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亚慢性铝暴露对Wistar大鼠学习记忆及海马CA1区c-Fos表达的影响

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中国药理学与毒理学杂志 2016年第5期30卷 553-557页

作者：张立丰白春玉张迪赵丽妮沈阳医学院公共卫生学院儿少卫生与妇幼保健学教研室辽宁沈阳110034 沈阳医学院基础医学院药理学教研室辽宁沈阳110034

目的探讨亚慢性铝暴露对大鼠学习记忆能力和c-Fos表达的影响,探索铝对大鼠认知功能损害的毒性作用及机制。方法 Wistar子代大鼠自出生之日起,分别通过乳汁或饮水染毒Al Cl32.0,4.0和8.0 g?L^(-1)连续3个月。Morris水迷宫法检测子代大鼠... 详细信息

目的探讨亚慢性铝暴露对大鼠学习记忆能力和c-Fos表达的影响,探索铝对大鼠认知功能损害的毒性作用及机制。方法 Wistar子代大鼠自出生之日起,分别通过乳汁或饮水染毒Al Cl32.0,4.0和8.0 g?L^(-1)连续3个月。Morris水迷宫法检测子代大鼠的学习记忆能力,石墨炉原子吸收光谱法检测子代大鼠海马铝含量,HE染色观察海马CA1区神经细胞形态,RT-PCR法检测子代大鼠海马CA1区c-fos基因表达,免疫组化法检测CA1区c-Fos蛋白表达。结果染Al Cl3组子代大鼠学习记忆能力明显低于对照组(P病理改变;染Al Cl34.0和8.0 g?L^(-1)组子代大鼠海马c-fos m RNA表达水平分别低于对照组和染Al Cl32.0 g?L^(-1)组(P病理学改变、功能减弱以及c-Fos表达水平降低有关。

关键词：铝海马学习记忆 c-Fos

Alpha-突触核蛋白寡聚体致帕金森病小鼠模型的行为学变化

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中国老年学杂志 2016年第21期36卷 5227-5230页

作者：王鹏历春王海鹏盖晓东北华大学基础医学院人体解剖学教研室吉林吉林132013 北华大学基础医学院病理学教研室

目的观察家族型帕金森病(PD)alpha-突触核蛋白(α-Syn)突变体A53T和A30P寡聚体导致小鼠PD模型的行为学变化,探讨α-Syn寡聚体在体内的神经毒性作用。方法制备野生型α-Syn、家族型突变体A53T和A30P的聚集体,对C57BL/6小鼠进行纹状体注... 详细信息

目的观察家族型帕金森病(PD)alpha-突触核蛋白(α-Syn)突变体A53T和A30P寡聚体导致小鼠PD模型的行为学变化,探讨α-Syn寡聚体在体内的神经毒性作用。方法制备野生型α-Syn、家族型突变体A53T和A30P的聚集体,对C57BL/6小鼠进行纹状体注射。培养至第30、60天,进行爬杆实验、悬吊实验、滚轴实验和平衡木实验评估行为学改变。免疫组织化学方法检测黑质多巴胺能神经元改变。结果实验鼠纹状体α-Syn寡聚体注射后30 d出现PD样运动障碍表现,纹状体注射30 d和60 d后,各组小鼠的爬杆实验结果均与对照组无差异(P>0.05)。注射30 d后,野生型α-Syn寡聚体组小鼠平衡木实验、悬挂实验、滚轴实验与对照组无差异(P>0.05);A53T和A30P组小鼠平衡木时间比对照组长(P<0.05),滚轴上时间比对照组小鼠缩短(P<0.05),悬挂评分比对照组明显降低(P<0.01),与野生型α-Syn寡聚体组相比有统计学差异(P<0.05)。注射60 d后,野生型α-Syn寡聚体组小鼠平衡木实验平均通过时间比对照组小鼠长(P<0.05)、悬挂实验评分较对照组小鼠降低(P<0.05);A53T和A30P组小鼠各项行为学评估与对照组小鼠差异显著(P<0.01)、与野生型α-Syn寡聚体组相比有差异(P<0.05)。A53T和A30P组小鼠黑质多巴胺能神经元数目下降(P<0.05)。结论纹状体注射α-Syn突变体A53T和A30P寡聚体,模型小鼠出现PD样行为学改变和黑质多巴胺能神经元减少。

关键词：帕金森病 alpha-突触核蛋白寡聚体

临夏回族17个Y染色体短串联重复序列基因座遗传多态性

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解剖学杂志 2015年第1期38卷 64-67,115页

作者：于越黎卫平谢小冬陈聪兰州大学基础医学院病理学研究所兰州730000 兰州大学基础医学院遗传学研究所兰州730000

目的：调查研究17个Y染色体短串联重复序列（Y-STR）基因座及其单倍型在甘肃省临夏回族自治州回族人群中的分布情况.方法：应用AmpFlSTR（R） YfilerTM PCR荧光标记复合扩增系统,对424名回族无关男性个体血样进行17个y-STR位点的复合扩... 详细信息

目的：调查研究17个Y染色体短串联重复序列（Y-STR）基因座及其单倍型在甘肃省临夏回族自治州回族人群中的分布情况.方法：应用AmpFlSTR（R） YfilerTM PCR荧光标记复合扩增系统,对424名回族无关男性个体血样进行17个y-STR位点的复合扩增,用ABI 3730xl遗传分析仪对扩增产物进行检测分析,数据分析使用GeneMapper ID v3.2.结果：DYS456,DYS389 Ⅰ,DYS389Ⅱ,DYS390,DYS458,DYS19,DYS393,DYS385a／b,DYS391,DYS439,DYS635,DYS392,YGATA H4,DYS437,DYS438和DYS448各位点遗传多样性（GD值）分布在0.471 3～0.968 0之间.17个Y-STR位点共同构成的单倍型361种.其单倍型多样性为0.999 5.结论：临夏回族17个Y-STR位点具有较高的遗传多态性,可为父权鉴定和父系进化研究提供有价值的遗传学资料.

关键词： Y染色体短串联重复序列遗传多态性回族临夏

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病理生理学教学方法心得

继续医学教育 2007年第34期21卷 61-63页

作者：秦迎松徐明刘超侠李俐王影徐州医学院病理生理学教研室 221002

病理生理学在医学各学科中具有重要地位和作用。教好病理生理学是学好这门课程的前提和基础。多种教学方式方法的有机结合是取得良好教学效果的保障。

关键词：病理生理学教学方法

肝动脉灌注3-溴丙酮酸阻断大鼠肝癌能量代谢的实验研究

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介入放射学杂志 2013年第12期22卷 1027-1032页

作者：易长虹袁琳波钱坤张真郑传胜韩萍武汉华中科技大学同济医学院附属协和医院放射科 430022 华中科技大学同济医学院基础医学院病理生理系

目的体外检测3-溴丙酮酸对Walker256细胞的抗肿瘤活性,体内研究经肝动脉灌注3-溴丙酮酸对大鼠肝癌的治疗作用。方法①体外研究采用二苯基四氮唑溴盐噻唑蓝比色法检测不同浓度(1、5、10、25、50μmol/L)3-溴丙酮酸对Walker256细胞的抗肿... 详细信息

目的体外检测3-溴丙酮酸对Walker256细胞的抗肿瘤活性,体内研究经肝动脉灌注3-溴丙酮酸对大鼠肝癌的治疗作用。方法①体外研究采用二苯基四氮唑溴盐噻唑蓝比色法检测不同浓度(1、5、10、25、50μmol/L)3-溴丙酮酸对Walker256细胞的抗肿瘤活性,琼脂糖凝胶电泳检测肿瘤细胞凋亡。②取30只雄性Wistar大鼠建立肝癌模型,并于肿瘤种植后11 d行胃十二指肠动脉逆行插管动脉灌注治疗,随机分为动脉灌注3-溴丙酮酸组(A组)、生理盐水组(B组)和丝裂霉素联合碘油栓塞组(C组)。介入术前1 d和术后第3天进行磁共振成像(MRI)检测肿瘤体积,之后处死大鼠,病理检查肿瘤坏死情况。结果体外研究显示,1、5、10、25、50μmol/L 3-溴丙酮酸对Walker256细胞抑制率分别为(10.9±0.9)%、(18.5±1.7)%、(24.2±1.3)%、(40.4±3.0)%、(55.1±2.4)%,50μmol/L 3-溴丙酮酸能诱导Walker256细胞凋亡。3-溴丙酮酸治疗后第3天,A、B、C组肿瘤平均体积分别为(482.98±103.88)mm3、(432.44±437.39)mm3、(569.79±268.89)mm3,组间差异无统计学意义(P>0.05)。A组中7只Ⅲ级坏死,2只Ⅳ级坏死和1只Ⅰ级坏死,B组6只均为Ⅰ级坏死,C组5只Ⅲ级坏死和1只Ⅱ级坏死,A组肿瘤平均坏死率明显高于B组,差异有统计学意义(P=0.001),A组与C组间差异无统计学意义(P=0.927)。结论肿瘤能量阻断剂3-溴丙酮酸有较强的体内、外抗肿瘤作用。

关键词：肝细胞癌介入治疗 3-溴丙酮酸大鼠

脊髓损伤模型大鼠软脊膜下注射2型腺相关病毒免疫荧光染色分析

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中国组织工程研究 2019年第31期23卷 4979-4985页

作者：柏秋实苏胜王亮佳郑洋洋康娟娟徐金影池光范吉林大学白求恩医学部临床医学院吉林省长春市130021 吉林大学基础医学院病理学系病理生物学教育部重点实验室吉林省长春市130021

背景:经软脊膜下注射腺相关病毒的方法可将病毒局限于以注射点为中心的较小范围内,全身毒副作用小,节省病毒的用量,但目前尚无将此方法应用于脊髓损伤大鼠的相关报道,对损伤部位星形胶质细胞和神经细胞的转染情况尚不明确。目的:探讨通... 详细信息

背景:经软脊膜下注射腺相关病毒的方法可将病毒局限于以注射点为中心的较小范围内,全身毒副作用小,节省病毒的用量,但目前尚无将此方法应用于脊髓损伤大鼠的相关报道,对损伤部位星形胶质细胞和神经细胞的转染情况尚不明确。目的:探讨通过软脊膜下注射2型腺相关病毒对脊髓损伤部位的星形胶质细胞和神经细胞的转染效果及手术过程的技术要点。方法:实验方案经吉林大学动物实验伦理委员会批准。24只Wistar大鼠随机分为2组:腺相关病毒组和模型组,均使用钳夹法构建脊髓损伤模型。腺相关病毒组经软脊膜下注射60μL病毒溶液;模型组经软脊膜下注射等量5%右旋糖酐溶液。于术后7,14和21d取脊髓标本,进行免疫荧光染色,观察星形胶质细胞分布情况和2型腺相关病毒转染情况。结果与结论:①经软脊膜下注射病毒后,病毒溶液最终均匀分布于损伤部位上下约1 cm的范围内;②术后7,14 d仅有微量绿色荧光蛋白在脊髓损伤区域表达,直至术后21 d,在脊髓损伤空洞周围可见有大量反应性星形胶质细胞,其在脊髓空洞周边部表达最为强烈,出现明显的胶质界膜;同时发现,2型腺相关病毒可稳定转染星形胶质细胞和神经细胞,其中星形胶质细胞集中分布于脊髓空洞周边部,而神经细胞散在分布于病毒转染范围内,注射范围以外正常组织仅见微量2型腺相关病毒转染;③该方法具有能将病毒局限于损伤部位,可靶向性转染星形胶质细胞和神经细胞,具有注射量病毒量低,全身毒副作用小,成本节约等优点。

关键词： 2型腺相关病毒钳夹型脊髓损伤软脊膜下注射星形胶质细胞神经细胞绿色荧光蛋白神经胶质原纤维酸性蛋白神经丝蛋白H 免疫组化免疫荧光胶质瘢痕

高转移结肠癌细胞微环境对人树突状细胞功能的影响

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郑州大学学报（医学版） 2009年第6期44卷 1146-1150页

作者：刘康栋秦珍珠路静杨洪艳黄幼田郑智敏赵明耀董子明郑州大学基础医学院病理生理学教研室郑州450001 商丘市第一人民医院病理科商丘476100

目的:探讨高转移结肠癌细胞SW620分泌的可溶性细胞因子营造的微环境对人单个核细胞来源的树突状细胞(DC)分化发育的影响,为DC疫苗在结肠癌患者中的临床应用提供依据。方法:密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞,加入含重组人粒细胞-巨... 详细信息

目的:探讨高转移结肠癌细胞SW620分泌的可溶性细胞因子营造的微环境对人单个核细胞来源的树突状细胞(DC)分化发育的影响,为DC疫苗在结肠癌患者中的临床应用提供依据。方法:密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞,加入含重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和重组人白细胞介素-4的RPMI1640培养液诱导培养,第2天对照组同前培养,实验组在此基础上加入SW620条件培养基,均隔天半量换液,第4天加入超声破碎法制备的SW620抗原,第6天加入脂多糖。第8天收集对照组正常成熟DC和实验组肿瘤相关DC(TADC)。显微镜观察其形态,流式细胞仪检测其免疫表型,RT-PCR检测CD1amRNA的表达,混合淋巴细胞反应及体外杀伤活性实验检测其刺激T细胞增殖及杀伤能力。结果:TADC与正常成熟DC相比,细胞形态明显受到抑制。流式细胞仪检测PBMC、正常DC及TADCCD86及CD1a分子阳性率,差异均有统计学意义(F分别为46.95及19.09,P<0.001)。与正常DC比较,TADCCD86分子阳性率由(68.56±8.04)%降为(42.41±10.87)%,CD1a分子阳性率由(55.71±12.12)%降为(26.60±12.03)%(P均<0.05);CD1a基因表达降低,体外刺激T细胞增殖[(112.53±7.16)%vs.(91.26±6.62)%]及杀伤能力[(62.42±0.57)%vs.(50.37±2.21)%]均下降(t分别为6.17、17.41,P均<0.001)。结论:SW620条件培养基所营造的微环境对DC的诱导分化及其功能有明显的抑制作用,这可能是肿瘤细胞逃避机体免疫监视的机制之一。

关键词：结肠癌树突状细胞肿瘤微环境 SW620细胞

肿瘤转移抑制相关基因TMSG-1核仁定位信号序列的鉴定

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中华病理学杂志 2011年第11期40卷 767-771页

作者：龚苗子由江峰崔湘林郑杰北京大学医学部病理学系 100191

目的鉴定肿瘤转移抑制相关基因TMSG-1蛋白中潜在的特异性定位信号序列并探索其亚细胞定位机制。方法聚合酶链反应（PCR）扩增TMSG-1开放读码框全长及不同长度的截断片段，定向克隆于绿色荧光蛋白（GFP）表达质粒pEGFP—N1；各融合蛋白... 详细信息

目的鉴定肿瘤转移抑制相关基因TMSG-1蛋白中潜在的特异性定位信号序列并探索其亚细胞定位机制。方法聚合酶链反应（PCR）扩增TMSG-1开放读码框全长及不同长度的截断片段，定向克隆于绿色荧光蛋白（GFP）表达质粒pEGFP—N1；各融合蛋白表达质粒转染人胚。肾细胞系HEK293细胞；转染48h后提取细胞总蛋白进行GFP的Western b1ot检测或用冷丙酮固定细胞后激光共聚焦显微镜观察融合蛋白的亚细胞定位。结果GFP分别融合TMSG-1全长蛋白（aa1-380）及其截断片段T1（aa1-70）、T2（aa1-128）、T3（aa129—380）、T4（aa71—128）、T5（aa71—179）和T6（aa71—380），Westernb1ot检测结果显示成功表达了各融合蛋白。激光共聚焦显微镜观察亚细胞定位显示融合蛋白T4（aa71—128）主要定位于细胞核内的核仁部位，融合蛋白T6（aa71—380）以细胞核内弥散分布为主，而TMSG—1全长融合蛋白及融合蛋白T1、T2、T3、T5则定位于胞质。进-步的序列缺失去除T4（aa71—128）羧基末端10个氨基酸得到截断片段T4△119-128，T4△119-128融合的GFP仍位于细胞核，但核仁内的绿色荧光信号明显减弱。结论肿瘤转移抑制相关基因TMSG-1存在潜在的核仁定位信号，位于aa119—128（RRRRNQDRPS），这一发现为深入研究TMSG-1的亚细胞定位及相关功能奠定了基础。

关键词：肿瘤转移基因,肿瘤抑制绿色荧光蛋白质类核仁组成区细胞系,肿瘤

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白小分子干扰RNA对食管鳞癌细胞中mTOR-p70S6K信号通路及裸鼠移植瘤生长的影响

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中华肿瘤杂志 2011年第5期33卷 334-339页

作者：刘明月侯桂琴张艳贝维娟闫爱华河南省人民医院肿瘤科郑州450003 郑州大学药学院临床药学系郑州大学基础医学院病理学教研室

目的检测哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）小分子干扰RNA（siRNA）对食管鳞癌中mTOR-p70S6K信号通路的阻断作用以及对裸鼠移植瘤生长的影响.方法以食管鳞癌细胞株EC9706为研究对象,采用siRNA干扰、逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、Weste... 详细信息

目的检测哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）小分子干扰RNA（siRNA）对食管鳞癌中mTOR-p70S6K信号通路的阻断作用以及对裸鼠移植瘤生长的影响.方法以食管鳞癌细胞株EC9706为研究对象,采用siRNA干扰、逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、Western blot、流式细胞术及CCK-8等方法,观察mTOR-p70S6K信号通路被阻断后,通路中各因子蛋白及mRNA表达的变化,及其对细胞增殖和凋亡的影响.进行裸鼠成瘤实验,观察mTOR siRNA对肿瘤生长的影响.结果与未转染细胞相比,转染mTOR siRNA的细胞中mTOR和磷酸化p70S6K的表达水平降低（P〈0.05）,而pTOS6K的表达水平升高（P〈0.05）.转染mTOR siRNA后,细胞凋亡增加,细胞增殖能力降低,且对顺铂的敏感性增高,细胞被阻滞在G,期（P〈0.05）.mTOR siRNA能明显抑制裸鼠移植瘤的生长,siRNA组和siRNA＋顺铂组的肿瘤抑制率分别为50.9%和62.3%.结论 mTOR siRNA能有效抑制mTOR-pTOS6K信号通路,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,在裸鼠体内能显著抑制肿瘤的生长.mTOR-pVOSSK信号通路在食管鳞癌发生发展中起重要作用.

关键词：食管肿瘤 RNA干扰流式细胞术 mTOR-p70S6K信号通路裸鼠