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Ligilactobacillus ***7642关键胆盐水解酶的发掘

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食品与发酵工业 2024年第6期50卷 72-77页

作者：任全路乳业生物技术国家重点实验室上海乳业生物工程技术研究中心光明乳业股份有限公司上海200436

随着人们生活水平的逐步提高,肥胖症的发生率在迅速升高。乳杆菌作为优秀的益生菌库,其对肥胖症具有很好的预防治疗效果,其中胆盐水解酶可能发挥着关键作用。胆盐水解酶对胆盐的降解具有特异性,对不同来源的胆盐水解酶的发掘及解析研究... 详细信息

随着人们生活水平的逐步提高,肥胖症的发生率在迅速升高。乳杆菌作为优秀的益生菌库,其对肥胖症具有很好的预防治疗效果,其中胆盐水解酶可能发挥着关键作用。胆盐水解酶对胆盐的降解具有特异性,对不同来源的胆盐水解酶的发掘及解析研究显得至关重要。该研究发现的一株Ligilactobacillus ***7642具有很高的胆盐水解酶活性,并对这一菌株来源的胆盐水解酶进行发掘。通过牛磺脱氧胆酸钠平板的方法筛选发现Ligilactobacillus ***7642具有高胆盐水解酶活性;利用HPLC分析BD7642对6种胆盐的降解特异性,发现其对牛磺酸胆盐具有偏好性;对BD7642的基因组进行分析发现3个注释为胆盐水解酶相关基因g1210、g1294、g1443,将这3个基因在大肠杆菌中异源表达,发现表达的3个蛋白都具有胆盐水解酶活性,其中g1294的胆盐水解酶活性最强;分子对接发现,g1294对牛磺酸的连接位点更紧密,这对g1294的高酶活力做出了一定的解释,也为后续合成生物学、菌株的人工改造提供新的思路和素材。

关键词： Ligilactobacillus 肥胖胆盐水解酶异源表达 HPLC

红曲霉奶酪的生物活性研究及ACE抑制肽的筛选

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食品科学 2024年第5期45卷 40-48页

作者：贾向飞郑远荣刘振民吴涵清周杨阳上海海洋大学食品学院上海201306 乳业生物技术国家重点实验室上海乳业生物工程技术研究中心光明乳业股份有限公司乳业研究院上海200436 江南大学食品学院江苏无锡214122

研究红曲霉对奶酪成熟过程中生物活性肽,尤其血管紧张素转换酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)抑制肽的影响。以不接种红曲霉的奶酪为对照组,研究奶酪成熟过程中的可溶性氮含量、α-葡萄糖苷酶抑制活性和ACE抑制活性,对红曲霉奶酪... 详细信息

研究红曲霉对奶酪成熟过程中生物活性肽,尤其血管紧张素转换酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)抑制肽的影响。以不接种红曲霉的奶酪为对照组,研究奶酪成熟过程中的可溶性氮含量、α-葡萄糖苷酶抑制活性和ACE抑制活性,对红曲霉奶酪肽谱进行鉴定,利用生物信息学和分子对接等方法对潜在的活性肽进行筛选,并对筛选肽进行合成和评价。结果表明,相比于对照组,在pH 4.6和三氯乙酸条件下,奶酪成熟结束时的可溶性氮相对含量分别提高57.98%和38.34%,α-葡萄糖苷酶抑制活性和ACE抑制活性分别提高32.21%和73.98%。在红曲霉奶酪提取物中共鉴定到1796种肽,其中51条ACE抑制肽、28条抗氧化肽、7条降血糖肽等。筛选到两种ACE抑制肽YPFPGPI和FPEVFGK,半抑制浓度分别为207.31μmol/L和410.61μmol/L,酶抑制类型均是非竞争性抑制。该研究提供了一种快速筛选ACE抑制肽的方法,证明奶酪中添加红曲霉能够有效提高ACE抑制活性,为挖掘红曲霉奶酪的功能特性潜力提供了参考。

关键词：红曲霉奶酪血管紧张素转化酶生物信息学分子对接酶抑制动力学

5-羟甲基糠醛对秀丽隐杆线虫影响的量效关系及其机制初探

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食品与发酵工业 2024年第3期50卷 93-99页

作者：楚阳阳张怡琳游春苹上海海洋大学食品学院上海201306 光明乳业股份有限公司乳业研究院上海乳业生物工程技术研究中心乳业生物技术国家重点实验室上海200436

利用秀丽隐杆线虫这一与人类基因组高度同源的模式生物探究不同浓度的5-羟甲基糠醛(5-hydroxymethylfurfural,5-HMF)对机体的作用及其可能的机制。将实验分组设定为对照组和实验组(5-HMF质量浓度分别为0.010、0.100、1.000 mg/mL)。通... 详细信息

利用秀丽隐杆线虫这一与人类基因组高度同源的模式生物探究不同浓度的5-羟甲基糠醛(5-hydroxymethylfurfural,5-HMF)对机体的作用及其可能的机制。将实验分组设定为对照组和实验组(5-HMF质量浓度分别为0.010、0.100、1.000 mg/mL)。通过显微镜观察线虫寿命、产卵情况、基础运动指标以及通过实时荧光定量PCR分析寿命信号通路:胰岛素/胰岛素样生长因子相关基因表达情况,并拟合出与寿命相关的量效关系。结果显示,高(1.000 mg/mL)、中(0.100 mg/mL)质量浓度组5-HMF可显著减少线虫产卵数量、咽泵频率、头部摆动和身体弯曲次数,并通过上调基因Daf-2的表达,下调基因Daf-16、Sod-3以及Sir-2.1的表达,显著缩短线虫寿命周期,而低(0.010 mg/mL)质量浓度组的5-HMF则完全相反。由量效关系曲线可知0.035 mg/mL是5-HMF影响线虫平均最长寿命的临界质量浓度值,0.056 mg/mL是5-HMF影响线虫最长寿命的临界质量浓度值。5-HMF作用于基因Daf-2、Daf-16、Sod-3以及Sir-2.1的临界质量浓度分别为0.067、0.067、0.075、0.052 mg/mL。结果表明,5-HMF对秀丽隐杆线虫的正、负向影响与浓度和作用时间密切相关,并存在一定量效关系。该文为进一步研究5-HMF对机体的影响提供了初步参考,并为5-HMF的毒理分析和安全应用提供理论依据。

关键词： 5-羟甲基糠醛秀丽隐杆线虫寿命基础运动指标寿命信号通路

红曲霉奶酪的成熟条件工艺优化及品质变化分析

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食品与发酵工业 2024年第7期50卷 74-82,I0003页

作者：贾向飞郑远荣刘振民徐杏敏孙嘉乳业生物技术国家重点实验室上海乳业生物工程技术研究中心光明乳业股份有限公司乳业研究院上海200436 上海海洋大学食品学院上海201306

为了优化红曲霉奶酪品质及缩短成熟时间,该试验将前期筛选的优良红曲霉应用于奶酪的制作,首先确定了红曲霉BC20和ZX99为1∶1时为最优复配比例,之后通过单因素试验和响应面优化得到了最佳的成熟工艺参数,并对其理化、质地和抗氧化特性进... 详细信息

为了优化红曲霉奶酪品质及缩短成熟时间,该试验将前期筛选的优良红曲霉应用于奶酪的制作,首先确定了红曲霉BC20和ZX99为1∶1时为最优复配比例,之后通过单因素试验和响应面优化得到了最佳的成熟工艺参数,并对其理化、质地和抗氧化特性进行了研究。结果表明,最优复配比例下,在相对湿度为55.3%,第一阶段成熟时间为8.9 d、成熟温度30.2℃时,形成的红曲霉奶酪具有最佳的感官品质和较好的蛋白水解度。在成熟过程中,水分含量下降,pH值先下降后上升;色度指标中,L^(*)值下降,a^(*)和b^(*)值上升;红曲色素含量逐渐增加;硬度和咀嚼性均先增加后下降,凝聚性先减弱后增强,而黏性整体呈下降趋势;与未接种红曲霉的对照组奶酪相比,红曲霉奶酪具有更好的抗氧化特性。总之,该成熟条件工艺优化可以改善奶酪的感官品质,缩短成熟时间,并证实了红曲霉的添加可以有效改善奶酪的抗氧化活性。

关键词：红曲霉奶酪工艺优化感官分析抗氧化

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三维互穿结构Cu-W触头抗熔焊机理

高电压技术 2024年第2期50卷 515-525页

作者：韩颖吴世齐宋博文安辉齐丽君陆艳君沈阳工业大学特种电机与高压电器教育部重点实验室沈阳110870 沈阳中北真空技术有限公司沈阳110167 沈阳芯源微电子设备股份有限公司沈阳110168

触头闭合回跳电弧引起的开关电器动熔焊问题,直接影响大功率接触器的电寿命和可靠性。为此设计了2种三维互穿有序结构的四边形和菱形十二面体的Cu-W复合材料触头,围绕触头动熔焊过程中的电弧、熔池、液滴溅射及凝固相变降温等问题,建立... 详细信息

触头闭合回跳电弧引起的开关电器动熔焊问题,直接影响大功率接触器的电寿命和可靠性。为此设计了2种三维互穿有序结构的四边形和菱形十二面体的Cu-W复合材料触头,围绕触头动熔焊过程中的电弧、熔池、液滴溅射及凝固相变降温等问题,建立触头熔池流体动力学模型和冷凝降温数学模型,研究了2种有序结构和商用无序结构的触头阳极在闭合回跳电弧作用下熔化温度分布、熔池喷溅形貌和接触区域金属凝固过程,通过模拟熔焊实验平台进行了熔焊力验证。结果表明,通过调节三维互穿有序W骨架结构,能够有效抑制熔池扩散和液态金属喷溅,并降低熔焊力,从而提高Cu-W复合材料的抗熔焊性能。

关键词：三维互穿结构 Cu-W复合材料熔化喷溅熔池凝固熔焊力

基于反向传播神经网络和遗传算法的新鲜Halloumi奶酪生产工艺优化

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食品与发酵工业 2024年第1期50卷 133-140,I0004-I0006页

作者：孙嘉郑远荣刘振民张娟徐杏敏贾向飞乳业生物技术国家重点实验室上海乳业生物工程技术研究中心光明乳业股份有限公司乳业研究院上海200436 上海大学生命科学学院上海201899

为提升Halloumi奶酪品质,采用反向传播神经网络和遗传算法优化Halloumi奶酪生产过程的多工艺参数。选取CaCl_(2)添加量、热烫温度和压榨压强为优化变量,以成品奶酪得率和感官评分为优化目标,分别建立了2个神经网络模型,模型精度分别达到... 详细信息

为提升Halloumi奶酪品质,采用反向传播神经网络和遗传算法优化Halloumi奶酪生产过程的多工艺参数。选取CaCl_(2)添加量、热烫温度和压榨压强为优化变量,以成品奶酪得率和感官评分为优化目标,分别建立了2个神经网络模型,模型精度分别达到了98.936%和98.255%。之后,通过遗传算法进行寻优,结果表明,在得率≥10%以及感官评分≥85的前提下,以奶酪得率为目标的最优生产工艺条件:CaCl_(2)添加量0.0144%、热烫温度83.5℃、压榨压强5.12 kPa,该条件下最高得率为12.01%。以感官品质为目标的最优生产工艺条件:CaCl_(2)添加量0.0171%、热烫温度83.7℃、压榨压强10.38 kPa,该条件下最高感官评分为94.5。该方法能够有效实现Halloumi奶酪生产工艺的快速优化,为促进Halloumi奶酪工业化提供理论基础。

关键词：新鲜奶酪 Halloumi奶酪神经网络遗传算法工艺优化

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屎肠球菌ID4产生的细菌素及作用机制研究

食品与发酵工业 2024年

作者：高雅茹张灏黄晓宇赵晨冰王晶吴正钧江南大学食品学院光明乳业股份有限公司乳业研究院上海乳业生物工程技术研究中心乳业生物技术国家重点实验室

从健康志愿者口腔中分离到一株产新型细菌素的屎肠球菌（Enterococcus faecium）ID4（CGMCC 28567），采用硫酸铵沉淀和Sephadex G-25柱层析获得经过部分纯化的细菌素粗品。经Tricine-SDS-PAGE电泳和生物自显影测定表明，ID4细菌素分子... 详细信息

从健康志愿者口腔中分离到一株产新型细菌素的屎肠球菌（Enterococcus faecium）ID4（CGMCC 28567），采用硫酸铵沉淀和Sephadex G-25柱层析获得经过部分纯化的细菌素粗品。经Tricine-SDS-PAGE电泳和生物自显影测定表明，ID4细菌素分子质量约为6.5 kDa。该细菌素的抑菌活性在121 ℃下保持15 min无显著变化，具有良好的热稳定性；在pH 2～6下保持稳定。该细菌素对多种蛋白酶敏感，抑菌谱较窄，对空腔诺卡氏菌（Nocardia coeliaca）和缓症链球菌（Streptococcus mitis）等链球菌具有显著的杀菌作用。其作用机制为将细胞膜穿孔受损，致使内容物泄露。ID4细菌素在血平板上无溶血活性，在低浓度时对Caco-2细胞的活力无显著性影响。因此，屎肠球菌ID4产生的细菌素具有治疗口腔细菌感染的潜力。

关键词：屎肠球菌细菌素口腔感染抗菌活性杀菌机制

加替沙星眼用凝胶不同点眼频次兔眼组织药代动力学比较

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中华实验眼科杂志 2024年第7期42卷 621-628页

作者：王小桐赵欣祖薇沈旭陈世超杨强沈阳兴齐眼药股份有限公司沈阳110164

目的建立一种测定兔眼组织中加替沙星浓度的方法,并比较加替沙星眼用凝胶兔眼单次和多次点眼后在眼组织及血浆中的药代动力学特征。方法取94只健康新西兰兔。任意选取10只新西兰兔不给予任何药物用于空白组织获取,将剩余84只按照随机数... 详细信息

目的建立一种测定兔眼组织中加替沙星浓度的方法,并比较加替沙星眼用凝胶兔眼单次和多次点眼后在眼组织及血浆中的药代动力学特征。方法取94只健康新西兰兔。任意选取10只新西兰兔不给予任何药物用于空白组织获取,将剩余84只按照随机数字表法随机分成单次给药组36只和多次给药组48只,雌雄各半,均取左眼为实验眼。单次给药组左眼给予1滴加替沙星眼用凝胶,分别于点眼后0.5、1、3、5、7、10 h收集泪液后进行心脏取血并处死,分别取房水、结膜、角膜、巩膜、虹膜-睫状体、晶状体、玻璃体、视网膜和脉络膜;多次给药组左眼每次给予1滴加替沙星眼用凝胶,每天3次,分别于连续给药第4和第6天首次给药后0.5 h,第7天首次给药后0.5、1、3、5、7、10 h进行心脏取血和眼组织收集。采用甲醇沉淀蛋白法预处理各样本,采用高效液相色谱串联质谱法测定并计算实验兔血浆及眼组织中加替沙星的达峰浓度(C_(max))、达峰时间(T_(max))、曲线下面积(AUC)等药代动力学参数,流动相采用甲醇-0.1%乙酸水溶液(体积比=70∶30),采用正离子多反应检测模式,以环丙沙星为内标物,并参照《中国药典》(2020年版)9012生物样品定量分析方法验证指导原则对方法的选择性、标准曲线和定量下限、准确度和精密度、提取回收率和基质效应、稳定性进行验证。结合加替沙星对眼部常见感染菌的最小抑菌浓度(MIC_(90)),计算各组织和血浆C_(max)/MIC_(90)和AUC/MIC_(90)值。结果加替沙星在各眼组织和血浆中线性关系良好;角膜组织中的日间准确度为-1.5%~6.0%,日间精密度≤15%;角膜组织中的提取回收率为92.0%~94.8%,经内标归一化计算得到的低、中、高浓度的基质效应精密度均不大于3.3%,单次给药后加替沙星在眼前节和后节组织均有较高的药物浓度分布,AUC 0-t从高到低分别为泪液、角膜、结膜、虹膜-睫状体、巩膜、房水、脉络膜、视网膜、晶状体和玻璃体,C_(max)分别为94.90μg/g、7.34μg/g、3.65μg/g、1.81μg/g、1.75μg/g、1.31μg/ml、0.86μg/g、0.53μg/g、0.13μg/g、0.07μg/ml,除晶状体、脉络膜和玻璃体液中的T_(max)为0.5 h,其余各组织T_(max)均为1 h。多次给药第4、6、7天的0.5 h各眼部组组织中加替沙星浓度比较,差异无统计学意义(P>0.05),且角膜、结膜和巩膜中AUC_(0-t)约为单次给药的2.04、2.12和2.32倍。单、多次给药后进入体循环的加替沙星浓度均低于25.00 ng/ml。对于金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌,加替沙星眼用凝胶连续用药后在眼前节结膜、角膜、巩膜、虹膜-睫状体、房水和脉络膜中的药代动力学/药效学均可满足C_(max)/MIC_(90)≥10且AUC/MIC_(90)≥30。结论成功构建快速灵敏的眼组织加替沙星浓度测量方法。加替沙星眼用凝胶以每天3次点眼连续用药3 d后眼组织可达到稳态浓度,且比单次给药在眼组织浓度升高。局部使用加替沙星眼用凝胶可实现眼部结膜、角膜、巩膜、虹膜-睫状体常见感染细菌的有效治疗。

关键词：加替沙星眼用凝胶高效液相色谱串联质谱法兔药代动力学

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基于DEA-EWM-TOPSIS算法的瓦楞纸箱配纸及楞型选择

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中国造纸 2024年第2期43卷 148-157页

作者：陈南宁刘争号肖颖喆谢勇光明乳业股份有限公司乳业研究院上海乳业生物工程技术研究中心乳业生物技术国家重点实验室上海200040 湖南工业大学湖南株洲412000

对瓦楞纸箱的面纸、芯纸、里纸和楞型进行组合评价,提供科学的纸箱选配依据,解决不合理选配纸箱问题。本课题提出了一个多准则决策模型,采用交叉效率DEA-EWM-TOPSIS组合模型,对瓦楞纸箱进行配纸及楞型方案选择,并开发了相应的纸箱选择软... 详细信息

对瓦楞纸箱的面纸、芯纸、里纸和楞型进行组合评价,提供科学的纸箱选配依据,解决不合理选配纸箱问题。本课题提出了一个多准则决策模型,采用交叉效率DEA-EWM-TOPSIS组合模型,对瓦楞纸箱进行配纸及楞型方案选择,并开发了相应的纸箱选择软件,帮助决策者选出性能和成本达到最优平衡的纸箱。以内装物质量为2 kg、综合尺寸为460 mm的0201型快递纸箱为例,依据瓦楞纸箱的评价指标数据,通过模型计算进行排序,选出最佳的纸箱方案。本课题将多变量因素耦合后,再进行整体优化,为瓦楞纸箱的选择决策提供了一种有效、便捷的方法。

关键词：多准则决策瓦楞纸箱方案选择评价模型

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