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转录因子E2F1抑制CREG表达调控体外培养的人血管平滑肌细胞分化

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生物化学与生物物理进展 2007年第5期34卷 490-496页

作者：韩雅玲赵昕闫承慧康建张效林邓捷徐红梅刘海伟沈阳军区总医院全军心血管病研究所心内科沈阳110016

为探讨转录因子E2F1在血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)表型转化中的作用及其对E1A激活基因阻遏子(cellular repressor of E1A-stimulated genes,CREG)表达调控的分子机制,应用生物信息学方法,定位人CREG(hCREG)基因启动子并确定转录因子E2F1在hCREG启动子区的结合位点,PCR方法克隆并构建hCREG基因启动子绿色荧光报告基因载体,以hCREG启动子区E2F1结合位点为模板,化学合成E2F1寡聚脱氧核苷酸(ODN)和错配E2F1ODN,利用转录因子"诱骗(Decoy)"策略,用E2F1ODN转染体外培养的VSMCs以阻断E2F1与hCREG基因启动子区的结合,蛋白质印迹(Western blot)分析检测阻断前后细胞内hCREG蛋白、报告基因绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)和平滑肌细胞分化标志蛋白SMα-actin表达变化.结果显示:分化表型HITASY细胞中E2F1表达下调伴出核转位,而增殖表型的HITASY细胞中E2F1蛋白表达明显增加且定位于核内.进一步应用FuGene6瞬时转染E2F1ODN和错配E2F1ODN于体外培养HITASY细胞中,蛋白质印迹分析发现,转染E2F1ODN后,HITASY细胞中hCREG、SMα-actin和GFP表达均较未阻断组及错配组细胞明显增加.上述研究结果证实,E2F1是hCREG基因转录的重要调控因子,能够直接结合于hCREG启动子区阻遏hCREG表达,参与hCREG蛋白对VSMCs表型转化的调控作用.

关键词： E2F1 转录因子阻遏蛋白 E1A 表型血管平滑肌细胞

MicroRNA-124对人脐静脉内皮细胞增殖和凋亡的影响

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解放军医学杂志 2016年第1期41卷 7-11页

作者：刘丹高乃婧田孝祥张效林闫承慧韩雅玲沈阳军区总医院心内科全军心血管病研究所心内科沈阳110016

目的观察miR-124对内皮细胞增殖和凋亡的影响,探讨miR-124在动脉粥样硬化中的作用。方法采用荧光定量PCR检测miR-124在40例冠心病患者及40例正常对照血浆中的表达水平,CCK-8和BrdU法检测miR-124对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖的影响,TU... 详细信息

目的观察miR-124对内皮细胞增殖和凋亡的影响,探讨miR-124在动脉粥样硬化中的作用。方法采用荧光定量PCR检测miR-124在40例冠心病患者及40例正常对照血浆中的表达水平,CCK-8和BrdU法检测miR-124对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖的影响,TUNNEL染色检测miR-124对HUVECs凋亡的影响,Western blotting检测miR-124对HUVECs促凋亡蛋白cleaved caspase 3及抗凋亡蛋白Bcl-2表达的影响。结果与对照组比较,miR-124在冠心病患者血浆中的表达明显降低。CCK-8和BrdU检测结果提示miR-124可明显促进HUVECs增殖;TUNNEL染色及Western blotting检测结果提示,miR-124可明显降低HUVECs凋亡细胞的比例及cleaved caspase 3表达,同时增加Bcl-2的表达。结论Mi R-124可促进HUVECs的增殖并抑制其凋亡,为深入认识动脉粥样硬化的发病机制提供了理论依据。

关键词：微RNAs 动脉粥样硬化人脐静脉内皮细胞细胞增殖细胞凋亡

肿瘤坏死因子α通过RhoA-ERK信号通路调控人脐静脉内皮细胞单层通透性的实验研究

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中华心血管病杂志 2011年第6期39卷 531-537页

作者：闫承慧于海波黄明方李杰张效林韩雅玲沈阳军区总医院全军心血管病研究所心内科 110840 南京军区福州总医院心内科

目的探讨肿瘤坏死因子α（TNF-α）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）单层通透性改变的效应分子,以寻找内皮细胞损伤修复的有效治疗靶点.方法应用TNF-α刺激体外培养的HUVEC,观察HUVEC骨架蛋白F-actin和细胞单层通透性的改变.应用荧光... 详细信息

目的探讨肿瘤坏死因子α（TNF-α）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）单层通透性改变的效应分子,以寻找内皮细胞损伤修复的有效治疗靶点.方法应用TNF-α刺激体外培养的HUVEC,观察HUVEC骨架蛋白F-actin和细胞单层通透性的改变.应用荧光免疫组织化学和Western blot方法检测TNF-α刺激前后细胞中RhoA和MAPK信号通路的改变.并通过添加特异性分子抑制剂Y27632和PD98059阻断RhoA和ERK表达,观察细胞F-actin及细胞单层通透性的改变.进一步应用持续活化型RhoA和主导抑制型RhoA逆转录病毒分别感染改变人HUVEC,改变细胞中RhoA的活化状态,观察TNF-α刺激前后细胞骨架蛋白及单层细胞通透性的变化.并确定RhoA与ERK的相互作用.结果 TNF-α刺激引起HUVEC中F-actin快速重构并形成大量应力纤维,细胞单层通透性明显增强,呈现时间和剂量依赖性趋势.其中TNF-α（100 ng/ml）刺激2 h后细胞单层通透性最强,HRP-BSA渗漏最大浓度为40 ng/ml.同时,细胞中活化RhoA的表达明显增加.TNF-α刺激前后细胞中MAPK信号转导蛋白JNK、P38和ERK1/2总蛋白均无明显改变,但p-JNK、p-p38和p-ERK表达均显著增加.其中,应用Y27632抑制RhoA的活化或PD98059阻断p-ERK表达后,TNF-α刺激的HUVEC中F-actin重构现象消失,同时细胞单层通透性增加也受到明显抑制,HRP-BSA渗漏浓度从40 ng/ml下降至12.5 ng/ml（P〈0.05）.进一步应用持续活化型RhoA感染人HUVEC细胞,发现RhoA活化的HUVEC单层通透性明显高于GFP感染组,HRP-BSA在TNF-α（100 ng/ml）刺激2 h后渗漏浓度从达到50 ng/ml（P〈0.05）,同时p-ERK表达也明显增加.而应用TNF-α刺激后,抑制型RhoA感染的HUVEC的骨架蛋白与单层细胞通透性均无明显变化.同时,p-ERK活化也受到明显抑制.结论 RhoA-pERK通路的活化介导了TNF-α诱导的HUVEC通透性增加,特异性抑制RhoA-ERK通路可以阻断TNF-α引起的内皮细胞通透性增加.

关键词：内皮细胞通透性肿瘤坏死因子α

E1A激活基因阻遏子过表达诱导体外培养大鼠平滑肌细胞分化

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生物化学与生物物理进展 2004年第12期31卷 1099-1105页

作者：韩雅玲闫承慧刘海伟胡叶康建王效增李少华沈阳军区总医院全军心血管病研究所心内科沈阳110016 Department of Pathology Robert Wood Johnson Medical School

为探讨E1A激活基因阻遏子蛋白 (CREG)对血管平滑肌细胞表型转换的调控机制 ,应用pRC/CMV hCREG真核表达载体转染体外培养的大鼠血管平滑肌细胞 (VSMCs) ,观察了转染前后细胞的表型改变 .结果发现 ,pRC/CMV hCREG质粒转染后 ,大鼠平滑肌... 详细信息

为探讨E1A激活基因阻遏子蛋白 (CREG)对血管平滑肌细胞表型转换的调控机制 ,应用pRC/CMV hCREG真核表达载体转染体外培养的大鼠血管平滑肌细胞 (VSMCs) ,观察了转染前后细胞的表型改变 .结果发现 ,pRC/CMV hCREG质粒转染后 ,大鼠平滑肌细胞增殖受抑 ,细胞分化标志蛋白SMα actin表达显著增加 .免疫共沉淀分析发现 ,CREG与血清反应因子 (SRF)发生相互作用形成复合体 ,在CREG基因过表达时 ,与CREG结合的SRF蛋白增加 .凝胶迁移阻滞分析 (GSMA)和抗体凝胶迁移阻滞分析 (supershift)显示 ,过表达的CREG蛋白与SRF蛋白共同结合到SMα actin基因启动子区CArG位点上 ,可能参与SMα actin表达的调控 .构建SMα actinpromoter pCAT 3报告基因载体并与pRC/CMV hCREG质粒共转染VSMCs也证实 ,CREG蛋白过表达可增强SMα actin基因表达 .上述研究提示。

关键词： CArG,阻遏蛋白,E1A,表型,细胞,血管平滑肌,大鼠

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女性心血管病的病理生理特点

中国实用内科杂志 2014年第1期34卷 10-11页

作者：韩雅玲王斌沈阳军区总医院心血管研究所心内科沈阳110027

心血管疾病是当今威胁女性健康和生命的主要疾病,是导致中国女性死亡的首位原因。男性心血管疾病的死亡率呈现下降趋势,但女性心血管疾病的死亡率并没有明显下降,这主要与女性心血管疾病独特的病理生理特点有关。目前尚未发现雌激素与... 详细信息

心血管疾病是当今威胁女性健康和生命的主要疾病,是导致中国女性死亡的首位原因。男性心血管疾病的死亡率呈现下降趋势,但女性心血管疾病的死亡率并没有明显下降,这主要与女性心血管疾病独特的病理生理特点有关。目前尚未发现雌激素与女性心血管疾病预后较男性差别存在明确的因果关系。女性随增龄伴随的疾病增多,合并糖尿病、高血压等均可能是造成此差异的主要原因。

关键词：女性心血管病雌激素糖尿病

冠状动脉支架术后三联抗血小板药物治疗对血小板功能的影响

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中华内科杂志 2006年第8期45卷 635-638页

作者：韩雅玲苏庆丰李毅康建闫承惠王守力沈阳军区总医院全军心血管病研究所心内科 110016

目的探讨三联抗血小板药物治疗对冠状动脉(冠脉)支架术后患者血小板活化和聚集功能的影响。方法120例冠心病行冠脉支架植入术患者,随机分为三联组(阿司匹林、氯吡格雷和西洛他唑)和两联组(阿司匹林和氯吡格雷),三联组于术后第1天起加服... 详细信息

目的探讨三联抗血小板药物治疗对冠状动脉(冠脉)支架术后患者血小板活化和聚集功能的影响。方法120例冠心病行冠脉支架植入术患者,随机分为三联组(阿司匹林、氯吡格雷和西洛他唑)和两联组(阿司匹林和氯吡格雷),三联组于术后第1天起加服西洛他唑。两组分别于术后第1天服用西洛他唑前及第5天测定血小板活化复合物(PAC-1)和CD_(62)p,同时测定5μmol/L及20μmol/L ADP诱导的血小板最大聚集率(MPAR)。结果两组临床基线资料及CD_(62)p、PAC-1和MPAR基线值差异均无统计学意义。分别计算各指标第二次测定值与基线值的差值,两组ΔMPAR差异无统计学意义,但三联组和两联组ΔCD_(62)p和ΔPAC-1分别为[(5.12±11.25)%比(1.08±4.97)%,P＜0.05]和[(12.12±12.30)%比(2.22±15.15)%,P＜0.01]。对急性冠脉综合征(ACS)患者亚组分析结果表明三联组ΔMPAR(5μmol/L)[(8.68±10.35)％比(2.92±13.06)%,P=0.018]、ΔMPAR(20μmol/L)[(11.05±11.14)%比(5.16±13.27)%,P=0.019]、ΔCD_(62)p[(5.57±12.08)％比(1.35±4.42)%,P=0.028】和ΔPAC-1[(11.62±12.73)%比(1.29±15.73)%,P= 0.001]均显著高于两联组。3个月临床随访显示三联组与两联组主要不良心、脑血管事件发生率分别为0和3.3%(2/60),出血发生率分别为5%(3/60)和3.3%(2/60),均无统计学意义。结论三联抗血小板药物治疗与常规两联治疗相比能更有效地抑制冠脉支架术后血小板活化和聚集,但其疗效和安全性还需大规模临床试验证实。

关键词：血管成形术,经皮,经腔血小板血小板聚集抑制剂

E1A激活基因阻遏子(CREG)过表达通过抑制p38/JNK信号分子活化对抗人血管平滑肌细胞凋亡

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生物化学与生物物理进展 2009年第12期36卷 1597-1606页

作者：吴光哲闫承慧韩雅玲陶杰邓捷田孝祥张保海王涛康建张效林第四军医大学西京医院心内科西安710032 沈阳军区总医院全军心血管病研究所心内科沈阳110016

血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡参与了动脉粥样硬化(AS)及冠状动脉介入治疗(PCI)术后再狭窄(RS)等心血管疾病的发生发展过程.E1A激活基因阻遏子(CREG)是新近发现的一种分泌型糖蛋白,在维持细胞和组织稳态方面发挥重要作用.前期研究发现CREG... 详细信息

血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡参与了动脉粥样硬化(AS)及冠状动脉介入治疗(PCI)术后再狭窄(RS)等心血管疾病的发生发展过程.E1A激活基因阻遏子(CREG)是新近发现的一种分泌型糖蛋白,在维持细胞和组织稳态方面发挥重要作用.前期研究发现CREG蛋白过表达能够对抗血清饥饿诱导的人血管平滑肌细胞(hVSMCs)凋亡,进一步探讨CREG对hVSMCs凋亡的调控作用及相关的分子机制.以逆转录病毒稳定转染的CREG过表达及表达抑制的hVSMCs为模型,应用两种药物Staurosporine(STS)和Etoposide(VP-16)诱导细胞发生凋亡,检测细胞凋亡和相关信号通路变化.结果显示,在药物干预后,CREG表达抑制时细胞凋亡明显增多,而CREG过表达明显抑制hVSMCs凋亡.同时也发现,CREG表达抑制时p38及JNK活性明显增强,而CREG过表达时p38和JNK活性被抑制.经腺病毒转染和药物干预抑制p38表达后,细胞凋亡均受到抑制,而且在p38活性被抑制的同时,JNK活化也受到抑制.说明p38和JNK表现为协同作用.结果也显示,VSMCs分化指标SMα-actin和SM MHC与CREG表达呈一致趋势,而细胞外基质蛋白Fibronection与CREG表达呈负相关.以上结果提示,CREG在维持VSMCs表型转换方面发挥重要作用,并且通过p38和JNK信号转导通路对hVSMCs凋亡进行调控.CREG可能对于AS和PCI术后RS的防治具有重要价值.

关键词： E1A激活基因阻遏子血管平滑肌细胞细胞凋亡信号通路

主动脉内球囊反搏辅助治疗冠心病合并慢性肾脏疾病的PCI患者临床疗效观察

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解放军医学杂志 2015年第4期40卷 266-270页

作者：经子兰任丽丽赵昕王效增韩雅玲邓婕荆全民徐凯刘海伟马颖艳王耿沈阳军区总医院心内科、全军心血管病研究所沈阳110016

目的探讨主动脉内球囊反搏(IABP)对冠心病合并慢性肾功能不全的PCI患者的临床疗效。方法纳入2000年1月-2014年7月沈阳军区总医院收治的冠心病合并慢性肾功能不全PCI患者120例,单纯冠心病无肾功能不全PCI患者123例。入院后患者因心脏泵... 详细信息

目的探讨主动脉内球囊反搏(IABP)对冠心病合并慢性肾功能不全的PCI患者的临床疗效。方法纳入2000年1月-2014年7月沈阳军区总医院收治的冠心病合并慢性肾功能不全PCI患者120例,单纯冠心病无肾功能不全PCI患者123例。入院后患者因心脏泵衰竭、心源性休克、急性左心衰、内科治疗无效的不稳定心绞痛(UP)或急性心肌梗死(AMI)等原因而选择植入IABP,观察两组患者入院时的一般临床资料及住院期间死亡率和预后情况。结果一般临床资料中,两组患者的性别、年龄、合并高血压病、合并糖尿病差异无统计学意义(P>0.05),术前的血脂、天冬氨酸转氨酶(AST)、D-二聚体、APTT、INR差异无统计学意义(P>0.05),AMI比例、左主干和(或)三支比例差异无统计学意义(P>0.05),而两组患者陈旧心梗患病率、肌钙蛋白T(Tn T)、肌酸激酶MB同工酶、血肌酐值、血尿素氮值、支架植入个数、IABP应用时间差异有统计学意义(P0.05)。Logistic回归分析结果显示,合并糖尿病、支架植入个数为住院期间死亡及远期死亡的独立危险因素。结论对于冠心病合并肾功不全及肾功能正常的PCI患者,IABP的近期和远期临床疗效相当,且合并糖尿病、支架植入个数为住院期间死亡及远期死亡的独立危险因素。

关键词：冠心病肾功能不全,慢性主动脉内气囊泵治疗结果

对影响我国ST段抬高型急性心肌梗死患者院内死亡因素的再认识

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解放军医学杂志 2016年第6期41卷 437-440页

作者：韩雅玲沈阳军区总医院全军心血管病研究所心内科沈阳110016

预测ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者院内死亡风险对于指导临床医生选择合理治疗方案至关重要。本期刊登的四篇文章深入分析了近年我国军队医院冠心病介入治疗数据库的资料,分别从性别、心肌梗死靶血管术前闭塞程度、单中心规范化胸痛中... 详细信息

预测ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者院内死亡风险对于指导临床医生选择合理治疗方案至关重要。本期刊登的四篇文章深入分析了近年我国军队医院冠心病介入治疗数据库的资料,分别从性别、心肌梗死靶血管术前闭塞程度、单中心规范化胸痛中心建设、应用主动脉内球囊反搏治疗方面探讨了STEMI患者院内死亡的影响因素,这将有助于临床医生制定个体化治疗方案、进一步优化再灌注策略、提高临床疗效和改善患者预后。

关键词：心肌梗死医院死亡率性别因素冠状血管胸痛中心反搏动术