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5种家蚕病毒的密码子及密码对使用模式分析

蚕业科学 2012年第2期38卷 273-280页

作者：石生林李苗苗姜义仁杨瑞生秦利沈阳农业大学植物保护博士后流动站沈阳110866 沈阳农业大学生物科学技术学院沈阳110866 辽宁省昆虫资源工程技术研究中心沈阳110866

通过分析5种家蚕病毒基因组密码子和密码对使用模式,初步探讨5种家蚕病毒的基因组进化和对宿主的适应策略。采用生物信息学方法对碱基含量(GCall、GC1、GC2、GC3、GC3s)、有效密码子数(ENc)、相对同义密码子使用度(RSCU)、密码对(codon-... 详细信息

通过分析5种家蚕病毒基因组密码子和密码对使用模式,初步探讨5种家蚕病毒的基因组进化和对宿主的适应策略。采用生物信息学方法对碱基含量(GCall、GC1、GC2、GC3、GC3s)、有效密码子数(ENc)、相对同义密码子使用度(RSCU)、密码对(codon-pair)等进行统计分析的结果表明:5种家蚕病毒的密码子偏好性均较低,病毒间的碱基组成及ENc值差异较小,碱基组成对密码子使用模式影响较小;不同病毒选择不同的偏好性密码子,不同病毒的密码对偏好性程度不同,其中,家蚕类葡萄斑点病毒(Bombyx mori macula-like virus,BmMLV)密码对偏好性最强,家蚕质型多角体病毒(Bombyx mori cypovirus,BmCPV)和家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)密码对偏好性最弱。聚类分析表明BmCPV和家蚕浓核病毒(Bombyx mori densovirus,BmDNV)的密码子使用模式相似,BmNPV和家蚕传染性软化病病毒(Bombyx mori infec-tious flacherie virus,BmIFV)的密码子使用模式相似;BmMLV、BmNPV和BmDNV的密码对使用模式相似,BmIFV和BmCPV的密码对使用模式相似。5种病毒的偏好性密码子和偏好性密码对不同,显示不同病毒的密码子和密码对的进化路径不同,对宿主的适应策略不同。

关键词：家蚕病毒碱基组成密码子密码对

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柞蚕核型多角体病毒PCR检测方法的建立

蚕业科学 2012年第4期38卷 694-699页

作者：贾平骜姜义仁任淑文王勇钟亮杨瑞生秦利沈阳农业大学生物科学技术学院辽宁省昆虫资源工程技术研究中心沈阳110866 黑龙江省蚕业研究所哈尔滨150086

为了建立柞蚕核型多角体病毒(Antheraea pernyi nucleopolyhedrovirus,ApNPV)的早期检测技术,采用NCBI提供的BLAST软件在线检索ApNPV特异基因ORF142的序列后设计引物AP1,对ApNPV基因组DNA进行PCR扩增,得到约130 bp的片段,最低检测量为0.5 fg/mL病毒DNA。分别以感染ApNPV的柞蚕幼虫总DNA和ApNPV多角体悬液为模板,相同扩增条件下可扩增出大小一致的一条特异性片段,最低检测量分别为1 fg/mL幼虫总DNA和20～25 PIBs/mL ApNPV多角体。以柞蚕4龄幼虫为材料,人工模拟感染ApNPV后取幼虫血淋巴为检测物可以直接检出ApNPV,当添毒量为2.3×108PIBs/mL时,添毒36 h后即可检出,且病毒感染后的检出时间与添毒浓度呈正相关。采用该方法的检测过程只需3 h,快速而方便。

关键词：柞蚕核型多角体病毒 ORF142基因 PCR 早期检测幼虫血淋巴

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木霉REMI转化体耐热机理的初步研究

植物保护 2010年第3期36卷 52-57页

作者：刘限赵岩郭培磊高增贵庄敬华沈阳农业大学生物科学技术学院沈阳110161 沈阳农业大学植物保护学院沈阳110161

本文利用蛋白质电泳、基因克隆和荧光定量PCR等技术对耐高温木霉REMI转化体的抗逆机理进行了初步研究。结果表明,耐高温木霉REMI转化体的蛋白质谱带明显多于出发菌株T21,且差异主要集中在Rf值大于0.593的区域,该区域主要是小分子的热休... 详细信息

本文利用蛋白质电泳、基因克隆和荧光定量PCR等技术对耐高温木霉REMI转化体的抗逆机理进行了初步研究。结果表明,耐高温木霉REMI转化体的蛋白质谱带明显多于出发菌株T21,且差异主要集中在Rf值大于0.593的区域,该区域主要是小分子的热休克蛋白,说明影响耐高温木霉REMI转化体对温度耐受性的蛋白主要以小分子量蛋白质为主。对其中一种热休克蛋白HSP24的基因进行克隆、测序,结果表明不同木霉REMI转化体和出发菌株T21间该基因序列没有差异,但经荧光定量PCR对HSP24基因转录检测表明,耐高温木霉REMI转化体的热激蛋白HSP24的表达量有所增加,从而表明REMI插入提高了该基因的转录水平。

关键词：木霉REMI转化体高温热激蛋白 HSP24

木霉菌REMI转化体对番茄灰霉病的防治及其机理的研究

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植物保护 2008年第5期34卷 80-85页

作者：刘限郭培磊高增贵赵岩沈阳农业大学生物科学技术学院沈阳110161 沈阳农业大学植物保护学院沈阳110161

研究不同木霉菌转化体对番茄灰霉病防治效果及机理,为木霉菌生物防治的合理利用奠定基础。利用限制性内切酶介导基因整合技术(restriction enzyme-mediated integration,REMI),通过插入线性化质粒DNA获得了生物防治番茄灰霉病(Botrytis ... 详细信息

研究不同木霉菌转化体对番茄灰霉病防治效果及机理,为木霉菌生物防治的合理利用奠定基础。利用限制性内切酶介导基因整合技术(restriction enzyme-mediated integration,REMI),通过插入线性化质粒DNA获得了生物防治番茄灰霉病(Botrytis cinerea)效果优于出发菌T21菌株(出发菌)的3个木霉菌转化体Ttrm31、Ttrm34和Ttrm55,对侵染花器和叶片的灰霉病防效分别比原生物防治木霉菌株提高了16.9%和8%。木霉菌转化体的产孢能力、分生孢子的萌发率、对碳氮源的利用能力及对高温的抵抗能力都有所提高;木霉菌转化体本身产生的几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶的活性均比出发菌高,因此通过REMI技术可以获得新的有益木霉菌转化体,在一定程度上提高了生物菌株防治番茄灰霉病的水平。说明REMI技术可以用于改良生防木霉菌株的功能,提高生物防治效果。

关键词：限制性内切酶介导整合技术木霉菌转化体番茄灰霉病生防机理

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人参属药用植物种质资源研究进展

中草药 2025年第1期 360-373页

作者：线小云李葵秀李满桥陈中坚王勇魏富刚杨生超刘冠泽云南农业大学西南中药材种质创新与利用国家地方联合工程研究中心云南农业大学云南省药用植物生物学重点实验室云南农业大学农学与生物技术学院文山学院文山三七研究院文山苗乡三七科技有限公司红河学院

人参属Panax L.是重要的药用植物资源，具有广阔开发前景，备受国内外关注。随着植物化学和分子生物学研究深入，人参属资源研究取得显著进展，资源保护和合理开发成为当务之急。人参属遗传多样性是研究的重要方面，新品种选育取得显著... 详细信息

人参属Panax L.是重要的药用植物资源，具有广阔开发前景，备受国内外关注。随着植物化学和分子生物学研究深入，人参属资源研究取得显著进展，资源保护和合理开发成为当务之急。人参属遗传多样性是研究的重要方面，新品种选育取得显著成果，此外多组学技术在揭示次生代谢物质生物合成、生长发育等机制中发挥重要作用。但种质资源评价与利用程度较低、育种和繁育技术有待提升。从人参属资源分类、构成及保护现状、遗传多样性和新品种选育及多组学研究和皂苷合成等方面，概述了人参属种质资源开发利用、育种研究及存在问题，为人参属药用植物资源的开发与利用提供理论参考。

关键词：人参属种质资源品种选育人参皂苷基因组生物合成

木霉菌辅助合成纳米银对甜瓜的防病促生作用研究

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生态环境学报 2020年第1期29卷 149-155页

作者：曲明星姚薇高增贵夏润玺刘限沈阳农业大学生物科学技术学院辽宁沈阳110866 沈阳农业大学植物保护学院辽宁沈阳110866

尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)侵染甜瓜引起的枯萎病造成甜瓜减产、品质下降,生产上多采用化学农药防治枯萎病,但频繁使用农药容易造成镰刀菌抗药性增强和对生态环境造成影响,甚至危及人类健康。因此,新型生防制剂的研制是解决甜瓜枯... 详细信息

尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)侵染甜瓜引起的枯萎病造成甜瓜减产、品质下降,生产上多采用化学农药防治枯萎病,但频繁使用农药容易造成镰刀菌抗药性增强和对生态环境造成影响,甚至危及人类健康。因此,新型生防制剂的研制是解决甜瓜枯萎病绿色防控的急需措施。纳米银(Silver Nanoparticles,AgNPs)由于其强杀菌性和不易使病原菌产生抗药性的特点,在农业病虫害防治中越来越受到关注。利用不同木霉菌(***、***、***、***、***、***、***、***、***和***)发酵液与AgNO3生物合成AgNPs,通过AgNPs(25、50、100、200 mg·L−1)对尖孢镰刀菌的抑制作用筛选优势AgNPs并对其进行表征分析,最后使用不同浓度的优势AgNPs对甜瓜种子萌发及甜瓜防病进行探究。结果表明,木霉菌合成的AgNPs对镰刀菌均有抑制作用,其中***的抑菌作用显著高于其他AgNPs。UV-Vis显示***表面等离子体共振发生在417 nm处有最大吸收峰;XRD证明了***高度结晶;FTIR研究证实***包含稳定的封闭剂;TEM观察到大多数***粒子是分散的,直径大小为5-15 nm。低浓度***(25 mg·L^−1)可促进甜瓜种子萌发及生长,而高浓度(大于25 mg·L^−1)则有抑制作用。***可有效降低甜瓜枯萎病发病率和病情指数。木霉菌生物合成AgNPs为甜瓜枯萎病的防治提供了新材料,为新型生防制剂的研制奠定了基础。

关键词：木霉菌银纳米粒子尖孢镰刀菌抑菌

蜕皮激素受体和超气门蛋白基因在柞蚕发育过程及激素诱导后的表达模式

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蚕业科学 2017年第4期43卷 594-602页

作者：汝玉涛王勇周敬林王德意马月月姜义仁高清秦利沈阳农业大学生物科学技术学院辽宁省昆虫资源工程技术研究中心沈阳110866 黑龙江蚕蜂技术指导总站哈尔滨150086

昆虫蜕皮激素受体和超气门蛋白形成的异源二聚体介导蜕皮激素信号,起始包括转录因子表达在内的蜕皮级联反应,从而使昆虫进入蜕皮和变态等生命过程。克隆了柞蚕的2个蜕皮激素受体相关基因,命名为Ap EcRB1(Gen Bank登录号:KY411159)和Ap U... 详细信息

昆虫蜕皮激素受体和超气门蛋白形成的异源二聚体介导蜕皮激素信号,起始包括转录因子表达在内的蜕皮级联反应,从而使昆虫进入蜕皮和变态等生命过程。克隆了柞蚕的2个蜕皮激素受体相关基因,命名为Ap EcRB1(Gen Bank登录号:KY411159)和Ap USP1(Gen Bank登录号:KY411160)。2个基因的ORF序列全长分别为1 758 bp、1 401 bp,编码585个、466个氨基酸。半定量RT-PCR检测这2个基因除在柞蚕幼虫血淋巴中不表达之外,在其他组织中均有表达,在丝腺和脂肪体中的表达量较高。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析2个基因在幼虫蜕皮前及化蛹前后呈现大幅度上调表达的规律。注射20-羟基蜕皮甾酮(20E)诱导启动滞育蛹的发育,结果诱导组的滞育蛹经过17 d羽化,比对照组滞育蛹提早羽化。滞育蛹中2个基因的表达量在注射20E后均明显下降,其中Ap EcRB1在蛹发育后期的12 d内一直处于较低水平,但羽化前期其表达量急剧上升,蛹发育16 d(羽化前1 d)达到最高;Ap USP1基因的表达量从注射后8 d开始升高,至16 d时达到最高。以上研究结果丰富了柞蚕变态发育过程中蜕皮激素调控作用的分子信息。

关键词：柞蚕蜕皮激素受体蛋白超气门蛋白基因克隆表达模式

2012–2013年中国禾柄锈菌小麦专化型小种动态及新毒力谱分析

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菌物学报 2016年第6期35卷 684-693页

作者：曹远银王浩李天亚吴限鑫徐晓凤王婉琳沈阳农业大学植物保护学院辽宁沈阳110866 沈阳农业大学生物科学技术学院辽宁沈阳110866

监测具有潜在威胁的小麦秆锈病病原菌小种动态并分析其毒力谱变化,是培育抗病品种不可或缺的基础工作。在小麦秆锈病鲜有发生的情况下,于2012–2013年获得小麦田间秆锈病标样11份和经有性生殖过程的禾柄锈菌小麦专化型菌样22份。上述菌... 详细信息

监测具有潜在威胁的小麦秆锈病病原菌小种动态并分析其毒力谱变化,是培育抗病品种不可或缺的基础工作。在小麦秆锈病鲜有发生的情况下,于2012–2013年获得小麦田间秆锈病标样11份和经有性生殖过程的禾柄锈菌小麦专化型菌样22份。上述菌样经过分离、纯化,得到了53个单孢子堆菌株。利用国内最新采用的禾柄锈菌小麦专化型小种与毒力鉴别寄主体系进行分析,鉴定出13个生理小种,其中34C3RTGQM和34Oro II-MRGQM为优势小种,出现频率均为13.2%,首次发现了对Sr5+Sr11具有联合毒力的6个新小种,其出现频率处在1.9%–13.2%范围内。同时测定出Sr9e、Sr26、Sr31、Sr33、Sr37、Sr38、Sr47和Sr Tt3等8个抗秆锈病单基因对全部供试菌株表现抗病,余下40个单基因系则分别表现对1个以上至全部菌株感病。结论:(1)首次报道了6个对Sr5+Sr11具有危险性的联合毒力谱的新小种类型,这类毒力类型应当被密切关注;(2)明确了当前完全有效的8个抗秆锈病基因和其他部分有效的抗病基因;(3)初步说明了有性循环菌株与无性循环菌株在毒力结构上存在差异。

关键词：禾柄锈菌小麦专化型生理小种抗秆锈病单基因系 Ug99 新毒力谱

微紫青霉(Penicillium janthinellum)Snef1650诱导大豆胞囊线虫防治效果及GmCAD应答响应

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中国油料作物学报 2023年第3期45卷 583-591页

作者：金贺夏诗宁王旭东王涵雨王晗王惠段玉玺沈阳农业大学生物科学技术学院辽宁沈阳110866 沈阳农业大学植物保护学院辽宁沈阳110866

大豆胞囊线虫严重影响大豆的产量和品质,利用生防菌可以有效控制大豆胞囊线虫(SCN)种群数量并降低危害。微紫青霉(Penicillium janthinellum)Snef1650是本实验室筛选出的对大豆胞囊线虫具有较高防效的生防真菌。为了研究Snef1650诱导大... 详细信息

大豆胞囊线虫严重影响大豆的产量和品质,利用生防菌可以有效控制大豆胞囊线虫(SCN)种群数量并降低危害。微紫青霉(Penicillium janthinellum)Snef1650是本实验室筛选出的对大豆胞囊线虫具有较高防效的生防真菌。为了研究Snef1650诱导大豆抗SCN的生防机制,通过触杀、室内盆栽和裂根试验检测Snef1650菌株诱导SCN防治效果;通过实时荧光定量PCR技术检测了木质素合成关键酶肉桂醇脱氢酶(CAD)在线虫胁迫下的表达变化。结果表明,随着Snef1650浓度(20%、40%、60%、80%和100%)和暴露时间(12、24、36和48 h)的增加,J2死亡率逐渐增加。盆栽和裂根试验发现,Snef1650发酵液有效延缓线虫幼虫的侵染和发育。qPCR分析感病品种Williams 82和抗线虫品种小粒黑豆中GmCAD的表达情况发现,GmCAD1和GmCAD2在Snef1650诱导感病品种抗线虫过程中9 dpi和15 dpi时表达显著上调,同时与抗病品种中的表达情况存在时间一致性。间苯三酚木质素染色表明,Snef1650诱导了木质素参与SCN胁迫,与小粒黑豆中染色结果相似,染色部分更加明显。研究结果表明,SCN胁迫下Snef1650可诱导木质素生物合成来抵御线虫的入侵以及发育。

关键词：大豆胞囊线虫微紫青霉肉桂醇脱氢酶木质素