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玉米C_4型PPDK基因的分段PCR克隆及其表达载体构建

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沈阳农业大学学报 2014年第6期45卷 691-695页

作者：崔震海王雷阮燕晔张立军朱延姝樊金娟沈阳农业大学生物技术学院/辽宁省植物基因工程技术研究中心沈阳110161

丙酮酸磷酸双激酶(PPDK)是C4植物和景天科酸代谢(CAM)植物光合作用的关键酶,催化形成固定CO2的初始分子受体磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)。玉米的C4型PPDK基因序列较长,难以直接克隆。本研究设计多对引物,首先利用常规PCR扩增PPDK启动子,再利... 详细信息

丙酮酸磷酸双激酶(PPDK)是C4植物和景天科酸代谢(CAM)植物光合作用的关键酶,催化形成固定CO2的初始分子受体磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)。玉米的C4型PPDK基因序列较长,难以直接克隆。本研究设计多对引物,首先利用常规PCR扩增PPDK启动子,再利用分段PCR扩增PPDK基因全长编码序列;测序证实克隆序列正确无误,最后利用In-Fusion技术将各个片段定向克隆至载体p CAMBIA-1391Z,成功构建了玉米C4型PPDK基因的植物表达载体。最终为C4型PPDK基因功能研究和C3植物遗传转化提供可用的基因序列,为全长基因的高效克隆及表达载体构建提供参考。

关键词：玉米 PPDK 分段PCR 克隆 In-Fusion技术表达载体构建

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植物抗除草剂基因研究进展

南方农业学报 2012年第4期43卷 462-466页

作者：阮燕晔薛寥莎沈阳农业大学生物技术学院辽宁省植物基因工程技术研究中心沈阳110866

对抗除草剂基因的来源、抗除草剂作物的抗性机制及抗除草剂基因的应用进行了简要综述,并对抗除草剂基因和启动子选择的局限性及抗除草剂遗传转化中存在的问题进行了探讨。指出目前植物抗除草剂研究存在可转入的抗除草剂基因种类较少、... 详细信息

对抗除草剂基因的来源、抗除草剂作物的抗性机制及抗除草剂基因的应用进行了简要综述,并对抗除草剂基因和启动子选择的局限性及抗除草剂遗传转化中存在的问题进行了探讨。指出目前植物抗除草剂研究存在可转入的抗除草剂基因种类较少、获得抗性稳定表达的植株比较困难等问题。提出选择抗性基因时,应重点考虑以降解除草剂为抗性机制的基因以减少代谢负担、加强对多价基因转入的研究等策略。

关键词：杂草抗除草剂基因抗性机制植物基因工程研究进展展望

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大肠杆菌氨基酸转运蛋白的研究进展

科技通报 2012年第3期28卷 49-56,99页

作者：马蓉张立军丁锐敖永华胡紫菱刘姗沈阳农业大学生物科学技术学院沈阳110161 辽宁省植物基因工程技术研究中心沈阳110161 沈阳农业大学工程学院沈阳110161

总结了大肠杆菌氨基酸的原初主动转运蛋白、次级主动转运蛋白和易化扩散载体在其种类、功能、结构和转运机制方面的研究进展。详细介绍了氨基酸与势能离子相伴的同向共转运和反向共转运,并提出了大肠杆菌氨基酸转运研究中存在问题及展望。

关键词：氨基酸转运蛋白原初主动转运蛋白次级主动转运蛋白同向转运反向转运

高密度SNP标记法解析两个玉米重组自交系穗夹角的遗传基础

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分子植物育种 2019年第12期17卷 3974-3982页

作者：林景卫韩笑张昕周思雅李浩戈陈水森张立军崔震海阮燕晔沈阳农业大学生物技术学院辽宁农业技术重点实验室辽宁省植物基因工程技术研究中心

为了探究控制玉米穗夹角的遗传基础,本试验以BYD和MX两个玉米重组自交系群体为材料,采用高密度SNP和连锁分析,对调控玉米穗夹角性状的基因进行QTL定位和可能的功能基因分析。结果表明,穗夹角性状具有较高的遗传性,受基因型和环境的影响... 详细信息

为了探究控制玉米穗夹角的遗传基础,本试验以BYD和MX两个玉米重组自交系群体为材料,采用高密度SNP和连锁分析,对调控玉米穗夹角性状的基因进行QTL定位和可能的功能基因分析。结果表明,穗夹角性状具有较高的遗传性,受基因型和环境的影响。穗夹角经过多环境的调查表明,在两个分离群体中均呈正态分布;共定位到调控穗夹角性状27个QTL,包括5个主效QTL,分别位于2号、4号和7号染色体上,两个来自BYD群体,3个来自MX群体,穗夹角性状QTL的表型贡献率从5.7%(qBYDEA2)到6.9%(qMXEA2-2);进一步通过bin图谱法缩进主效QTL区间,共发掘7个穗夹角性状候选基因,它们主要编码转录调控和代谢的酶。本研究结果首次揭示了玉米穗夹角的遗传基础,并有助于未来通过分子育种应用从而提高玉米优良穗夹角的品种。

关键词：玉米(Zea mays) 穗夹角 QTL定位重组自交系群体

伯氏致病杆菌SN52中的二硫吡咯类物质及其生物活性

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天然产物研究与开发 2017年第7期29卷 1091-1095,1203页

作者：张文波王宁姜义仁骆世洪于志国沈阳农业大学植物保护学院沈阳农业大学生物科学技术学院辽宁省生物农药工程技术研究中心沈阳110866

在我们从天然产物中寻找新抗菌剂的过程中,利用硅胶柱层析、凝胶柱层析和半制备高效液相色谱技术从昆虫病原线虫共生菌Xenorhabdus bovienii SN52的发酵液中分离得到6个单体化合物,通过波普综合解析和文献数据对照对分离到的单体化合物... 详细信息

在我们从天然产物中寻找新抗菌剂的过程中,利用硅胶柱层析、凝胶柱层析和半制备高效液相色谱技术从昆虫病原线虫共生菌Xenorhabdus bovienii SN52的发酵液中分离得到6个单体化合物,通过波普综合解析和文献数据对照对分离到的单体化合物进行结构鉴定。结果显示,均为二硫吡咯类物质,其中化合物1和2为新化合物,4个已知化合物分别鉴定为Xenorhabdin I(3)、Xenorhabdin II(4)、Xenorhabdin IV(5)、Xenorhabdin V(6)。使用微量肉汤稀释法测试化合物1~6的抗菌活性,其结构-活性关系表明二硫吡咯衍生物的抗菌活性受到侧链的可变取代基的显著影响。

关键词：伯氏致病杆菌SN52 二硫吡咯衍生物结构鉴定抗菌活性结构-活性关系

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粳型超级稻胚性细胞悬浮系的建立及植株再生

江苏农业科学 2011年第3期39卷 31-34页

作者：冀宇奇张立军弓雪崔震海胡凯沈阳农业大学生物科学技术学院/辽宁省植物基因工程技术中心辽宁沈阳110866

以北方粳型超级稻沈农265成熟胚为材料,对其胚性悬浮细胞系建立与植株再生进行了研究。结果表明,弱光下培养20 d,有利于成熟胚诱导出质量较好的愈伤组织,这些愈伤组织在添加2,4-D(3.0 mg/L)和脯氨酸(500 mg/L)的N6固体培养基上进行状态... 详细信息

以北方粳型超级稻沈农265成熟胚为材料,对其胚性悬浮细胞系建立与植株再生进行了研究。结果表明,弱光下培养20 d,有利于成熟胚诱导出质量较好的愈伤组织,这些愈伤组织在添加2,4-D(3.0 mg/L)和脯氨酸(500 mg/L)的N6固体培养基上进行状态调整后,可获得适于悬浮培养的胚性愈伤组织。悬浮培养时适宜的2,4-D浓度为2～3 mg/L;起始接种量以20 mg/mL的效果较好;最佳继代时间是7 d。悬浮细胞团先经固体继代培养获得愈伤组织小块,再将愈伤小块干燥处理2 h后进行分化,可显著提高植株再生率,愈伤组织绿点分化率和成苗率分别达58.6%和27.2%。

关键词：粳型超级稻胚性愈伤组织悬浮细胞系植株再生

深冬季节油松针叶过剩光能的耗散及光氧化防御研究

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沈阳农业大学学报 2012年第5期43卷 555-559页

作者：胡紫菱崔震海秦萍曹松屹张立军周广柱沈阳农业大学生物科学技术学院沈阳110161 沈阳农业大学辽宁省植物基因工程技术研究中心沈阳110161 沈阳农业大学林学院沈阳110161

以辽宁省沈阳地区（41°82’N,123°56’E）深冬季节（1月末）油松小枝基部和顶部针叶为材料,测定吸收光谱和反射光谱、快速叶绿素荧光诱导动力学参数、叶绿素含量、光合速率和呼吸速率、细胞膜透性、丙二醛和过氧化氢含量以及抗氧化酶... 详细信息

以辽宁省沈阳地区（41°82’N,123°56’E）深冬季节（1月末）油松小枝基部和顶部针叶为材料,测定吸收光谱和反射光谱、快速叶绿素荧光诱导动力学参数、叶绿素含量、光合速率和呼吸速率、细胞膜透性、丙二醛和过氧化氢含量以及抗氧化酶活性,探讨油松针叶在深冬低温下对过剩光能的耗散和光氧化保护机制。结果表明：深冬季节油松针叶的最大光化学量子产量（Fv/Fm）降低,仅达到0.11～0.12,单位横截面积捕获的光能（ABS/CS）和有活性的反应中心的密度（RC/CS）减少,热耗散成为过剩光能消耗的主要途径;光合作用停止,呼吸作用处于很低水平;相对电导率达到78%~85%,但丙二醛、过氧化氢含量和抗氧化酶活性都处于较低水平,因此,细胞膜透性增大可能不主要是活性氧引起的膜质过氧化作用的结果。研究发现,深冬季节的油松针叶生理状态难以满足目前所知的叶黄素循环运转所需要的生理条件。

关键词：油松深冬过剩光能的耗散光氧化防御

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大肠杆菌多基因共表达策略

中国生物工程杂志 2012年第4期32卷 117-122页

作者：马蓉徐昊丁锐敖永华张立军沈阳农业大学生物科学技术学院沈阳110161 辽宁省植物基因工程技术研究中心沈阳110161 江苏华东净化设备有限公司扬州225800 沈阳农业大学工程学院沈阳110161

利用基因工程手段实现多个基因在同一宿主菌中共表达是大肠杆菌细胞发育调节研究和代谢途径改造的有效手段。介绍了单一转录单元的多基因共表达载体、多重转录单元的多基因共表达和单基因载体的构建原理、特点、优势及转化策略,并着重... 详细信息

利用基因工程手段实现多个基因在同一宿主菌中共表达是大肠杆菌细胞发育调节研究和代谢途径改造的有效手段。介绍了单一转录单元的多基因共表达载体、多重转录单元的多基因共表达和单基因载体的构建原理、特点、优势及转化策略,并着重介绍了利用LIC衔接子实现基因在多基因载体上定位连接的原理和方法。

关键词：基因共表达多基因载体单基因载体

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间接竞争ELISA法对柞蚕微孢子虫的检测

应用昆虫学报 2013年第5期50卷 1364-1370页

作者：姜义仁王伯阳孙影王勇石生林杨瑞生段玉玺秦利沈阳农业大学生物科学技术学院辽宁省昆虫资源工程技术研究中心沈阳110866 沈阳农业大学植物保护学院沈阳110866

柞蚕微孢子虫病是柞蚕唯一的检疫性病害,其致病病原物为柞蚕微孢子虫(Nosema pernyi Ding,Su&Wen),因此,柞蚕微孢子虫的检测对于该病的防治具有重要意义。本文通过制备柞蚕微孢子虫多克隆抗体,建立柞蚕微孢子虫间接竞争ELISA检测法。结... 详细信息

柞蚕微孢子虫病是柞蚕唯一的检疫性病害,其致病病原物为柞蚕微孢子虫(Nosema pernyi Ding,Su&Wen),因此,柞蚕微孢子虫的检测对于该病的防治具有重要意义。本文通过制备柞蚕微孢子虫多克隆抗体,建立柞蚕微孢子虫间接竞争ELISA检测法。结果表明,柞蚕微孢子虫多克隆抗体效价为1∶104、浓度为3 mg·mL-1,主要由2条大小约50 ku和25 ku蛋白条带组成,可作为后续试验多克隆抗体材料。间接竞争ELISA法最佳抗原工作浓度为2.0μg·mL-1微孢子虫孢壁蛋白溶液,最佳抗体工作浓度为兔抗血清按1∶102倍浓度稀释,酶标二抗最佳工作浓度为1∶5×104倍稀释,柞蚕微孢子虫间接竞争ELISA检测法的灵敏度为1.6×105spores·mL-1。间接竞争ELISA法在柞蚕微孢子虫的检测方面具有一定的应用价值。

关键词：柞蚕微孢子虫酶联免疫吸附测定多克隆抗体检测