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小柴胡汤干预日本血吸虫致肝纤维化的实验研究

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小柴胡汤干预日本血吸虫致肝纤维化的实验研究

作者：卢金江苏省血吸虫病防治研究所

学位级别：硕士

目的:通过细胞实验、动物实验以及血吸虫成虫体外干预实验,探究小柴胡汤及其主要成分对血吸虫致肝纤维化的作用机制,为应用小柴胡汤治疗血吸虫肝纤维化奠定理论基础,为筛选并发现用于血吸虫肝纤维化的新药提供技术支撑。方法:1.小柴胡... 详细信息

目的:通过细胞实验、动物实验以及血吸虫成虫体外干预实验,探究小柴胡汤及其主要成分对血吸虫致肝纤维化的作用机制,为应用小柴胡汤治疗血吸虫肝纤维化奠定理论基础,为筛选并发现用于血吸虫肝纤维化的新药提供技术支撑。方法:1.小柴胡汤及其主要成分对体外培养肝星状细胞的作用体外培养人肝星状细胞系LX-2细胞,在TGF-β1刺激活化后,分别用小柴胡汤、柴胡皂苷A(SSA)、黄芩苷(BC)作用于细胞。通过MTT法和EDU法检测细胞增殖率,采用流式细胞术观察细胞凋亡情况,通过RT-PCR和Western Blot检测纤维化相关分子COL-I、COL-Ⅲ、α-SMA的表达水平。2.小柴胡汤及其主要成分干预日本血吸虫感染小鼠肝纤维化的作用通过人工感染,建立日本血吸虫感染小鼠肝纤维化动物模型,尾蚴感染小鼠6周后,通过灌胃,分别给予小柴胡汤、SSA、BC,干预4周后,剖杀取材;病理切片HE染色和Masson染色观察小鼠肝脏病变,分析虫卵肉芽肿面积和胶原纤维沉积量;流式细胞术检测小鼠脾脏淋巴细胞中CD4T细胞、CD8T细胞和Treg细胞数量;通过ELISA法,检测小鼠血清IL-6、IL-10、TGF-β1和TNF-α等细胞因子的表达量;采用RT-PCR和Western Blot方法,检测小鼠肝脏COL-I、COL-III、α-SMA、TGF-β1的表达量。3.小柴胡汤及其主要成分干预体外培养血吸虫成虫的研究人工感染实验家兔,并于感染6周后收集肠系膜静脉丛成虫,进行体外培养,给予不同浓度小柴胡汤、SSA、BC干预,考察血吸虫成虫的存活率、活动力和产卵数量;通过RT-PCR方法,检测用药后虫体体表水通道蛋白sj AQP m RNA的表达水平,探讨药物作用于虫体体表蛋白进而影响虫体活力的机制。结果:1.小柴胡汤及其主要成分对体外培养肝星状细胞的作用小柴胡汤、SSA、BC可剂量依赖性抑制LX-2细胞的增殖(P血吸虫感染小鼠肝纤维化的作用与血吸虫感染未用药(模型)组相比,经小柴胡汤(0.01 m L/kg·d)、SSA(10mg/kg·d)、BC(250 mg/kg·d)干预4周后,小鼠生存状态较好。剖杀后,取小鼠肝脏和脾脏,肝脏指数分别为8.76±1.42、8.05±1.52、8.37±1.74,与模型组(9.91±2.42)相比,差异无统计学意义(P>0.05);脾脏指数分别为1.67±0.51、1.59±0.43、1.72±0.53,与模型组(2.30±0.76)相比显著下降,差异有统计学意义(P血吸虫成虫生存状态的影响复方小柴胡汤随着浓度增加(0.1%、1%、5%),对体外培养成虫存活率有抑制作用,但无统计学意义(P>0.05);在5%小柴胡汤作用组,观察到对成虫活动力有显著抑制作用(P血吸虫成虫的生存状态和产卵能力具有显著影响。RT-PCR结果显示,与对照组相比,成虫经复方小柴胡汤作用后,sj AQP表达未见显著变化。成虫经SSA作用24 h后sj AQP表达上调,作用48 h后sj AQP表达下调(P研究证实了小柴胡汤及其主要成分可有效干预血吸虫致肝纤维化的进程,其具体的作用机制为:小柴胡汤及其主要成分可抑制肝星状细胞的活化增殖及纤维化相关分子COL-I、COL-Ⅲ、α-SMA的表达,诱导活化的HSC发生凋亡;上调小鼠Treg细胞,抑制血清中IL-6、IL-10、TGF-β1等Th2型细

关键词：小柴胡汤日本血吸虫肝纤维化肝星状细胞

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江西省人体华支睾吸虫感染现状分析

中国血吸虫病防治杂志 2017年第1期29卷 44-47页

作者：兰炜明姜唯声戴坤教杭春琴谢曙英葛军李召军曾小军江西省寄生虫病防治研究所南昌330046

目的了解江西省华支睾吸虫病流行现状和态势。方法按照江西省第3次人体重点寄生虫感染现状调查方案,以生态区为基础,按照经济条件和地理方位进行分层整群抽样,农村地区华支睾吸虫调查与土源性线虫调查一并进行,城镇地区以随机整群抽样... 详细信息

目的了解江西省华支睾吸虫病流行现状和态势。方法按照江西省第3次人体重点寄生虫感染现状调查方案,以生态区为基础,按照经济条件和地理方位进行分层整群抽样,农村地区华支睾吸虫调查与土源性线虫调查一并进行,城镇地区以随机整群抽样法进行调查。共抽取全省32个县92个调查点进行调查,用改良加藤厚涂片法粪检虫卵并计数,抽取部分人群进行健康知识问卷。结果全省共调查23 606人,华支睾吸虫感染者138人,感染率为0.58%,以轻度感染为主,感染者主要集中于信丰县,共124人,其余各地有散在感染者。信丰县调查的851人中,除0~岁组无感染者外,其余各年龄组均有感染者,70~岁组感染率最高(24.00%);男性感染率(20.29%)高于女性感染率(6.25%),差异有统计学意义(P省华支睾吸虫感染除信丰县呈现区域聚集性外,其余呈现散发分布,有必要继续开展全省寄生虫病筛查,同时要对信丰县华支睾吸虫病流行区加强综合性防治。

关键词：华支睾吸虫病感染率现况调查江西省

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血吸虫现症感染诊断方法的研究进展

中国血吸虫病防治杂志 2016年第2期28卷 220-224页

作者：刘茜余传信江苏省血吸虫病防治研究所、卫生部寄生虫病预防与控制技术重点实验室、江苏省寄生虫与媒介控制重点实验室无锡214064

血吸虫病是严重危害人类健康、阻碍流行区社会经济发展的一种重要人兽共患寄生虫病。准确诊断现症感染对于减轻血吸虫感染对人体健康的危害、控制血吸虫病流行具有重要意义。本文对血吸虫现症感染的实验室诊断方法(包括病原学、免疫学... 详细信息

血吸虫病是严重危害人类健康、阻碍流行区社会经济发展的一种重要人兽共患寄生虫病。准确诊断现症感染对于减轻血吸虫感染对人体健康的危害、控制血吸虫病流行具有重要意义。本文对血吸虫现症感染的实验室诊断方法(包括病原学、免疫学及分子生物学技术)的研究进展及应用进行综述,以期为血吸虫病现场防治工作提供借鉴。

关键词：血吸虫病现症感染诊断

曼氏血吸虫中间宿主光滑双脐螺的生物学特性：生殖与生存

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中国血吸虫病防治杂志 2019年第4期31卷 362-367页

作者：王宜安梁幼生曲国立石锋邢云天戴建荣江苏省血吸虫病防治研究所、国家卫生健康委员会寄生虫病预防与控制技术重点实验室、江苏省寄生虫与媒介控制技术重点实验室无锡214064 江苏省镇江市卫生监督所

目的比较光滑双脐螺自体受精和异体受精的繁殖力差异,观察昼夜和光照对产卵的影响,以及成螺对缺水缺食的耐受性,旨在为现场控制该螺提供依据。方法采用实验室条件下培育的光滑双脐螺,分成自体受精组和自然受精组,比较两组受精螺的产卵... 详细信息

目的比较光滑双脐螺自体受精和异体受精的繁殖力差异,观察昼夜和光照对产卵的影响,以及成螺对缺水缺食的耐受性,旨在为现场控制该螺提供依据。方法采用实验室条件下培育的光滑双脐螺,分成自体受精组和自然受精组,比较两组受精螺的产卵能力、所产卵的发育和孵化、幼螺生长发育等状况。将成螺分成全天光照组、全天避光组、日间光照和夜间避光(自然环境状态)组、日间避光和夜间光照组等4种饲养环境,比较各组螺的产卵情况。将光滑双脐螺成螺分别暴露在相对湿度为0、65%、87%和100%的不同环境中,观察其生存情况。采用快速烘干法去除光滑双脐螺成螺软体内水分,观察螺体重分别减轻10%、20%、30%、40%、50%、52%、55%、57%、60%和70%后的存活率。结果在25℃环境条件下,自体受精组和自然受精组螺15 d的产卵数分别为(8.77±16.92)枚/螺和(149.71±142.28)枚/螺,两组间差异有统计学意义(t=0.999 999,P 所产螺卵的孵化率分别为50.1%和78.9%(χ^2=18.18,P 血吸虫病传播具有重要意义。

关键词：光滑双脐螺曼氏血吸虫自体受精异体受精生物学特性

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溴氰菊酯影响中华按蚊代谢变化的研究

溴氰菊酯影响中华按蚊代谢变化的研究

作者：李雅姝江苏省血吸虫病防治研究所

学位级别：硕士

中华按蚊(Anopheles sinensis)是我国分布最为广泛的蚊种之一,是疟疾、丝虫等重要寄生虫病的传播媒介。基于杀虫剂的媒介控制措施在疟疾等虫媒传染病防控过程中发挥了重要作用,其中溴氰菊酯是当前应用最广泛的卫生杀虫剂之一。由于杀虫... 详细信息

中华按蚊(Anopheles sinensis)是我国分布最为广泛的蚊种之一,是疟疾、丝虫等重要寄生虫病的传播媒介。基于杀虫剂的媒介控制措施在疟疾等虫媒传染病防控过程中发挥了重要作用,其中溴氰菊酯是当前应用最广泛的卫生杀虫剂之一。由于杀虫剂长期反复的使用,蚊虫对溴氰菊酯产生了严重的抗性。杀虫剂的代谢过程涉及蚊体内复杂的解毒途径和形式多样的酶代谢反应,目前对蚊虫杀虫剂具体代谢过程的研究较少,代谢机理研究也不完善。本研究采用代谢组学技术,分别对实验室和现场中华按蚊暴露于溴氰菊酯后的体内代谢物进行分析,比较小分子代谢物种类和含量的变化,为开展中华按蚊溴氰菊酯代谢途径研究和筛选抗性相关代谢标记物提供科学依据和理论参考。本研究共分三个部分:一、实验室敏感中华按蚊幼虫溴氰菊酯暴露后代谢组学分析为了解中华按蚊暴露于不同浓度和时间溴氰菊酯后小分子代谢物的变化情况,对实验室饲养的敏感品系中华按蚊幼虫采用浸渍法测定其半数致死浓度(LC),并在此基础上采用液相色谱和质谱串联(LC-MS/MS)技术,对暴露溴氰菊酯不同致死浓度(LC,LC以及LC)和不同时长(30分钟和24小时)后的总代谢物进行检测并进行差异分析。结果显示,实验室敏感中华按蚊幼虫暴露溴氰菊酯后大多数差异代谢物与生物氧化磷酸化和糖类等能源物质代谢相关;多归属于有机氧化合物、羧酸及其代谢物、脂肪酰基等3个生化功能家族中。在本次实验中,因为在LC暴露浓度下的毒作用个体差异最小;24h是大部分研究中用于杀虫剂测定时较为稳定的测试时间,因此暴露24h以及LC浓度溴氰菊酯暴露为更适合代谢组学分析的实验条件。二、实验室敏感中华按蚊成蚊溴氰菊酯暴露后代谢组学分析为进一步了解中华按蚊成蚊和幼虫代谢溴氰菊酯的区别,对实验室敏感中华按蚊成蚊暴露24h、LC溴氰菊酯后进行了代谢组学检测,与第一部分幼虫代谢组数据进行对比后发现:1、实验室敏感中华按蚊成蚊暴露溴氰菊酯后,共获得234种差异代谢物,其中20种与实验室敏感幼虫差异代谢物相同;2、在敏感成蚊和幼虫获得的20种差异代谢物中,有17种在幼虫和成蚊接触溴氰菊酯后出现相同的变化趋势,大多为羧酸及其衍生物、有机氧化合物以及脂肪酰基类化合物;3、差异代谢物KEGG通路富集分析结果显示中华按蚊成蚊和幼虫共同的差异代谢物富集通路为:碳代谢、乙醛酸和二羧酸酯代谢、Fox O信号通路、磷酸戊糖途径、柠檬酸盐循环(TCA循环)、甘油磷脂代谢,这些信号通路涉及生物能量代谢及氧化呼吸、脂质代谢和脂肪动员以及细胞凋亡的调控。三、现场抗性中华按蚊幼虫溴氰菊酯暴露后代谢组学分析为进一步分析中华按蚊溴氰菊酯抗性相关代谢变化,选用野外现场捕获的抗性水平较高的中华按蚊幼虫,暴露溴氰菊酯后进行代谢组学分析,并与前述实验室敏感幼虫和成蚊代谢组数据进行对比。结果显示:1、现场抗性幼虫暴露溴氰菊酯后差异代谢物较多为有机氧化合物、甘油磷脂类代谢物,大多涉及甘油磷脂代谢和磷酸戊糖途径;2、抗性和敏感幼虫有8种共同差异代谢物,其中6种表现出不同的变化,分别属于甘油磷脂或脂肪酰基、嘌呤核苷酸家族;同时这些差异代谢物较多聚集在氨基酸生物合成与代谢及甘油磷脂代谢途径上;3、羟丙酰肉碱、鸟苷一磷酸为实验室敏感幼虫、成蚊以及抗性幼虫中暴露杀虫剂后的共同差异代谢物,这两种代谢物在敏感成蚊和幼虫中变化趋势一致但与抗性幼虫完全相反,在敏感品系的幼虫和成蚊中均上升,在抗性幼虫中下降。

关键词：中华按蚊溴氰菊酯抗性代谢组学液相色谱质谱联用

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江苏省11例输入性重症疟疾病例分析

中国热带医学 2021年第1期21卷 29-32,41页

作者：王伟明曹园园杨蒙蒙顾亚萍徐岁周华云朱国鼎曹俊江苏省血吸虫/寄生虫病防治研究所国家卫生健康委员会寄生虫病预防与控制技术重点实验室和江苏省寄生虫与媒介控制技术重点实验室江苏无锡214064

目的对江苏省11例输入性重症疟疾病例进行分析,总结重症疟疾的成因、评价诊治效果,为制定切实可行的重症疟疾救治措施提供科学依据。方法收集2019年江苏省11例重症疟疾病例传染病报告信息管理系统和寄生虫病防治信息管理系统的个案信息... 详细信息

目的对江苏省11例输入性重症疟疾病例进行分析,总结重症疟疾的成因、评价诊治效果,为制定切实可行的重症疟疾救治措施提供科学依据。方法收集2019年江苏省11例重症疟疾病例传染病报告信息管理系统和寄生虫病防治信息管理系统的个案信息、流行病学调查报告以及住院病历,对重症疟疾病例的发病时间、临床表现、诊断过程、治疗情况进行汇总分析。结果11例重症疟疾病例中恶性疟10例、卵形疟1例,均为境外输入性病例,在境外生活时间最短22 d,最长1070 d,在国外期间有4例曾患过疟疾。10例恶性疟重症病例均在回国后一个月内发病,其中有3例在回国当天就发病。1例卵形疟重症病例在回国后134 d才开始发病。11例重症疟疾病例发病至就诊平均时间为2.5 d,就诊至确诊平均时间为1.81 d。重症表现为昏迷或休克3例、重度贫血3例、急性肾功能衰竭4例、急性呼吸窘迫综合征1例。1例卵形疟由于出现自发性脾破裂引起重度贫血。除1例卵形疟病例给予双氢青蒿素哌喹片加服伯氨喹片治疗外,其余10例恶性疟重症病例均采用青蒿琥酯注射抗疟治疗,接受抗疟治疗后均痊愈出院。11例重症病例,住院天数最短9 d,最长40 d,平均22.64 d;住院费用最少9270元,最多177174元,平均81520.76元。结论应加强多部门合作,提高患者及时就诊意识;加强医务人员疟疾专业知识和业务的培训,尽早发现输入性疟疾病例并及时治疗,防止因延误诊断造成的重症疟疾。

关键词：恶性疟卵形疟重症疟疾输入性

“十二五”期间我国血吸虫病科学研究重点和方向

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中国血吸虫病防治杂志 2011年第2期23卷 111-113页

作者：汪天平操治国林丹丹周晓农安徽省血吸虫病防治研究所合肥230061 江西省寄生虫病防治研究所中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所

本文分析了我国血吸虫病科学研究进展,阐述了当前我国血防工作对科学研究的需求,并提出了在"十二五"期间的研究重点与方向。

关键词：血吸虫病 “十二五”规划科学研究中国

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2014年江西省人体肠道原虫感染现状调查

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2019年第3期37卷 266-271页

作者：兰炜明葛军姜唯声谢曙英杭春琴李召军刘红云张晶黄成坚曾小军江西省寄生虫病防治研究所

目的了解江西省人体肠道原虫感染现状,为制订防控措施提供参考依据。方法根据2014年全国第3次人体重点寄生虫感染现状调查方案,结合江西省具体情况,以生态区为基础,根据地理方位进行分层整群随机抽样,选择江西省28个县(市、区) 84个调... 详细信息

目的了解江西省人体肠道原虫感染现状,为制订防控措施提供参考依据。方法根据2014年全国第3次人体重点寄生虫感染现状调查方案,结合江西省具体情况,以生态区为基础,根据地理方位进行分层整群随机抽样,选择江西省28个县(市、区) 84个调查点。调查对象为各调查点常住居民(12岁以下儿童不超过1/3),每个调查点最终受检人数不少于250人。采集调查对象粪样,采用卢戈氏碘液染色法(一粪一检)检查粪样原虫包囊,生理盐水直接涂片法(一粪一检)检查滋养体。应用IBM SPSS Statistics 20软件进行统计学分析,感染率通过χ2检验进行比较。结果共调查21 569人,肠道原虫感染率为1.4%(307/21 569)。共发现8种原虫,感染率分别为溶组织内阿米巴0.2%(45/21 569)、结肠内阿米巴0.5%(104/21 569)、蓝氏贾第鞭毛虫0.1%(26/21 569)、人芽囊原虫0.3%(68/21 569)、哈门氏内阿米巴0.1%(28/21 569)、微小内蜒阿米巴0.2%(46/21 569)、布氏嗜碘阿米巴3例和结肠小袋纤毛虫1例。南岭山地丘陵地区肠道原虫感染率最高,为2.8%(132/4 742),以人芽囊原虫和微小内蜒阿米巴感染为主;浙闽山地丘陵地区感染率最低,为0.3%(18/5 887),不同生态区肠道原虫感染率差异有统计学意义(P 省病例数的93.3%(42/45);宜春市结肠内阿米巴、蓝氏贾第鞭毛虫感染病例数较多,分别占全省病例数的65.4%(68/104)和46.2%(12/26),仅有的1例结肠小袋纤毛虫感染病例也发现于宜春市;赣州市人芽囊原虫、哈门氏内阿米巴、微小内蜒阿米巴感染病例数较多,分别占全省病例数的69.1%(47/68)、 82.1%(23/28)和97.8%(45/46)。全省存在12例混合感染病例。男、女肠道原虫感染率分别为1.4%(148/10 582)和1.5%(159/10 987),差异无统计学意义(P> 0.05)。0~9岁人群肠道原虫感染率最高,为2.0%(64/3 243);70≥岁人群感染率最低,为0.9%(16/1 710),不同年龄组人群肠道原虫感染率差异无统计学意义(P> 0.05)。工、商人员肠道原虫感染率最高,为1.8%(6/329);教师及离退休人员感染率最低,为0.8%(2/248),不同职业间肠道原虫感染率差异无统计学意义(P> 0.05)。文盲人群肠道原虫感染率最高,为1.5%(56/3 635),大专、大学以上人群感染率最低,为0.2%(1/219),不同文化程度人群肠道原虫感染率差异无统计学意义(P> 0.05)。经济水平较高地区人群的肠道原虫感染率为1.3%(102/7 837),以结肠内阿米巴感染为主;经济水平中等地区人群的感染率为0.9%(50/5 456),以溶组织内阿米巴和蓝氏贾第鞭毛虫感染为主;经济水平较低地区人群的感染率为1.9%(155/8 276),以人芽囊原虫和其他原虫感染为主,不同经济水平地区间肠道原虫感染率差异有统计学意义(P 省人体肠道原虫总感染率较低,但经济水平较低的南岭山地丘陵地区人群感染情况较严重,是未来原虫防治工作的重点。

关键词：肠道原虫感染现状江西省

尿液中外源日本血吸虫小分子DNA片段提取方法的建立与评价

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中国血吸虫病防治杂志 2023年第1期35卷 15-21页

作者：张乔乔赵松叶钰滢毕念念王鑫瑶张键锋李伟杨坤江苏省血吸虫病防治研究所、国家卫生健康委员会寄生虫病预防与控制技术重点实验室、江苏省寄生虫与媒介控制技术重点实验室江苏无锡214064 南京医科大学全球健康中心江苏南京211166

目的建立尿液中外源添加的日本血吸虫小分子DNA片段提取方法,评价不同方法处理尿液后的提取效果。方法以日本血吸虫SjG28基因片段作为靶序列,通过PCR扩增靶序列上的81 bp小分子DNA片段,经测序鉴定后作为拟添加到尿液样本中的外源小分子... 详细信息

目的建立尿液中外源添加的日本血吸虫小分子DNA片段提取方法,评价不同方法处理尿液后的提取效果。方法以日本血吸虫SjG28基因片段作为靶序列,通过PCR扩增靶序列上的81 bp小分子DNA片段,经测序鉴定后作为拟添加到尿液样本中的外源小分子DNA片段。以SjG28为靶基因设计引物及探针,建立实时荧光定量PCR(qPCR)方法;将外源小分子DNA片段以10为梯度倍比稀释后进行扩增,评价该方法的敏感性;以日本血吸虫、曼氏血吸虫、埃及血吸虫、巴贝虫、十二指肠钩口线虫、华支睾吸虫、卫氏并殖吸虫基因组DNA为模板进行检测,评价该方法的特异性。将外源小分子DNA片段添加至人工尿液及健康人尿液后,经调整p H值、离心、浓缩等处理后,采用QIAmp Viral RNA Mini Kit(Qiagen试剂盒)、BIOG游离DNA提取试剂盒(BIOG试剂盒)提取尿液中的外源小分子DNA片段,比较不同处理方式及提取方法的效果。结果成功制备81 bp外源日本血吸虫小分子DNA片段,建立的qPCR法最低能检测到100拷贝/μL的81 bp外源日本血吸虫小分子DNA片段。以上述7种寄生虫DNA为模板进行检测,仅日本血吸虫基因组DNA模板有荧光信号值增长。调整人工尿液pH值为5、6、7、8,采用Qiagen试剂盒提取其中的外源日本血吸虫小分子DNA片段回收率分别(49.12±2.09)%、(84.52±4.96)%、(89.38±3.32)%和(87.82±3.90)%;采用BIOG试剂盒提取小分子DNA片段回收率分别为(2.30±0.07)%、(8.11±0.26)%、(13.35±0.61)%、(20.82±0.68)%,两种方法提取回收率差异均有统计学意义(t=38.702、26.955、39.042、29.571,P均0.05)。人工尿液[(64.30±1.00)%vs.(58.87±0.26)%;t=12.033,P血吸虫小分子DNA片段的提取方法,Qiagen试剂盒提取效果较好。将尿液样本p H值调整至6~8、使用100K离心浓缩管浓缩健康人尿液样本均可提高提取效果。

关键词：日本血吸虫尿液游离DNA 小分子DNA片段实时荧光定量PCR