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SH-SY5Y细胞中EZH2调控GFRα1启动子DNA甲基化的机制研究

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中华小儿外科杂志 2024年第4期45卷 347-353页

作者：赵凡周崇高彭琨夏仁鹏马体栋许光邹婵娟李碧香湖南省儿童医院新生儿外科长沙410007

目的探讨SH-SY5Y细胞中果蝇zeste基因增强子同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)调控胶质细胞源性神经营养因子受体(glial cell linederived neurotrophic factor receptor,GFR)α1启动子DNA甲基化的分子机制。方法SH-SY5Y细胞中EZH2及DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase,DNMT)3B过表达及干扰后,采用实时定量聚合酶链反应(real time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)及蛋白质印迹法检测EZH2、DNMT3B、GFRα1表达水平,染色质免疫共沉淀qPCR检测转染各组DNMT3B启动子区EZH2结合水平及组蛋白H3第27位赖氨酸(H3K27)甲基化水平,亚硫酸氢盐测序检测转染各组GFRα1启动子DNA甲基化的程度。采用独立样本t检验比较两组间差异;多组数据的组内比较使用one-way ANOVA分析,并使用LSD-t检验进行两两比较。结果qRT-PCR及蛋白质印迹法显示,EZH2过表达组EZH2的mRNA及蛋白相对表达量高于过表达对照组,EZH2干扰组EZH2的mRNA及蛋白相对表达量低于干扰对照组(均P<0.05);DNMT3B过表达组DNMT3B的mRNA及蛋白的相对表达量高于过表达对照组;DNMT3B干扰组DNMT3B的mRNA及蛋白的相对表达量低于干扰对照组(均P<0.05)。染色质免疫共沉淀qPCR显示,EZH2过表达组DNMT3B启动子区EZH2结合水平为2.25±0.15,高于过表达对照组的1.00±0.05(t=-12.82,P=0.006);EZH2过表达组DNMT3B启动子区H3K27甲基化水平为2.47±0.44,高于过表达对照组的1.01±0.09(t=-6.17,P=0.025)。EZH2干扰组DNMT3B启动子区EZH2结合水平为0.57±0.08,低于干扰对照组的1.00±0.06(t=5.80,P=0.029);EZH2干扰组DNMT3B启动子区H3K27甲基化水平为0.31±0.09,低于干扰对照组的1.08±0.17(t=12.24,P=0.007)。qRT-PCR及蛋白质印迹法显示,EZH2过表达组DNMT3B的mRNA相对表达水平为0.58±0.09,低于过表达对照组的1.01±0.13(t=17.75,P=0.003);EZH2过表达组DNMT3B的蛋白质相对表达水平为0.32±0.06,低于过表达对照组的0.54±0.05(t=23.64,P=0.002)。EZH2干扰组DNMT3B的mRNA相对表达水平为1.79±0.05,高于干扰对照组的1.01±0.1(t=-12.00,P=0.007);EZH2干扰组DNMT3B的蛋白质相对表达水平为0.85±0.08,高于干扰对照组的0.51±0.07(t=-18.78,P=0.003)。亚硫酸氢盐测序结果显示,EZH2过表达组GFRα1启动子区DNA甲基化水平为0.28±0.03,低于过表达对照组的0.52±0.01(t=8.93,P=0.012);EZH2干扰组GFRα1启动子区DNA甲基化水平为0.79±0.02,高于干扰对照组的0.52±0.01(t=-44.45,P=0.001)。qRT-PCR结果显示,EZH2过表达组GFRα1 mRNA相对表达量为1.87±0.05,高于过表达对照组的1.01±0.14(t=-10.04,P=0.001);EZH2过表达+DNMT3B过表达组GFRα1 mRNA相对表达量为0.73±0.04,低于过表达对照组1.01±0.14(t=3.27,P=0.031);EZH2过表达+DNMT3B过表达组GFRα1 mRNA相对表达水平为0.73±0.04,低于EZH2过表达组的1.87±0.05(t=30.00,P=0.001)。蛋白质印迹法显示,EZH2过表达组GFRα1蛋白相对表达量为0.89±0.07,高于过表达对照组的0.59±0.03(t=-7.09,P=0.002);EZH2过表达+DNMT3B过表达组GFRα1蛋白相对表达量为0.48±0.03,低于过表达对照组的0.59±0.03(t=3.51,P=0.025);EZH2过表达+DNMT3B过表达组GFRα1蛋白相对表达水平为0.48±0.03,低于EZH2过表达组的0.89±0.07(t=8.84,P=0.001)。qRT-PCR结果显示,EZH2干扰组GFRα1 mRNA相对表达量为0.57±0.13,低于干扰对照组的1.03±0.13(t=4.29,P=0.013);EZH2干扰+DNMT3B干扰组GFRα1

关键词：先天性巨结肠 DNA甲基化胶质细胞源性神经营养因子

胆道闭锁Kasai术后迟发性胆漏合并肝外胆汁湖的诊疗分析

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中华小儿外科杂志 2024年第4期45卷 309-313页

作者：吴晓霞刘文跃张晖孙雪任红霞山西省儿童医院新生儿外科太原030013

目的探讨胆道闭锁Kasai术后迟发性胆漏合并肝外胆汁湖的临床特点及诊治经验。方法回顾性分析2005年1月至2021年4月山西省儿童医院收治的4例胆道闭锁Kasai术后迟发性胆漏合并肝外胆汁湖患儿的临床资料,其中男2例,女2例;行Kasai手术的中... 详细信息

目的探讨胆道闭锁Kasai术后迟发性胆漏合并肝外胆汁湖的临床特点及诊治经验。方法回顾性分析2005年1月至2021年4月山西省儿童医院收治的4例胆道闭锁Kasai术后迟发性胆漏合并肝外胆汁湖患儿的临床资料,其中男2例,女2例;行Kasai手术的中位年龄为44 d,范围在37~84 d;比较患儿胆汁湖形成前后血液白细胞计数、丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶、γ-谷氨酰转移酶、总胆红素、直接胆红素浓度,总结其临床特点和诊疗方法并随访。结果4例患儿入院时白细胞计数、丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶、γ-谷氨酰转移酶较胆汁湖形成前均有不同程度升高,但总胆红素、直接胆红素均下降。4例患儿予以积极抗感染、经皮肝外囊肿引流术(percutaneous transcystic drainage,PTD)治疗。其中3例采取超声引导下PTD术,3例患儿中2例引流4~5周后拔除引流管,1例因胆汁性腹膜炎再行腹腔镜下PTD;另1例行开腹PTD,2周后移除引流管。4例患儿均治愈,随访6个月胆漏及胆汁湖均无复发,再行腹腔镜下PTD的1例患儿Kasai术后10个月因胆管炎、肝功能衰竭家属放弃治疗而死亡,其余3例携自体肝持续生存,目前仍在随访中。结论胆道闭锁Kasai术后迟发性胆漏合并肝外胆汁湖是胆道闭锁术后少见并发症,术中精准操作可预防发生,结合彩色多普勒超声等辅助检查可明确诊断,PTD是安全、有效的治疗方法。

关键词：胆道闭锁胆漏胆汁性腹膜炎

胆道闭锁患儿Kasai手术后血清肝纤维化指标对预后的评估价值

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中华肝胆外科杂志 2024年第4期30卷 265-270页

作者：余晨高威王智茹左伟詹江华刘翔安徽省儿童医院新生儿外科合肥230000 天津市儿童医院普外科天津300134

目的探究胆道闭锁患儿Kasai手术后血清肝纤维化指标对预后的评估价值。方法回顾性分析2017年1月至2021年1月在安徽省儿童医院新生儿外科行Kasai手术治疗的53例胆道闭锁患儿的临床资料,其中男性23例,女性30例,手术日龄为(62.91±19.93)d... 详细信息

目的探究胆道闭锁患儿Kasai手术后血清肝纤维化指标对预后的评估价值。方法回顾性分析2017年1月至2021年1月在安徽省儿童医院新生儿外科行Kasai手术治疗的53例胆道闭锁患儿的临床资料,其中男性23例,女性30例,手术日龄为(62.91±19.93)d。根据患儿预后分为两组:自体肝生存时间(NLS)≥2年的患儿纳为预后良好组(n=31);NLS儿纳为预后不良组(n=22)。收集患儿的性别、手术日龄、γ-谷氨酰转肽酶(GGT)、总胆红素(TBil)、直接胆红素(DBil)、肝脏病理纤维化分级、IV型胶原、透明质酸、层粘连蛋白及Ⅲ型前胶原肽(PC-Ⅲ)等临床资料。术后采用门诊复诊、电话、微信的方式随访。Spearman秩次相关检验血清肝纤维化指标与肝脏病理纤维化分级的相关性。利用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清肝纤维化指标对早期预后的预测能力。结果Spearman秩次相关检验发现,Kasai手术时的肝脏病理纤维化分级与透明质酸(r_(s)=0.558,P儿在术后1个月、3个月时的透明质酸[1个月:334.1(164.4,776.0)ng/ml比116.3(70.0,262.1)ng/ml,Z=2.66,P=0.007;3个月:394.6(161.6,800.0)ng/ml比131.9(103.2,189.4)ng/ml,Z=2.39,P=0.016]及IV型胶原[1个月:640.0(568.0,640.0)ng/ml比338.9(234.8,640.0)ng/ml,Z=2.40,P=0.016;3个月:640.0(161.6,800.0)ng/ml比277.2(167.7,495.0)ng/ml,Z=2.39,P=0.015]均增高,差异有统计学意义;预后不良组在术后3个月时的PC-III高于预后良好组[550.0(550.0,550.0)ng/ml比281.0(199.9,548.1)ng/ml],差异有统计学意义(Z=2.73,P=0.005)。术后3个月时的透明质酸预测胆道闭锁患儿Kasai术后预后的ROC曲线下面积为0.724(95%CI:0.586~0.986,P=0.006),最佳截值为215.95 ng/ml,其灵敏度和特异度分别为86.4%和83.9%。结论胆道闭锁患儿Kasai手术后3个月时较高的透明质酸水平提示预后不佳。

关键词：胆道闭锁细胞外基质血清肝纤维化指标自体肝生存

小于胎龄早产儿胆汁淤积症的临床特征及危险因素

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中国当代儿科杂志 2024年第10期26卷 1027-1033页

作者：陈瑜朱雪萍苏州大学附属儿童医院新生儿科江苏苏州215025 徐州市儿童医院新生儿内科江苏徐州221000

目的探讨小于胎龄(small for gestational age infant,SGA)早产儿胆汁淤积症临床特征及其发生的高危因素。方法选取胎龄<37周且在出生24 h内收住苏州大学附属儿童医院新生儿科的SGA早产儿为研究对象,将其分为胆汁淤积症和非胆汁淤积症两... 详细信息

目的探讨小于胎龄(small for gestational age infant,SGA)早产儿胆汁淤积症临床特征及其发生的高危因素。方法选取胎龄儿童医院新生儿科的SGA早产儿为研究对象,将其分为胆汁淤积症和非胆汁淤积症两组,收集并回顾性分析2017年7月—2022年6月的临床数据。结果纳入的553例SGA早产儿中,100例(18.1%)发生胆汁淤积症。不同胎龄和出生体重组别的发生率分别为:超早产儿50.0%,极早产儿46.6%,中期早产儿32.7%,晚期早产儿9.8%;出生体重(birth weight,BW)儿发生胆汁淤积症的独立危险因素(P儿胆汁淤积症的发生率随胎龄和出生体重的降低而升高;SGA早产儿胆汁淤积症的发生受低出生体重、颅内出血、有创通气及氨基酸、脂肪乳累积量等多种危险因素综合影响,需采取综合治疗措施减少其发生。

关键词：胆汁淤积症临床特征危险因素小于胎龄儿早产儿

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T型肠造口术治疗新生儿暂时性短肠综合征

中华小儿外科杂志 2024年第5期45卷 419-424页

作者：颜景灏周玲李水学北京儿童医院新疆医院新疆维吾尔自治区儿童医院新生儿外科乌鲁木齐830000

目的探讨T型肠造口术在新生儿暂时性短肠综合征患者中的治疗效果。方法回顾性分析2008年12月至2021年12月在北京儿童医院新疆医院接受手术治疗的26例新生儿暂时性短肠综合征患儿的临床资料,其中男16例,女10例,手术时日龄为(9.1±2.3)d;... 详细信息

目的探讨T型肠造口术在新生儿暂时性短肠综合征患者中的治疗效果。方法回顾性分析2008年12月至2021年12月在北京儿童医院新疆医院接受手术治疗的26例新生儿暂时性短肠综合征患儿的临床资料,其中男16例,女10例,手术时日龄为(9.1±2.3)d;根据手术方式不同分为T瘘手术组12例,即Ⅰ期肠造口术(单腔或T型)+Ⅱ期单腔肠造口改T型造口术+Ⅲ期造口还纳术,传统手术组14例,即Ⅰ期肠造口术(单口或双口)+Ⅱ期肠切除肠吻合。对比分析两组患儿造口还纳时间、造口还纳后排便时间、手术并发症和营养状况等指标的差异。结果T瘘手术组患儿手术日龄[(7.5±2.7)d比(10.5±2.2)d]、手术时体质量[(1253±442)g比(1882±190)g]、早产周龄[(28.8±2.3)周比(31.2±1.7)周]、可利用肠管长度[(42.5±9.0)cm比(52.5±7.3)cm]均短于传统手术组患儿,差异均有统计学意义(P儿等待造口还纳时间[(12.0±2.8)周比(14.7±2.1)周]、造口还纳后排便时间[(3.8±2.4)d比(7.7±1.1)d]均短于传统手术组,差异均有统计学意义(P儿T瘘手术前与造口还纳术前比较,造口还纳术前与造口还纳后6个月比较,前白蛋白和视黄醇结合蛋白有提高(P儿封堵造口期间无严重并发症发生,封堵效果满意。结论T型肠造口术可以显著改善造口还纳手术等待时间和造口还纳后肠功能恢复时间,减少非计划再手术的发生。

关键词：短肠综合征肠造口术新生儿

支气管肺发育不良3种诊断标准对早产儿预后的预测价值比较

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中华儿科杂志 2024年第1期62卷 36-42页

作者：王馨郭静吴彦彦鲁阳珂刘大鹏李明超李蕊王颍源康文清郑州大学附属儿童医院新生儿重症监护室、郑州市新生儿疾病研究重点实验室郑州450018

目的比较支气管肺发育不良(BPD)3种诊断标准对出生胎龄<32周BPD早产儿预后的预测价值。方法采用回顾性队列研究,收集2019年1月至2021年9月郑州大学附属儿童医院新生儿科收治的285例出生胎龄<32周BPD早产儿的临床资料,出院后定期随访。... 详细信息

目的比较支气管肺发育不良(BPD)3种诊断标准对出生胎龄儿预后的预测价值。方法采用回顾性队列研究,收集2019年1月至2021年9月郑州大学附属儿童医院新生儿科收治的285例出生胎龄儿的临床资料,出院后定期随访。以校正胎龄36周至校正年龄18月龄发生死亡或呼吸系统不良预后定义为主要复合不良结局,发生死亡或神经系统不良预后定义为次要复合不良结局,分别按照主要或次要复合不良结局分为预后不良组和预后正常组。分别应用2001年美国国立儿童健康与人类发育研究所(NICHD)标准(简称2001 NICHD标准)、2018年NICHD修订标准(简称2018 NICHD标准)和2019年新生儿研究网(NRN)标准(简称2019 NRN标准)对BPD早产儿进行诊断和分级。采用χ^(2)检验、Logistic回归分析、受试者工作特征(ROC)曲线及Delong法分析3种诊断标准对预后的预测价值。结果285例BPD早产儿出生胎龄为29.4(28.1,30.6)周,出生体重为1230(1000,1465)g,其中男167例(58.6%)。285例BPD早产儿完成随访,发生主要复合不良结局124例(43.5%),次要复合不良结局40例(14.0%)。多因素Logistic回归分析显示2001 NICHD标准的重度BPD,2018 NICHD标准的Ⅱ、Ⅲ级BPD和2019 NRN标准的2、3级BPD均是主要复合不良结局发生的危险因素(均P儿主要及次要复合不良结局具有较好且相似的预测能力,预测效能均优于2001 NICHD标准。

关键词：婴儿,早产支气管肺发育不良预后预测

体外膜肺氧合在先天性膈疝治疗中的应用及进展

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中华小儿外科杂志 2024年第4期45卷 367-372页

作者：孟楚怡马立霜首都儿科研究所附属儿童医院新生儿外科北京100020

先天性膈疝(congenital diaphragmatic hernia,CDH)是新生儿使用体外膜肺氧合(extracorporeal membrane oxygenation,ECMO)的最常见适应证,CDH患儿生后因严重的肺发育不良和肺动脉高压出现难治性呼吸循环衰竭,可通过ECMO维持呼吸循环功... 详细信息

先天性膈疝(congenital diaphragmatic hernia,CDH)是新生儿使用体外膜肺氧合(extracorporeal membrane oxygenation,ECMO)的最常见适应证,CDH患儿生后因严重的肺发育不良和肺动脉高压出现难治性呼吸循环衰竭,可通过ECMO维持呼吸循环功能保障患儿生命。尽管近年来已有大量回顾性研究提出使用ECMO的指征及经验,但是其生存益处与弊端仍存在争议,ECMO对CDH患儿生存率有一定的改善但引发的远期出血并发症风险较大,且缺乏多中心随机对照研究。随着CDH呼吸机支持治疗水平的提高、肺动脉高压靶向药物联合治疗的应用,各医疗中心对ECMO的使用也越来越谨慎。目前ECMO多数情况下在部分重症CDH患儿中应用,且各中心实践标准并不完全一致。现总结目前ECMO在CDH应用的临床指征、插管方式、手术修补时机及禁忌证、预后等相关标准及争议点,对ECMO的相关研究进展进行综述。

关键词：疝,横膈,先天性体外膜肺氧合适应证

先天性巨结肠竞争内源性RNA网络构建和分析

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中华小儿外科杂志 2024年第9期45卷 819-826页

作者：刘丰丽张建军曾战东黄广锋马同胜徐州医科大学附属徐州儿童医院新生儿外科徐州221000

目的:基于在线数据库,利用生物信息学的方法构建先天性巨结肠(Hirschsprung disease,HSCR)竞争性内源RNA(competitive endogenous RNA,ceRNA)调控网络。方法:从GEO数据库中下载HSCR长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)-seq、微小RNA(microRNA,miRNA)-seq和mRNA-seq,采用limma算法筛选出差异表达lncRNAs、miRNAs和mRNAs。利用R包cluster Profile对差异基因进行GO分析和KEGG分析。利用生物信息学预测网站预测靶点关系,采用Cytoscape v3.5.1软件构建可视化ceRNA网络。利用实时荧光定量聚合酶链反应,免疫组织化学及免疫荧光进行临床样本验证。采用t检验进行统计学分析。结果:从HSCR样本中筛选出219个上调和116个下调的lncRNAs;61个上调和21个下调的miRNAs;1216个上调的和1376个下调的mRNAs;差异基因主要富集在神经系统形成、免疫反应、凋亡调控等GO功能;涉及PPAR信号通路、Hippo信号通路、cAMP信号通路、Th1和Th2细胞分化、MAPK信号通路、Wnt信号通路等信号通路。在构建的ceRNA网络中,共筛选出37个核心lncRNAs、13个靶向miRNAs及22个具有靶向关系的mRNAs。miR-149-3p呈现出与ENST00000568239.1和X连锁凋亡的抑制剂(X-linked inhibitor of apoptosis,XIAP)相反的表达趋势。结论:构建了参与HSCR发生发展的ceRNA调控网络,为HSCR分子机制研究提供新的靶标和依据。

关键词：先天性巨结肠生物信息学竞争性内源RNA

先天性巨结肠lncRNA-mRNA共表达网络构建和分析

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中华小儿外科杂志 2024年第8期45卷 711-718页

作者：张建军马同胜黄广锋袁海彬刘丰丽徐州医科大学附属徐州儿童医院新生儿外科徐州221000

目的通过生物信息学的方法构建先天性巨结肠(Hirschsprung disease,HSCR)调控网络。方法RNA测序检测HSCR组织和正常结肠组织中的长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)和mRNA表达谱。结合GSE96854数据库的mRNA表达谱数据,构建lncRN... 详细信息

目的通过生物信息学的方法构建先天性巨结肠(Hirschsprung disease,HSCR)调控网络。方法RNA测序检测HSCR组织和正常结肠组织中的长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)和mRNA表达谱。结合GSE96854数据库的mRNA表达谱数据,构建lncRNA-mRNA共表达网络。各选择3个lncRNA和mRNA,采用QPCR验证RNA测序结果。结果RNA测序共筛选出224个lncRNA,其中上调和下调的lncRNA分别为108和116个;785个差异表达的基因(differentially expressed genes,DEGs),其中上调和下调的DEGs分别为82个和703个。DEGs主要富集在cGMP-PKG、NF-κB信号通路等KEGG通路上。在GSE96854数据中,显著上调和显著下调的DEGs分别为1216个和1376个。两个数据集中后共有的DEGs有178个,其中显著下调的DEGs有175个,而显著上调的DEGs仅有3个。蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)结果表明,SNAP25、SYP、ATP2B3和ZAP70位于网络中心的基因,与诸多基因尤其是SNAP25有互作关系。共筛选出146对lncRNA-mRNA调控网络。筛选出AC074286.1-ADRA2A-cGMP-PKG和DUX4L9-ATP2B3-NF-κB信号通路的lncRNA-mRNA通路调控网络。实时定量基因扩增荧光检测结果表明ADRA2A、ATP2B3、TNFSF14、AC074286.1、DUX4L9和REXO1L1P在HSCR中显著下调,且与RNA测序结果一致。结论参与炎症反应、细胞凋亡和神经相关的lncRNA和mRNA分子标志物在HSCR中发挥着重要的作用。

关键词：先天性巨结肠 RNA测序生物信息学共表达网络