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杜鹃素对映体的分离及其在中药材中的含量测定

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中国现代应用药学 2024年第1期41卷 80-87页

作者：晏堂楼丽张苏霞余丽双刘永静福建中医药大学药学院福州350000

目的建立杜鹃素对映体分离的HPLC方法,并应用于满山红和照山白药材中的对映体含量测定。方法用HPLC对杜鹃素对映体进行拆分,优化手性柱种类、流动相比例、流速和柱温的色谱条件。对手性热力学拆分进行探讨,计算杜鹃素对映体在色谱柱... 详细信息

目的建立杜鹃素对映体分离的HPLC方法,并应用于满山红和照山白药材中的对映体含量测定。方法用HPLC对杜鹃素对映体进行拆分,优化手性柱种类、流动相比例、流速和柱温的色谱条件。对手性热力学拆分进行探讨,计算杜鹃素对映体在色谱柱分离的焓变、熵变、焓变差值和熵变差值等热力学参数。并在最佳分离条件测定了满山红和照山白2种药材中2个对映体的含量。结果确定了杜鹃素的2个对映体的最佳分离条件:色谱柱为Chiralcel OJ-RH(4.6 mm×150 mm,5μm),乙腈-水(40∶60)为流动相等度洗脱,流速为0.5 mL·min^(–1),柱温为25℃,检测波长为295 nm。在最佳分离条件下,杜鹃素对映体的分离度达到1.5,表明杜鹃素的2个对映体能够完全分离。当柱温为20~35℃时,分离因子随着温度的升高呈降低趋势,2个对映体的lnα与1/T呈良好的线性关系,手性拆分过程受焓的控制。将所建立的杜鹃素对映体分离方法应用于中药材满山红、照山白中的杜鹃素对映体含量测定,杜鹃素的2个对映体线性范围分别为0.718~57.44μg·mL^(–1)和1.28~102.24μg·mL^(–1),在3个批次的满山红中杜鹃素的2个对映体的平均含量分别为0.228 2和0.466 2 mg·g^(–1);3个批次的照山白中杜鹃素的2个对映体的平均含量分别为0.416 8和0.707 3 mg·g^(–1)。结论该方法简便高效,适用于中药中杜鹃素对映体的含量测定。

关键词：杜鹃素对映体高效液相色谱法满山红照山白含量测定手性分离

中国个人信息保护经验研究的方法论反思——欧盟经验的启示

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智能社会研究

智能社会研究 2024年第3期003卷 85-113页

作者：张月明李汶龙李汶锴李子豪李傲兰比利时根特大学法律与犯罪学院英国爱丁堡大学数据、社会与文化研究中心CDCS 比利时布鲁塞尔自由大学法学院英国格拉斯哥大学法学院美国斯坦福大学法学院英国伦敦玛丽女王大学法学院

法教义学与法学经验研究的范式之争由来已久,但学界对经验研究方法如何推进某一具体部门法的发展和变革洞见甚少。本文聚焦于个人信息保护领域,探讨经验研究方法在个人信息保护研究中的应用与效果。本文采用系统文献综述法,对以英文公... 详细信息

法教义学与法学经验研究的范式之争由来已久,但学界对经验研究方法如何推进某一具体部门法的发展和变革洞见甚少。本文聚焦于个人信息保护领域,探讨经验研究方法在个人信息保护研究中的应用与效果。本文采用系统文献综述法,对以英文公开发表的《通用数据保护条例》(GDPR)相关的经验研究文献进行系统分析,从研究问题和研究方法两个角度进行了全面述评。在综述过程中,归纳了GDPR相关经验研究着力回答的六个研究面向及每种面向形成的方法范式,梳理了相关研究的趋势、方法、理念和效果。问题维度方面,经验研究可以为知情同意、告知义务、数据权利、大众认知、市场竞争等问题提供事实证据的支持;研究方法方面,呈现传统定性、定量实证研究方法与新兴计算法学方法并存的图景,跨学科研究有所增加,统计学方法、机器学习与人工智能等方法逐渐占有一席之地。未来在中国开展针对《个人信息保护法》的经验研究,可选择性借鉴欧盟相关研究的经验,更应立足中国立法的具体场景,为《个人信息保护法》的理解提供可靠的事实依据,以此推动法律的实施和解读。

关键词：《个人信息保护法》《通用数据保护条例》(GDPR) 个人信息保护经验研究系统文献综述

基于中药整体成分的参白纳米混悬剂大鼠体内药代动力学分析

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中国实验方剂学杂志 2024年第2期30卷 164-171页

作者：刘伟婷简凤娇黄可心李孝栋福建中医药大学药学院福州350122

目的:明确参白纳米混悬剂中药物整体成分大鼠体内药代动力学测定方法的科学性,为多成分复杂体系中药制剂的体内研究提供方法指导和理论依据。方法:采用吸波面积法(AUAWC)测定不同时间大鼠血浆中参白汤剂与参白纳米混悬剂中总皂苷和总多... 详细信息

目的:明确参白纳米混悬剂中药物整体成分大鼠体内药代动力学测定方法的科学性,为多成分复杂体系中药制剂的体内研究提供方法指导和理论依据。方法:采用吸波面积法(AUAWC)测定不同时间大鼠血浆中参白汤剂与参白纳米混悬剂中总皂苷和总多糖等为主的整体成分药物浓度,高效液相色谱法(HPLC)测定个体成分人参皂苷Rg1的药物浓度,并进行方法学验证。将获得整体成分的药代动力学参数与人参皂苷Rg1的药代动力学参数比较,评价2种制剂的体内运行特点。结果:AUAWC与HPLC的方法学考察均符合要求。AUAWC分析显示,参白汤剂组与参白纳米混悬剂组中整体成分房室拟合均呈一室模型,半衰期(t_(1/2))分别为2.43 h和2.04 h,参白纳米混悬剂的相对生物利用度为138.99%;HPLC检测显示,参白汤剂组和参白纳米混悬剂组中人参皂苷Rg1呈二室模型,分布半衰期(t_(1/2α))分别为0.13 h和2.55 h,消除半衰期(t_(1/2β))分别为14.28 h和3.85 h,参白纳米混悬剂相对生物利用度为127.49%。与参白汤剂比较,参白纳米混悬剂中整体成分和人参皂苷Rg1的达峰时间(t_(max))、达峰浓度(C_(max))与药-时曲线下面积(AUC)增加。结论:建立的AUAWC可用于中药制剂整体成分药代动力学的研究,与HPLC测得的个体成分结果具有互补性,可为中药新剂型的体内研究提供有益借鉴。

关键词：中药整体成分参白纳米混悬剂吸波面积法高效液相色谱法(HPLC) 药代动力学抗肿瘤生物利用度

基于自噬抑制剂3-MA介导的大叶蛇葡萄总黄酮提取物对人乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响

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中国药理学通报 2024年第6期40卷 1115-1123页

作者：许诗怡廖思雨张天旭邹雪桂春张秀桥湖北中医药大学药学院湖北武汉430065

目的探讨抑制自噬时,大叶蛇葡萄总黄酮提取物(total flavonoid extract,TFE)对人乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法针对人宫颈癌细胞Hela、人肺癌细胞A549、人肝癌细胞SMMC-7721、人乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231及人正常肝... 详细信息

目的探讨抑制自噬时,大叶蛇葡萄总黄酮提取物(total flavonoid extract,TFE)对人乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法针对人宫颈癌细胞Hela、人肺癌细胞A549、人肝癌细胞SMMC-7721、人乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231及人正常肝细胞L-02,采用MTT法优选敏感细胞株;通过TFE与自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)联合运用,采用MTT法检测其对敏感细胞增殖的抑制作用;透射电子显微镜及Hoechst 33258单染法观察细胞的形态学变化;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率的变化;Western blot检测凋亡相关蛋白和通路蛋白(死亡受体途径、线粒体途径、内质网应激途径)的表达水平;免疫荧光法检测线粒体途径关键蛋白Cyt-c表达,并选择自噬激动剂雷帕霉素(rapamycin,RA)进行反向验证。结果TFE可浓度依赖性抑制人乳腺癌细胞增殖,MCF-7细胞为敏感细胞株,与TFE组相比,TFE+3-MA组在24、48、72 h对MCF-7细胞的抑制率均明显增加(P时可能通过线粒体途径促进MCF-7细胞凋亡,激活自噬可逆转细胞凋亡。

关键词：大叶蛇葡萄总黄酮提取物抑制自噬乳腺癌细胞 MCF-7细胞增殖凋亡

载紫杉醇的大黄酸偶联物胶束的体外释放及抗肿瘤研究

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中国药学杂志 2024年第15期59卷 1408-1415页

作者：黄彩霞欧阳惠枝黄秋萍陆伟利王晓颖徐伟福建中医药大学药学院福州350122

目的研究载紫杉醇的大黄酸偶联物(PTX/TPGS-CR)胶束的体外释放行为及其体外抗肿瘤效果。方法采用透析法,以泰素(Taxol?)为对照,考察PTX/TPGS-CR胶束在不同释放介质中的释药行为。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法,以Taxol?为对照,评估PTX/TPGS... 详细信息

目的研究载紫杉醇的大黄酸偶联物(PTX/TPGS-CR)胶束的体外释放行为及其体外抗肿瘤效果。方法采用透析法,以泰素(Taxol?)为对照,考察PTX/TPGS-CR胶束在不同释放介质中的释药行为。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法,以Taxol?为对照,评估PTX/TPGS-CR胶束对小鼠乳腺癌4T1细胞的细胞毒性。通过流式细胞仪检测PTX/TPGS-CR胶束对人宫颈癌HeLa细胞的细胞周期、凋亡的影响。通过划痕实验考察PTX/TPGS-CR胶束对HeLa、4T1细胞迁移的影响。结果体外释放实验结果显示,在pH 7.4磷酸盐缓冲液(PBS)中,PTX/TPGS-CR胶束在12和72 h内分别累积释放50.84%和71.38%;在模拟肿瘤微环境pH 5.8 PBS中,PTX/TPGS-CR胶束在12 h内累积释放79.19%,且72 h几乎完全释放。细胞毒试验结果显示,PTX/TPGS-CR胶束对4T1细胞表现出较强的肿瘤细胞增殖抑制作用,并呈时间和浓度依赖性,72 h时半抑制浓度(IC_(50))为0.3219 nmol·mL^(-1)。PTX/TPGS-CR胶束能引起HeLa、4T1细胞发生早期凋亡和晚期凋亡;可使HeLa细胞在PTX阻滞G2/M期的基础上同时增加G0/G1期阻滞,抑制细胞分裂增殖。PTX/TPGS-CR胶束能抑制HeLa、4T1细胞迁移,减少肿瘤转移。结论PTX/TPGS-CR胶束具有很好的pH响应释药特征,在血液环境中缓释药物,而在肿瘤微环境中实现快速释药;具有很好的肿瘤增殖抑制效果,促进细胞凋亡,抑制肿瘤细胞迁移,具有较好的肿瘤治疗潜力。

关键词：紫杉醇聚合物胶束体外释放抗肿瘤细胞实验

AB-8大孔树脂-C18柱联用分离干腌牛肉抗氧化肽的研究

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食品与发酵工业 2024年第5期50卷 171-179页

作者：张迎阳陈文涛徐莹孙承骏邹林玲邹平满在伟常州大学药学院/生物与食品工程学院江苏常州213164

该文利用盐酸提取法提取了干腌牛肉多肽,借助AB-8型大孔树脂及C18球形硅胶柱的分离纯化出4种抗氧化肽,利用分子对接模拟了4种抗氧化肽与超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的结合位点。利用盐酸提取法提取了抗氧化肽并测试其在1... 详细信息

该文利用盐酸提取法提取了干腌牛肉多肽,借助AB-8型大孔树脂及C18球形硅胶柱的分离纯化出4种抗氧化肽,利用分子对接模拟了4种抗氧化肽与超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的结合位点。利用盐酸提取法提取了抗氧化肽并测试其在1、2、3、4、5 mg/mL的抗氧化能力,发现在5 mg/mL时,DPPH自由基、ABTS阳离子自由基和超氧阴离子自由基(·O_(2)^(-))清除率分别为86.24%、35.62%和54.34%。对比了AB-8、D101、S-8、X-S、HPD-500、NKA-9的吸附率与解吸率,AB-8的吸附率与解吸率最好,分别为92.55%和82.88%。研究优化了AB-8的上样流速、上样量、乙醇洗脱浓度和洗脱流速,在4 BV/h上样流速、39 mL上样量、75%(体积分数)乙醇溶液洗脱剂和1 mL/min洗脱流速时,可以分离出3个组分(A、B和C),测试3个组分的抗氧化能力,B组分的DPPH自由基、ABTS阳离子自由基和·O_(2)^(-)清除能力最高,分别为73.33%、21.01%和63.33%。对B组分进行C18柱分离,分离出4个抗氧化肽:FDGDF、TGPGPW、FLSDH和KPFDAK。与SOD(PDB ID;1E9O)进行分子对接,发现FDGDF、TGPGPW、FLSDH和KPFDAK均可以与SOD形成氢键,结合能分别为-6.7、-6.55、-6.6、-7.35 kcal/mol,1 mg/mL的FDGDF可以有效增加SOD活力11.64%,酶活力单位增加697 U/mL,研究结果为干腌牛肉制品的开发提供理论基础。

关键词：干腌牛肉抗氧化肽大孔树脂分离纯化分子对接

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橄榄仁抗氧化肽的分离鉴定及分子对接

食品与发酵工业 2024年第5期50卷 189-198页

作者：张迎阳董亚云邹平郑文武常州大学药学院/生物与食品工程学院江苏常州213164

该研究利用酶解法结合凝胶色谱柱从橄榄仁中分离纯化得到6个抗氧化肽,采用分子对接模拟6种抗氧化肽与超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)的结合机制。采用酶解法从橄榄仁中提取抗氧化活性肽,以水解度、DPPH自由基清除率为指标,... 详细信息

该研究利用酶解法结合凝胶色谱柱从橄榄仁中分离纯化得到6个抗氧化肽,采用分子对接模拟6种抗氧化肽与超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)的结合机制。采用酶解法从橄榄仁中提取抗氧化活性肽,以水解度、DPPH自由基清除率为指标,从6种商用酶中筛选出最适蛋白酶为木瓜蛋白酶,以底物浓度、酶底比、酶解时间、温度进行单因素试验,选取影响酶解反应的3个因素(酶底比>温度>时间)进行响应面法优化得出最佳工艺条件为底物质量浓度50 g/L、酶底比为3.3%(质量分数)、温度20℃、时间88 min。对最优条件下的粗肽液进行SephadexG-25和SephadexG-15分离纯化得到6个具有良好活性的抗氧化肽,分别为WLSF、TSVLR、LVYLVR、AGGKPFQ、YYPFKGFA、AFNVDERLAR。TSVLR显示出最高的DPPH自由基清除活性81.07%和羟自由基清除能力42.48%。分子对接研究表明,纯化的肽通过疏水效应和氢键与抗氧化相关的关键蛋白SOD有效结合。结果表明,橄榄仁可作为天然食物来源制取功能性食品的一个新的探究方向。

关键词：橄榄仁抗氧化肽响应面优化分离鉴定分子对接

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桃胶多糖对便秘模型小鼠的改善作用研究

食品与发酵工业 2024年第19期50卷 40-48页

作者：高帆苏洁周衡朴李进应国伟陈素红吕圭源浙江中医药大学药学院浙江杭州310053 浙江工业大学药学院浙江杭州310014

该文探讨桃胶多糖(peach gum polysaccharide,PGP)缓解便秘的作用及机制。采用盐酸洛派丁胺(10 mg/kg BW)连续灌胃14 d建立便秘模型小鼠,模型成功后给予桃胶多糖(100、300 mg/kg)连续3周。给药期间测定小鼠6小时内粪便粒数、粪便含水率... 详细信息

该文探讨桃胶多糖(peach gum polysaccharide,PGP)缓解便秘的作用及机制。采用盐酸洛派丁胺(10 mg/kg BW)连续灌胃14 d建立便秘模型小鼠,模型成功后给予桃胶多糖(100、300 mg/kg)连续3周。给药期间测定小鼠6小时内粪便粒数、粪便含水率、首次黑便时间、肠道推进率、胃排空率和行为学指标;ELISA法测定血清中胃泌素(gastrin,GAS)、胃动素(motilin,MTL)和5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)含量;阿利新蓝-过碘酸-雪夫染色(Alixin blue periodic acid Schiff staining,AB-PAS)染色法观察结肠组织中杯状细胞数目;H&E染色法观察结肠组织形态;免疫组化法观察小鼠结肠组织中5-羟色胺受体3(5-hydroxytryptamine receptor 3,5-HT3R)表达;免疫荧光法观察小鼠结肠组织中闭合蛋白(occludin)和紧密连接蛋白-1(claudin-1)表达;Western blot法测定结肠组织中Occludin、5-HT3R和色氨酸羟化酶1(tryptophan hydroxylase 1,TPH-1)相对表达量。桃胶可以显著增加便秘模型小鼠的抓力、自主活动次数、开放臂进入次数和开放臂停留时间;增加粪便粒数粪便含水率和胃排空率,缩短首次黑便时间;升高血清中GAS和MTL水平;增加结肠组织中杯状细胞数量,改善肠粘膜损伤,并上调Occludin、Claudin-1蛋白表达;增加血清中5-HT水平及结肠组织中5-HT3R和TPH-1蛋白表达。桃胶多糖具有改善便秘的作用,其机制可能与促进胃肠激素分泌和激动5-HT信号通路有关。

关键词：桃胶多糖便秘 5-HT 胃肠激素 Occludin

基于pH响应涂层柱的毛细管电泳法在线富集和分离糖蛋白

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色谱 2024年第9期42卷 903-908页

作者：张剑徐彩凤马彩莲贺茂芳张博刘春叶西安医学院药学院陕西西安710021

本研究通过静电自组装法制备了一种3-氨基苯硼酸(APBA)修饰的纳米金(AuNPs@APBA)涂层毛细管柱,该毛细管柱兼具抗非特异性吸附性和富集选择性,将其作为分离通道,建立了基于pH响应涂层柱的糖蛋白在线富集与分离方法。首先,采用柠檬酸钠还... 详细信息

本研究通过静电自组装法制备了一种3-氨基苯硼酸(APBA)修饰的纳米金(AuNPs@APBA)涂层毛细管柱,该毛细管柱兼具抗非特异性吸附性和富集选择性,将其作为分离通道,建立了基于pH响应涂层柱的糖蛋白在线富集与分离方法。首先,采用柠檬酸钠还原法制备金纳米颗粒(AuNPs),再将APBA通过静电自组装修饰到AuNPs表面,制得AuNPs@APBA纳米材料;利用离子吸附作用将AuNPs@APBA吸附到毛细管内壁上,制得AuNPs@APBA涂层毛细管柱。在pH为8的条件下,糖蛋白能够与毛细管内表面的硼酸基团结合形成硼酸酯,从而被吸附;当pH为3时,硼酸酯发生解离并释放出糖蛋白,基于上述原理,该方法能够实现糖蛋白的选择性在线富集与分离。实验结果表明,与使用普通电泳法的裸柱相比,经AuNPs@APBA涂层毛细管柱富集后,卵清蛋白(OVA)的峰面积增大了2646倍,而牛血清白蛋白(BSA)的峰面积仅增大了847倍;并且,将鸡蛋清样品稀释1×10^(6)倍后,仍可利用该方法对糖蛋白进行检测。该方法样品用量少,操作简单,分离效率高,可用于实际样品中痕量糖蛋白的在线富集与分离。

关键词：毛细管电泳在线富集离子吸附糖蛋白苯硼酸