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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会2016年学术研讨会

作者：田文静郁川陈桂华廖成水翟崇凯张春杰程相朝河南科技大学动物疫病与公共安全重点实验室洛阳职业技术学院

为研究携带TAT-Apoptin重组减毒鼠伤寒沙门菌对肿瘤细胞的作用,将构建好的能稳定携带TAT-Apoptin的重组减毒沙门菌体外感染黑色素瘤细胞B16F10和肺癌细胞LL/2,Western-blot检测TAT-Apoptin在不同肿瘤细胞内的表达情况,CCK-8法检测不同MO... 详细信息

为研究携带TAT-Apoptin重组减毒鼠伤寒沙门菌对肿瘤细胞的作用,将构建好的能稳定携带TAT-Apoptin的重组减毒沙门菌体外感染黑色素瘤细胞B16F10和肺癌细胞LL/2,Western-blot检测TAT-Apoptin在不同肿瘤细胞内的表达情况,CCK-8法检测不同MOI及感染时间条件下细胞增殖情况,TUNEL法检测细胞凋亡情况,并分析Caspase-1,3,6,8,9和细胞色素C等信号蛋白的表达情况。Western-blot结果显示,重组菌感染两细胞后,均可检测到约20KD的TAT-Apoptin蛋白条带;CCK-8法实验结果表明,MOI浓度越大,抑制率越高,并且随着感染时间的增加,抑制率逐渐下降,说明重组菌抑制B16F10和LL/2细胞增殖具有浓度依赖性和时间依赖性;重组菌感染B16F10、LL/2细胞24h后,荧光显微镜下可观察到TUNEL阳性细胞;这表明重组菌能够诱导B16F10和LL/2细胞凋亡;进一步对凋亡信号蛋白分析发现,重组菌感染肿瘤细胞B16F10和LL/2后,能诱导Caspase-3,Caspase-6,Caspase-8,Caspase-9和细胞色素C的表达,互补菌对照组和细胞培养空白组均不能诱导上述信号蛋白的表达,此外Caspase-1在LL/2细胞中表达显著升高,以上结果表明,重组减毒鼠伤寒沙门菌能够有效递呈TAT-Apoptin基因在黑色素瘤细胞B16F10和肺癌细胞LL/2内表达,且能够诱导这两种肿瘤细胞凋亡,其可能通过外源性死亡受体途径和内源性线粒体途径诱导肿瘤细胞凋亡,并且诱导肺癌细胞LL/2凋亡还与炎症相关因子Caspase-1的介导有关。

关键词：减毒鼠伤寒沙门菌 TAT-Apoptin 表达信号通路抗肿瘤

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鸡EED基因的克隆与原核表达

鸡EED基因的克隆与原核表达

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十四次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会第二十三次学术研讨会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会第三次学术研讨会、中国兽医病理学家第三次学术研讨会

作者：郁川何雷廖成水贾艳艳余祖华张春杰程相朝河南科技大学动物疫病与公共安全重点实验室洛阳职业技术学院

EED(embryonic ectoderm development)是由535个氨基酸构成的胚胎外胚层发育蛋白,是PRC2及其他相关复合物的重要组成部分,在胚胎发育、肿瘤发生和转移以及维持干细胞中起重要作用。研究发现靶向EZH2-EED相互作用的小分子抑制剂可能抑制P... 详细信息

EED(embryonic ectoderm development)是由535个氨基酸构成的胚胎外胚层发育蛋白,是PRC2及其他相关复合物的重要组成部分,在胚胎发育、肿瘤发生和转移以及维持干细胞中起重要作用。研究发现靶向EZH2-EED相互作用的小分子抑制剂可能抑制PRC2的致癌活性。但是EED基因在肿瘤发展中的作用机制并不完全清楚。为了以鸡肿瘤性疾病为模型,探讨鸡EED在肿瘤中的作用,本研究对鸡EED基因进

关键词： EED 原核表达 PMD

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轮作对禾谷孢囊线虫田间种群数量的影响

轮作对禾谷孢囊线虫田间种群数量的影响

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中国植物病理学会2015年学术年会

作者：罗书介王高峰肖炎农肖雪琼湖北省植物病害监测与安全控制重点实验室华中农业大学植物科技学院

禾谷孢囊线虫(Heterodera avenae Wollenweber 1924),又名燕麦孢囊线虫,是世界性分布重要植物病原线虫,可导致小麦减产30%0%。油菜、蚕豆和豌豆与小麦的种植季节相同,我们分析了小麦田中次年轮作油菜、蚕豆或豌豆,对禾谷孢囊线虫种群数...

禾谷孢囊线虫(Heterodera avenae Wollenweber 1924),又名燕麦孢囊线虫,是世界性分布重要植物病原线虫,可导致小麦减产30%0%。油菜、蚕豆和豌豆与小麦的种植季节相同,我们分析了小麦田中次年轮作油菜、蚕豆或豌豆,对禾谷孢囊线虫种群数量的影响,以期为轮作防治线虫病害的方法提供理论依据。调查大田中的小麦分别与油菜、蚕豆、豌豆进行轮作,对田间禾谷孢囊线虫孢囊和卵基数的影响。结果表明轮作蚕豆使发病区孢囊基数减少45%,轮作油菜和豌豆则分别使其减少42%和37%。此外,轮作三种作物都使孢囊内的卵数目减少,其中豌豆使卵数量减少84%,高于油菜的64%和蚕豆的57%。分析轮作导致线虫种群数目变化的原因,结果发现豌豆根渗出液可促进孢囊的孵化,21天时孵化量(19.3条/个),高于油菜和小麦、水对照(均为9条/个),而蚕豆根渗出液处理后孢囊孵化仅为2条/个。幼虫存活试验表明,处理3天后蚕豆根渗出液有微弱的杀死线虫的作用,存活率约91.5%,而另外油菜、豌豆和小麦处理后的线虫存活率均接近100%。据此,我们推测轮作条件下豌豆和油菜作物都可以诱导线虫的孢囊正常孵化,从而使孢囊内卵的基数减少,而孵化的线虫由于找不到寄主而不能完成生活史,导致田间最终的孢囊数目减少;蚕豆对孢囊孵化诱导能力稍弱,但是对线虫有微弱的杀死作用,最终仍可以使田间的孢囊数目减少。根据以上结果,禾谷孢囊线虫危害较为严重的小麦田,可以结合实际情况换种油菜、蚕豆或豌豆轮作从而暂停种植小麦一年或几年的策略进行防控。

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甘草多糖对单核细胞增生性李斯特菌体内外生长的影响

甘草多糖对单核细胞增生性李斯特菌体内外生长的影响

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会2016年学术研讨会

作者：廖成水田文静郁川贾艳艳张春杰余祖华程相朝河南科技大学动物疫病与公共安全重点实验室洛阳职业技术学院

目的:探讨甘草多糖对单核细胞增生性李斯特菌（Listeria monocytogenes,Lm）体内外生长的影响。方法:采用平板计数法和荧光显微镜、分光光度法及Bliss法分别分析甘草多糖对Lm长速度和生物被膜形成的影响及计算细菌对小鼠半数致死量(LD)... 详细信息

目的:探讨甘草多糖对单核细胞增生性李斯特菌（Listeria monocytogenes,Lm）体内外生长的影响。方法:采用平板计数法和荧光显微镜、分光光度法及Bliss法分别分析甘草多糖对Lm长速度和生物被膜形成的影响及计算细菌对小鼠半数致死量(LD)。观察低剂量（1 mg/kg）、中剂量（10mg/kg）和高剂量（100 mg/kg）甘草多糖对感染100×LD Lm小鼠的保护力。小鼠感染0.01×LD的Lm后1、7、14、21、28 d和35 d剖杀小鼠,检测脾脏、肝脏和肺脏中Lm分布的消长情况。结果:低浓度时（10、20μg/m L和50μg/m L）,甘草多糖随着浓度增加对Lm标准菌株10403S生长速度和生物被膜形成的促进呈上升趋势,但高浓度时（100μg/m L和200μg/m L）这种促进作用逐渐降低。Lm口服感染小鼠的LD为2.70×10～8 CFU。高剂量甘草多糖对于100×LD的Lm感染可提供50.00%的保护力。0.01×LD的Lm感染小鼠,随着甘草多糖浓度增加小鼠脾脏、肝脏和肺脏的细菌量逐渐减少。结论:低浓度甘草多糖在体外对Lm的生长具有促进作用,但随着浓度增高促进强度逐渐降低。而甘草多糖可以提高小鼠抵抗Lm的感染。

关键词：甘草多糖单核细胞增生性李斯特菌生物被膜抑制

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针刺百会透曲鬓穴对MCAO/R大鼠血清及脑组织炎症因子表达的影响

针刺百会透曲鬓穴对MCAO/R大鼠血清及脑组织炎症因子表达的影响

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作者：侯尚梅黑龙江中医药大学

学位级别：硕士

目的:本文通过研究百会透曲鬓这一针刺方法对脑缺血再灌注损伤保护作用及其作用机理,从调节炎性细胞因子和血管内皮细胞黏附等角度,探究该针刺方法在脑缺血再灌注损伤中的作用及机制。为缺血性脑血管病的病理生理机制研究及传统中医学... 详细信息

目的:本文通过研究百会透曲鬓这一针刺方法对脑缺血再灌注损伤保护作用及其作用机理,从调节炎性细胞因子和血管内皮细胞黏附等角度,探究该针刺方法在脑缺血再灌注损伤中的作用及机制。为缺血性脑血管病的病理生理机制研究及传统中医学针刺疗法在本领域的广泛应用提供实验依据。方法:雄性SD大鼠54只,随机分为假手术组、模型组、针刺组,每组18只。采用线栓法制大鼠脑缺血再灌注损伤模型,通过神经功能评分判断模型是否复制成功。针刺组大鼠患侧给予针刺“百会透曲鬓”穴治疗,每日透刺2次,每12小时一次,各30min,连续3日。疗程结束后给予神经功能评分和水迷宫测试,光镜下观察各组大鼠海马组织的形态结构变化,透射电镜观察海马内皮细胞超微结构,ELISA法检测血清和脑组织IL-6和TNF-ɑ表达,免疫组化法检测ICAM-1、VCAM-1在各组大鼠脑组织中表达量。结果:1.与模型组比较,针刺组大鼠神经功能缺损评分在24h、48h、72h明显降低(**P<0.05)。2.与模型组比较,针刺治疗72小时后,针刺百会透曲鬓穴组的平台穿越次数72h明显增加(P<0.05);针刺组逃避潜伏期72h显著缩短(P<0.05),说明针刺百会透曲鬓穴能够不同程度地改善脑缺血再灌注损伤大鼠学习记忆能力和神经功能。3.与模型组比较,针刺组大鼠ICAM-1、VCAM-1表达显著降低,表明针刺能阻止细胞间的粘附和信号传递。4.与模型组比较,针刺百会透曲鬓能抑制血清和脑组织炎症因子IL-6和TNF-α表达。5.针刺组大鼠海马CA1区锥体细胞排列紧密,在4层左右,细胞呈多边形,细胞体积大,细胞核清晰,胞质丰富,毛细血管内皮细胞结构清晰。针刺组毛细血管内皮细胞完整,细胞外侧基底膜清晰,胞质丰富,线粒体有絮状变性,粗面内质网清晰,核质比正常,胞核清晰,毛细血管的基本结构较好。表明针刺百会透曲鬓穴可维持海马内皮细胞TJ正常结构,改善神经细胞的超微结构。结论:1、针刺百会透曲鬓可明显减轻MCAO/R大鼠的神经功能缺损程度和海马神经元的缺血损伤,促进脑缺血再灌注损伤大鼠学习记忆能力和神经功能恢复。2、针刺百会透曲鬓能抑制神经炎症,该作用与抑制炎症因子IL-6、TNF-α的表达和下调脑缺血区粘附分子ICAM-1、VCAM-1蛋白表达,阻止细胞间的粘附和信号传递相关。

关键词：脑缺血再灌注损伤百会透曲鬓 ICAM-1 VCAM-1 TNF-α IL-6

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新型重组减毒鸡白痢沙门菌ΔcrpΔasdC79-13（pcD-asd）平衡致死系统的构建及其特性

新型重组减毒鸡白痢沙门菌ΔcrpΔasdC79-13（pcD-asd）平衡致死...

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中国兽医病理学2017年学术研讨会暨兽医病理学分会第九...

作者：翟崇凯郁川程相朝余祖华何雷廖成水张春杰李银聚田文静河南科技大学动物疫病与公共安全重点实验室洛阳职业技术学院

为开发新型重组减毒鸡白痢沙门菌口服活疫苗载体。本研究以pc DNA3.1-Zeo（+）质粒为基础,用沙门菌asd基因替代其氨苄抗性基因Amp,构建不含抗性基因的真核互补质粒pc D-asd;再将互补质粒pc D-asd电转入沙门菌ΔcrpΔasd C79-13,构建Δcr... 详细信息

为开发新型重组减毒鸡白痢沙门菌口服活疫苗载体。本研究以pc DNA3.1-Zeo（+）质粒为基础,用沙门菌asd基因替代其氨苄抗性基因Amp,构建不含抗性基因的真核互补质粒pc D-asd;再将互补质粒pc D-asd电转入沙门菌ΔcrpΔasd C79-13,构建ΔcrpΔasd C79-13（pc D-asd）平衡致死系统,研究其生物学特性,进一步将报告基因EGFP克隆入pc D-asd,构建重组菌株ΔcrpΔasd C79-13（pc D-asd-EGFP）,感染鸡胚成纤维（CEF）细胞,Western Blot分析该系统递呈外源抗原的能力。PCR、酶切及测序结果表明ΔcrpΔasd C79-13（pc D-asd）平衡致死系统构建成功;生物学特性鉴定结果表明,其血清型与亲本株ΔcrpΔasd C79-13及野生株C79-13保持一致;其生化特性与亲本株基本相近,但与野毒株相比发生明显变化;生长速度也更为缓慢,对氨苄抗生素敏感;重组菌株ΔcrpΔasd C79-13 （pc D-asd）的LD50较野生株C79-13降低了3.4×104倍;Western Blot结果发现,重组菌株感染CEF细胞后,可表达大小约为27KDa EGFP蛋白。以上结果证实,本研究成功构建了新型重组减毒鸡白痢沙门菌ΔcrpΔasd C79-13（pc D-asd）株,其能够有效递呈外源抗原,该重组菌株有潜力作为安全、稳定、高效表达外源基因的口服重组活疫苗载体。

关键词：减毒沙门菌无抗性基因平衡致死系统活疫苗载体

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幼园无症状枝条苹果树腐烂病菌带菌率检测及树体不同月份抗病性差异分析

幼园无症状枝条苹果树腐烂病菌带菌率检测及树体不同月份抗病性差...

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中国植物病理学会2019年学术年会

作者：郭斐然贺艳婷郭衍李晨黄丽丽冯浩旱区作物逆境生物学国家重点实验室西北农林科技大学植物保护学院

苹果树腐烂病是由黑腐皮壳属真菌Valsa mali侵染引起的枝干病害。病菌在田间可周年传播,且入侵苹果组织后具有潜伏侵染的特性。因此,早期监测预警对苹果树腐烂病的综合防控具有重要意义。本研究按照五点取样法分别选取陕西省宝鸡市扶风... 详细信息

苹果树腐烂病是由黑腐皮壳属真菌Valsa mali侵染引起的枝干病害。病菌在田间可周年传播,且入侵苹果组织后具有潜伏侵染的特性。因此,早期监测预警对苹果树腐烂病的综合防控具有重要意义。本研究按照五点取样法分别选取陕西省宝鸡市扶风县幼园和苗圃以及洛川县幼园的5株果树,每个月每株果树按东南西北中采集一年生无症状枝条,利用巢氏PCR技术对枝条的带菌率,及枝条致病力进行了检测。结果表明,陕西省宝鸡市扶风县的幼园和洛川县试验示范站的幼园中的枝条均不同程度的带有苹果树腐烂病菌。扶风县的苗圃带菌率极低。表明树龄与树体带菌率有相关性。幼园带菌率分析发现,不同月份检测到的带菌率存在差异,3—4月带菌率较低,10—12月带菌率最高,可见,病菌潜伏侵染随时间推移逐渐加强。另外同一树体不同月份的抗性水平也存在差异,在4月的抗病性弱,11—12月抗病性强,可能与寄主营养差异水平存在一定关系。本研究证明苹果树腐烂病菌可以潜伏在寄主植物组织中越冬,同时树体的抗病性会在不同月份存在差异,可见,研究结果为病害综合防控提供了重要理论依据。

关键词：苹果树腐烂病菌幼园无症状果树带菌率抗病性

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MDV-miR-M4对MDCC-MSB-1细胞增殖的影响

MDV-miR-M4对MDCC-MSB-1细胞增殖的影响

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中国兽医病理学2017年学术研讨会暨兽医病理学分会第九次全国会员代表大会

作者：余祖华廖成水郁川何雷张春杰程相朝河南科技大学动物疫病与公共卫生重点实验室洛阳职业技术学院

鸡马立克氏病毒(Marek’s disease virus)是鸡的一种具有极强致瘤性的淋巴组织增生性病毒,病毒的基因组中存在着大量的Micro RNA的表达。MDV分为三个血清型,其中MDV-miR-M4则是MDV1在感染鸡之后早期表达的miRNA之一,其在MDV1致病过程中...

鸡马立克氏病毒(Marek’s disease virus)是鸡的一种具有极强致瘤性的淋巴组织增生性病毒,病毒的基因组中存在着大量的Micro RNA的表达。MDV分为三个血清型,其中MDV-miR-M4则是MDV1在感染鸡之后早期表达的miRNA之一,其在MDV1致病过程中可发挥重要的调控作用。目的:为了探究马立克氏病毒对鸡MDCC-MSB-1细胞增殖的影响,为进一

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多西环素对荷瘤小鼠子宫内膜癌组织中CCAT1、MMP-2及TIMP-2表达的影响

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中国免疫学杂志 2020年第21期36卷 2619-2623页

作者：魏旭静李林张红真王景徐静河北医科大学第一医院产科石家庄050000

目的:探讨多西环素对小鼠子宫内膜癌组织中CCAT1、MMP-2及TIMP-2表达的影响。方法:将40只荷瘤小鼠随机分为模型组、多西环素低、中和高剂量组,每组10只。多西环素低、中和高剂量组分别腹腔注射盐酸多西环素5、10、20 mg/ml,模型组和对... 详细信息

目的:探讨多西环素对小鼠子宫内膜癌组织中CCAT1、MMP-2及TIMP-2表达的影响。方法:将40只荷瘤小鼠随机分为模型组、多西环素低、中和高剂量组,每组10只。多西环素低、中和高剂量组分别腹腔注射盐酸多西环素5、10、20 mg/ml,模型组和对照组给予等量生理盐水,连续给药7 d。7 d后处死小鼠,剥离肿瘤称重,测定肿瘤抑制率,采用HE染色观察各组小鼠肿瘤组织病理变化情况。采用RT-PCR检测肿瘤组织CCAT1、MMP-2及TIMP-2 mRNA表达水平。免疫组化法检测各组MMP-2、TIMP-2、PCNA和Ki67表达水平以及MMP-2/TIMP-2比值。结果:与模型组相比,多西环素低、中、高剂量组小鼠肿瘤细胞体积明显减小,排列稀疏,多西环素组高剂量小鼠肿瘤细胞可见大面积坏死核碎裂,肿瘤抑制率明显上升(P水平明显下降(P水平明显升高(P水平均明显下降(P水、TIMP-2 mRNA和蛋白表达水平、PCNA和Ki67蛋白表达水平差异有统计学意义(P<0.05)。结论:多西环素可能通过下调CCAT1、MMP-2,PCNA、Ki67表达,上调TIMP-2表达,对子宫内膜癌生长和肿瘤细胞增殖起抑制作用。

关键词：多西环素子宫内膜癌 CCAT1 MMP-2 TIMP-2 PCNA Ki67

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健脾补肾益气养阴法对糖尿病模型大鼠降糖作用与机制的研究

健脾补肾益气养阴法对糖尿病模型大鼠降糖作用与机制的研究

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作者：吴颂黑龙江中医药大学

学位级别：硕士

目的:观察以健脾补肾、益气养阴法对链脲佐菌素(STZ)所致糖尿病(DM)大鼠的降血糖作用研究及机制,为其临床应用提供可靠的实验依据。方法:根据中医理论并结合导师多年临床经验和现代医学对中药的研究,我们认为DM的病机特点是“脾肾亏虚,... 详细信息

目的:观察以健脾补肾、益气养阴法对链脲佐菌素(STZ)所致糖尿病(DM)大鼠的降血糖作用研究及机制,为其临床应用提供可靠的实验依据。方法:根据中医理论并结合导师多年临床经验和现代医学对中药的研究,我们认为DM的病机特点是“脾肾亏虚,气阴两虚”从而提出以“健脾补肾、益气养阴”的治疗原则,并精心组成御唐丸,在导师指导下开展实验研究。Wistar大鼠140只雌雄各半,其中20只空白对照组给予基础饲料喂养,自由摄水。造模组给予高糖高脂饲料,连续4周后给予一次性腹腔注射STZ溶液,复制2DM动物模型大鼠,选择造模成功且血糖值相近的大鼠95只,随机分为5组(每组19只):模型组、中低组、中高组、中对组、西对组,观察中高、低不同剂量对大鼠的一般情况、FBG、检测肝糖原、HbA1c、FINS、肝脏组织病理学的影响。结果:1、高脂饮食联合小剂量STZ成功复制2DM动物模型大鼠,健脾补肾益气养阴法能明显改善STZ-DM模型大鼠的生存质量。2、对大鼠血糖的影响:给药30天,中高组可明显降低大鼠血糖水平,与各治疗组比较效果显著。3、对HbA1c的影响:中高组可使HbA1c有一定的降低作用。4、对FINS、ISI的影响:中高组对胰岛素水平有一定提高,并有效改善胰岛素敏感性,与其它各治疗组比较效果显著。结论:1、健脾补肾益气养阴法可降低HbA1c、升高FINS水平,从而降低模型大鼠血糖。2、研究发现健脾补肾益气养阴法对肝脏的保护机制可能通过降低血糖、血脂、提高胰岛素敏感指数,从而对STZ-DM大鼠的肝脏起到了早期的保护作用,其机理值得深入研究。

关键词：健脾补肾糖尿病血糖

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