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基于微流控芯片的乳胶免疫凝集光电检测方法

仪器仪表学报 2013年第6期34卷 1395-1400页

作者：杨宁张荣标徐佩锋郭建江成立邵世和江苏大学电气信息工程学院镇江212013 江苏大学基础医学与医学技术学院镇江212013

乳胶免疫凝集技术是一项成熟的医学检测技术,然而传统检测过程中采用的免疫比浊法都是在宏观条件下进行的,该过程检出限较高且耗液量大。为此,提出一种基于微流控芯片的乳胶免疫凝集光电检测方法。针对乳胶免疫凝集实验过程的特点设计... 详细信息

乳胶免疫凝集技术是一项成熟的医学检测技术,然而传统检测过程中采用的免疫比浊法都是在宏观条件下进行的,该过程检出限较高且耗液量大。为此,提出一种基于微流控芯片的乳胶免疫凝集光电检测方法。针对乳胶免疫凝集实验过程的特点设计了专用微流控芯片,并创建了具有完整乳胶免疫凝集检测过程(包括进样、混合、反应和检测)的自动化系统平台。以类风湿因子在微流控芯片中的免疫凝集检测为例,对微尺度乳胶免疫凝集系统的最佳条件参数进行了测定与优化。实验结果表明,所设计的基于微流控芯片的乳胶免疫凝集光电检测系统对类风湿因子的检出限比宏观尺度免疫凝集法降低了约60%,且试剂用量是传统免疫比浊法的千分之一。

关键词：微流控芯片免疫凝集光电检测检出限

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神经生长因子减轻大鼠脑缺血再灌注耳蜗损伤

中国病理生理杂志 2002年第12期18卷 1486-1489页

作者：施宁华张志坚戴树宏江苏大学医学技术学院医学影像系江苏镇江212001

目的 :研究神经生长因子 (NGF)对脑缺血再灌注引起的听力及耳蜗损伤的作用。方法 :本研究给实验组大鼠脑缺血再灌注前后肌注NGF ,对照组动物肌注等量生理盐水 ,于处理前后对两组的听力损失及耳蜗结构变化加以比较。结果 :缺血 30min再灌... 详细信息

目的 :研究神经生长因子 (NGF)对脑缺血再灌注引起的听力及耳蜗损伤的作用。方法 :本研究给实验组大鼠脑缺血再灌注前后肌注NGF ,对照组动物肌注等量生理盐水 ,于处理前后对两组的听力损失及耳蜗结构变化加以比较。结果 :缺血 30min再灌注 60min和 2 4h ,实验组的听力损失明显小于对照组 (P <0 0 1 )。耳蜗的扫描和透射电镜观察发现 ,对照组毛细胞静纤毛粘连、部分脱落 ,外毛细胞肿胀、散在性坏死缺失 ,螺旋神经节神经元变性 ,线粒体水肿、嵴断裂。实验组耳蜗Corti’s器毛细胞及螺旋神经节神经元的损伤明显轻于对照组。结论 :NGF能减轻脑缺血再灌注引起的听力及耳蜗损伤。

关键词：神经生长因子脑缺血再灌注损伤耳蜗损伤大鼠

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飞秒激光诱导水光学击穿阈值

强激光与粒子束 2010年第1期22卷 49-52页

作者：王亚伟王立峰邓晓斌刘莹卜敏王楷文雷海娜江苏大学理学院江苏镇江212013 江苏大学机械学院江苏镇江212013 江苏大学基础医学与医学技术学院江苏镇江212013

为了研究飞秒激光诱导水光学击穿阈值随激光脉冲参数的变化关系,采用四阶RungeKutta方法对飞秒激光诱导水光学击穿的椭球体模型进行了不同脉宽(40～540fs)、波长(400～1200nm)和光斑尺寸(0～200μm)下的数值模拟。通过控制变量法得出阈... 详细信息

为了研究飞秒激光诱导水光学击穿阈值随激光脉冲参数的变化关系,采用四阶RungeKutta方法对飞秒激光诱导水光学击穿的椭球体模型进行了不同脉宽(40～540fs)、波长(400～1200nm)和光斑尺寸(0～200μm)下的数值模拟。通过控制变量法得出阈值光强与这些激光脉冲参数的关系曲线图,据此定性分析了阈值光强与激光脉冲参数的变化特征趋势。应用光强与功率、能量、辐照曝光量和电场强度之间的关系,得到了它们随激光脉冲参数脉宽、波长和光斑尺寸的动态关系,这为进一步研究飞秒激光与水和含水介质的相互作用提供了理论依据。

关键词：飞秒激光击穿阈值 Runge-Kutta方法水

let-7a和IL-6在食管鳞状细胞癌组织中的表达及两者的相关性

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细胞与分子免疫学杂志 2013年第11期29卷 1181-1184页

作者：陈德玉金丽艳朱龙萍牟笑王胜军毛朝明江苏大学附属医院肿瘤研究院江苏镇江212001 江苏大学基础医学与医学技术学院江苏镇江212001

目的探讨let-7a与IL-6在食管鳞状细胞癌(鳞癌)组织中的表达及两者的相关性。方法 40例食管鳞癌组织及相对应的癌旁正常组织中,采用茎环结构的逆转录实时定量PCR检测let-7a的表达情况;实时荧光定量PCR(qRT-PCR),免疫组化SP法检测IL-6的... 详细信息

目的探讨let-7a与IL-6在食管鳞状细胞癌(鳞癌)组织中的表达及两者的相关性。方法 40例食管鳞癌组织及相对应的癌旁正常组织中,采用茎环结构的逆转录实时定量PCR检测let-7a的表达情况;实时荧光定量PCR(qRT-PCR),免疫组化SP法检测IL-6的表达情况。结果 40例食管鳞癌组织中,let-7a在食管鳞癌组织中的表达显著低于癌旁正常组织(P<0.01);IL-6 mRNA在食管鳞癌组织中的表达显著高于癌旁正常组织(P<0.01);免疫组化结果显示IL-6蛋白在食管鳞癌组织中的阳性表达率显著高于癌旁正常组织(P<0.01);相关性分析显示let-7a和IL-6的mRNA在食管鳞癌组织中的表达负相关(r=-0.974,P<0.01);IL-6蛋白阳性表达组的let-7a的表达量低于IL-6阴性组(P<0.05)。结论食管鳞癌组织中let-7a表达下调,IL-6表达上调且两者负相关。

关键词： let-7a IL-6 食管鳞状细胞癌

PKH26标记大鼠骨髓间质干细胞的实验研究

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中国生物医学工程学报 2006年第6期25卷 745-749,754页

作者：杨欢许文荣朱伟王兴忠乔纯胡嘉波钱晖陈永昌江苏大学医学技术学院镇江市检验医学重点实验室镇江212001

目的建立PKH26标记大鼠骨髓间质干细胞(MSCs)的方法,并探讨标记MSCs的基本生物学活性。方法大鼠MSCs按PKH26标记程序进行标记后培养,采用激光共聚焦显微镜、流式细胞分析仪等观察细胞生长状态和荧光标记活性变化;应用RT-PCR检测标记后M... 详细信息

目的建立PKH26标记大鼠骨髓间质干细胞(MSCs)的方法,并探讨标记MSCs的基本生物学活性。方法大鼠MSCs按PKH26标记程序进行标记后培养,采用激光共聚焦显微镜、流式细胞分析仪等观察细胞生长状态和荧光标记活性变化;应用RT-PCR检测标记后MSCs的GAPDH、nucleostemin及Bmi-1基因的表达;选用碱性磷酸酶染色、Von Kossa染色及骨形成蛋白3(BMP3)基因表达分析等技术,观察标记后MSCs体外分化成骨细胞的特性。结果PKH26标记后细胞呈红色荧光,荧光的强度随着PKH26浓度的增加而递增,并与传代时间和代数相关;标记后细胞生长状态良好,基本生长特性如传代培养和生长曲线无明显改变;细胞GAPDH、nucleostemin及Bmi-1基因表达未见改变;标记MSCs诱导后ALP、Von Kossa染色阳性,呈现典型的成骨细胞形态和生物学特征,并表达BMP3基因。结论PKH26可稳定标记大鼠骨髓MSCs并能传代培养,标记后细胞形态、生长活力及多向分化潜能等无明显影响,该技术可用于追踪MSCs转归、可塑性及干细胞移植方面的实验研究。

关键词：骨髓间质干细胞 PKH26 成骨细胞 RT-PCR

Napsin A基因转染干预A549细胞的上皮-间质转化

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解剖学报 2011年第3期42卷 350-355页

作者：管淑红郑金旭汤艳宋萍许清刘继柱江苏大学基础医学与医学技术学院江苏镇江212013 江苏大学附属医院呼吸科江苏镇江212001

目的探讨Napsin A基因转染至A549细胞对其上皮-间质转化(EMT)的作用和机制。方法采用慢病毒载体质粒PLJM1构建重组质粒PLJM1-Napsin A,将Napsin A基因转染至A549细胞染色体中并鉴定。用转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激A549细胞构建体外EM... 详细信息

目的探讨Napsin A基因转染至A549细胞对其上皮-间质转化(EMT)的作用和机制。方法采用慢病毒载体质粒PLJM1构建重组质粒PLJM1-Napsin A,将Napsin A基因转染至A549细胞染色体中并鉴定。用转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激A549细胞构建体外EMT模型,倒置显微镜下动态观察细胞形态学的变化,观察Napsin A基因转染对A549细胞在体外EMT模型中细胞EMT和表达黏着斑激酶(FAK)的影响。结果重组质粒PLJM1-Napsin A测序结果与设计序列完全符合,转Napsin A基因A549细胞表达Napsin A蛋白显著高于非转基因细胞组(P<0.01)。细胞经TGF-β1刺激后形态上演变为间质细胞,E钙蛋白的mRNA和蛋白表达水平明显下调(P<0.01),相反Ⅰ型胶原则显著上调(P<0.01),提示体外构建EMT模型获得成功。转Napsin A基因A549细胞在TGF-β1干预后,其细胞形态间质改变、E钙蛋白和Ⅰ型胶原的表达量也发生相似变化趋势,但变化幅度显著变小(其中E钙蛋白:P<0.01,Ⅰ型胶原:P<0.05)。体外EMT模型中,细胞FAK蛋白表达量增多(P<0.01),但转基因细胞上调趋势明显小于未转基因细胞(P<0.01)。结论转染Napsin A基因至A549细胞可以部分阻滞细胞EMT进程,其作用机制可能与抑制整合素信号转导通路有关。

关键词： Napsin A 基因转染 A549细胞上皮一间质转化反转录一聚合酶链反应免疫印迹法

OmpR与PhoP高渗应激下交叉调节伤寒沙门菌基因表达

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华中师范大学学报（自然科学版） 2010年第4期44卷 633-638页

作者：生秀梅徐顺高张海方许化溪黄新祥江苏大学医学技术学院江苏镇江212013

为了探寻OmpR和PhoP之间的交叉调节关系,构建了ompR-phoP双缺陷变异株,运用基因芯片分析技术比较了伤寒沙门菌ompR缺陷株、phoP缺陷株及ompR-phoP双缺陷株之间基因表达谱的差异.结果显示OmpR与PhoP共同激活11个基因的转录,主要为外膜孔... 详细信息

为了探寻OmpR和PhoP之间的交叉调节关系,构建了ompR-phoP双缺陷变异株,运用基因芯片分析技术比较了伤寒沙门菌ompR缺陷株、phoP缺陷株及ompR-phoP双缺陷株之间基因表达谱的差异.结果显示OmpR与PhoP共同激活11个基因的转录,主要为外膜孔蛋白相关基因、脂多糖修饰相关基因等,两者在调节特定的膜蛋白、孔蛋白及表面结构成分的表达水平方面发挥着协同作用,OmpR与PhoP对未知功能蛋白基因t0563、t0564也具有协同激活效应,值得进一步关注.OmpR与PhoP共同抑制nanT的转录,阻止唾液酸的转运.另外,ompR缺陷株和phoP缺陷株中未见变化,而ompR-phoP双缺陷变异株中差异表达基因也可能是OmpR和PhoP的共同调节元,但需要进一步验证.

关键词：伤寒沙门菌 OmpR PhoP 基因表达调节

白血病细胞、多种肿瘤细胞及胃癌组织中pokemon基因的定量检测

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临床检验杂志 2008年第1期26卷 42-45页

作者：徐静许文荣钱晖朱伟李继刚周洪兴周忠海阴晴司煜安张蕾蕾江苏大学医学技术学院江苏镇江212013 江苏大学附属医院江苏镇江212001

目的建立检测pokemon基因表达的实时荧光定量PCR的方法,用以研究pokemon在白血病细胞、多种肿瘤细胞株及胃癌组织中的表达水平。方法通过RT-PCR、T-A克隆、real-time PCR等方法精确测定并比较pokemon基因在白血病细胞、人结肠癌细胞株(S... 详细信息

目的建立检测pokemon基因表达的实时荧光定量PCR的方法,用以研究pokemon在白血病细胞、多种肿瘤细胞株及胃癌组织中的表达水平。方法通过RT-PCR、T-A克隆、real-time PCR等方法精确测定并比较pokemon基因在白血病细胞、人结肠癌细胞株(SW480)、人胃癌细胞株(SGC)、人肺癌细胞株(LTEP)、人髓系白血病细胞株(U937)、人前列腺癌细胞株(PC3)、人宫颈癌细胞株(HELA)、人内皮细胞株(UEVC-304)、健康人外周血单个核细胞(PBMC)、胃癌组织中的表达水平。绘制pokemon基因real-time PCR的标准曲线。结果急性淋巴细胞白血病(ALL)中pokemon的表达显著高于急性粒细胞白血病(AML)和慢性粒细胞白血病(CML)及健康人PBMC(P<0.05);SW480中的表达量明显高于SGC、LTEP、U937、PC3、HELA和UEVC-304(P<0.05);胃癌组织表达量高于胃癌旁组织,阳性率为5/7。结论建立的测定pokemon基因表达的real-timePCR方法稳定、准确,pokemon基因可以作为某些肿瘤的一个新的靶点,其表达水平的检测可作为判断某些肿瘤发生的参考指标。

关键词： pokemon 肿瘤实时定量PCR 白血病

标准菌株和临床菌株oipA基因的检测及其核苷酸序列比对

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中国免疫学杂志 2007年第2期23卷 116-117页

作者：邵世和王华刘木清韩晓红段秀杰江苏大学医学技术学院镇江212001 北华大学医学院长春132001 江苏大学医学院镇江212001 江苏大学附属医院镇江212001

目的:检测幽门螺杆菌标准菌株NCTC11637及临床分离菌株Hp1和Hp2的oipA基因,分析其核苷酸序列,比对其与国际标准菌株Hp26695的同源性。方法:常规方法培养幽门螺杆菌,提取DNA,PCR法扩增oipA基因,检测其核苷酸序列,并比较其与Hp26695的同... 详细信息

目的:检测幽门螺杆菌标准菌株NCTC11637及临床分离菌株Hp1和Hp2的oipA基因,分析其核苷酸序列,比对其与国际标准菌株Hp26695的同源性。方法:常规方法培养幽门螺杆菌,提取DNA,PCR法扩增oipA基因,检测其核苷酸序列,并比较其与Hp26695的同源性。结果:NCTC11637及Hp1、Hp2均表达oipA基因。其核苷酸序列与Hp26695比对,NCTC11637有48个突变位点、Hp1有48个突变位点、Hp2有50个突变位点,同源性均为94%。NCTC11637与Hp1的同源性为100%、与Hp2的同源性为97%。结论:NCTC11637、Hp1、Hp2均表达oipA基因,但不同菌株oipA基因的核苷酸序列有所不同。

关键词：幽门螺杆菌 oipA基因序列比对