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中国农业科学 2024年第7期57卷 1308-1318页

作者：王程泽张燕付伟贾京哲董金皋申珅郝志敏河北农业大学生命科学学院/华北作物改良与调控国家重点实验室/河北省农业微生物生物信息利用技术创新中心/河北省植物生理与分子病理学重点实验室邯郸学院

【目的】对玉米1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶ACO基因家族进行全基因组鉴定，分析其在玉米不同器官和不同发育时期以及响应外源激素和病菌侵染中的表达模式，为明确玉米ACO基因家族功能打下基础。【方法】利用生物信息学方法，在玉米B73自... 详细信息

【目的】对玉米1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶ACO基因家族进行全基因组鉴定，分析其在玉米不同器官和不同发育时期以及响应外源激素和病菌侵染中的表达模式，为明确玉米ACO基因家族功能打下基础。【方法】利用生物信息学方法，在玉米B73自交系基因组中鉴定ACO，对其基因结构、蛋白质理化性质、家族成员间的亲缘关系以及保守基序进行分析，利用实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)技术分析ZmACO基因家族的表达模式。【结果】除ZmACO11外，ZmACO家族成员均具有Fe2+离子结合位点和底物抗坏血酸结合位点。系统发育分析显示，ZmACO2与ScACO在同一分支，亲缘关系较近，Bootstrap值达98。基因表达分析表明，ZmACO2、5、9、15、20、35在各发育时期均活跃表达，且在叶片中呈优势表达，因此选择上述6个基因进行下一步检测。喷施乙烯利后，上述6个基因的表达均有所波动，其中ZmACO2的表达量受影响较大，变化幅度在8倍左右。在乙烯利处理的0—24 h内这6个基因的表达量存在波动，但在处理后24 h,6个基因的表达量均接近0。水杨酸处理后，ZmACO5的表达量受影响较大，变化倍数在2倍左右。其他基因的表达量在处理后24 h均接近0。ZmACO9、35在3—12 h的表达量存在波动，ZmACO2、15、20表达量呈下调趋势。在响应生物胁迫方面，接种玉米大斑病菌（Setosphaeria turcica）后，ZmACO5、9的表达量变化幅度最大，在接种后第10天，这两个基因的表达量分别升至对照组的50和60倍。接种玉米小斑病菌（Cochlibolus heterostrophus）后，ZmACO5的表达量变化幅度较大，变化倍数在40—90倍。接种立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）后，ZmACO5、35表达量变化幅度最大，在病菌接种的第3天达到200倍。【结论】ZmACO2、5、20、35在玉米生长发育过程中表达变化最活跃；施加外源乙烯利和水杨酸可以对ZmACO的表达水平造成显著影响。病菌侵染玉米后ZmACO的表达水平产生显著变化，与生物胁迫应答关系密切。

关键词：玉米ACO基因家族实时荧光定量PCR 基因表达乙烯利水杨酸玉米大斑病菌玉米小斑病菌立枯丝核菌

非均匀流体的体积黏度:Maxwell弛豫模型

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物理学报 2024年第6期73卷 305-315页

作者：孙宗利康艳霜张君霞华北电力大学数理系保定071003 华北电力大学数理系河北省物理学与能源技术重点实验室保定071003 河北农业大学理学院保定071001

基于黏弹力学中的Maxwell弛豫理论,提出一种新颖的、可用于计算非均匀体积黏度的理论方法.该方法通过体相流体的黏性和弹性特征来计算体系的局域弛豫时间,进而结合体系的局域弛豫模量来计算体积黏度的非均匀分布.作为应用,计算了受限于... 详细信息

基于黏弹力学中的Maxwell弛豫理论,提出一种新颖的、可用于计算非均匀体积黏度的理论方法.该方法通过体相流体的黏性和弹性特征来计算体系的局域弛豫时间,进而结合体系的局域弛豫模量来计算体积黏度的非均匀分布.作为应用,计算了受限于平行狭缝中的Lennard-Jones流体的非均匀体积黏度,系统地研究了体密度、温度、缝宽和吸附强度等因素对体积黏度的影响.结果表明,上述因素的变化均可显著地调制狭缝中流体的体积黏度.其中,体密度和吸附强度的增大均有益于体积黏度的增强,而温度的升高将则会削弱其体积黏度.此外,毛细凝聚的发生也对受限流体的体积黏度具有显著的调制作用.

关键词：非均匀流体体积黏度局域弛豫时间力学模量

玉米大斑病菌铁载体合成基因簇鉴定及表达分析

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农业生物技术学报 2024年第5期32卷 1121-1131页

作者：岳浩峰赵天益李海笑闫秋静徐雅迪孟亚南曹志艳刘宁董金皋河北农业大学生命科学学院华北作物改良与调控国家重点实验室/河北省植物生理与分子病理学重点实验室河北农业大学植物保护学院

铁是微生物生长必需的元素，在氧代谢、电子转移以及DNA和RNA合成等过程中发挥重要作用，微生物主要依赖于铁载体吸收环境中的铁离子。铁载体作为微生物分泌的低分子量铁螯合物，协助机体运输铁离子。真菌主要利用非核糖体多肽合成酶编... 详细信息

铁是微生物生长必需的元素，在氧代谢、电子转移以及DNA和RNA合成等过程中发挥重要作用，微生物主要依赖于铁载体吸收环境中的铁离子。铁载体作为微生物分泌的低分子量铁螯合物，协助机体运输铁离子。真菌主要利用非核糖体多肽合成酶编码基因为核心的次级代谢物生物合成基因簇合成铁载体，本研究旨在明确玉米大斑病菌(Setosphaeria turcica)铁载体的合成基因簇以及关键基因的表达。利用铬天青(chrome azurol sulphonate, CAS)鉴定玉米大斑病菌合成铁载体的类型并利用AntiSMASH网站预测其生物合成基因簇，利用玉米大斑病菌孢子不同发育时期的转录组数据及qRT-PCR分析病菌侵染过程中铁载体合成基因簇中各关键基因的表达水平以及外源铁浓度对基因表达的影响。结果表明，玉米大斑病菌产生异羟肟酸盐型铁载体，在基因组中鉴定得到1个产生异羟肟酸盐铁载体的次级代谢物生物合成基因簇，由非核糖体多肽合成酶(nonribosomal peptide synthetase, NRPS)编码基因StNPS6为核心的12个铁载体合成相关基因组成。在玉米大斑病菌孢子萌发和侵染玉米叶片的过程中，基因簇中多个基因表达显著上调。与菌丝时期相比，侵染6 d后StNPS6表达量上调5.52倍，侵染9 d时后辅助合成基因StrhbE表达量上调24.12倍，编码转运相关蛋白的基因Stpmd1上调19.95倍。同时发现富铁和贫铁均对病菌的生长具有一定的抑制作用，且富铁情况下病菌黑色素合成受阻，培养基中铁含量差异导致基因簇中多个基因表达量显著变化，尤其是转运相关蛋白基因Stpmd1在富铁条件下表达量上升73.28倍。本研究为解析玉米大斑病菌铁载体的潜在作用提供了参考。

关键词：玉米大斑病菌铁载体次级代谢产物生物合成基因簇基因表达

糖苷水解酶基因FvGH16-2参与拟轮枝镰孢菌生长发育及致病性

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植物保护学报 2024年第2期51卷 342-351页

作者：任志国刘宁陈悦孙蔓莉曹志艳董金皋河北农业大学植物保护学院保定071000 河北农业大学河北省植物生理与分子病理学重点实验室华北作物改良与调控国家重点实验室保定071000 河北农业大学生命科学学院保定071000

为明确糖苷水解酶16(glycoside hydrolase,GH16)家族基因在拟轮枝镰孢菌Fusarium verticillioides生长发育和致病过程中的作用,利用生物信息学分析软件对其GH16家族成员进行鉴定,采用转录组分析及实时荧光定量PCR技术对GH16家族成员在... 详细信息

为明确糖苷水解酶16(glycoside hydrolase,GH16)家族基因在拟轮枝镰孢菌Fusarium verticillioides生长发育和致病过程中的作用,利用生物信息学分析软件对其GH16家族成员进行鉴定,采用转录组分析及实时荧光定量PCR技术对GH16家族成员在不同培养温度下的表达水平进行检测,并通过遗传转化法对家族成员FvGH16-2基因进行敲除及回补,分析其在拟轮枝镰孢菌生长发育及致病过程中的作用。结果显示,在拟轮枝镰孢菌基因组中共鉴定到23个GH16家族基因,其中FvCH16-2、FvCH16-4和FvCH16-12等多个上调表达基因与病菌的生长和抗逆性相关。敲除FvGH16-2基因导致拟轮枝镰孢菌的生长速率及产孢能力降低,细胞壁完整性受损,对H2O2更加敏感,同时对玉米籽粒和茎秆的致病力减弱。表明FvGH16-2基因在拟轮枝镰孢菌生长发育和致病过程中发挥着重要作用,是拟轮枝镰孢菌细胞壁完整性和致病性所必需的。

关键词：糖苷水解酶家族拟轮枝镰孢菌玉米病害基因表达功能分析

乳腺癌中KiSS-1与核因子-κBp50和基质金属蛋白酶9的表达之相互关系及其临床病理意义

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中华病理学杂志 2008年第4期37卷 238-242页

作者：伊雪李常颖张素华王献华李占清杨方华北煤炭医学院病理学教研室唐山063000

目的探讨KiSS-1、核因子（NF）-κBp50和基质金属蛋白酶9（MMP-9）在乳腺癌组织中的表达和相互关系及其临床病理意义。方法应用免疫组织化学EliVision法检测152例标本（乳腺癌92例，乳腺增生30例，癌旁乳腺30例）和伴有癌转移的腋窝淋巴... 详细信息

目的探讨KiSS-1、核因子（NF）-κBp50和基质金属蛋白酶9（MMP-9）在乳腺癌组织中的表达和相互关系及其临床病理意义。方法应用免疫组织化学EliVision法检测152例标本（乳腺癌92例，乳腺增生30例，癌旁乳腺30例）和伴有癌转移的腋窝淋巴结54枚中KiSS-1、NF—κBp50及MMP-9蛋白表达情况。应用原位杂交方法检测50例乳腺癌组织、20例癌旁乳腺组织中KiSS-1 mRNA的表达。应用CMIAS真彩图像分析仪对免疫组织化学和原位杂交结果进行积分吸光度（IA）值测定，并计算其平均IA值。结果（1）与癌旁乳腺组织表达比较，KiSS-1基因在乳腺癌组织学分级Ⅰ～Ⅱ级中（13．59±6．24）明显高于Ⅲ级（9．53±4．57）、TNM分期高（Ⅰ～Ⅱ期12．35±6．15，Ⅲ～Ⅳ期7．53±4．93）、在淋巴结转移率高的乳腺癌中的表达减弱（9．61±5．25，无转移组为13．06±5．89）甚至缺失；其在淋巴结转移灶（3．47±1．59）中的表达（IA值）明显低于其相应的原发灶（10．02±3．80）。乳腺癌组织中KiSS-1mRNA表达（10．84±4．90）与KiSS-1蛋白表达（11．67±6．22）有较好的一致性。（2）NF-κBp50、MMP-9在乳腺癌组织中表达上调，其上调程度随着乳腺癌分化程度的降低、TNM分期的增加、淋巴结转移及瘤块增大而逐渐增高。结论KiSS-1蛋白在乳腺癌分化程度低、淋巴结转移组中的表达下降，并分别与NF—κBp50、MMP-9蛋白表达呈负相关；NF-κBp50与MMP-9蛋白在乳腺癌中表达呈正相关，KiSS-1蛋白可能参与了乳腺癌的转移扩散。

关键词：乳腺肿瘤基因 KiSS-1 NF—κB 明胶酶B 肿瘤转移转录因子TFⅢ类

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热压型煤成型条件优化试验研究方法

煤炭学报 2024年第2期49卷 739-752页

作者：许江贾立甘青青彭守建闫发志王旭戴诗杰焦峰李奇贤陈月霞重庆大学煤矿灾害动力学与控制全国重点实验室重庆400044 江西理工大学应急管理与安全工程学院江西赣州341000 太原理工大学安全与应急管理工程学院山西太原030024 煤炭科学研究总院北京100013 华北科技学院应急技术与管理学院河北廊坊065201

针对当前煤矿瓦斯动力学物理模拟试验中型煤材料存在低强度和高渗透率问题,建立了一套热压型煤成型条件优化试验研究方法。首先,自主研发了热压型煤试验系统,并对试验系统优势和今后改进方向进行了汇总,同时基于Horsfield致密堆积理论... 详细信息

针对当前煤矿瓦斯动力学物理模拟试验中型煤材料存在低强度和高渗透率问题,建立了一套热压型煤成型条件优化试验研究方法。首先,自主研发了热压型煤试验系统,并对试验系统优势和今后改进方向进行了汇总,同时基于Horsfield致密堆积理论创建了型煤材料最优配制方案,最后形成了以马氏距离度量法和黄金分割法相结合的成型条件优化方法。为了验证试验方法的效果,通过控制成型温度为311.8℃、升温速率为5℃/min和保温时间为5.3 h,开展了不同成型压力条件下热压型煤试验研究,研究了不同成型压力条件下的热压型煤微观结构、物理力学特性和渗透特性等响应特征。结果表明:增加成型压力,总孔隙度逐渐减小,单轴抗压强度呈先增大后减少的变化趋势,破坏形式以块状剥落和纵向破裂为主,初始渗透率呈先减小后增大、最小渗透率则呈先减后增再减的变化趋势。以各成型条件的具体数值为试验点、热压型煤和原煤的关键参数为评价参量构建样本矩阵,计算各成型条件下热压型煤和原煤之间的马氏距离,再结合黄金分割法对试验区间进行优化求解,优化后的最佳成型压力为80 MPa,在此成型条件下制作的热压型煤密度、单轴抗压强度和初始渗透率分别为1.137 g/cm^(3)、12.21 MPa、1.32×10^(-15)m^(2),与原煤的1.132 g/cm^(3)、12.83 MPa、1.08×10^(-15)m^(2)相似性极高,达到了提高型煤强度、降低型煤渗透率的目的。

关键词：煤矿瓦斯热压型煤单轴抗压强度渗透率

原儿茶醛对环磷酰胺诱导急性肾损伤的保护作用及机制研究

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药物评价研究 2024年第6期47卷 1217-1223页

作者：张景富肖雨何继江宋嘉亮白梓煊高思齐杨世瑜李继安储金秀华北理工大学基础医学院河北唐山063210 华北理工大学中医学院河北唐山063210 河北省中西医结合防治糖尿病及其并发症重点实验室河北唐山063210 河北省慢性疾病基础医学重点实验室河北唐山063210

目的研究原儿茶醛对环磷酰胺(CTX)所致急性肾损伤的预防作用及其机制。方法将24只SPF级雄性昆明种小鼠随机分为对照组、模型组及原儿茶醛低、高剂量(15、30mg·kg^(-1))组,每组各6只。对照组和模型组ig给予0.9%氯化钠溶液,原儿茶醛低、... 详细信息

目的研究原儿茶醛对环磷酰胺(CTX)所致急性肾损伤的预防作用及其机制。方法将24只SPF级雄性昆明种小鼠随机分为对照组、模型组及原儿茶醛低、高剂量(15、30mg·kg^(-1))组,每组各6只。对照组和模型组ig给予0.9%氯化钠溶液,原儿茶醛低、高剂量组每日1次ig对应药物。连续给药14d,末次给药1h后,除对照组外,其余各组单次ip给药CTX(200mg·kg^(-1))。次日,在称体质量麻醉后取血和肾脏,分离血清,检测小鼠血清肌酐(CRE)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)等生化指标;采用苏木素-伊红(HE)染色观察肾脏病理损伤情况;采用荧光染色检测小鼠肾脏TUNEL的表达情况;采用Westernblotting检测B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(BAX)等凋亡相关蛋白的表达情况。结果与对照组比较,模型组小鼠的肾脏指数显著降低(P病理改变少见;原儿茶醛低、高剂量组肾脏TUNEL阳性表达有所下降(P<0.01、0.001),Caspase-3和Bcl-2蛋白表达显著上升(P<0.05、0.01、0.001)),cleaved-Caspase-3和BAX蛋白表达显著下降(P<0.01、0.001),呈剂量相关性。结论原儿茶醛可预防CTX所致急性肾损伤,其机制可能与抗细胞凋亡有关。

关键词：原儿茶醛环磷酰胺急性肾损伤氧化应激:凋亡