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雏菊叶龙胆酮拮抗阿霉素诱导心肌损伤中差异表达lncRNA的筛选及分析

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中国组织工程研究 2024年第26期28卷 4121-4128页

作者：刘莹刘亚磊刘玉河北中医学院生物化学与生物学教研室河北省心脑血管病中医药防治研究重点实验室河北省石家庄市050000 河北中医学院实验中心河北省石家庄市050000

背景:有研究表明,长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)在心脏疾病的发生和发展中发挥了重要作用,其是否参与雏菊叶龙胆酮拮抗阿霉素诱导的小鼠心脏损伤目前未见报道。目的:筛选雏菊叶龙胆酮改善阿霉素诱导心肌损伤小鼠心肌组织... 详细信息

背景:有研究表明,长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)在心脏疾病的发生和发展中发挥了重要作用,其是否参与雏菊叶龙胆酮拮抗阿霉素诱导的小鼠心脏损伤目前未见报道。目的:筛选雏菊叶龙胆酮改善阿霉素诱导心肌损伤小鼠心肌组织中差异表达的lncRNA,并对其进行生物信息学分析。方法:取48只C57小鼠,采用随机数字表法分为正常组、模型组、雏菊叶龙胆酮组和阳性药组,每组12只。模型组、雏菊叶龙胆酮组和阳性药组小鼠腹腔注射阿霉素,隔日一次,共8次;雏菊叶龙胆酮组和阳性药组在注射阿霉素的基础上分别灌胃给予雏菊叶龙胆酮悬浊液、卡托普利溶液,1次/d,连续给药21 d。给药结束后,进行心电图检查与心肌组织病理形态观察,同时对小鼠心肌组织进行高通量测序分析,筛选出差异表达的lncRNA,对差异表达的lncRNA进行靶基因预测,并对靶基因进行GO富集与KEGG信号通路分析。结果与结论:①模型组小鼠心电图ST段明显抬高,雏菊叶龙胆酮组小鼠心电图ST段抬高程度减轻;苏木精-伊红、Masson及天狼猩红染色显示,模型组小鼠心肌组织中心肌胞浆着色不均,颜色深浅不一,心肌纤维完整性及连续性较差,可见大量胶原纤维沉积;雏菊叶龙胆酮处理后小鼠心肌组织异常情况有所改善。②高通量测序分析结果显示,与模型组相比,雏菊叶龙胆酮组小鼠心肌组织识别出差异表达lncRNA共270个,其中表达上调的lncRNA有165个,表达下调的lncRNA有105个。结合实验结果与相关文献,最终获得3条LncRNA(NONMMUT149833.1、NONMMUT003237.2、ENSMUST00000219015)及4个相关mRNAs(Alas2、Igf2、Acta1、Cilp)。靶基因预测、GO富集与KEGG信号通路分析结果显示,雏菊叶龙胆酮处理后,心肌损伤小鼠心肌组织中差异表达的lncRNA可通过顺式(cis-)和/或反式(trans-)调控来调节其靶蛋白编码基因的表达,参与调控分子功能及生物过程等。③结果显示,雏菊叶龙胆酮可显著改善阿霉素诱导心肌损伤小鼠的心功能和部分lncRNA表达。

关键词：雏菊叶龙胆酮心肌损伤长链非编码RNA 生物信息学信号通路

复方玉液汤通过调控PI3K/Akt信号通路抑制糖尿病大鼠心肌细胞凋亡和炎症反应

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南方医科大学学报 2024年第7期44卷 1306-1314页

作者：张文祥顾惠贤陈鹏德吴思宇马洪艳姚蓝新疆医科大学中医学院新疆乌鲁木齐830057 新疆名医名方与特色方剂学重点实验室新疆乌鲁木齐830057

目的运用网络药理学技术分析复方玉液汤防治糖尿病心肌病(DCM)的作用机制,并通过动物实验进行验证。方法利用TCMSP数据库检索复方玉液汤所含6种中药(黄芪、山药、知母、葛根、五味子、天花粉)中的化学成分,根据口服生物利用度(OB)和药... 详细信息

目的运用网络药理学技术分析复方玉液汤防治糖尿病心肌病(DCM)的作用机制,并通过动物实验进行验证。方法利用TCMSP数据库检索复方玉液汤所含6种中药(黄芪、山药、知母、葛根、五味子、天花粉)中的化学成分,根据口服生物利用度(OB)和药物相似性(DL)筛选出活性化学成分以及与DCM相关的靶点;利用Drugbank、Gene Cards、OMIM和PharmGKb数据库获取与DCM相关靶点;STRING数据库对核心靶点进行PPI网络的构建和分析;Metascape进行核心靶点的GO和KEGG富集分析;利用Cytoscape3.9.1构建“中药-关键成分-核心靶点-关键通路”网络,并对核心靶点对接的关键成分进行分子对接。建立糖尿病心肌病Wistar大鼠动物模型,将大鼠分为正常组、模型组、玉液汤低剂量组(YYT-低组,0.29 g/kg)、玉液汤高剂量组(YYT-高组,1.15 g/kg),15只/组,药物剂量为生药含量。给药8周后观察各组大鼠的心脏组织病理切片,检测各组大鼠心脏电生理变化、血清中的LDH、CK、CK-MB含量变化以及心脏组织中PI3K、P-PI3K、Akt、P-AKT、BAX、IL-6、TNF-α蛋白的表达情况。结果筛选后得到复方玉液汤中61个活性化合物,1057个靶点;3682个DCM相关疾病靶点,共同靶点551个。根据筛选获得的核心靶点富集得到的核心通路发现,凋亡和炎症及相关PI3K/Akt信号通路可能是治疗DCM的关键信号通路;分子对接结果显示,金色酰胺醇酯、山柰酚等活性成分与AKT1和PIK3R1的结合活性较好。利用动物实验对筛选的靶点及通路进行验证,结果显示,与DCM模型组大鼠比较,复方玉液汤能改善模型大鼠心肌组织细胞紊乱及炎性浸润的病理特征,降低模型大鼠血清中LDH、CK、CK-MB水平及模型大鼠心脏组织中BAX、IL-6、TNF-α的蛋白含量并升高P-PI3K和P-AKT的蛋白含量(P<0.05)。结论复方玉液汤防治DCM是多成分、多靶点和多信号通路共同作用的结果。复方中主要活性成分金色酰胺醇酯、山柰酚等通过调控PI3K/Akt信号通路,抑制DCM发病过程中心肌细胞凋亡及炎症反应,发挥对DCM的保护作用。

关键词：网络药理学复方玉液汤糖尿病心肌病

穿山龙薯蓣皂苷通过调控自噬治疗胶原诱导性关节炎小鼠模型的机制

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中国药理学通报 2024年第4期40卷 645-651页

作者：江涛由涌夏东帅薄思涵王永为高亚贤宋鸿儒承德医学院基础医学院免疫学教研室河北承德067000 承德医学院基础医学院解剖学教研室河北承德067000 河北北方学院医学检验学院免疫学教研室河北张家口075000

目的探讨穿山龙薯蓣皂苷通过自噬治疗胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)模型小鼠的作用机制。方法通过鸡Ⅱ型胶原乳剂建立CIA模型小鼠,初次免疫DBA1小鼠(0.1 mL),第21天后再次给予相同剂量刺激。加强免疫后将胶原免疫... 详细信息

目的探讨穿山龙薯蓣皂苷通过自噬治疗胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)模型小鼠的作用机制。方法通过鸡Ⅱ型胶原乳剂建立CIA模型小鼠,初次免疫DBA1小鼠(0.1 mL),第21天后再次给予相同剂量刺激。加强免疫后将胶原免疫的50只小鼠随机分组为CIA模型组、雷公藤组和穿山龙薯蓣皂苷低、中、高剂量组,另有10只小鼠注射等量生理盐水作为对照组。在对小鼠进行连续14天灌胃治疗并观察各组小鼠足爪的炎症程度,取下各组小鼠脾、腹股沟淋巴结和踝关节、膝关节,对踝关节、膝关节进行HE染色,检测各组淋巴结、脾组织中mRNA和蛋白质水平的相关自噬指标。结果与CIA模型组相比,穿山龙薯蓣皂苷高剂量组关节炎指数(AI)评分降低(P<0.05);雷公藤组及穿山龙薯蓣皂苷组足爪厚度差值减小(P<0.01)。与对照组相比,CIA模型组体质量明显下降(P<0.01);小鼠膝关节滑膜和足爪踝关节HE染色结果显示CIA模型组对比对照组出现免疫细胞浸润、骨质侵蚀、软骨破坏和滑膜增生的症状;雷公藤组与穿山龙薯蓣皂苷中、高剂量组对CIA模型有不同程度的治疗作用,可以减轻和预防症状。与CIA模型组相比,雷公藤组和穿山龙薯蓣皂苷治疗组中LC3、Beclin-1的mRNA水平和蛋白水平的表达升高,p62的mRNA水平和蛋白水平的表达降低。结论穿山龙薯蓣皂苷可能通过抑制自噬对CIA模型小鼠起到治疗作用。

关键词：穿山龙薯蓣皂苷自噬类风湿性关节炎胶原诱导性关节炎 p62 LC3 Beclin-1

基于肠道微生态探讨黄芪扶正调衡治疗糖尿病肾病的研究进展

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中国微生态学杂志 2024年第8期36卷 967-973页

作者：纪新建张志芳闫鑫媛张欣雨陈明昊刘雅倩内蒙古医科大学中医学院内蒙古呼和浩特010010 内蒙古医科大学方剂学教研室

肠道微生态环境在糖尿病肾病的发生发展中发挥着不可或缺的作用。黄芪是临床治疗糖尿病肾病的常用药物之一,其既能上调有益菌的丰富度,又能维护肠道屏障功能。如果将肠道菌群失调而产生的有害菌群及其衍生物视为“邪气”,将肠上皮屏障... 详细信息

肠道微生态环境在糖尿病肾病的发生发展中发挥着不可或缺的作用。黄芪是临床治疗糖尿病肾病的常用药物之一,其既能上调有益菌的丰富度,又能维护肠道屏障功能。如果将肠道菌群失调而产生的有害菌群及其衍生物视为“邪气”,将肠上皮屏障以及肠道能量代谢和免疫功能视作“正气”,则邪盛正亏是肠道微生态被破坏而导致糖尿病患者肾脏进一步损伤的主要原因。将中药黄芪作为治疗手段,以肠道菌群为纽带,形成“药-菌-人”三位一体的动态调节机制,从而使糖尿病肾病患者达到人菌共存、正邪相安的平衡状态。因此,本文基于肠道微生态探讨黄芪修护肠上皮屏障的机制,提升自身免疫力以“扶正”,调节肠道微生态环境的稳定以“调衡”,进而治疗并延缓糖尿病肾病,以期为临床治疗糖尿病肾病提供新的思路和理论依据。

关键词：糖尿病肾病肠道微生态黄芪扶正调衡

苦杏仁苷对流感病毒FM1诱导的微血管内皮细胞通透性的影响

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中国临床药理学杂志 2024年第6期40卷 820-824页

作者：王祎曲书焱姜琪琦钟燕春河北中医药大学基础医学院温病学教研室河北石家庄050200

目的研究苦杏仁苷对甲型流感病毒FM1诱导的微血管内皮细胞(PMVEC)通透性增加的影响及其作用机制。方法将PMVEC随机分为对照组、模型组(100 TCID_(50) FM1)、苦杏仁苷低剂量组(100 TCID_(50) FM1+4.0 mg·mL^(-1)苦杏仁苷)、苦杏仁苷中... 详细信息

目的研究苦杏仁苷对甲型流感病毒FM1诱导的微血管内皮细胞(PMVEC)通透性增加的影响及其作用机制。方法将PMVEC随机分为对照组、模型组(100 TCID_(50) FM1)、苦杏仁苷低剂量组(100 TCID_(50) FM1+4.0 mg·mL^(-1)苦杏仁苷)、苦杏仁苷中剂量组(100 TCID_(50) FM1+8.0 mg·mL^(-1)苦杏仁苷)、苦杏仁苷高剂量组(100 TCID50 FM1+16.0 mg·mL^(-1)苦杏仁苷)及740Y-P组(100 TCID50 FM1+16.0 mg·mL^(-1)苦杏仁苷+50μmol·L^(-1)的PI3K激活药740Y-P)。以噻唑蓝(MTT)法、Transwell法、酶联免疫吸附测定(ELISA)法、蛋白质印迹法分别检测各组细胞增殖、细胞通透性、炎性因子表达水平和蛋白表达水平。结果对照组、模型组和苦杏仁苷低、中、高剂量组的白细胞介素-6(IL-6)水平分别为(50.12±3.16)、(93.12±5.61)、(80.33±6.24)、(70.05±5.46)和(61.03±4.68)pg·mL^(-1),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平分别为(101.31±9.24)、(167.05±10.31)、(142.02±10.13)、(125.34±9.87)和(112.44±8.05)pg·mL^(-1)。对照组、模型组、苦杏仁苷低剂量组、苦杏仁苷中剂量组、苦杏仁苷高剂量组、740Y-P组细胞跨上皮电阻(TER)分别为(53.01±4.17)、(24.98±2.66)、(30.01±3.49)、(36.84±3.25)、(46.23±4.31)和(30.21±3.16)Ω×cm^(2),磷酸化的磷脂酰肌醇-3-羟激酶(p-PI3K)蛋白水平分别为0.34±0.04、1.01±0.09、0.80±0.08、0.61±0.07、0.43±0.05和0.87±0.09,磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)水平分别为0.27±0.03、0.82±0.10、0.60±0.06、0.42±0.03、0.31±0.02和0.84±0.02。以上指标,模型组和对照组比较,苦杏仁苷低、中、高剂量组分别与模型组比较,苦杏仁苷低、中、高剂量组之间比较,苦杏仁苷高剂量组与740Y-P组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论苦杏仁苷可能通过抑制PI3K/AKT/mTOR通路降低流感病毒FM1诱导的PMVEC细胞通透性增加。

关键词：苦杏仁苷甲型流感病毒微血管内皮细胞通透性磷脂酰肌醇-3-羟激酶/蛋白质激酶B/雷帕霉素靶蛋白通路

基于GEO数据库的玉液汤防治糖尿病肾病lncRNA-miRNA-mRNA转录网络的整合研究

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中药药理与临床 2024年第4期40卷 68-77,109页

作者：吴思宇陈鹏德张文祥郭凤顾惠贤姚蓝新疆医科大学中医学院乌鲁木齐830057 新疆名医名方与特色方剂学重点实验室乌鲁木齐830057

目的:挖掘玉液汤防治糖尿病肾病(Diabetic Nephropathy,DN)的三元转录网络,预测其防治DN的生物标志物及作用机制。方法:利用TCMSP、Pharmmapper、Uniprot数据库预测玉液汤的关键活性成分及其靶蛋白,采用GEO数据库筛查正常及DN患者的差... 详细信息

目的:挖掘玉液汤防治糖尿病肾病(Diabetic Nephropathy,DN)的三元转录网络,预测其防治DN的生物标志物及作用机制。方法:利用TCMSP、Pharmmapper、Uniprot数据库预测玉液汤的关键活性成分及其靶蛋白,采用GEO数据库筛查正常及DN患者的差异表达的信使核糖核酸(mRNA)和微小RNA(miRNA),将玉液汤预测靶点与DN差异表达的mRNAs(DEmRNAs)取交集得到玉液汤防治DN的靶点,利用String在线平台对其绘制蛋白质相互作用(PPI)网络,并利用Metascape平台对其进行基因本体GO功能富集分析和京都基因与基因组百科全书KEGG通路富集分析;利用Cytoscape 3.6.1软件构建玉液汤防治DN的活性成分-靶点网络。将PPI网络中的玉液汤治疗DN的靶点导入Cytoscape软件进行拓扑分析,利用Cytohubba插件筛选核心靶点,使用miRDB、miRWalk和TargetScan数据库预测核心靶点相关的miRNAs并与DN差异表达的miRNAs(DEmiRNA)取交集,将交集miRNAs导入Starbase数据库预测与之相关的长链非编码核糖核酸(lncRNA),筛选与DN有关的lncRNA;利用Discovery Studio 2019软件进行核心化合物-核心靶点的分子对接验证。链脲佐菌素(STZ)联合高脂高糖饲料诱导DN大鼠模型,给予玉液汤2.6 g/kg干预,观察各组大鼠体质量变化、空腹血糖水平及肾脏组织病理形态,检测尿蛋白、血肌酐和尿素氮含量;采用荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)验证差异基因,利用Cytoscape软件构建玉液汤防治DN的lncRNA-miRNA-mRNA的竞争性内源RNA(ceRNA)网络。结果:预测获得玉液汤防治DN的ceRNA网络由17个关键的lncRNAs、10个关键的miRNAs和13个关键的mRNAs构成。经实验验证,在ceRNA网络中,与模型对照组相比,玉液汤2.6 g/kg组大鼠尿蛋白、血肌酐和尿素氮的含量显著降低(P学过程,分子对接结果显示活性成分叶酸、毛蕊异黄酮、槲皮素、淫羊藿苷Ⅰ与核心靶点结合良好。结论:玉液汤可能通过影响糖尿病肾病大鼠lncRNA-miRNA-mRNA转录网络保护肾脏,抑制肾脏炎症,涉及多成分、多靶点、多途径协同作用。

关键词：玉液汤糖尿病肾病三元转录网络网络药理学分子对接

基于TLR4/MyD88通路探究针刺足三里对慢性阻塞性肺疾病大鼠的干预效果

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中国老年学杂志 2024年第10期44卷 2507-2511页

作者：刘森田琳胡秋生李晓峰河北中医学院研究生学院河北石家庄050091 河北以岭医院针灸科

目的基于Toll样受体(TLR)4/髓样分化因子(MyD)88通路探究针刺足三里对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠的干预效果。方法将40只大鼠选为实验对象,其中10只作为对照组,剩余30只用于构建COPD模型。于建模第15天在建模大鼠中随机选取10只作为早... 详细信息

目的基于Toll样受体(TLR)4/髓样分化因子(MyD)88通路探究针刺足三里对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠的干预效果。方法将40只大鼠选为实验对象,其中10只作为对照组,剩余30只用于构建COPD模型。于建模第15天在建模大鼠中随机选取10只作为早期模型组,烟熏55 d后将剩余20只建模大鼠分为模型组、普通COPD组各10只,普通COPD组给予针刺足三里,空白组、模型组给予生理盐水10 ml/kg。检测对比各组炎性因子、肺功能及TLR4、MyD88 mRNA及相关蛋白相对表达量。结果与对照组相比,模型组、早期模型组、普通COPD组白细胞介素(IL)-8、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-6水平、TLR4、MyD88 mRNA及蛋白表达量明显升高,0.3 s用力呼气量(FEV0.3)、用力肺活量(FVC)、呼气峰流速(PEF)水平明显降低(P<0.05);与模型组相比,早期模型组、普通COPD组IL-8、TNF-α、IL-6水平、TLR4、MyD88 mRNA及蛋白表达量明显降低,FEV0.3、FVC、PEF水平明显升高(P<0.05);与早期模型组相比,普通COPD组IL-8、TNF-α、IL-6水平、TLR4、MyD88 mRNA及蛋白表达量明显升高,FEV0.3、FVC、PEF水平明显降低(P<0.05)。结论针刺足三里可改善COPD大鼠肺功能,减轻炎性反应,且干预时间越早效果越佳,这种疗效可能与TLR4/MyD88信号通路的抑制有关。

关键词：慢性阻塞性肺疾病 Toll样受体4 髓样分化因子88 炎性因子肺功能

补阳还五汤对脑缺血再灌注大鼠线粒体氧化损伤和PKCε-Nampt通路的影响

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中成药 2024年第1期46卷 79-86页

作者：尹美娟刘真一靳晓飞周晓红高钰赵月眸高维娟河北中医学院河北省心脑血管病中医药防治研究重点实验室河北石家庄050091

目的探讨补阳还五汤对脑缺血再灌注(I/R)大鼠线粒体氧化损伤及PKCε-Nampt通路的影响。方法大鼠随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤组(14.3 g/kg)和依达拉奉组(3 mg/kg),除假手术组外均采用MCAO法建立脑I/R损伤模型,术后24 h各组给... 详细信息

目的探讨补阳还五汤对脑缺血再灌注(I/R)大鼠线粒体氧化损伤及PKCε-Nampt通路的影响。方法大鼠随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤组(14.3 g/kg)和依达拉奉组(3 mg/kg),除假手术组外均采用MCAO法建立脑I/R损伤模型,术后24 h各组给予相应剂量药物,给药7 d后通过神经功能评分评估神经功能缺损情况,免疫荧光检测神经元标志物MAP-2表达,观察神经元损伤情况,检测ROS、MDA水平和SOD活性评价氧化损伤情况,荧光探针JC-1检测线粒体膜电位变化,修饰酶循环法检测NAD^(+)/NADH比值,Western blot法检测PKCε、p-PKCε、Nampt蛋白表达,免疫组化法检测p-PKCε、Nampt蛋白阳性表达。结果与模型组比较,补阳还五汤组脑梗死体积、神经功能评分降低(P<0.05),脑组织MAP-2荧光强度增强(P<0.05),神经元损伤减轻,脑组织ROS、MDA水平降低(P<0.05),SOD活性、线粒体膜电位、NAD^(+)/NADH比值升高(P<0.05),p-PKCε、Nampt蛋白表达升高(P<0.05)。结论补阳还五汤可通过激活PKCε-Nampt信号通路、提高线粒体功能来减轻大鼠脑I/R损伤。

关键词：补阳还五汤脑缺血再灌注损伤线粒体 PKCε Nampt

金雀根、黄芪及其配伍对糖尿病肾脏疾病大鼠JNK/SAPK信号通路的影响

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中成药 2024年第8期46卷 2580-2586页

作者：林健聂远郭献炳赵阳丁英钧河北中医学院河北石家庄050200 河北省中西医结合肝肾病证研究重点实验室河北石家庄050091

目的探究金雀根、黄芪及其配伍对糖尿病肾脏疾病(DKD)模型大鼠肾脏保护作用及机制。方法将60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、恩格列净组(10 mg/kg)、金雀根组(3.1 g/kg)、黄芪组(3.1 g/kg)、金雀根加黄芪组(6.2 g/kg),除正常组外,各... 详细信息

目的探究金雀根、黄芪及其配伍对糖尿病肾脏疾病(DKD)模型大鼠肾脏保护作用及机制。方法将60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、恩格列净组(10 mg/kg)、金雀根组(3.1 g/kg)、黄芪组(3.1 g/kg)、金雀根加黄芪组(6.2 g/kg),除正常组外,各组大鼠行左侧肾摘除手术并腹腔注射链脲佐菌素(STZ,35 mg/kg)建立DKD模型,各组分别给予相应药物灌胃8周。期间定期检测FBG、24 h尿微量蛋白(24 h U-mAlb)。给药8周后处死大鼠,检测Scr、BUN、Cystatin C水平,HE、PAS、Masson染色观察肾组织病理改变,免疫组织化学法检测巨噬细胞标志蛋白CD68、iNOS表达,Western blot法检测肾组织JNK/SAPK通路蛋白JNK、p-JNK和TNF-α、IL-1β、ICAM-1表达,ELISA法检测血清TNF-α、IL-1β、ICAM-1水平。结果与正常组比较,模型组大鼠FBG、24 h U-mAlb、BUN、Scr、Cystatin C水平均升高(P0.05);与金雀根组或黄芪组比较,金雀根加黄芪组各指标均有不同程度的改善(P<0.05,P<0.01)。结论金雀根、黄芪及其配伍可改善DKD大鼠肾功能,抑制M1型巨噬细胞,减少炎症因子分泌,减轻肾脏病理损伤,其机制可能与抑制JNK/SAPK信号通路激活有关,金雀根与黄芪配伍药效较好。

关键词：金雀根黄芪糖尿病肾脏疾病 JNK/SAPK信号通路炎症因子