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基于呼吸道合胞病毒F基因的实时荧光定量PCR检测方法的建立、验证及应用

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微生物学免疫学进展 2025年

作者：易瑞琛李川川郭杨梁鑫瑶张志强宋菲菲高博杜琳张怡轩北京智飞绿竹生物制药有限公司重组载体疫苗研发中心沈阳药科大学生命科学与生制药学院

目的建立一种检测呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus， RSV）F基因重组腺病毒拷贝数的SYBR Green实时荧光定量PCR检测方法，并对其进行方法学验证及初步应用。方法针对RSV F基因设计4对特异性引物，以pUC19-preF质粒标准... 详细信息

目的建立一种检测呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus， RSV）F基因重组腺病毒拷贝数的SYBR Green实时荧光定量PCR检测方法，并对其进行方法学验证及初步应用。方法针对RSV F基因设计4对特异性引物，以pUC19-preF质粒标准品作为模板，筛选引物及反应条件，建立针对RSV F基因的SYBR Green实时荧光定量PCR检测方法。对该方法的专属性、重复性、中间精密度、准确度、线性、定量限及耐用性进行验证，及初步应用。结果利用引物preF-2-F/R进行荧光定量PCR扩增，熔解曲线峰单一，无杂峰；该方法能特异性检测重组RSV腺病毒 F基因拷贝数；重复性验证变异系数（coefficient of variation， CV）为4.54%～19.01%；中间精密度验证CV为4.54%～19.01%；准确度验证回收率为81.46%～134.34%，CV为2.65%～5.29%；在1×103～1×109copies/μL浓度范围内，标准曲线线性关系良好(R2＞0.997)；定量限为1×103copies/μL；耐用性验证CV为7.79%～9.31%。使用该方法检测不同时间病毒培养液的目的基因拷贝数，可实时监控病毒增殖情况，为病毒培养工艺优化提供数据支持。结论建立的荧光定量检测方法专属性、重复性、中间精密度、准确度、线性、定量限和耐用性均符合可接受标准，可用于RSV F基因拷贝数的检测。

关键词：呼吸道合胞病毒腺病毒疫苗 F基因实时荧光定量PCR SYBR Green荧光染料法方法学验证病毒滴度检测质量控制

富血小板纤维蛋白复合甲基丙烯酰化明胶水凝胶的促成骨性能

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中国组织工程研究 2025年第4期29卷 809-817页

作者：赵红霞孙政伟韩阳吴学超韩静沈阳药科大学制药工程学院辽宁省沈阳市110016 山东大学制药工程山东省烟台市264000 沈阳药科大学中药学院辽宁省沈阳市110016 华中农业大学生命科学与技术学院湖北省武汉市430070 沈阳药科大学功能食品与葡萄酒学院辽宁省沈阳市110016

背景:富血小板纤维蛋白具有制备简单、制作费用低、安全性高等诸多优势,目前已被广泛应用于口腔颌面外科骨缺损修复研究中,但存在降解速度太快、生长因子释放时间短等问题。目的:将富血小板纤维蛋白负载于甲基丙烯酰化明胶水凝胶内,通... 详细信息

背景:富血小板纤维蛋白具有制备简单、制作费用低、安全性高等诸多优势,目前已被广泛应用于口腔颌面外科骨缺损修复研究中,但存在降解速度太快、生长因子释放时间短等问题。目的:将富血小板纤维蛋白负载于甲基丙烯酰化明胶水凝胶内,通过体内外实验分析其促成骨性能。方法:①抽取新西兰大白兔静脉血,制备富血小板纤维蛋白。分别制备含0,0.05,0.075,0.1 g富血小板纤维蛋白的甲基丙烯酰化明胶水凝胶,分别记为GelMA、GelMA/PRF-0.05、GelMA/PRF-0.075、GelMA/PRF-0.1,表征水凝胶的微观形貌与体外缓释性能。②将4种水凝胶分别与MC3T3-E1细胞共培养,以单独培养的细胞为对照,检测细胞增殖活性;成骨诱导后,检测细胞碱性磷酸酶活性、矿化能力、成骨相关基因(骨钙素、骨桥蛋白、RUNX2)mRNA与蛋白表达,ERK1/2-p38 MAPK通路蛋白mRNA与蛋白表达。③取15只新西兰大白兔。在每只兔颅骨部分别制备4个直径8 mm的全层骨缺损,其中1处缺损不植入任何材料(空白对照组),另3处缺损分别植入GelMA水凝胶、富血小板纤维蛋白、GelMA/PRF-0.1水凝胶。术后4,8,12周,进行骨缺损部位Micro-CT扫描与骨组织形态观察。结果与结论:①扫描电镜下可见4组水凝胶都具有蜂窝状的孔隙结构,并且随着水凝胶中富血小板纤维蛋白含量的增加,水凝胶的孔径轻微减小,但组间比较无明显差异;3组GelMA/PRF水凝胶均能以一定的速率释放转化生长因子β1与胰岛素样生长因子1,随着时间的延长,转化生长因子β1与胰岛素样生长因子1累计释放量显著增加。②CCK-8检测与活/死染色显示,3组GelMA/PRF水凝胶可促进MC3T3-E1细胞的增殖;碱性磷酸酶染色、茜素红染色及成骨基因检测结果显示,GelMA/PRF水凝胶可促进MC3T3-E1细胞的成骨分化,同时可抑制ERK1/2-p38 MAPK通路蛋白的表达,并且呈现富血小板纤维蛋白含量依赖性。③Micro-CT扫描显示,GelMA/PRF-0.1水凝胶组兔骨缺损处骨矿物质密度与骨体积分数均高于其他3组(P<0.05);苏木精-伊红染色显示,相较于其他3组,GelMA/PRF-0.1水凝胶组兔骨缺损处新骨形成更快、更成熟。④结果表明,GelMA/PRF水凝胶在体内外均具有良好的促成骨性能,该作用可能与抑制ERK1/2-p38 MAPK通路蛋白表达有关。

关键词：骨损伤富血小板纤维蛋白甲基丙烯酰化明胶水凝胶颅骨缺损

高校生物医药类专业学生科技创新管理模式的探索与实践——以广东药科大学生命科学与生物制药学院为例

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包头职业技术学院学报 2017年第4期18卷 78-80页

作者：张锡钦广东药科大学生命科学与生物制药学院广州510006

科技创新是高校学风建设的重要组成部分。本文通过介绍广东药科大学生命科学与生物制药学院科技创新管理模式的具体做法以及取得成效,以恭同仁商榷、探讨,共同促进高校生物医药类专业科技创新管理工作的发展与进步。

关键词：高校科技创新管理模式探索

“三三制”工作法:高校学生党建工作的探索与实践——以广东药科大学生命科学与生物制药学院为例

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山西广播电视大学学报 2017年第4期22卷 13-15页

作者：张锡钦广东药科大学生命科学与生物制药学院广东广州511450

发展学生党员是高校党建工作的重要组成部分。本文通过介绍广东药科大学生命科学与生物制药学院"三三制"工作法基本内涵、实践途径、取得成效和工作启示,以恭同仁商榷、探讨,共同促进高校学生党建工作的发展与进步。

关键词： “三三制”工作法学生党建育人探索

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诺卡菌核酸检测技术的应用

微生物学免疫学进展 2025年

作者：王刚毅许四宏石大伟沈阳药科大学生命科学与生物制药学院中国食品药品检定研究院传染病诊断试剂二室国家卫生健康委员会生物技术检定方法及其标准化重点实验室

诺卡菌（Nocardia）是一种广泛存在于土壤和水中的弱染色革兰阳性菌，是条件致病菌且主要引起患者的肺部感染。核酸检测（nucleic acid testing， NAT）技术可快速、准确地检测诺卡菌，为诺卡菌感染的早期诊断提供了重要支持。现就常规... 详细信息

诺卡菌（Nocardia）是一种广泛存在于土壤和水中的弱染色革兰阳性菌，是条件致病菌且主要引起患者的肺部感染。核酸检测（nucleic acid testing， NAT）技术可快速、准确地检测诺卡菌，为诺卡菌感染的早期诊断提供了重要支持。现就常规PCR、多位点序列分析、实时荧光定量PCR、二代测序和成簇规律间隔短回文重复等检测技术在诺卡菌核酸检测技术方面的应用作一概述。

关键词：诺卡菌常规聚合酶链式反应多位点序列分析实时荧光定量PCR 二代测序成簇规律间隔短回文重复

慢加急性肝衰竭关键基因的生物信息学探究及潜在中药预测验证

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中国实验方剂学杂志 2023年第22期29卷 79-87页

作者：吴忠吴斌魏秀岩沈阳药科大学生命科学与生物制药学院沈阳110016

目的:应用生物信息学方法探究慢加急性肝衰竭(ACLF)的关键基因,预测潜在治疗中药并实验验证其作用机制。方法:利用Perl和R软件分析GSE142255数据集获取差异表达基因(DEGs),基于CytoHubba插件的5种算法鉴定DEGs蛋白质-蛋白质相互作用(PPI... 详细信息

目的:应用生物信息学方法探究慢加急性肝衰竭(ACLF)的关键基因,预测潜在治疗中药并实验验证其作用机制。方法:利用Perl和R软件分析GSE142255数据集获取差异表达基因(DEGs),基于CytoHubba插件的5种算法鉴定DEGs蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络中的关键基因,并借助受试者工作特征(ROC)曲线和GSE168048数据集对关键基因进行验证分析;Coremine Medical数据库映射关键基因对应中药并分析其四气、五味、归经;中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)和DEGs获取高频中药治疗ACLF的交集靶点,Cytoscape软件绘制关键基因-高频中药-活性成分-交集靶点网络图,并进行基因本体(GO)、京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析及体外实验。结果:共获取388个DEGs,7个关键基因分别为CD4、整合素亚基αM(ITGAM)、CD2、淋巴细胞特异蛋白酪氨酸激酶(LCK)原癌基因,CC基序趋化因子配体5(CCL5)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、Fcε受体IG(FCER1G)。潜在治疗中药多为寒性、苦味、归肝经的药物,其中高频中药如白花蛇舌草、灵芝、黄芪和活性成分槲皮素、山柰酚、β-谷甾醇的潜在治疗价值重大。富集分析显示,中药除调控关键基因外,仍对自噬、氧化应激、炎症因子等多靶点、多通路发挥作用。L02细胞实验表明,与D-氨基半乳糖(D-GaLN)组比较,槲皮素组肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、丙二醛(MDA)水平和泛素结合蛋白p62、MMP-9蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01),而超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)水平和微管相关蛋白1轻链3Ⅱ/Ⅰ(LC3Ⅱ/Ⅰ)蛋白表达明显增加(P<0.05,P<0.01),且3-甲基腺嘌呤(3-MA)预处理可抑制槲皮素对L02细胞自噬激活作用。结论:基于ACLF的关键基因,预测所得潜在治疗中药及活性成分具有重大研究价值,其中槲皮素对D-GaLN诱导L02细胞氧化应激、炎症反应的抑制及MMP-9的调控而具有治疗ACLF的潜力,其机制可能与其激活自噬相关。

关键词：慢加急性肝衰竭关键基因生物信息学中药预测自噬

阿维链霉菌中aveD基因插入失活产生的异常组分(英文)

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中国抗生素杂志 2009年第1期34卷 18-23,60页

作者：陈红霞何建勇张怡轩沈阳药科大学生命科学与生物制药学院沈阳110016

目的探索阿维链霉菌中aveD基因插入失活后对发酵产物组分的影响。方法采用将抗生素(安普霉素)抗性基因插入到aveD基因的方法,构建了重组质粒pID03;利用接合转移的方法将重组质粒导入到阿维链霉菌S-2(Streptomyces avermitilis S-2)菌株... 详细信息

目的探索阿维链霉菌中aveD基因插入失活后对发酵产物组分的影响。方法采用将抗生素(安普霉素)抗性基因插入到aveD基因的方法,构建了重组质粒pID03;利用接合转移的方法将重组质粒导入到阿维链霉菌S-2(Streptomyces avermitilis S-2)菌株中,并通过抗性标记筛选双交换的菌株。结果得到了aveD基因插入失活的菌株AveD24。该菌株不再产生4个A组分,只产生4个B组分,同时还产生2个异常的组分,经HPLC和质谱分析,初步确定异常组分D24-1为寡霉素A,另一异常组分D24-2为5-酮avermectin la。

关键词：阿维链霉菌 Avermectin aveD基因寡霉素 5-酮基avermectin

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荧光技术在高通量药物筛选中的应用

中国药学杂志 2009年第11期44卷 801-804页

作者：张怡轩韩云波沈阳药科大学生命科学与生物制药学院沈阳110016

目的高通量筛选是现代发现药物先导化合物的主要手段之一。荧光技术在高通量药物筛选中被广泛使用,本文对荧光技术在高通量药物筛选中的研究进展进行综述。方法查阅近年国内外文献,对7种荧光检测技术的原理及其在高通量药物筛选中的应... 详细信息

目的高通量筛选是现代发现药物先导化合物的主要手段之一。荧光技术在高通量药物筛选中被广泛使用,本文对荧光技术在高通量药物筛选中的研究进展进行综述。方法查阅近年国内外文献,对7种荧光检测技术的原理及其在高通量药物筛选中的应用情况进行归纳总结,包括荧光强度分析法、荧光偏振检测法、荧光共振能量转移检测法、均相时间分辨荧光检测法、荧光关联光谱、荧光成像分析、荧光报告系统。结果与结论现在已经建成多种高通量药物筛选模型,利用荧光检测技术进行高通量药物筛选具有广阔的应用前景。

关键词：高通量筛选荧光强度分析荧光偏振检测荧光共振能量转移检测均相时间分辨荧光检测

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一种真菌对人参皂苷Rg_3的转化

微生物学报 2008年第9期48卷 1181-1185页

作者：吴秀丽王艳赵文倩张怡轩沈阳药科大学生命科学与生物制药学院沈阳110016

【目的】筛选长白山人参土壤中的活性微生物,转化人参总皂苷及单体人参皂苷产生稀有抗肿瘤成份。【方法】从长白山人参根际土壤中分离各类菌株,对人参总皂苷及单体人参皂苷进行微生物转化,并通过硅胶柱层析等方法对转化产物进行分离纯化... 详细信息

【目的】筛选长白山人参土壤中的活性微生物,转化人参总皂苷及单体人参皂苷产生稀有抗肿瘤成份。【方法】从长白山人参根际土壤中分离各类菌株,对人参总皂苷及单体人参皂苷进行微生物转化,并通过硅胶柱层析等方法对转化产物进行分离纯化,采用波谱解析及理化常数对其进行结构鉴定;结合菌落形态、产孢结构、孢子形态特征以及菌株ITS rDNA核酸序列分析,对活性菌株进行鉴定。【结果】从长白山人参根际土壤中分离各类真菌菌株68株,有12株菌株对人参总皂苷有转化活性,其中菌株SYP2353对二醇组人参皂苷Rg3具有较强的转化活性。【结论】阳性菌株SYP2353被鉴定为疣孢漆斑菌(Myrothecium verrucaria),能将人参皂苷Rg3转化为稀有人参皂苷Rh2及二醇组人参皂苷苷元PPD,为稀有人参皂苷Rh2的制备提供了新的方法。

关键词：人参皂苷Rg3 人参皂苷Rh2 苷元PPD 疣孢漆斑菌生物转化