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亚低温对大鼠颅脑创伤后内源性神经干细胞增殖和分化的影响及其机制

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中华创伤杂志 2014年第6期30卷 500-503页

作者：李晓红陈翀赵霞梁海乾赵明亮张赛涂悦武警后勤学院附属医院脑科医院武警部队脑创伤与神经疾病研究所天津300162 武警总队北京第二医院外三科

目的探讨亚低温对创伤性脑损伤（traumatic brain injury，TBl）海马齿状回颗粒下区神经干细胞（neural stem cells，NSCs）增殖和分化的影响及潜在机制。方法SD大鼠按随机数字表法分为假手术组（只暴露硬脑膜，不接受液压冲击）、亚低... 详细信息

目的探讨亚低温对创伤性脑损伤（traumatic brain injury，TBl）海马齿状回颗粒下区神经干细胞（neural stem cells，NSCs）增殖和分化的影响及潜在机制。方法SD大鼠按随机数字表法分为假手术组（只暴露硬脑膜，不接受液压冲击）、亚低温组（假手术组大鼠给予亚低温治疗）、TBI组[采用液压冲击仪（2．4arm）建立sD大鼠单侧重型TBI模型]和TBI＋亚低温组（TBI后即刻给予72h亚低温治疗），每组8只大鼠。TBI模型制备后连续7d行BrdU腹腔注射，1次／d。TBI后第7天断头取损伤侧海马匀浆或40g／L多聚甲醛灌流取材切片，采用免疫组织化学法检测海马齿状回颗粒下区BrdU和双皮质素的表达，选用连续5张切片进行阳性细胞计数。采用Western blot检测海马沉默信息调节因子（silent information regulator1，Sirt1）蛋白的表达量。结果与假手术组比较，TBI组伤后7d海马齿状回颗粒下区Brdu和双皮质素标记细胞数显著增加（P均〈0．01），而TBI＋亚低温组较TBI组BrdU、双皮质素的表达增加[（257．4±34．3）：（196．4±23．8）]、[（346．4±42．2）：（245．7±33．2）]（P〈0．01）。同时亚低温可逆转TBI诱导的海马Sirt1过表达[（0．62±0．08）：（1．18±0．11）]（P〈0．01）。结论亚低温治疗可促进TBI后海马齿状回颗粒下区NSCs的增殖和神经元分化，其机制可能与抑制海马Sirt1蛋白过表达有关。

关键词：颅脑损伤神经干细胞亚低温

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脑损伤动物模型实施亚低温的模式概述

天津医药 2016年第3期44卷 377-380页

作者：刘成龙陈翀孙洪涛脑创伤与神经疾病研究所武警后勤学院附属医院脑科医院天津市神经创伤修复重点实验室天津300162

脑损伤是全球死亡和致残的主要原因之一,给社会和家庭带来沉重的负担。脑损伤动物模型的亚低温实验能够为脑损伤的治疗提供新的干预及治疗措施。在大量的脑损伤动物模型的亚低温治疗实验中,其脑保护的作用已经被证实。然而,目前的脑损... 详细信息

脑损伤是全球死亡和致残的主要原因之一,给社会和家庭带来沉重的负担。脑损伤动物模型的亚低温实验能够为脑损伤的治疗提供新的干预及治疗措施。在大量的脑损伤动物模型的亚低温治疗实验中,其脑保护的作用已经被证实。然而,目前的脑损伤动物实验的亚低温治疗模式尚不明确,其最佳的治疗模式如低温持续的时间、低温诱导的方法以及最佳的温度等仍然未知。本文对脑损伤动物模型的亚低温实验方法进行概述。

关键词：亚低温脑损伤动物模型治疗模式

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Ts-SV40介导的温敏细胞研究现状

天津医药 2015年第3期43卷 323-326页

作者：廖余平李晓红孙洪涛脑创伤与神经疾病研究所武警后勤学院附属医院脑科医院天津市神经创伤修复重点实验室天津300162

非永生化细胞在体外的传代次数、增殖活性是有限的,在应用于细胞治疗或者是体外研究中会受到细胞数量的限制。转染有ts-SV40LT基因的细胞在许可温度下具有最大的增殖活性,在许可温度进行细胞扩增能弥补细胞数量不足的限制,非许可温度可... 详细信息

非永生化细胞在体外的传代次数、增殖活性是有限的,在应用于细胞治疗或者是体外研究中会受到细胞数量的限制。转染有ts-SV40LT基因的细胞在许可温度下具有最大的增殖活性,在许可温度进行细胞扩增能弥补细胞数量不足的限制,非许可温度可用于细胞治疗或研究其生理特性。其研究领域涉及腹膜的间质细胞、泌尿道肌卫星细胞、口腔上皮细胞、肾上腺髓质细胞、骨髓血管内皮细胞、视网膜祖细胞、间充质干细胞、造血干细胞、肥大细胞、足细胞、库普弗细胞等。本文对ts-SV40介导的温敏细胞的研究现状做一综述。

关键词：转染低温,人工综述 ts-SV40 温敏细胞亚低温永生化

ts—SV40LT抗原转基因干细胞增殖活性的温度调控机制分析

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中华神经外科杂志 2010年第6期26卷 557-561页

作者：涂悦刘晓智张赛武警医学院附属医院脑创伤与神经疾病研究所天津300162

目的研究温度敏感性猿猴病毒40大T抗原（ts-SV40LT）转基因干细胞增殖活性的温度调控机制,为实现脑创伤患者在亚低温治疗期间实施干细胞移植奠定基础.方法用含ts-SV40LT抗原的表达质粒转染人源性脐带间充质干细胞（UCMSCs）,PCR方法 ... 详细信息

目的研究温度敏感性猿猴病毒40大T抗原（ts-SV40LT）转基因干细胞增殖活性的温度调控机制,为实现脑创伤患者在亚低温治疗期间实施干细胞移植奠定基础.方法用含ts-SV40LT抗原的表达质粒转染人源性脐带间充质干细胞（UCMSCs）,PCR方法检测外源基因的整合效率,将其分别置于亚低温（33℃）和正常体温（37℃）下培养,细胞免疫荧光方法检测增殖细胞核抗原（PCNA）活性,PCR-ELISA端粒酶检测法检测端粒酶活性,流式细胞术检测细胞周期,Western blot法检测细胞周期调控蛋白--周期素D1（Cyclin D1）、CyclinE、周期素依赖性蛋白激酶-2（CDK2）、CDK4、CDK6、P16和P21的蛋白表达情况,免疫荧光方法检测巢蛋白（nestin）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达;SPSS13.0软件进行统计学分析.结果 PCR结果显示ts-SV40LT抗原的基因片段被成功整合入干细胞,该细胞株在33℃条件下增殖生长旺盛,端粒酶活性高,Cyclin D1、CyclinE、CDK2、CDK4、CDK6均高表达,P16和P21低表达,同时高表达nestin,不表达NSE和GFAP;在37℃条件下细胞增殖缓慢甚至停滞,端粒酶活性低,Cyclin D1、CyclinE、CDK2、CDK4、CDK6的表达强度明显低于33℃条件,P16和P21则相反,与此同时nestin表达强度明显下降,NSE和GFAP表达水平上升.结论通过ts-SV40LT抗原基因的有效转染可实现干细胞在不同温度环境下的增殖调控,为在亚低温条件下实现干细胞移植救治颅脑创伤患者提供了实验支持.

关键词：干细胞颅脑创伤低温疗法分化

脑源性神经营养因子对亚低温处理后移植干细胞的存活及分化的影响

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中华创伤杂志 2011年第1期27卷 68-71页

作者：张赛刘晓智孙洪涛涂悦程世翔武警医学院附属医院脑创伤与神经疾病研究所、脑系科中心天津300162

目的研究脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）对亚低温处理后移植干细胞的存活及分化的影响.方法脂质体介导BDNF表达质粒转染293T细胞,ELISA法确定BDNF高峰表达时相,收集高表达时相阶段细胞上清液.建立SD... 详细信息

目的研究脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）对亚低温处理后移植干细胞的存活及分化的影响.方法脂质体介导BDNF表达质粒转染293T细胞,ELISA法确定BDNF高峰表达时相,收集高表达时相阶段细胞上清液.建立SD大鼠液压脑创伤模型,分为A组（干细胞移植组）和B组（干细胞移植＋BDNF组）,两组同时给予亚低温治疗（33℃）5 d.对第4天和第8大（复温后第3天）脑组织标本行增殖细胞核抗原（PCNA）、巢蛋白（nestin）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的免疫组织化学及原位细胞凋亡检测,实验动物予以神经功能缺陷评分.结果 ELISA结果显示细胞转染48～60 h后BDNF持续高表达.亚低温处理第4天两组PCNA、巢蛋白均高表达,NSE及GFAP无或极低表达,细胞凋亡少见,但B组较A组更少（P＜0.05）.复温后第3天两组PCNA、巢蛋白均表达下降,NSE及GFAP表达升高,但B组较A组NSE阳性率更高,细胞凋亡更少（P＜0.05）.B组获得最佳动物神经功能评分.结论 BDNF可增加低温环境下的干细胞存活率,并诱导干细胞向神经元分化.

关键词：颅脑损伤干细胞脑源性神经营养因子亚低温

Scepter球囊保护下弹簧圈结合Onyx胶栓塞创伤性颈动脉海绵窦瘘的疗效评价

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中华创伤杂志 2018年第3期34卷 201-205页

作者：任登鹏涂悦薛德友张赛天津医科大学研究生院天津300070 武警后勤学院附属医院脑科医院脑创伤与神经疾病研究所

目的探讨在Scepter球囊保护下应用弹簧圈结合Onyx胶栓塞治疗创伤性颈动脉海绵窦瘘（TCCF）的安全性及治疗效果。方法采用回顾性病例系列研究分析2012年2月-2017年2月收治的24例球囊保护下弹簧圈结合Onyx胶栓塞治疗的TCCF患者临床资料，... 详细信息

目的探讨在Scepter球囊保护下应用弹簧圈结合Onyx胶栓塞治疗创伤性颈动脉海绵窦瘘（TCCF）的安全性及治疗效果。方法采用回顾性病例系列研究分析2012年2月-2017年2月收治的24例球囊保护下弹簧圈结合Onyx胶栓塞治疗的TCCF患者临床资料，其中男20例，女4例；年龄21-65岁[（42．6±6．8）岁]。格拉斯哥昏迷评分（GCS）15分。均为单侧病变。其中右侧13例，左侧11例。伴发颅内杂音23例，搏动性突眼伴球结膜充血水肿22例，眼球运动障碍19例，视力减退9例。术中通过微导管造影明确TCCF瘘口的位置及回流特点。将保护球囊置于颈内动脉瘘口处，再沿微导管在海绵窦内近瘘口处填入少量弹簧圈后分次推注Onyx胶，直至瘘口闭塞。观察患者术前及术后2周颅内杂音、搏动性突眼、视力障碍、眼球运动障碍改善情况，术后复查数学减影血管造影（DSA）了解颈内动脉通畅情况及复发情况。结果术后2周，24例TCCF患者原有颅内杂音、搏动性突眼、球结膜水肿症状均消失，19例眼球活动障碍患者中2例改善不明显，9例视力障碍患者中2例改善不明显，与术前比较差异有统计学意义（P〈0．05）。1例Onyx胶与保护球囊粘连，将球囊连同导引导管送至颈外动脉后撤出球囊，术后患者无并发症。随访6-12个月，临床症状未见复发，无手术相关并发症，DSA示瘘口均完全闭塞，且颈内动脉均保持通畅。结论Scepter球囊保护下弹簧圈结合Onyx胶栓塞治疗TCCF可闭塞瘘口，消除眼部症状，维持颈内动脉通畅，是一种安全有效的方法。

关键词：颈动脉海绵窦瘘栓塞弹簧圈

模拟脑组织生物力学环境下温敏脐带间充质干细胞的分化特性研究

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中国医药导报 2016年第36期13卷 14-17页

作者：符锋陈以胜李晓红陈翀孙洪涛涂悦张赛武警后勤学院附属医院脑科中心脑创伤与神经疾病研究所天津市神经创伤修复重点实验室天津300162

目的模拟脑组织弹性模量制备相应二维培养基,比较亚低温联合温敏脐带间充质干细胞(ts UC)与常温下脐带间充质干细胞(UC)的分化特性。方法应用单、双丙烯酰胺的聚合作用,制备弹性模量为0.5 k Pa的聚丙烯酰胺(PA)水凝胶,用于模拟脑组织的... 详细信息

目的模拟脑组织弹性模量制备相应二维培养基,比较亚低温联合温敏脐带间充质干细胞(ts UC)与常温下脐带间充质干细胞(UC)的分化特性。方法应用单、双丙烯酰胺的聚合作用,制备弹性模量为0.5 k Pa的聚丙烯酰胺(PA)水凝胶,用于模拟脑组织的生物力学环境,并测其弹性模量。从新生儿脐带中分离培养脐带间充质干细胞,通过感染携温度敏感型猿猴病毒40大T抗原(ts-SV40LT)基因的逆转录病毒来制备ts UC。实验分为3组:UC+常温+玻片组(A组)、UC+常温+0.5 k Pa组(B组)、ts UC+亚低温+0.5 k Pa组(C组)。动态观察各组细胞的生长情况和形态变化,并于7 d后行细胞免疫荧光检测各组细胞的分化水平并计算分化神经元的轴突长度。结果 PA水凝胶弹性模量的检测结果为(0.50±0.03)k Pa。B、C两组部分细胞出现细长的胞突,并存在β-tubulinⅢ阳性细胞,A组细胞镜下无明显神经元形态,也无β-tubulinⅢ阳性表达。B、C两组的神经元分化率以及荧光下轴突长度均明显高于A组,但组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论在模拟脑组织弹性模量的环境中,ts UC具有向神经元分化的能力,可应用于亚低温治疗下脑损伤修复的细胞移植研究。

关键词：温敏脐带间充质干细胞聚丙烯酰胺水凝胶弹性模量生物力学

右美托咪碇联合低温对创伤性脑损伤小鼠急性脑水肿的影响

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中华创伤杂志 2019年第5期35卷 423-429页

作者：梁佳敏张谦侯亚红杨程程世翔武警部队特色医学中心脑科中心天津市神经创伤修复重点实验室武警部队特色医学中心脑创伤与神经疾病研究所天津300162 解放军总医院第三医学中心麻醉科北京100039

目的探讨低温环境下右美托咪碇(Dex)对创伤性脑损伤(TBI)小鼠急性脑水肿的影响.方法180只成年雄性C57B176J小鼠.按随机数字表法分为对照组、假手术组、TBI组、TBI+Dex组、TBI+低温组和TBI+Dex联合低温组,每组30只应用电子控制性脑皮质... 详细信息

目的探讨低温环境下右美托咪碇(Dex)对创伤性脑损伤(TBI)小鼠急性脑水肿的影响.方法180只成年雄性C57B176J小鼠.按随机数字表法分为对照组、假手术组、TBI组、TBI+Dex组、TBI+低温组和TBI+Dex联合低温组,每组30只应用电子控制性脑皮质撞击仪建立TBI模型,假手术组仅开骨窗但不打击,对照组不开骨窗也不打击,TBI+Dex组、TBI+低温组和TBI+Dex联合低温组伤后即刻腹腔注射Dex(60μg/kg,每隔2h给药1次,共3次)和(或)低温干预.TBI组仅致伤,对照组、假手术组均行常温处理并腹腔注射等量生理盐水:伤后24h分别采用甲苯胺蓝、伊文思蓝染色和干湿重法测定各组脑组织损伤体积、血脑屏障通透性和脑组织含水量改变;实时定量PCR和Westernblot法检测损伤区脑组织紧密连接蛋白-5(Claudin-5)mRNA和蛋白表达变化伤后24,48.72h采用改良神经功能缺损评分(mNSS)评价神经功能受损程度:结果与假手术组比较.TB1组伤后24h脑组织损伤体积增加[(0.49±0.04)mm^3;(11.57±1.01)mm^3],血脑屏障通透性升高[(16.4±0.8)p,g/g:(54.3±1.7)μg/g],脑组织含水量增加[(76.7±0.9)%:(83.1±0.8)%],mNSS明显升高[(1.6±0.7)分:(13.4±0.7)分](P均脑组织损伤体积[(7.20±0.18)mm^3和(5.94±0.18)mm^3],降低血脑屏障通透性[(32.7±1.2)μg/g和(27.6±1.0)μg/g],减少脑组织含水量[(78.5±0.4)%和(78.2±0.6)%],降低mNSS[(7.3±1.1)分和(5.8±1.3)分](卩均脑组织损伤体积降至(3.92±0.05)mm^3,血脑屏障通透性降至(21.6±0.7)μg/g,脑组织含水量降至(77.7±0.3)%,mNSS降至(4.3±1.2)分(P均脑屏障的完整性,减轻脑水肿和脑损伤程度,促进神经功能恢复.

关键词：右美托咪呢脑损伤脑水肿低温紧密连接蛋白-5

限制性液体复苏对重型颅脑创伤患者凝血功能的影响

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中华创伤杂志 2015年第8期31卷 681-685页

作者：杨细平张馨予涂悦赵明亮刁云锋张赛天津医科大学研究生院 300070 武警部队脑创伤与神经疾病研究所天津市神经创伤修重点实验室武警后勤学院附属医院脑科医院武警后勤学院临床医学系生物化学与分子生物学教研室

目的探讨限制性液体复苏（LFR）对重型颅脑创伤（sTBI）患者凝血功能的影响及其临床意义。方法选择2011年4月-2014年4月神经外科ICU（NICU）收治的sTBI患者79例，按随机数字表法分为低容量组（≤2000ml，40例）和高容量组（〉2000ml，3... 详细信息

目的探讨限制性液体复苏（LFR）对重型颅脑创伤（sTBI）患者凝血功能的影响及其临床意义。方法选择2011年4月-2014年4月神经外科ICU（NICU）收治的sTBI患者79例，按随机数字表法分为低容量组（≤2000ml，40例）和高容量组（〉2000ml，39例），两组患者均接受LFR治疗。分别测量两组不同时相点的凝血酶原时间（胛）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、凝血酶时间（TT）及纤维蛋白原（FIB）水平，监测患者平均心率、血压、血气分析及血电解质等，同时统计患者人住NICU时间、住院时间、多器官功能障碍综合征（MODS）发生率，并根据格拉斯哥预后评分（GOS）判断预后。结果低容量组患者治疗后PT、APTT、TT及FIB低于高容量组，而FIB值高于高容量组（P〈0．05）。低容量组和高容量组患者人住ICU时间[分别为（13．84±3．02）d和（15．28±3．79）d]、住院时间[分别为（36．85±6．73）d和（40．01±7．21）d]、MODS发生率（分别为15．0％和17．9％）及死亡率（分别为27．5％和38．5％）差异均无统计学意义（P均〉0．05），而低容量组患者的恢复良好率高于高容量组患者（22．5％：7．3％，P〈0．05）；两组患者平均心率、血压、电解质及血气等指标差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论低容量LFR治疗可以改善sTBI患者的凝血障碍和预后，是一项安全有效的治疗措施。

关键词：颅脑损伤复苏术凝血功能障碍