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噬菌体展示疫苗的研究进展

中国生物制品学杂志 2023年第9期36卷 1132-1137页

作者：王财赵子红(综述) 李唯峰张玉妥(审校) 河北北方学院病原生物学与免疫研究所河北张家口075000

噬菌体是感染细菌、真菌、放线菌和螺旋体等微生物的病毒,因其固有的免疫原性、遗传可塑性、稳定性及安全性等优势,使其在疫苗研发中具有独特的潜力。目前,有较多利用其构建疫苗递送平台的研究,主要包括噬菌体展示疫苗、噬菌体DNA疫苗... 详细信息

噬菌体是感染细菌、真菌、放线菌和螺旋体等微生物的病毒,因其固有的免疫原性、遗传可塑性、稳定性及安全性等优势,使其在疫苗研发中具有独特的潜力。目前,有较多利用其构建疫苗递送平台的研究,主要包括噬菌体展示疫苗、噬菌体DNA疫苗及杂交噬菌体DNA疫苗3种形式,其中研究最为广泛的是噬菌体展示疫苗。噬菌体展示技术是一种新型疫苗制备技术,是以噬菌体为载体,通过将外源多肽或蛋白基因整合至噬菌体基因中,以融合蛋白的形式展示在噬菌体表面的分子生物学技术。本文主要就噬菌体展示疫苗的免疫学基础、展示系统及其在疾病预防应用的研究进展作一综述,以期为噬菌体展示疫苗的研发与应用提供参考。

关键词：噬菌体噬菌体展示疫苗噬菌体展示系统

张家口地区18岁以下变应性鼻炎患者变应原检测结果分析

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第二军医大学学报 2021年第8期42卷 851-857页

作者：陈蕊赵颖安晶马翠宋鸿儒张玉妥河北北方学院病原生物学与免疫研究所张家口075000

目的分析张家口地区18岁以下变应性鼻炎(AR)患者的变应原检测结果,了解本地区AR患者食入性、吸入性变应原的分布情况。方法选择2019年4月至2020年11月就诊于河北北方学院附属第一医院耳鼻咽喉-头颈外科454例18岁以下有AR临床表现的患者... 详细信息

目的分析张家口地区18岁以下变应性鼻炎(AR)患者的变应原检测结果,了解本地区AR患者食入性、吸入性变应原的分布情况。方法选择2019年4月至2020年11月就诊于河北北方学院附属第一医院耳鼻咽喉-头颈外科454例18岁以下有AR临床表现的患者作为研究对象,通过酶联免疫捕获法对患者血清进行15种变应原特异性IgE抗体检测,分析变应原在不同年龄段、性别、就诊月份的差异。结果454例患者中,438例(96.48%)至少有1种变应原阳性,吸入性变应原阳性率为71.59%(325/454),其中艾蒿的阳性率最高(52.20%,237/454),其次为普通豚草(28.85%,131/454)、屋尘(28.85%,131/454);食入性变应原阳性率为67.18%(305/454),其中以鸡蛋和牛奶的阳性率较高[分别为55.51%(252/454)、34.14%(155/454)]。变应原总阳性率、吸入性变应原总阳性率、食入性变应原总阳性率在1-6岁组、7-14岁组和15-17岁组之间差异有统计学意义(P学意义(χ^(2)=3.959,P=0.047;χ^(2)=0.818,P=0.366);食入性变应原阳性率1-6岁组高于7-14岁组及15-17岁组,且7-14岁组高于15-17岁组,差异均有统计学意义(P均学意义(P均<0.05)。男性AR患者艾蒿、普通豚草、猫上皮、交链孢霉变应原的阳性率均高于女性(P均<0.05)。AR患者主要以单一变应原致敏为主(29.45%,129/438),变应原阳性个数与患者的性别无关。AR患者就诊人数于8月份达到高峰(37.22%,169/454)。结论张家口地区18岁以下AR患者的主要吸入性变应原为艾蒿、普通豚草、屋尘,食入性变应原为鸡蛋、牛奶。随着患者年龄的增长食入性变应原阳性率逐渐降低。AR患者以单一变应原为主,就诊人数于8月份达到高峰。

关键词：变应性鼻炎张家口未成年人食入性变应原吸入性变应原

沙眼衣原体多态膜蛋白PmpF基因克隆及生物信息学分析

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中国病原生物学杂志 2015年第9期10卷 786-791页

作者：常月立张彦霞乔海霞王文栋王晨红韩小艳张玉妥河北北方学院病原生物学研究所河北张家口075000

目的克隆沙眼衣原体的多态膜蛋白PmpF基因,分析其生物学特征。方法以沙眼衣原体L2菌株DNA为模板,PCR扩增PmpF基因,克隆后测序,采用生物信息软件、数据库对其进行同源性比对,并分析其编码蛋白的主要化学特征、结构功能以及B细胞抗原表位... 详细信息

目的克隆沙眼衣原体的多态膜蛋白PmpF基因,分析其生物学特征。方法以沙眼衣原体L2菌株DNA为模板,PCR扩增PmpF基因,克隆后测序,采用生物信息软件、数据库对其进行同源性比对,并分析其编码蛋白的主要化学特征、结构功能以及B细胞抗原表位。结果 PCR扩增实验株沙眼衣原体PmpF基因核苷酸序列长度为3 099bp,该菌株与同一生物型同源性≥99.97%,与不同生物型同源性生物型氨基酸序列同源性≥99.90%,与不同生物型同源性达研究克隆了沙眼衣原体PmpF基因,推测其表达蛋白含B细胞抗原表位。为研究此基因的生物学功能奠定了基础。

关键词：沙眼衣原体 PmpF基因克隆序列测定生物信息学分析

刚地弓形虫ROP10-ROP18真核表达载体的构建与鉴定

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中国病原生物学杂志 2018年第6期13卷 612-616页

作者：刘荣荣张晓磊张进顺贾晓晖刘楠河北北方学院病原生物学与免疫学研究所河北张家口075000

目的构建刚地弓形虫棒状体蛋白10(ROP10)、棒状体蛋白18(ROP18)复合基因真核表达载体pVAXDROP10-ROP18,并在HeLa细胞内表达目的蛋白。方法设计ROP10、ROP18基因特异引物,采用RT-PCR扩增ROP10、ROP18基因并测序,将ROP10和ROP18基因分别... 详细信息

目的构建刚地弓形虫棒状体蛋白10(ROP10)、棒状体蛋白18(ROP18)复合基因真核表达载体pVAXDROP10-ROP18,并在HeLa细胞内表达目的蛋白。方法设计ROP10、ROP18基因特异引物,采用RT-PCR扩增ROP10、ROP18基因并测序,将ROP10和ROP18基因分别定向插入双启动子真核表达载体pVAXD的多克隆位点中,构建单价质粒pVAXD-ROP10和pVAXD-ROP18,然后将ROP18基因插入pVAXD-ROP10中构建双启动子真核表达载体pVAXD-ROP10-ROP18。经PCR和双酶切验证后将pVAXD-ROP10-ROP18转染至HeLa细胞内,提取细胞总RNA并逆转录为cDNA,以此为模板分别进行ROP10基因和ROP18基因的RT-PCR鉴定;采用间接免疫荧光试验(IFA)检验ROP10和ROP18蛋白表达情况。结果成功克隆ROP10、ROP18基因片段并构建了重组质粒pVAXDROP10-ROP18,测序、双酶切和PCR验证重组质粒构建正确。分别将3种重组质粒转染至HeLa细胞后经RT-PCR鉴定,pVAXD-ROP10-ROP18组可同时扩增出1 761bp(ROP10基因)和1 665bp(ROP18基因)2个片段,而pVAXDROP10组和pVAXD-ROP18组分别扩增出1 761bp和1 665bp的目的片段;IFA显示pVAXD-ROP10组和pVAXDROP18组均有绿色荧光,即分别表达ROP10和ROP18蛋白。结论成功构建重组质粒pVAXD-ROP10-ROP18、pVAXD-ROP10和pVAXD-ROP18质粒可在真核细胞中分别表达ROP10和ROP18两种蛋白。

关键词：刚地弓形虫棒状体蛋白10 棒状体蛋白18 重组质粒真核表达载体

CRISPR/Cas9系统在传染病诊疗中的应用进展

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中国免疫学杂志 2022年第9期38卷 1150-1152,F0003,F0004页

作者：高哲张荣荣贾天军(指导) 河北北方学院临床检验诊断学重点实验室病原生物学与免疫研究所张家口075000

CRISPR/Cas系统是一种源自细菌和古细菌的适应性免疫系统,经人工改造后发展成为一种强大的基因编辑工具,使基础科学研究发生了革命性的变化。其中,CRISPR/Cas9系统是研究最为深入、发展最快的一种。随着CRISPR/Cas9系统的不断发展,越来... 详细信息

CRISPR/Cas系统是一种源自细菌和古细菌的适应性免疫系统,经人工改造后发展成为一种强大的基因编辑工具,使基础科学研究发生了革命性的变化。其中,CRISPR/Cas9系统是研究最为深入、发展最快的一种。随着CRISPR/Cas9系统的不断发展,越来越多关于CRISPR/Cas9系统的疗法进入临床试验。本文简要介绍CRISPR/Cas9系统的结构和作用机制,并对其在传染病诊疗中的应用进行综述。

关键词： CRISPR/Cas9系统病毒感染寄生虫感染

微小脲原体UP3-00830基因原核表达载体的构建表达及生物信息学分析

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中国病原生物学杂志 2023年第2期18卷 162-167页

作者：白一童贾泽玮贾晓晖李瑞平贾天军河北北方学院临床检验诊断学重点实验室河北北方学院病原生物学与免疫研究所河北张家口075000 河北北方学院附属第二医院检验科

目的构建微小脲原体UP3-00830基因原核表达载体,诱导表达蛋白并进行生物信息学分析。方法通过PCR方法扩增UP3-00830基因。双酶切目的基因和载体质粒pGEX-6P-2,经T4连接酶连接,连接产物转化XL1-Blue感受态,经10 mmol/L IPTG诱导表达GST... 详细信息

目的构建微小脲原体UP3-00830基因原核表达载体,诱导表达蛋白并进行生物信息学分析。方法通过PCR方法扩增UP3-00830基因。双酶切目的基因和载体质粒pGEX-6P-2,经T4连接酶连接,连接产物转化XL1-Blue感受态,经10 mmol/L IPTG诱导表达GST-UP3-00830融合蛋白,运用生物信息学软件预测UP3-00830基因编码的假设蛋白的功能。结果成功构建了pGEX-6p-2-UP3-00830重组质粒,测序后与NCBI中录入的序列进行比对,同源性为99.85%。将重组质粒转染大肠埃希菌后经10 mmol/L IPTG诱导,表达相对分子质量为51×10^(3)的GST-UP3-00830融合蛋白,与预期相符。采用生物信息学软件分析UP3-00830基因编码的假设蛋白,其分子式为C_(1150)H_(1846)N_(302)O_(356)S_(4),理论相对分子质量为25.73×10^(3),理论等电点(pI)为5.19,氨基酸数目为218,氨基酸组成中的赖氨酸(Lys)所占比例最高。含有α-螺旋、延伸链、无规则卷曲和β-转角,无跨膜区域和信号肽区域,第178-216位为卷曲螺旋区域。高级结构分析显示,UP3-00830基因编码的假设蛋白与蛋白库中1zxj.1相似性最高,为31.05%;结构及功能预测显示该蛋白具有蛋白转运和蛋白折叠的功能,与其相邻的蛋白分别为UU067、fecE(UU069)、hmuU-1(UU070)和ABCsbp-4(UU071)。结论成功构建UP3-00830基因原核表达载体,并诱导表为51×10^(3)的目的蛋白,该蛋白可能参与物质转运和信号转导。

关键词：微小脲原体 UP3-00830 原核表达生物信息学分析

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b型和不可分型流感嗜血杆菌疫苗的研究进展

现代预防医学 2021年第1期48卷 161-165页

作者：赵颖陈蕊安晶曾琳张玉妥河北北方学院病原生物学实验室

流感嗜血杆菌(Hi)是常见的条件致病菌,可引起脑膜炎、肺炎、中耳炎、败血症和会厌炎等疾病,其中,b型流感嗜血杆菌(Hib)和不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)所致感染最为常见。疫苗接种是预防其感染最有效的手段。本文简述了Hib疫苗的发展、应... 详细信息

流感嗜血杆菌(Hi)是常见的条件致病菌,可引起脑膜炎、肺炎、中耳炎、败血症和会厌炎等疾病,其中,b型流感嗜血杆菌(Hib)和不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)所致感染最为常见。疫苗接种是预防其感染最有效的手段。本文简述了Hib疫苗的发展、应用及NTHi候选疫苗的研究现状,为疾病的防治和疫苗的研发提供参考。

关键词： b型流感嗜血杆菌不可分型流感嗜血杆菌疫苗

刚地弓形虫ROP16基因的克隆及生物信息学分析

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中国病原生物学杂志 2016年第12期11卷 1108-1113页

作者：刘楠郭玲玲张进顺张晓磊刘荣荣河北北方学院病原生物学与免疫学研究所河北张家口075000

目的构建刚地弓形虫棒状体蛋白16(TgROP16)真核重组表达载体,对TgROP16基因编码蛋白进行生物信息学分析。方法提取刚地弓形虫总RNA,根据TgROP16基因的开放阅读框架设计引物,采用逆转录PCR(RTPCR)扩增ROP16基因,经EcoR I、Not I酶切后连... 详细信息

目的构建刚地弓形虫棒状体蛋白16(TgROP16)真核重组表达载体,对TgROP16基因编码蛋白进行生物信息学分析。方法提取刚地弓形虫总RNA,根据TgROP16基因的开放阅读框架设计引物,采用逆转录PCR(RTPCR)扩增ROP16基因,经EcoR I、Not I酶切后连接入真核表达载体pVAX1中,连接产物转化大肠埃希菌(E.coli)XL1-Blue。提取阳性菌落质粒,进行PCR、双酶切鉴定及基因测序,对所获序列进行生物信息学分析。结果 TgROP基因RT-PCR扩增产物与预期一致,大小约为2 100bp。重组质粒经PCR及双酶切鉴定构建正确。测序显示获得的TgROP16基因片段为2 124bp,与GenBank已收录的弓形虫ROP16基因序列(登录号为GQ249093.1)比对,一致性为99.8%。预测其编码蛋白TgROP16为非跨膜分泌蛋白,含707个氨基酸,分子式为C3343H5339N967O1024S2,分子质量单位为76.1352ku,理论等电点为9.18;在TgROP16蛋白的二级结构中α-螺旋、延伸链、β-转角和无规则卷曲分别占比35.79%、14.29%、7.07%和42.86%;含多个可形成卷曲螺旋构象的区域与可成为磷酸化位点的氨基酸残基,存在信号肽序列,含39个B细胞抗原表位、24个CTL细胞抗原表位及33个Th细胞抗原表位。结论成功构建了pVAX1-ROP16真核表达重组质粒,生物信息学分析表明其编码蛋白TgROP16具有良好的抗原性及免疫原性,有望作为弓形虫疫苗候选分子。

关键词：刚地弓形虫 ROP16 真核表达生物信息学分析

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刚地弓形虫棒状体蛋白10的生物信息学分析

中国病原生物学杂志 2017年第9期12卷 855-859页

作者：刘荣荣张进顺张晓磊刘楠贾晓晖王璐瑶河北北方学院病原生物学与免疫学研究所河北张家口075000

目的对刚地弓形虫棒状体蛋白10(TgROP10)进行生物信息学预测,分析其免疫原性。方法运用生物信息学在线分析程序ProtParam、SOSUI、ProtScale、TMHMM、SignalP-4.1、TargetP1.1Server、SOPMA、MotifScan、SWISS-MODEL、SYFPEITHI和Bcepred等并结合生物信息学软件DNASTAR和DNAMAN分析预测TgROP10的理化性质、可溶性、亲疏水性、跨膜结构域、信号肽、胞内定位、二级结构、蛋白翻译后修饰位点、三级结构、柔韧性、表面可及性和B细胞、T细胞抗原表位等。结果 TgROP10蛋白由586个氨基酸组成,分子式为C2562H4045N739O964S9,分子质量单位(Mr)为60.912 21×103,理论等电点为4.19,吸光度值为0.476,半衰期为30h,不稳定系数为55.56,脂溶性指数为56.25,总平均亲水性系数为-0.699,属于亲水性蛋白;该蛋白无跨膜结构区域,信号肽切割位点在22-23位氨基酸之间,亚细胞定位预测可能是分泌蛋白;二级结构中α螺旋和β折叠分别占26.79%和13.31%,β转角和无规则卷曲分别占6.48%和53.41%,有6种翻译后修饰位点,15个B细胞抗原表位,3个CTL细胞抗原表位,12个Th细胞抗原表位,28个亲水性参数得分1.9的区域,15个柔韧性参数得分2.0的区域,27个表面可及性参数得分1.9的区域,3个暴露表面参数得分2.3的区域。结论生物信息学预测TgROP10含多个抗原表位,具有免疫原性,可作为弓形虫疫苗备选蛋白。

关键词：刚地弓形虫 TgROP10 生物信息学免疫原性