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过表达HAC1提高葡萄糖氧化酶在毕赤酵母中分泌表达

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生物技术 2024年第5期 537-542页

作者：王庆庆高庆华罗同阳董聪王玥刘小娜唐兆宏贾振华河北省微生物研究所有限公司保定鲜尔康生物工程有限责任公司河北省科学院生物研究所

[目的]旨在提高重组葡萄糖氧化酶(GOD)在毕赤酵母中的表达。[方法]将构建的表达载体pPICZB-HAC1、pPICZB-Hrd1、pPIC3.5K-Ubc1线性化后，电击转化青霉葡萄糖氧化酶毕赤酵母感受态细胞，用含有50μg/mL Zeocin或200μg/mL G418的YPD平板... 详细信息

[目的]旨在提高重组葡萄糖氧化酶(GOD)在毕赤酵母中的表达。[方法]将构建的表达载体pPICZB-HAC1、pPICZB-Hrd1、pPIC3.5K-Ubc1线性化后，电击转化青霉葡萄糖氧化酶毕赤酵母感受态细胞，用含有50μg/mL Zeocin或200μg/mL G418的YPD平板筛选阳性转化子。阳性转化子进行试管诱导培养，筛选得到1株高产重组菌；在此基础上进行10 L发酵罐培养时，外源添加氯化血红素来提高葡萄糖氧化酶在毕赤酵母中的表达量。[结果]在试管水平筛选过表达转录激活因子HAC1、下游分子伴侣Hrd1和Ubc1的重组菌株，相比出发菌株酶活分别提高了56.46%、43.51%和48.02%,其中过表达HAC1重组青霉葡萄糖氧化酶菌株在10 L发酵罐酶活达到1 308 U/mL。[结论]通过过表达HAC1或者分子伴侣可以辅助蛋白正确折叠，其中过表达HAC1菌株表达的葡萄糖氧化酶酶活最高，将酶活提高了86%。

关键词：毕赤酵母葡萄糖氧化酶未折叠蛋白响应 HAC1基因分子伴侣氯化血红素异源表达分泌蛋白

某油气水混输不保温海底管道的腐蚀原因及控制措施

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腐蚀与防护 2024年第9期45卷 120-125页

作者：杨根全张峙胡丽华王治国陈大江中海石油(中国)有限公司湛江分公司湛江524057 中海油研究总院有限责任公司北京100028

对某油气水混输不保温海底管道开展了多次智能内检测,发现在不同时间段海底管道前段及中段存在大量局部腐蚀缺陷点。通过腐蚀模拟试验、通球清管产物及微生物测试分析、海底管道温度变化曲线分析等手段,对该海底管道腐蚀原因进行了系统... 详细信息

对某油气水混输不保温海底管道开展了多次智能内检测,发现在不同时间段海底管道前段及中段存在大量局部腐蚀缺陷点。通过腐蚀模拟试验、通球清管产物及微生物测试分析、海底管道温度变化曲线分析等手段,对该海底管道腐蚀原因进行了系统分析。结果表明:海底管道前段及中段产生大量腐蚀缺陷点的原因是硫酸盐还原菌和腐生菌,以及沉积物垢下腐蚀相互作用,不同时间段海底管道缺陷点发生位置不同是由物流入口温度变化从而改变管道沿程温降引起的。近年来,采取了加强通球清管措施、调整杀菌剂的注入、监测杀菌剂杀菌效果等措施后,海底管道腐蚀状况得到了缓解,腐蚀状况未见明显加剧。

关键词：海底管道微生物腐蚀沉积物垢下腐蚀

咖啡酸合成途径重构及其在大肠杆菌中的异源表达

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微生物学报 2024年第11期 4371-4387页

作者：刘蓉王美燕杜红毅刘硕栾孟澳唐游廖凤霞牛国清重庆中烟工业有限责任公司烟叶资源科学利用重庆市重点实验室西南大学农学与生物科技学院重庆太极集团股份有限公司医药研究院

【目的】通过咖啡酸合成途径重构，在大肠杆菌中实现咖啡酸的从头合成；通过优化合成基因的表达提升咖啡酸的合成效率，为咖啡酸及其衍生物的高效合成奠定基础。【方法】克隆约氏黄杆菌(Flavobacteriumjohnsoniaeu)酪氨酸氨解酶编码基因... 详细信息

【目的】通过咖啡酸合成途径重构，在大肠杆菌中实现咖啡酸的从头合成；通过优化合成基因的表达提升咖啡酸的合成效率，为咖啡酸及其衍生物的高效合成奠定基础。【方法】克隆约氏黄杆菌(Flavobacteriumjohnsoniaeu)酪氨酸氨解酶编码基因FjTAL和大肠杆菌(Escherichia coli)4-羟基苯乙酸-3-单加氧酶/核黄素氧化还原酶复合体编码基因EchpaBC，通过基因共表达重构咖啡酸合成途径，导入常用大肠杆菌中进行表达。通过组成型启动子筛选、对香豆酸生物传感器动态调控和关键基因拷贝数增加相结合的方式，构建一系列工程菌株，并利用HPLC分析这些菌株中对香豆酸和咖啡酸的产生情况。随后比较添加不同氮源和底物对咖啡酸产量的影响。【结果】在大肠杆菌中实现了咖啡酸的从头合成；通过启动子工程大幅提升了咖啡酸的合成效率，以葡萄糖为底物时咖啡酸产量从1.40mg/L提升到96.40mg/L，以酪氨酸为底物时咖啡酸从1.78mg/L提升到123.31mg/L；将驱动EchpaBC表达的组成型启动子替换为对香豆酸生物传感器，咖啡酸产量达到162.73mg/L；额外增加一个EchpaBC的拷贝数促进对香豆酸的转化，咖啡酸产量提高到185.15 mg/L。【结论】本研究采用组成型启动子改造、生物传感器调控和关键基因拷贝数增加相结合的策略，优化了FjTAL和EchpaBC的表达，成功获得了咖啡酸高产工程菌株，为咖啡酸的高效合成奠定了基础。

关键词：咖啡酸大肠杆菌启动子工程生物传感器动态调控

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气化渣酸浸液铁铬净化及聚合氯化铝制备

中国有色金属学报 2024年

作者：周季龙王亚茹魏怡菲孙建平孙伟岳彤中南大学资源加工与生物工程学院陕西煤业化工技术研究院有限责任公司

气化渣是煤气化工艺产生的固体废弃物，其大量排放严重威胁生态环境，制约煤化工行业发展。本文提出了从气化渣中酸浸提铝制备聚合氯化铝(PAC)的方法，开发了"混酸逆流浸出-铁铬共沉淀除杂-调控聚合"制备液态PAC的技术路线。混酸逆流浸... 详细信息

气化渣是煤气化工艺产生的固体废弃物，其大量排放严重威胁生态环境，制约煤化工行业发展。本文提出了从气化渣中酸浸提铝制备聚合氯化铝(PAC)的方法，开发了"混酸逆流浸出-铁铬共沉淀除杂-调控聚合"制备液态PAC的技术路线。混酸逆流浸出阶段最佳条件为：盐酸浓度2.125 mol/L，硫酸浓度0.69 mol/L，液固比4:1，温度85℃，时间4h，在此条件下，铝浸出率达85.39%。黄钠铁矾法除杂最佳条件为：97℃，反应1.5h，终点pH为2.0，可去除69.46%铁离子和51.36%铬离子。调控制备PAC阶段采用净化液为原料，加入150g/L氯化铝和100g/L氢氧化铝，60℃水解1h，85℃聚合1.5h，制得符合国家标准GB/T22627-2022的液体PAC产品，去浊率达94.33%。本研究为气化渣的资源化利用提供了新思路，具有节约资源、减少环境污染的双重意义。

关键词：气化渣逆流浸出黄钠铁矾法聚合氯化铝

新型冠状病毒S1、S2和NTD抗原特异性B细胞及其亚型标记技术的建立与应用

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病毒学报 2024年第4期40卷 679-686页

作者：宋彦丽杨惠洁赵玉秀鲍春婷李淑艳李长贵武汉生物制品研究所有限责任公司病毒性疫苗研究二室武汉430207 中国食品药品检定研究院呼吸道病毒疫苗室北京102600 北京生物制品研究所课题一组北京100176 长春生物制品研究所有限责任公司疫苗研究室长春130012

建立一种新型冠状病毒(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS⁃CoV⁃2)S1、S2、NTD蛋白特异性B细胞及其亚型的标记技术,该技术可通过与流式细胞术联用检测抗原特异性B细胞及其亚型含量,或与10×免疫组库联用对抗原特异性... 详细信息

建立一种新型冠状病毒(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS⁃CoV⁃2)S1、S2、NTD蛋白特异性B细胞及其亚型的标记技术,该技术可通过与流式细胞术联用检测抗原特异性B细胞及其亚型含量,或与10×免疫组库联用对抗原特异性B细胞进行测序。首先,测试最佳蛋白使用浓度:将生物素标记的S1、S2和NTD蛋白按照600 nmol/L、1200 nmol/L、2400 nmol/L、3600 nmol/L和4800 nmol/L分别与荧光素⁃亲和素偶联,通过流式检测S1+CD19+B、S2+CD19+B、NTD+CD19+B细胞占比,确定不同蛋白对应的最佳使用浓度;进一步优化生物素⁃蛋白与荧光素⁃亲和素的比例:将检测生物素⁃蛋白与荧光⁃亲和素的摩尔比分别按照4∶1,5∶1和6∶1比例测试,对小鼠脾脏S1+CD19+B、S2+CD19+B、NTD+CD19+B细胞及S1+CD19+CD27+B、S2+CD19+CD27+B、NTD+CD19+CD27+B细胞的检测效果,优化荧光素⁃亲和素的最佳使用量;通过测试BV421、Super Bright 600、PE、PE/Cy7和APC等荧光对小鼠脾细胞的非特异结合能力,选择非特异结合较弱的荧光;根据筛选的荧光,给生物素化的S1、S2和NTD均标记PE和APC荧光,建立检测这3个蛋白特异性B细胞和记忆B细胞的方法,并测试带核酸序列的荧光素⁃亲和素对B细胞和记忆B细胞的检测效果,测试该方法的稳定性。S1、S2和NTD蛋白浓度分别为4800 nmol/L、3600 nmol/L和3600 nmol/L时,对B细胞的检测效果最佳,且对阴性小鼠的染色效果较低;生物素⁃S1蛋白与荧光素⁃亲和素的最佳摩尔比为6∶1时,检测结果最佳;生物素⁃S2蛋白、生物素⁃NTD蛋白与荧光素⁃亲和素均在4:1时,检测结果最佳,且在该浓度下BV421、APC、Super Bright 600、PE与细胞的非特异结合较弱;建立了一种检测SARS⁃CoV⁃2 S1、S2和NTD抗原特异性B细胞及记忆B细胞的方法,通过对一批样本的重复3次检测,发现该方法较为稳定,CV值≤20%。通过抗原特异性B细胞标记技术,实现了对SARS⁃CoV⁃2 S1、S2和NTD蛋白特异性B细胞及其亚型标记技术方法,并且具有良好的适用性,可用于与流式细胞术检测抗原特异性B细胞及记忆B细胞和10×免疫组库测序联合使用。

关键词：流式细胞术生物素⁃蛋白荧光素⁃亲和素新型冠状病毒抗原特异性B细胞

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同种异体肌腱处理技术的进展

中国矫形外科杂志 2024年第15期32卷 1398-1402页

作者：张净宇马荣星王丽敏胡永成天津市天津医院天津300211 北京威达峰医学生物材料有限责任公司北京101102

本综述全面总结了同种异体肌腱处理工艺的研究现状和前沿技术。同种异体肌腱处理流程为核心,系统总结了该领域的研究现状和前沿技术。肌腱移植成为肌腱损伤重建的主要手段之一。首先介绍了同种异体肌腱的应用背景和发展趋势,深入探讨了... 详细信息

本综述全面总结了同种异体肌腱处理工艺的研究现状和前沿技术。同种异体肌腱处理流程为核心,系统总结了该领域的研究现状和前沿技术。肌腱移植成为肌腱损伤重建的主要手段之一。首先介绍了同种异体肌腱的应用背景和发展趋势,深入探讨了免疫原性与排斥反应相关的物理冷冻法和化学法,以及脱脂技术、脱细胞技术等处理方法。强调了同种异体肌腱处理工艺优化对于提高临床手术效果的重要性,为其运用于临床提供了科学依据和技术支持。

关键词：同种异体肌腱免疫原性处理技术

氨基寡糖素与噻霉酮复配比例筛选及对烟草青枯病的防控效果

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烟草科技 2024年

作者：王垚梁依佳杨磊梁颖涛汪安斌马兴隽丁伟李石力西南大学植物保护学院湖南中烟工业有限责任公司中国烟草总公司重庆市公司西南大学农学与生物科技学院

为筛选出氨基寡糖素与噻霉酮对烟草青枯病防治的最佳复配比例，采用滤纸片法测定了氨基寡糖素与噻霉酮不同质量配比对烟草青枯病菌的毒力，并通过室内盆栽和大田试验研究了最佳复配比例的促生控病效果。结果表明：氨基寡糖素与噻霉酮质... 详细信息

为筛选出氨基寡糖素与噻霉酮对烟草青枯病防治的最佳复配比例，采用滤纸片法测定了氨基寡糖素与噻霉酮不同质量配比对烟草青枯病菌的毒力，并通过室内盆栽和大田试验研究了最佳复配比例的促生控病效果。结果表明：氨基寡糖素与噻霉酮质量配（简称复配剂）比例为1:3对青枯病菌CQPS-1的毒力最高，且略高于噻霉酮单剂，EC50分别为22.05 mg/L和23.69 mg/L。室内盆栽试验表明，复配剂的防效高于噻霉酮和氨基寡糖素单剂，而田间试验表明，两者复配能够改善烟株的农艺性状和促进烟株的根系发育，效果高于氨基寡糖素和噻霉酮单剂。其中，打顶期的株高、茎围、腰叶长、腰叶宽和叶面积均显著高于对照，分别提高10.42%、8.57%、14.93%、10.30%和26.55%。田间防效结果显示，复配剂防治效果高于单剂，且在发病初期（施药后15 d）和发病高峰期（施药后48 d）防效分别为78.06%和73.68%，高于噻霉酮单剂的70.54%、64.76%和氨基寡糖素单剂的44.40%和42.05%。因此，氨基寡糖素与噻霉酮复配能提高噻霉酮的抑菌活性与防效。

关键词：烟草青枯病噻霉酮氨基寡糖素复配剂增效作用田间防效

隧道烘箱确认的现场检查发现问题分析及改进对策探讨

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中国食品药品监管 2024年第3期 108-113页

作者：聂希霖李茜宋弘王卫武汉生物制品研究所有限责任公司国药奇贝德(上海)工程技术有限公司

隧道烘箱是无菌制剂生产的关键设备,承担着灭菌、除热原等功能,通常是现场检查的重点关注对象。本文汇总了2021年世界卫生组织对我国疫苗生产企业的预认证现场检查和2020~2022年我国监管部门开展生物制品检查时针对隧道烘箱确认提出的... 详细信息

隧道烘箱是无菌制剂生产的关键设备,承担着灭菌、除热原等功能,通常是现场检查的重点关注对象。本文汇总了2021年世界卫生组织对我国疫苗生产企业的预认证现场检查和2020~2022年我国监管部门开展生物制品检查时针对隧道烘箱确认提出的典型问题,并分析问题产生原因,探讨整改措施,旨在为进一步提升隧道烘箱确认的科学性合理性提供借鉴。

关键词：隧道烘箱确认问题分析改进对策无菌保障

祖先羰基还原酶的挖掘及酶法合成(S)-乙偶姻的研究

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微生物学通报 2024年第5期51卷 1512-1521页

作者：王嘉乐奚安安彤郑香玉吴达束茹欣许国超上海烟草集团有限责任公司上海200082 江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室江苏无锡214122

【背景】(S)-乙偶姻是一种重要的精细化学品,开展其绿色高效合成具有重要的应用价值。【目的】祖先酶可能具有较好的热稳定性。论文以筛选高活性和稳定性的祖先羰基还原酶为目标,并探究其酶学性质,实现(S)-乙偶姻的高效酶法合成。【方... 详细信息

【背景】(S)-乙偶姻是一种重要的精细化学品,开展其绿色高效合成具有重要的应用价值。【目的】祖先酶可能具有较好的热稳定性。论文以筛选高活性和稳定性的祖先羰基还原酶为目标,并探究其酶学性质,实现(S)-乙偶姻的高效酶法合成。【方法】基于祖先序列重建法的基因挖掘策略筛选双乙酰还原酶,并对其进行了酶学性质表征,构建不对称还原双乙酰合成(S)-乙偶姻的反应体系。【结果】获得了一种可以不对称还原双乙酰合成(S)-乙偶姻的祖先羰基还原酶AncBDH1,并在Escherichia coli中实现可溶性表达。序列保守性分析显示,AncBDH1含有短链醇脱氢酶家族的特征基序,且与已报道羰基还原酶的同源性均较低。对AncBDH1进行了镍柱纯化和酶学性质表征,显示其仅可利用NADH为辅酶,最适反应pH值为7.0,最适反应温度为60℃,催化活性不依赖金属离子,并且表现出对二甲基亚砜等有机溶剂的良好耐受性。Anc BDH1可以在12 h内将200 mmol/L双乙酰完全转化为(S)-乙偶姻。【结论】发现了一个具有较高的最适温度及有机溶剂耐受性的祖先羰基还原酶AncBDH1,并实现了(S)-乙偶姻的高效酶法合成,为(S)-乙偶姻的酶法合成奠定了一定的研究基础。

关键词：祖先序列重建基因挖掘羰基还原酶 (S)-乙偶姻