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牛奶中喹诺酮类药物残留的AlphaLISA检测方法的研究

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食品工业科技 2024年第14期45卷 264-270页

作者：马立才邢维维于莹贾良曦秦誉金兴丁亚芳北京维德维康生物技术有限公司北京100095

本文旨在建立一种可检测牛奶中喹诺酮类药物(Quinolones,QNS)残留的均相光激化学发光免疫分析方法(Amplifiedluminescent proximity homogeneous assay linkedimmune sorbent assay,AlphaLISA)。采用EDC/NHS活泼酯法在诺氟沙星分子连接6-氨基己酸作为间隔臂,制备生物素修饰诺氟沙星半抗原(Biotin-6AS-NOR),并在受体微球上偶联QNS单克隆抗体,Biotin-6AS-NOR可与牛奶样品中的QNS竞争结合喹诺酮抗体;通过优化受体微球的QNS抗体偶联量,Biotin-6AS-NOR及供/受体微球的用量等参数,以及牛奶样品的稀释方案,建立了牛奶中QNS残留的AlphaLISA检测方法。采用1:5牛奶样品稀释方案,所建立牛奶中QNS残留的AlphaLISA检测方法的检出限和定量限分别为0.19 ng/mL和0.46 ng/mL,回收率在85.97%~110.11%之间,日内和日间变异系数均小于10%,与诺氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星、培氟沙星、达氟沙星和洛美沙星的交叉反应率均高于70%。本研究所建立AlphaLISA检测方法具有灵敏度和准确度高、重复性好等优点,且在整个检测过程中不需要繁琐洗涤操作,具有较高的应用和推广价值。

关键词：喹诺酮类半抗原生物素 AlphaLISA

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灭活植物乳杆菌及其代谢物对克氏原螯虾生长性能和肠道健康的影响

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饲料研究 2024年第7期47卷 49-55页

作者：石英庞纪彩田娟刘晶晶高欣宋晓青山东畜牧兽医职业学院山东潍坊261061 中国水产科学研究院长江水产研究所湖北武汉430223 江西好实沃生物技术有限公司江西宜春336000

试验旨在研究灭活植物乳杆菌及其代谢物(LPM)对克氏原螯虾生长性能和肠道健康的影响。试验选择初重为(8.16±0.23) g的克氏原螯虾162尾随机分为3组,每组3个重复,每个重复18尾虾。配制3组分别含0 (对照组)、300 (LPM-300组)、600 mg/kg (... 详细信息

试验旨在研究灭活植物乳杆菌及其代谢物(LPM)对克氏原螯虾生长性能和肠道健康的影响。试验选择初重为(8.16±0.23) g的克氏原螯虾162尾随机分为3组,每组3个重复,每个重复18尾虾。配制3组分别含0 (对照组)、300 (LPM-300组)、600 mg/kg (LPM-600组)的LPM的配合饲料。配制两个试验组饲料时,在对照组饲料配方基础上用3%面粉代替3%的花生粕,使饲料蛋白质水平降低1.5%。试验期42 d。结果显示:饲料中添加600 mg/kg LPM,克氏原螯虾的增重率、特定生长率、蛋白质效率和蛋白质沉积率显著高于对照组(P<0.05),饲料系数显著低于对照组(P<0.05)。饲料中添加600 mg/kg LPM,全虾粗蛋白、粗脂肪和粗灰分含量显著高于对照组(P<0.05)。饲料中添加300、600 mg/kg LPM,肌肉粗脂肪含量显著高于对照组(P<0.05)。与对照组相比,饲料中添加LPM可显著提高克氏原螯虾血清总蛋白(TP)含量(P<0.05),降低谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)活性(P<0.05);饲料中添加600 mg/kg LPM可显著提高克氏原螯虾血清白蛋白(ALB)含量和碱性磷酸酶(AKP)活性(P<0.05)。添加600 mg/kg LPM可显著提高肝胰脏和肠道蛋白酶活性(P<0.05)。添加600 mg/kg LPM可显著降低克氏原螯虾绒毛宽度(P<0.05)。对照组和试验组的肝胰脏细胞结构完整,无损伤或病变,LPM-300组的B细胞、F细胞和R细胞数量明显多于对照组。研究表明,饲料中添加600 mg/kg LPM有利于改善克氏原螯虾肠道组织结构,提高非特异性免疫能力,促进了饲料蛋白质的利用。

关键词：克氏原螯虾灭活植物乳杆菌及其代谢物生长性能肠道健康

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反义寡核苷酸药物AD00510-AS在小鼠、大鼠、猴、人肝S9和血浆中的代谢产物研究

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中国新药杂志 2024年第2期33卷 151-158页

作者：柳庆龙纪海霞李伦张云祁佳琦刘添浩梁柳艺陶桂勇周绍联益诺思生物技术南通有限公司南通226133 上海益诺思生物技术股份有限公司上海201203 上海舶望制药有限公司上海201203

目的:建立反义寡核酸药物AD00510-AS的LC-UV-Q-TOF方法,并探索小核酸药物AD00510-AS在体外肝S9和血浆中的代谢产物和代谢途径.方法:基于固相萃取的方法对孵育24h后的肝S9和血浆样品进行处理,采用SCIEX OS进行数据采集,采用Molecule Prof... 详细信息

目的:建立反义寡核酸药物AD00510-AS的LC-UV-Q-TOF方法,并探索小核酸药物AD00510-AS在体外肝S9和血浆中的代谢产物和代谢途径.方法:基于固相萃取的方法对孵育24h后的肝S9和血浆样品进行处理,采用SCIEX OS进行数据采集,采用Molecule ProfilerTM软件分析空白样品和给药后孵育24h样品的提取离子流图(XIC)的差异,得到可能的代谢产物,并推测代谢途径.结果:AD00510-AS分别与小鼠、大鼠、猴、人肝S9孵育24h后,共检测到3个代谢产物(M1,M4和M5),母药的相对丰度分别为73.9%,87.1%,78.4%和81.3%;AD00510-AS分别与小鼠、大鼠、猴、人血浆孵育24h后,共检测到4个代谢产物(M2,M3,M4和M5),母药的相对丰度分别为69.1%,94.5%,67.8%和68.1%;通过MS及MS/MS的测定,鉴定的代谢产物如下:M1:3'末端丢失9个核苷酸代谢产物(MW=4544);M2:3'末端丢失2个核苷酸代谢产物(MW=6857);M3:3'末端丢失1个核苷酸代谢产物(MW=7232);M4:双脱硫代谢产物(MW=7559);M5:脱硫代谢产物(MW=7575).结论:采用确认的LC-UV-Q-TOF方法可以检测到AD00510-AS及其5个代谢产物,AD00510-AS在体外肝S9和血浆中主要通过降解(丢失核苷酸)和脱硫进行代谢.

关键词：反义寡核苷酸肝S9 血浆代谢产物鉴定固相萃取

同位素稀释液相色谱-串联质谱法测定血清皮质醇候选参考方法的建立及评价

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中华检验医学杂志 2024年第8期47卷 927-935页

作者：黄昌发林丹付晓雅翁旭琦孙雅玲李伟广州万孚生物技术股份有限公司广州510663

目的建立同位素稀释液相色谱-串联质谱法(ID-LC/MS/MS)测定血清中皮质醇浓度的候选参考方法。方法方法学建立。将样本与皮质醇内标混匀后加入碳酸钠溶液碱化处理, 正己烷/乙酸乙酯进行液液萃取, 流动相采用甲醇水溶液等度洗脱, 质谱采... 详细信息

目的建立同位素稀释液相色谱-串联质谱法(ID-LC/MS/MS)测定血清中皮质醇浓度的候选参考方法。方法方法学建立。将样本与皮质醇内标混匀后加入碳酸钠溶液碱化处理, 正己烷/乙酸乙酯进行液液萃取, 流动相采用甲醇水溶液等度洗脱, 质谱采用电喷雾电离源正离子模式(ESI+)及多反应监测(MRM)分析方法, 标准溶液及内标的配制、样本与内标的混合均采用重量法进行控制, 括号法计算皮质醇浓度。参照美国临床实验室标准化协会C62-A、C50-A及国内专家共识文件《液相色谱-质谱临床应用建议》《液相色谱串联质谱临床检测方法的开发与验证》等对方法正确度、精密度、特异性、线性、检测限和定量下限等性能进行系统评价。数据经Excel2019进行处理, 最小二乘法进行线性回归分析。结果方法准确精密, 测定有证标准物质ERM-DA192、ERM-DA193以及2021—2023年RELA样本的相对偏倚均好线性, 方法检测限和定量下限分别为0.5和1.0 nmol/L。经溯源后的皮质醇测定试剂盒(化学发光免疫分析法)与该候选参考方法同时测定46例临床血清样本的相关性良好。结论建立了一种灵敏、准确且操作简便的血清皮质醇浓度测定候选参考方法, 可为临床常规测定方法的量值溯源及正确度评价提供参考。

关键词：氢化可的松同位素稀释液相色谱-串联质谱候选参考方法

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高风险人群流感疫苗接种现况和免疫策略分析

中华流行病学杂志 2024年第4期45卷 615-620页

作者：随海田高汇迪赵若颖郭昱苏锦锋舒祥中国生物技术股份有限公司北京100024

流感是由流感病毒引起的一种呼吸道传染性疾病,严重疾病负担常见于高风险人群。接种流感疫苗是预防流感及其并发症的有效方法,尤其是对高风险人群。虽然已有部分国家将流感疫苗纳入国家免疫规划,但全球范围内高风险人群流感疫苗接种率... 详细信息

流感是由流感病毒引起的一种呼吸道传染性疾病,严重疾病负担常见于高风险人群。接种流感疫苗是预防流感及其并发症的有效方法,尤其是对高风险人群。虽然已有部分国家将流感疫苗纳入国家免疫规划,但全球范围内高风险人群流感疫苗接种率仍然较低。目前,流感疫苗在我国仍属于自愿自费接种的非免疫规划疫苗,且全国各地流感疫苗免疫策略差异化明显,接种率与发达国家仍有差距。进一步优化我国流感疫苗全人群免疫策略,加强流感疫苗全人群免疫策略的宣传,降低我国流感的疾病负担,是目前迫切需要解决的问题。

关键词：流感临床风险人群免疫策略

罗伊氏粘液乳杆菌K07的生物学特性及其基因分析

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现代食品科技 2024年第4期40卷 73-83页

作者：黄志钰黎旭李幸金庭飞陶纯长刘宗争广东益可维生物技术有限公司广东广州510630

从新疆昭苏县传统发酵乳酪中分离出2株罗伊氏粘液乳杆菌(编号K07、K08),对2株菌的生长和产酸性能、耐酸耐胆盐、模拟胃肠道的耐受、产罗伊氏菌素能力和抗氧化活性进行了评估;此外还测定了2株菌的抑菌性能并对K07菌株进行基因分析。结果... 详细信息

从新疆昭苏县传统发酵乳酪中分离出2株罗伊氏粘液乳杆菌(编号K07、K08),对2株菌的生长和产酸性能、耐酸耐胆盐、模拟胃肠道的耐受、产罗伊氏菌素能力和抗氧化活性进行了评估;此外还测定了2株菌的抑菌性能并对K07菌株进行基因分析。结果表明,2株菌均在培养12 h后进入对数生长末期,发酵终点pH值为4.45。K07对酸、胆盐和模拟胃肠道的耐受及抗氧化能力强于K08。pH值2.50处理4 h,K07存活率为73.27%。0.15%胆盐胁迫下K07菌株OD_(600 nm)上升0.3个单位需5.50 h,模拟胃肠道试验K07的存活率为74.13%。两株菌的无细胞提取物抗氧化活性高于完整细胞,其中K07无细胞提取物对DPPH自由基和羟自由基的清除率为42.39%、15.69%,还原力17.96%。K07产罗伊氏菌素量为183.05 mmol/L显著高于K08,且K07抑菌性能较好,对白色念珠菌和无乳链球菌的抑菌圈直径为22.20 mm、18.26 mm。K07基因组全长1950440 bp,预测蛋白质编码基因2067种,GC含量为38.69%。研究结果显示罗伊氏粘液乳杆菌K07具有良好的益生特性,为后续产业化应用提供理论依据。

关键词：罗伊氏粘液乳杆菌益生特性基因分析

微流数字成像技术在蛋白药物制剂不溶性微粒分析中的应用

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中国医药工业杂志 2024年第1期55卷 36-41页

作者：谢力琦毕宝帅黄懿上海探实生物技术有限公司上海201206

不溶性微粒可以指示注射剂的潜在质量问题和免疫原性风险,是注射剂质量管理中必须评估的质量指标。微流数字成像(MDI)技术是检测不溶性微粒的新方法,相较于不溶性微粒检测“金标准”的光阻法,除了可以提供颗粒的大小和数量信息外,还可... 详细信息

不溶性微粒可以指示注射剂的潜在质量问题和免疫原性风险,是注射剂质量管理中必须评估的质量指标。微流数字成像(MDI)技术是检测不溶性微粒的新方法,相较于不溶性微粒检测“金标准”的光阻法,除了可以提供颗粒的大小和数量信息外,还可以通过高分辨图像获得颗粒种类和形状等特性数据,并且所需样本量少,特别适用于蛋白药物注射剂的质量分析。文章从不溶性微粒的成因和各国药品监管机构和药典对注射剂不溶性微粒质量控制的技术要求出发,综述了MDI技术在蛋白药物处方筛选和工艺研究中的应用进展,以保障蛋白药物制剂的安全性和有效性。

关键词：蛋白药物注射剂不溶性微粒微流数字成像质量控制

毒性病理学及人工智能数字组织图像分析质量控制概述

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中国新药杂志 2024年第5期33卷 441-448页

作者：滕伊洋张亚群李一昊钱庄汪溪洁吕建军中国医药工业研究总院上海201203 上海益诺思生物技术股份有限公司上海200043 益诺思生物技术南通有限公司南通226133 湖北天勤鑫圣生物科技有限公司武汉430207

随着人工智能和机器学习的快速发展,人工智能对全切片图像的诊断几乎可以媲美病理学家,建立人工智能算法需要大量的数字组织图像训练集数据。数字组织图像分析是通过各种算法分析全切片图像,并从其中提取大量复杂的定量数据集。数字组... 详细信息

随着人工智能和机器学习的快速发展,人工智能对全切片图像的诊断几乎可以媲美病理学家,建立人工智能算法需要大量的数字组织图像训练集数据。数字组织图像分析是通过各种算法分析全切片图像,并从其中提取大量复杂的定量数据集。数字组织图像分析的质量控制不仅非常重要,而且是确保建立高质量数据集和AI算法的基础和前提。本文简要概述了全切片图像的质量控制策略、数字组织图像分析的影响因素和质量控制方法、数字组织图像分析结果的质量控制方法、毒性病理学家在数字组织图像分析中的作用、数据解释和报告以及数字组织图像用于毒性病理学诊断及AI的挑战,以期为我国药物非临床安全性评价毒性试验中使用全切片图像进行毒性病理学诊断及建立AI各种算法提供一定参考。

关键词：毒性病理学人工智能数字组织图像分析质量控制全切片图像

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哺乳动物细胞单抗生产的载体策略

中国生物工程杂志 2024年第5期44卷 66-77页

作者：黄超宾申会涛杨立元孟思刘泽高辉中逸安科生物技术股份有限公司研发中心天津300409

抗体药物在生物医药行业所占比重持续增加,抗体高效表达需要在合适的系统中进行,载体在这一过程中尤其重要,可以参与一系列抗体生产步骤:搭配合适的元件来筛选阳性、高表达克隆,选择轻重链的最优表达比例,稳定基因转录,增强翻译效率,对... 详细信息

抗体药物在生物医药行业所占比重持续增加,抗体高效表达需要在合适的系统中进行,载体在这一过程中尤其重要,可以参与一系列抗体生产步骤:搭配合适的元件来筛选阳性、高表达克隆,选择轻重链的最优表达比例,稳定基因转录,增强翻译效率,对抗体进行正确的翻译后修饰等。对哺乳动物细胞表达载体构建所涉及的启动子、增强子、绝缘子、支架/基质附着区、信号肽、多顺反子策略、筛选系统、加尾信号以及用于增强目的基因表达所涉及的遗传工具等研究进展进行讨论,以期全面了解哺乳动物细胞重组抗体表达所涉及关键点,克服与之相关的挑战,进而推动抗体疗法发展。

关键词：单抗启动子增强子绝缘子支架/基质附着区信号肽内部核糖体进入位点 2A肽筛选系统加尾信号遗传工具