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日本沼虾高效生态养殖技术浅析

山东畜牧兽医 2024年第7期45卷 45-48页

作者：石丰运李华坤张海涛徐州生物工程职业技术学院/徐州现代农业生物技术重点实验室江苏徐州221006

市场上日本沼虾的需求量不断增加,但目前日本沼虾亩产量已处于瓶颈阶段。面对不断增长的市场需求量,如何提高日本沼虾亩产量成了日本沼虾养殖的首要问题。本文通过对日本沼虾养殖的初步研究和对养殖户的随机调研等方法,研究当地的养殖... 详细信息

市场上日本沼虾的需求量不断增加,但目前日本沼虾亩产量已处于瓶颈阶段。面对不断增长的市场需求量,如何提高日本沼虾亩产量成了日本沼虾养殖的首要问题。本文通过对日本沼虾养殖的初步研究和对养殖户的随机调研等方法,研究当地的养殖流程及病害防治手段。结果发现,当地日本沼虾池塘养殖中存在近亲育苗从而导致种质退化严重、日常饲养管理过程中缺少预防意识而盲目用药、捕捞时使用溴氰菊酯赶捕等问题。针对以上问题,本研究针对性地提出了引进优质苗种、采取套养模式、树立以防为主的意识合理用药、采用轮捕与集中捕捞相结合替代赶捕等解决对策。

关键词：日本沼虾苗种池塘管理病害防治

猪流行性腹泻病毒N蛋白原核表达及多克隆抗体制备

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中国畜牧兽医 2024年第10期51卷 4522-4530页

作者：吴婕杜菁樊繁任金阳卢会鹏张力雷昕诺曹世诺吴植朱睿朱善元江苏农牧科技职业学院江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室江苏现代畜牧与新兽药工程技术中心泰州225300 江苏农牧科技职业学院泰州225300

【目的】利用原核表达系统表达猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)核衣壳蛋白(N),并制备具有高效价和特异性强的多克隆抗体。【方法】利用生物信息学工具分析PEDV N蛋白氨基酸序列,并预测其抗原性;利用原核表达载... 详细信息

【目的】利用原核表达系统表达猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)核衣壳蛋白(N),并制备具有高效价和特异性强的多克隆抗体。【方法】利用生物信息学工具分析PEDV N蛋白氨基酸序列,并预测其抗原性;利用原核表达载体pColdⅠ诱导表达重组N蛋白,并通过SDS-PAGE和Western blotting鉴定重组蛋白;使用兔多抗制备佐剂与纯化后的重组N蛋白混合后免疫新西兰白兔,收集血清制备多克隆抗体。利用间接ELISA法测定重组N蛋白多克隆抗体效价,并对多克隆抗体进行Western blotting和间接免疫荧光试验(IFA)验证。【结果】生物信息学预测结果显示,N蛋白不含信号肽和跨膜结构,具有良好的抗原性和溶解度。SDS-PAGE电泳结果显示,重组N蛋白大小约为58 ku,主要以可溶性蛋白存在;Western blotting结果显示,该蛋白能与抗His标签的鼠源单克隆抗体发生特异性反应。间接ELISA结果显示,多克隆抗体效价可达1∶204800;Western blotting结果表明,抗体稀释度为1∶5000时能特异性识别重组N蛋白及PEDV感染后的Vero细胞样品中的N蛋白;IFA结果显示,当稀释度为1∶1000时,该抗体能有效识别PEDV感染细胞样品中的N蛋白。【结论】本研究成功制备了效价高和特异性好的兔抗N蛋白多克隆抗体,为深入研究PEDV N蛋白的功能、了解PEDV复制机制和病毒-宿主细胞间的互作提供试验材料,为开发PEDV诊断和检测方法奠定基础。

关键词：猪流行性腹泻病毒(PEDV) N蛋白原核表达多克隆抗体

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猪干扰素α的原核可溶性表达及抗PEDV活性

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中国兽医学报 2024年第3期44卷 550-557页

作者：朱睿张弘石吴植谢军张蕾覃光让房崇琴成大荣朱善元江苏农牧科技职业学院、江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室、江苏现代畜牧与新兽药工程技术中心江苏泰州225300 江苏农牧科技职业学院江苏泰州225300 扬州大学兽医学院江苏扬州225009 高邮市产品质量综合检验检测中心江苏扬州225600

旨在利用原核表达系统高效表达具有抗病毒活性的可溶性重组猪干扰素α(soluble recombinant porcine interferon-α,srPoIFN-α)。通过PCR方法扩增姜曲海猪IFNα基因成熟肽序列,将其分别克隆至原核表达载体pCold-Ⅱ、pET22b、pET30a和pE... 详细信息

旨在利用原核表达系统高效表达具有抗病毒活性的可溶性重组猪干扰素α(soluble recombinant porcine interferon-α,srPoIFN-α)。通过PCR方法扩增姜曲海猪IFNα基因成熟肽序列,将其分别克隆至原核表达载体pCold-Ⅱ、pET22b、pET30a和pET30a-ELP中并在大肠杆菌中进行表达;通过Western blot结合Image J软件或BCA定量分析不同表达载体、密码子偏好优化、培养基类别、纯化方式等因素对猪干扰素α基因在大肠杆菌中可溶性表达的影响,鉴定提高srPoIFN-α表达的有利因素;利用VSV-GFP和PEDV检测srPoIFN-α的抗病毒活性。结果显示,原核表达载体pET30a、密码子优化、HB-PET自诱导培养基和磁珠纯化均能显著提高srPoIFN-α产量(P<0.001);srPoIFN-α有效抑制VSV-GFP复制的稀释倍数为2-8.1,与重组人干扰素α2b标准品的比活为1.71×10^(8)IU/g,有效抑制PEDV复制的稀释倍数为2^(-10.29),抗PEDV活性为2.72 IU,表明srPoIFN-α具有良好抗PEDV活性。这些结果为进一步开发可溶性IFNα药物制剂提供参考。

关键词：原核表达猪可溶性重组干扰素α 抗病毒活性 PEDV

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高邮鸭Akt1基因克隆及生物信息学分析

畜牧与兽医 2024年第10期56卷 1-7页

作者：李小芬朱睿宋易霖田维婷张蕾江苏农牧科技职业学院江苏泰州225300 江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室/江苏现代畜牧与新兽药工程技术中心江苏泰州225300

Akt1是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族基因,通过响应生长因子刺激磷酸化一系列下游底物来调节许多过程,包括代谢、增殖、细胞存活、生长和血管生成等。实验室前期对全转录组差异分析获得了与高邮鸭双黄蛋率显著相关的候选关键基因Akt1,并且A... 详细信息

Akt1是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族基因,通过响应生长因子刺激磷酸化一系列下游底物来调节许多过程,包括代谢、增殖、细胞存活、生长和血管生成等。实验室前期对全转录组差异分析获得了与高邮鸭双黄蛋率显著相关的候选关键基因Akt1,并且Akt1显著富集于差异表达信号通路——PI3K-AKT信号通路。为了对高邮鸭双黄蛋候选基因Akt1进行系统的功能研究,本研究通过PCR技术克隆高邮鸭卵巢组织Akt1全长,构建了Akt1-EGFP融合表达载体,结合生物信息学技术对AKT1蛋白的理化性质进行系统分析。结果:AKT1为种间保守型非分泌蛋白,表达于质膜,具有丰富的丝氨酸和苏氨酸磷酸化位点,可与10种蛋白(TSC1、MAPK1、PIK3R1、PIK3CA、TSC2、CDKN1A、IKBKB、PIK3CD、PDPK1和ILK)发生互相作用。研究结果为揭示Akt1基因编码的蛋白在调控高邮鸭双黄蛋形成过程中的功能和分子机制提供理论基础。

关键词：高邮鸭双黄蛋 Akt1基因克隆生物信息学分析

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甜茶树苷H对高糖致小鼠肾足细胞损伤的作用研究

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中国畜牧兽医 2024年第8期51卷 3256-3266页

作者：陈毓孙伟翔李昊达张婷杨海峰陈晓兰李锋涛江苏农牧科技职业学院泰州225300 江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室泰州225300 江苏卫生健康职业学院南京211800

[目的]探究甜茶树苷H抑制NLRP3/ASC/Caspase1通路从而改善高糖导致的小鼠肾足细胞(MPC-5)的损伤作用。[方法]试验采用不同浓度(0、3.25、7.5、15、30、60、120μmol/L)甜茶树苷H分别孵育MPC-5细胞,通过CCK-8法检测细胞活力,判定安全给... 详细信息

[目的]探究甜茶树苷H抑制NLRP3/ASC/Caspase1通路从而改善高糖导致的小鼠肾足细胞(MPC-5)的损伤作用。[方法]试验采用不同浓度(0、3.25、7.5、15、30、60、120μmol/L)甜茶树苷H分别孵育MPC-5细胞,通过CCK-8法检测细胞活力,判定安全给药浓度。将MPC-5细胞分为空白对照组(CON)、D(+)-无水葡萄糖等渗对照组(MA)、高糖组(HG)以及不同浓度(3.25、7.5、15μmol/L)甜茶树苷H组(CY3.25、CY7.5和CY15组)。HG和不同浓度甜茶树苷H组分别加入30μmol/L D(+)-无水葡萄糖,MA组加入5.5 mmol/L D(+)-无水葡萄糖+24.5 mmol/L甘露醇,CON组加入不含FBS的DMEM培养基,孵育细胞24 h后,CY3.25、CY7.5和CY15组培养基更换为不同浓度甜茶树苷H,并再次孵育细胞24 h。收集细胞,采用CCK-8法和乳酸脱氢酶(lactate hydrogenase,LDH)法分别检测细胞活力和损伤程度;利用碘化丙啶(PI)荧光染色法检测细胞凋亡率;通过免疫荧光法观察MPC-5细胞中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)和凋亡相关斑点样蛋白(ASC)共定位情况;采用ELISA法检测细胞上清液中白细胞介素-1β前体(Pro-IL-1β)和白细胞介素-1β(IL-1β)含量;通过Western blotting检测NLRP3、ASC、半胱氨酸天冬酶1(Caspase1)/半胱氨酸天冬酶1前体(Pro-Caspase1)以及肾结蛋白(Desmin)、肾病蛋白(Nephrin)、线粒体裂变因子(MFF)、胶原Ⅳ(CollagenⅣ)蛋白表达量。[结果]与0μmol/L甜茶树苷H组相比,7.5和15μmol/L甜茶树苷H组细胞活力显著升高(P<0.05),30、60和120μmol/L甜茶树苷H组细胞活力显著降低(P<0.05)。因此,后续选择3.25~15μmol/L为甜茶树苷H的安全作用浓度。采用以上安全作用浓度甜茶树苷H处理细胞,结果显示,与HG组相比,CY3.25、CY7.5和CY15组细胞活力显著升高(P<0.05),细胞上清液中LDH活力显著降低(P<0.05),且呈现剂量依赖性;CY7.5和CY15组细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。免疫荧光法检测结果显示,与CON组相比,HG组细胞中NLRP3、ASC荧光增强且出现红绿荧光标记重叠现象;与HG组相比,CY3.25、CY7.5组细胞中NLRP3、ASC荧光减弱,未观察到红绿荧光标记重叠现象,CY15组细胞中NLRP3、ASC无荧光阳性标记。ELISA检测结果显示,与HG组相比,CY15组细胞中IL-1β和Pro-IL-1β释放量比值显著降低(P<0.05)。Western blotting检测结果显示,与HG组相比,CY15组细胞中NLRP3、ASC、Desmin、MFF、CollagenⅣ及Caspase1/Pro-Caspase1表达量均显著降低(P<0.05),Nephrin蛋白表达量显著升高(P<0.05)。[结论]甜茶树苷H能改善高糖诱导导致的MPC-5细胞损伤,其主要通过改变NLRP3/ASC/Caspase1通路中相关蛋白的表达,从而发挥对细胞的保护作用。

关键词：甜茶树苷H 高糖足细胞损伤作用

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高职会计专业“教学做一体化教学”模式的实践——以《货币资金核算与管理》课程教学为例

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职教论坛 2012年第11期28卷 44-46页

作者：杭瑞友王宏伟王芳江苏畜牧兽医职业技术学院

"教学做一体化"教学是基于行动体系的将理论教学与实践教学融为一体的高等职业教学模式,学习场所设在实训室(中心、农场、工厂、车间等),以学生为主体,教师为主导,教中学,学中做,学做结合,以求用中学,实中思,做得更好,培养学生的求职竞... 详细信息

"教学做一体化"教学是基于行动体系的将理论教学与实践教学融为一体的高等职业教学模式,学习场所设在实训室(中心、农场、工厂、车间等),以学生为主体,教师为主导,教中学,学中做,学做结合,以求用中学,实中思,做得更好,培养学生的求职竞争能力、岗位胜任能力和职业发展能力。

关键词：教学模式一体化教学实践

应用Excel处理饲料分析中的标准曲线问题

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饲料工业 2011年第15期32卷 52-55页

作者：任善茂陶勇江苏畜牧兽医职业技术学院

饲料中氟含量的测定、配合饲料混合均匀程度的测定（氯离子选择电极法）、饲料中磷的测定等测定方法中都要求绘制标准曲线,然后将用同法测定试样的数据在标准曲线上求出相对应的值。一般实验室都是在坐标纸上绘制标准曲线,手工绘制标准... 详细信息

饲料中氟含量的测定、配合饲料混合均匀程度的测定（氯离子选择电极法）、饲料中磷的测定等测定方法中都要求绘制标准曲线,然后将用同法测定试样的数据在标准曲线上求出相对应的值。一般实验室都是在坐标纸上绘制标准曲线,手工绘制标准曲线易受人为因素影响,不仅易产生较大误差,而且真正操作起来比较费时。笔者在工作过程中,利用Excel处理饲料分析中的标准曲线,先根据散点图确定变量之间的关系,根据确定的变量间的关系求得回归方程,再将试样测定数据代入回归方程求出相应值,

关键词：标准曲线 Excel 饲料分析离子选择电极法测定方法应用回归方程均匀程度

安徽地区新型鸭呼肠孤病毒的分离鉴定及其σC基因序列分析

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中国预防兽医学报 2024年第8期46卷 805-811页

作者：胡晓苗李薇李婷许夏澎薄宗义郭梦娇张小荣吴艳涛戴银张成成安徽省农业科学院畜牧兽医研究所/安徽省畜禽疫病研究中心/畜禽产品安全工程安徽省重点实验室安徽合肥230031 扬州市职业大学江苏扬州225009 扬州大学兽医学院/江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 河北省定州市农业农村局河北定州073000

为掌握新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)的最新流行特征,本研究收集安徽某地区鸭场出现肝组织肿胀、出血等临床症状的25份雏鸭肝脏及脾脏样品,利用RT-PCR方法检测NDRV。将RT-PCR检测为阳性的病料样品接种SPF鸡胚分离病毒,收获第3代尿囊液进行PCR... 详细信息

为掌握新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)的最新流行特征,本研究收集安徽某地区鸭场出现肝组织肿胀、出血等临床症状的25份雏鸭肝脏及脾脏样品,利用RT-PCR方法检测NDRV。将RT-PCR检测为阳性的病料样品接种SPF鸡胚分离病毒,收获第3代尿囊液进行PCR检测及病毒纯净性鉴定;同时对NDRV分离株的全长σC基因进行克隆并测序,将测序所得的分离株σC基因序列与GenBank中登录的21株禽源呼肠孤病毒参考株的相应基因序列及推导氨基酸序列进行相似性比对分析,利用Mega 7.0软件构建分离株基于σC基因的系统进化树,并进行σC基因编码氨基酸序列的突变分析。将分离株接种Vero细胞观察其体外培养特性,感染雏鸭进行致病性试验。结果显示,25份病料样品中检出3份NDRV阳性样品,将阳性病料样品接种鸡胚3 d内,鸡胚全部死亡,并伴有水肿、严重充血等现象;病毒纯净性试验结果显示,病料样品仅NDRV呈阳性,其他病原如鸭甲型肝炎病毒(DHV)、鸭坦布苏病毒(DTMUV)、禽呼肠孤病毒(ARV)、番鸭呼肠孤病毒(MDRV)、H9亚型禽流感病毒(H9N2 AIV)及禽腺病毒(FAdV)均为阴性。将3株分离株经测序分析,结果显示,其目的基因序列完全一致,为同一株病毒,并将其命名为NDRV AH株。对NDRV AH株σC基因进行序列相似性分析发现,NDRV AH株与其他NDRV参考株σC核苷酸序列的相似性为89.5%~99.0%,氨基酸序列的相似性为85.3%~98.9%。σC基因的遗传演化结果显示,NDRV AH株属于基因2型。σC氨基酸比对分析结果显示,与灭活疫苗TH11株(KC493571.1)相比,NDRV AH株aa67、aa93、aa100、aa132、aa151、aa158、aa212、aa253和aa298均发生了突变。将该分离株接种Vero细胞,可观察到细胞出现形态圆缩、细胞核聚集等细胞病变。致病性试验结果显示,感染雏鸭死亡率为40%,剖检发现雏鸭肾脏、肝脏出血,脾脏肿大,有轻微坏死灶或大面积坏死灶,有些脾脏质地较硬。可见大面积坏死灶。本研究揭示了NDRV在我国安徽地区的分子流行病学特征,为变异株疫苗研发奠定了基础,对NDRV感染的防治具有重要意义。

关键词：新型鸭呼肠孤病毒分离鉴定 σC基因进化分析致病性试验

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高等职业教育校企合作价值认同的思考

教育与职业 2012年第12期 18-20页

作者：杭瑞友葛竹兴朱其志江苏畜牧兽医职业技术学院骨干院校建设办公室江苏畜牧兽医职业技术学院骨干院校教务处江苏畜牧兽医职业技术学院高职教育研究所

校企合作是高等职业教育的必然选择。文章在分析高等职业教育校企合作面临的机遇及存在的问题的基础上,提出校企双方只有达成价值认同,合作意愿才能生成,进而建立校企合作价值共同体,校企合作才能走向深入。

关键词：高等职业教育校企合作价值认同