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大肠杆菌O157∶H7胶体金免疫层析检测试纸条在感染牛和小鼠排菌检测中的应用

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中国兽医科学 2012年第3期42卷 285-289页

作者：夏兴霞孟祥升王永山董晨红赵攀登张雪寒何孔旺江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为了检验大肠杆菌O157∶H7胶体金免疫层析检测试纸条在感染动物排菌中的应用效果,将牛和小鼠采用灌胃攻毒方式试验感染大肠杆菌O157∶H7,用大肠杆菌O157∶H7胶体金免疫层析检测试纸条、细菌鉴别培养基培养计数以及PCR 3种方法检测感染... 详细信息

为了检验大肠杆菌O157∶H7胶体金免疫层析检测试纸条在感染动物排菌中的应用效果,将牛和小鼠采用灌胃攻毒方式试验感染大肠杆菌O157∶H7,用大肠杆菌O157∶H7胶体金免疫层析检测试纸条、细菌鉴别培养基培养计数以及PCR 3种方法检测感染动物粪便中O157∶H7的排菌量和持续时间。牛在感染大肠杆菌O157∶H7后的第2天开始从粪便排菌,第4天达到峰值,排菌时间可持续28d;小鼠在感染O157∶H7后的第4小时开始从粪便排菌,第6小时达到峰值,排菌时间可持续15d。大肠杆菌O157∶H7胶体金免疫层析检测试纸条、细菌鉴别培养基培养计数以及PCR 3种方法的检测结果一致,但试纸条更简便、快捷、直观,1～5min可得出检测结果,便于现场检测样品中O157∶H7的快速筛查。

关键词：胶体金免疫层析检测试纸条肠出血性大肠杆菌O157∶H7 牛鼠粪便

猪鼻支原体TaqMan MGB探针荧光定量PCR方法的建立

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中国预防兽医学报 2013年第10期35卷 833-836页

作者：白方方武昱孜刘茂军冯志新熊祺琰韦艳娜马庆红邵国青江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为建立快速检测猪鼻支原体(***)的荧光定量PCR方法,本研究根据GenBank中登录的p37基因序列设计并合成引物及MGB探针,构建含有p37基因的重组质粒,以其为标准品绘制标准曲线,并检测该方法的特异性、敏感性和重复性。结果显示该方法具有良... 详细信息

为建立快速检测猪鼻支原体(***)的荧光定量PCR方法,本研究根据GenBank中登录的p37基因序列设计并合成引物及MGB探针,构建含有p37基因的重组质粒,以其为标准品绘制标准曲线,并检测该方法的特异性、敏感性和重复性。结果显示该方法具有良好的特异性,与猪肺炎支原体、猪絮状支原体、猪滑液支原体、鸡毒支原体、副猪嗜血杆菌、猪胸膜肺炎放线杆菌、猪圆环病毒、猪瘟病毒及猪流感病毒无交叉反应,对***的检测敏感性为10拷贝/μL,并且稳定性好,变异系数小于2%。利用建立的荧光定量PCR方法对55份临床样品进行检测,阳性检出率为87.3%(48/55),而分离培养方法和普通PCR的阳性检出率分别为41.8%(23/55)和29.1%(16/55)。该结果表明,建立的方法特异性强、敏感性高、稳定性好,可以用于***临床样品的检测,对***的快速和定量检测具有重要意义。

关键词：猪鼻支原体 p37基因荧光定量PCR

传染性法氏囊病病毒VP2结构蛋白抗体ELISA检测方法的建立

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中国兽医学报 2018年第10期38卷 1864-1871页

作者：王晓丽王永山欧阳伟夏兴霞潘群兴毕振威诸玉梅江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心

为建立敏感、特异、稳定的传染性法氏囊病病毒（IBDV）VP2结构蛋白抗体ELISA检测方法,本试验以杆状病毒表达系统表达的重组IBDV-VP2结构蛋白为抗原,通过包被VP2单克隆抗体捕捉VP2结构蛋白的形式,建立鸡血清VP2结构蛋白抗体ELISA检测方法... 详细信息

为建立敏感、特异、稳定的传染性法氏囊病病毒（IBDV）VP2结构蛋白抗体ELISA检测方法,本试验以杆状病毒表达系统表达的重组IBDV-VP2结构蛋白为抗原,通过包被VP2单克隆抗体捕捉VP2结构蛋白的形式,建立鸡血清VP2结构蛋白抗体ELISA检测方法（VP2-ELISA）。条件优化结果显示：单克隆抗体最适包被质量浓度为3mg/L,VP2最佳稀释度为1∶20,夹心ELISA效价1∶12.8,被捡血清的稀释度为1∶400。该方法与禽流感、鸡新城疫、鸡马立克氏病、鸡传染性喉气管炎病毒及杆状病毒阳性血清无交叉反应,对琼扩效价为1∶32的IBDV阳性血清的最低检出量为1∶12 800,ROC曲线确定的D450nm临界值为0.236,组内、组间重复性试验变异系数均小于10%。用本试验建立的VP2-ELISA方法与进口IBDV-ELISA抗体试剂盒平行检测100份背景已知的临床鸡血清样品,总符合率VP2-ELISA（97%）高于进口ELISA试剂盒（96%）。本试验为进一步研制鸡传染性法氏囊病病毒VP2结构蛋白抗体ELISA检测试剂盒奠定基础。

关键词：传染性法氏囊病病毒 VP2 单克隆抗体 ELISA

铁离子限制下猪胸膜肺炎放线杆菌外膜囊泡的制备及其抗原性分析

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江苏农业学报 2017年第1期33卷 119-123页

作者：周俊明何孔旺倪艳秀祝昊丹温立斌俞正玉茅爱华吕立新江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为评估猪胸膜肺炎放线杆菌外膜囊泡对小鼠免疫系统的刺激水平,以铁离子限制下体外培养猪胸膜肺炎放线杆菌shope菌株,经离心、0.22μm过滤处理后获取无细胞培养上清,继而超速离心制备细菌释放的外膜囊泡(Outer membrane vesicles,OMV),以... 详细信息

为评估猪胸膜肺炎放线杆菌外膜囊泡对小鼠免疫系统的刺激水平,以铁离子限制下体外培养猪胸膜肺炎放线杆菌shope菌株,经离心、0.22μm过滤处理后获取无细胞培养上清,继而超速离心制备细菌释放的外膜囊泡(Outer membrane vesicles,OMV),以OMV作为亚单位疫苗2次鼻腔免疫小鼠。结果表明,通过透射电镜观察可见大部分OMV直径在50 nm至100 nm之间,OMV免疫小鼠长期增质量与PBS免疫组无显著差异,同时OMV不仅能够刺激小鼠血清产生高水平的IgG,而且在小鼠肺脏中产生高水平的IgA。可见,OMV是一种高效免疫刺激物,能有效地刺激小鼠肺脏黏膜产生免疫反应。

关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌外膜囊泡 IgA 黏膜免疫

重组猪鼻支原体P37蛋白的原核表达及免疫原性分析

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中国预防兽医学报 2013年第10期35卷 840-844页

作者：熊祺琰刘占军马庆红冯志新刘茂军白方方邵国青江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

P37是猪鼻支原体(Mhr)的主要免疫原之一,也是Mhr中目前唯一已知的与肿瘤直接相关的抗原。为原核表达Mhr P37蛋白并分析其免疫原性,本研究通过人工合成能够在***中优势表达P37蛋白的编码序列,以pET-28a(+)为载体对P37重组蛋白进行原核表... 详细信息

P37是猪鼻支原体(Mhr)的主要免疫原之一,也是Mhr中目前唯一已知的与肿瘤直接相关的抗原。为原核表达Mhr P37蛋白并分析其免疫原性,本研究通过人工合成能够在***中优势表达P37蛋白的编码序列,以pET-28a(+)为载体对P37重组蛋白进行原核表达。SDS-PAGE及western blot鉴定结果表明,表达的P37重组蛋白约为45.97 ku并能够被Mhr高免血清识别。利用纯化的重组蛋白为包被抗原初步建立间接ELISA检测方法,检测结果显示与Mhr高免血清呈强阳性反应。此外,将P37重组蛋白免疫小鼠,能够诱导高滴度特异性抗体,表明该蛋白具有良好的免疫原性。本研究结果为Mhr检测方法的建立、P37蛋白功能研究以及P37相关重组肿瘤疫苗和Mhr疫苗的研制奠定基础。

关键词：猪鼻支原体 P37蛋白原核表达免疫

口服O157:H7(ΔhlyΔstxΔtoxB)能够减少O157:H7在山羊体内的定殖

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华北农学报 2012年第3期27卷 123-125页

作者：张雪寒何孔旺俞正玉茅爱华江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为了明确O157:H7(ΔhlyΔstxΔtoxB)口服能否减少亲本株O157:H7在山羊体内的定殖。选用3月龄山羊,首先口服接种O157:H7(ΔhlyΔstxΔtoxB),分别于第7,14天再次口服接种亲本株O157:H7,监测亲本株O157:H7的排菌持续时间和排菌量。结果表明... 详细信息

为了明确O157:H7(ΔhlyΔstxΔtoxB)口服能否减少亲本株O157:H7在山羊体内的定殖。选用3月龄山羊,首先口服接种O157:H7(ΔhlyΔstxΔtoxB),分别于第7,14天再次口服接种亲本株O157:H7,监测亲本株O157:H7的排菌持续时间和排菌量。结果表明:O157:H7(ΔhlyΔstxΔtoxB)口服后第7天攻击亲本株O157:H7,第4天检测不到亲本株O157:H7的排菌;第14天攻击亲本株O157:H7,第9天检测不到亲本株O157:H7的排菌。直接口服亲本株O157:H7,排菌一直持续到第25天。口服O157:H7(ΔhlyΔstxΔtoxB)能够减少O157:H7在山羊体内的定殖,为研制EHECO157:H7基因缺失疫苗奠定了基础。

关键词： O157:H7(ΔhlyΔstxΔtoxB) 山羊排菌

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类猪圆环病毒因子P1核酸链型和极性的研究

华北农学报 2012年第3期27卷 120-122页

作者：温立斌何孔旺倪艳秀张雪寒李彬王小敏郭容利周俊明俞正玉茅爱华吕立新江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

研究报道类猪圆环病毒因子P1的核酸链型和极性的研究结果。采用氯化铯平衡密度梯度离心获得较为纯净的病毒粒子后,提取病毒DNA,经S1核酸酶消化、特异性单引物第一轮PCR扩增结合常规第二轮PCR扩增等研究,结果表明,类猪圆环病毒因子P1为... 详细信息

研究报道类猪圆环病毒因子P1的核酸链型和极性的研究结果。采用氯化铯平衡密度梯度离心获得较为纯净的病毒粒子后,提取病毒DNA,经S1核酸酶消化、特异性单引物第一轮PCR扩增结合常规第二轮PCR扩增等研究,结果表明,类猪圆环病毒因子P1为单股、负链基因组。

关键词：类猪圆环病毒因子P1 核酸链型极性

猪肺炎支原体P97R1抗原免疫刺激复合物的制备及对活疫苗免疫刺激能力的增强作用研究

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中国预防兽医学报 2013年第12期35卷 1016-1019页

作者：韦艳娜熊祺琰董璐冯志新邵国青江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

为增强肌肉注射免疫条件下猪肺炎支原体(Mhp)活疫苗的免疫刺激能力,并补充其缺乏的针对重要黏附因子P97R1的应答,本实验采用透析法制备含有P97R1的免疫刺激复合物(ISCOM-P97R1),并将ISCOMP97R1作为活疫苗的佐剂,通过小鼠模型进行免疫学... 详细信息

为增强肌肉注射免疫条件下猪肺炎支原体(Mhp)活疫苗的免疫刺激能力,并补充其缺乏的针对重要黏附因子P97R1的应答,本实验采用透析法制备含有P97R1的免疫刺激复合物(ISCOM-P97R1),并将ISCOMP97R1作为活疫苗的佐剂,通过小鼠模型进行免疫学评价。结果表明,电镜下观察所制备的ISCOM-P97R1具有ISCOM的典型蜂窝状结构,直径为30 nm^40 nm,P97R1蛋白的包封率可达85.6%。免疫后7 d即可在小鼠血清中检测到高水平的特异性P97R1抗体,并且其针对Mhp全菌蛋白的抗体也显著高于无佐剂的活疫苗对照组。结果表明,ISCOM-P97R1对Mhp活疫苗免疫刺激能力具有显著的增强作用,同时可以有效诱导产生针对P97R1的免疫应答,进一步增强了疫苗的保护能力。

关键词：免疫刺激复合物 P97R1 猪支原体肺炎活疫苗

鹅坦布苏病毒非结构蛋白NS1的原核表达及纯化

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华北农学报 2012年第6期27卷 11-14页

作者：赵冬敏黄欣梅刘宇卓张敬峰韩凯凯谢星星周晓波李银江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

根据鹅坦布苏病毒JS804株非结构蛋白NS1基因序列,设计1对特异性引物,利用PCR方法扩增得到完整的NS1基因,并将其克隆至原核表达载体pET28a和pET32a上,构建出重组表达质粒pET28a-NS1和pET32a-NS1,转化至BL21(DE3)中,经IPTG诱导得到NS1融... 详细信息

根据鹅坦布苏病毒JS804株非结构蛋白NS1基因序列,设计1对特异性引物,利用PCR方法扩增得到完整的NS1基因,并将其克隆至原核表达载体pET28a和pET32a上,构建出重组表达质粒pET28a-NS1和pET32a-NS1,转化至BL21(DE3)中,经IPTG诱导得到NS1融合蛋白(His-NS1),其分子质量约分别为44,58 kDa,均在诱导后6 h达到表达量高峰。分析显示,2种融合蛋白均以包涵体形式存在,包涵体经过变性和复性后均可获得单一、高表达量的目的蛋白,为进一步开展关于鹅坦布苏病毒NS1蛋白的研究奠定了基础。

关键词：鹅坦布苏病毒 NS1蛋白原核表达