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葛根素促进人成骨样MG-63细胞分化的分子机制研究

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中草药 2014年第4期45卷 536-540页

作者：赵艳威李宗旻宋光明王越谢文利武警后勤学院药理学教研室天津300309 武警后勤学院病原生物与免疫学教研室天津300309

目的探讨植物雌激素葛根素促进人成骨样MG-63细胞分化的分子机制。方法选择兼有2种雌激素受体(estrogen receptor,ER)亚型表达的人成骨样MG-63细胞为研究模型,采用磷酸苯二钠法、ELISA法及小RNA干扰等技术,探讨葛根素对人成骨细胞分化... 详细信息

目的探讨植物雌激素葛根素促进人成骨样MG-63细胞分化的分子机制。方法选择兼有2种雌激素受体(estrogen receptor,ER)亚型表达的人成骨样MG-63细胞为研究模型,采用磷酸苯二钠法、ELISA法及小RNA干扰等技术,探讨葛根素对人成骨细胞分化的作用及作用机制。结果葛根素可通过提高MG-63细胞中碱性磷酸酶(ALP)活性和I型胶原蛋白分泌促进成骨细胞分化成熟,该作用可被纯ER阻断剂ICI 182,780完全阻断,应用小RNA干扰技术进一步证实葛根素对成骨细胞ALP活性、I型胶原蛋白分泌的调节作用是由ERα和ERβ共同介导的。结论葛根素对成骨细胞分化的调节是经ER途径,由ERα和ERβ共同介导。

关键词：葛根素成骨细胞碱性磷酸酶 I型胶原雌激素受体

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细胞因子在莱姆病中作用的研究进展

中国药理学通报 2014年第3期30卷 26-29页

作者：李覃邢杰王增田武警后勤学院病原生物与免疫学教研室天津300309 武警后勤学院临床医学系天津300309

莱姆病是一种以硬蜱作为传播媒介、由伯氏疏螺旋体感染所致的人兽共患传染病,临床表现多样,严重影响人类健康和生活质量。有关细胞因子在莱姆病发生发展中的作用尚未完全阐明,但国内外已经取得一系列研究进展。明确不同类型细胞因子在... 详细信息

莱姆病是一种以硬蜱作为传播媒介、由伯氏疏螺旋体感染所致的人兽共患传染病,临床表现多样,严重影响人类健康和生活质量。有关细胞因子在莱姆病发生发展中的作用尚未完全阐明,但国内外已经取得一系列研究进展。明确不同类型细胞因子在莱姆病中的作用不仅有利于揭示莱姆病发生发展的具体分子机制,还将大大促进细胞因子在莱姆病预防、诊断和药物治疗中的应用。现就细胞因子与莱姆病关系的研究作一综述。

关键词：莱姆病伯氏疏螺旋体细胞因子炎症靶点治疗

三维手段定量评估股骨颈骨折复位质量与股骨头坏死的相关性

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中国组织工程研究 2016年第22期20卷 3287-3293页

作者：张立朋张国玲徐葳王丹王文良武警后勤学院病原生物学与免疫学教研室天津市300000 武警后勤学院附属医院关节三科天津市300000

背景:骨折复位质量对骨折愈合与肢体功能恢复至关重要,传统X射线片与断层CT对量化与直观观察骨折移位效果不佳。Mimics具有快速构建骨骼模型和空间测量的功能,为定量三维空间量化复位质量提供了可能。目的:利用三维测量方法对X射线评估... 详细信息

背景:骨折复位质量对骨折愈合与肢体功能恢复至关重要,传统X射线片与断层CT对量化与直观观察骨折移位效果不佳。Mimics具有快速构建骨骼模型和空间测量的功能,为定量三维空间量化复位质量提供了可能。目的:利用三维测量方法对X射线评估为复位满意的股骨颈骨折患者进行残留移位再测量,并探究残留移位与股骨头坏死的相关性。方法:将2012年1月至2013年12月于武警后勤学院附属医院关节三科接受治疗的141例股骨颈骨折患者纳入研究,按骨折移位程度分组,无移位组44例(Garden1&2),移位组97例(Garden3&4)。利用CT的DICOM数据建立每个患者的三维模型,测量修复术后股骨颈骨折患者的残留移位参数:股骨头中心距离、股骨头小凹距离及空间偏转距离。对患者股骨头坏死情况进行随访,探究残留移位程度与股骨头坏死的相关性。结果与结论:1患者随访时间为25-43个月,无移位组和移位组中分别有7例和21例患者罹患股骨头坏死;2无移位组中股骨头中心距离、股骨头小凹距离、空间偏转角度分别为(7.44±2.84)mm,(11.75±4.12)mm,(17.68±8.99)°;移位组分别为(6.51±3.75)mm,(9.34±5.27)mm,(14.67±7.43)°,两组中除股骨头中心距离外差异均有显著性意义(P<0.05);3提示复位质量欠佳是引起股骨头坏死的重要因素之一;同时X射线在描述空间立体移位和角度中存在不足,在评估股骨颈骨折的复位质量时具有局限性;而利用三维测量手段评估骨折复位质量具有一定的优越性。

关键词：股骨骨折股骨头坏死内固定器随访研究组织工程骨科植入物骨植入物股骨颈骨折复位质量三维测量

应用Balb/c小鼠建立特应性皮炎的方法与评价

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免疫学杂志 2015年第4期31卷 349-352页

作者：王翼腾李覃张璐张丽明高强李辉陈虹武警后勤学院生药与药剂学教研室天津300309 武警后勤学院病原生物与免疫学教研室天津300309 武警后勤学院科研部天津300309

目的探索应用变应原致敏Balb/c小鼠建立特应性皮炎(AD)的方法。方法不同剂量卵清蛋白(OVA)或2,4-二硝基氟苯(DNFB)经皮致敏Balb/c小鼠,经一定流程后观察皮肤症状并进行评分,H&E染色检测皮肤组织病理学变化,ELISA检测血清总Ig E含量,RT-... 详细信息

目的探索应用变应原致敏Balb/c小鼠建立特应性皮炎(AD)的方法。方法不同剂量卵清蛋白(OVA)或2,4-二硝基氟苯(DNFB)经皮致敏Balb/c小鼠,经一定流程后观察皮肤症状并进行评分,H&E染色检测皮肤组织病理学变化,ELISA检测血清总Ig E含量,RT-PCR检测核因子T-bet和Gata3的m RNA表达。结果 OVA组(1、10、20、100 mg/ml)未见明显的皮肤炎症表现。DNFB组2种方案(0.5%+1%与0.5%)中,模型小鼠皮炎评分、抓搔次数、Ig E含量均显著升高(P免疫偏移状态,皮肤病理学检测观察到模型小鼠表皮增厚、棘层细胞增生、炎症细胞大量浸润等变化。结论本研究中,经皮给予DNFB能够成功诱导小鼠发生AD样改变,是进一步开展AD相关研究的基础。

关键词：特应性皮炎卵白蛋白二硝基氟苯小鼠

嗜酸性粒细胞介导的ADCC效应在旋毛虫感染免疫中的作用研究

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中国病原生物学杂志 2012年第9期7卷 685-687页

作者：邢杰董铮闫玉文马萍武警后勤学院病原生物学教研室天津300162

目的通过对小鼠总IgE、特异性IgE及依赖IgE的嗜酸性粒细胞(Eos)介导的ADCC效应的动态观察,进一步探讨嗜酸性粒细胞在旋毛虫病免疫中的作用。方法采用双抗体夹心ELISA法,分别检测感染旋毛虫后7、14、21、28、35、60d小鼠外周血中总IgE水... 详细信息

目的通过对小鼠总IgE、特异性IgE及依赖IgE的嗜酸性粒细胞(Eos)介导的ADCC效应的动态观察,进一步探讨嗜酸性粒细胞在旋毛虫病免疫中的作用。方法采用双抗体夹心ELISA法,分别检测感染旋毛虫后7、14、21、28、35、60d小鼠外周血中总IgE水平,用间接ELISA法测定特异性IgE水平;分别在96孔细胞培养板的板孔中加入感染旋毛虫小鼠外周血提取的嗜酸性粒细胞。感染鼠血清及感染鼠的旋毛虫肌幼虫与含10%灭活小牛血清的RPMI-1640培养液,37℃条件下培养,分别在12、24、48h显微镜下观察小鼠Eos对旋毛虫肌幼虫的影响。结果实验组较对照组总IgE水平增高,在感染后14、21d达到高峰(P学意义(P免疫血清参与下,Eos对幼虫的杀伤作用明显增强;灭活IgE和补体后,Eos的杀伤作用明显减弱,与单纯Eos组比较肌幼虫死亡率差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Eos对旋毛虫肌幼虫杀伤的过程需要免疫血清的参与,免疫血清中介导上述效应的物质为IgE和补体。

关键词：旋毛虫嗜酸性粒细胞 ADCC效应

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病原生物与免疫学教研室

免疫学杂志 2015年第7期31卷 591-594页

作者：杨震张敏王翼腾张丽明李覃陈虹天津武警后勤学科研部 300309 生药与药剂学教研室病原生物与免疫学教研室

目的本研究在前期工作基础上,对中药土槿皮有效成分土槿乙酸进行结构改造,得到新型衍生物氢化土槿乙酸（hexahydropseudolaric acid B,HPB）,通过体内外研究,初步揭示其对T淋巴细胞的免疫调节作用及分子机制。方法首先,通过体外细胞培... 详细信息

目的本研究在前期工作基础上,对中药土槿皮有效成分土槿乙酸进行结构改造,得到新型衍生物氢化土槿乙酸（hexahydropseudolaric acid B,HPB）,通过体内外研究,初步揭示其对T淋巴细胞的免疫调节作用及分子机制。方法首先,通过体外细胞培养鉴定HPB的免疫抑制活性及细胞毒性,进而以二硝基氟苯（2,4-Dinitrofluorobenzene,DNFB）诱导建立T细胞介导的迟发型超敏反应（delayed-type hypersensitivity,DTH）模型,口服不同剂量HPB进行干预,检测小鼠耳肿胀度、计算脾脏指数,综合评价HPB的药效学作用。最后,通过ELISA、Western blot分析等方法分析HPB对T细胞免疫抑制作用的分子机制。结果 HPB体内外均能明显抑制T淋巴细胞增殖及T细胞介导的细胞免疫应答,且安全性高,其免疫抑制作用的分子机制可能与上调IL-10、影响JNK信号通路有关。结论本研究结果有望为研制高效低毒的新型抗炎免疫调节剂奠定基础,应用开发前景广阔。

关键词：氢化土槿乙酸 T淋巴细胞免疫抑制 IL-10

NY-ESO-1/GST融合蛋白在大肠杆菌的表达、纯化及鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2012年第10期28卷 1094-1097页

作者：汤蕾宋朝君孙元杰李娜魏玉英孙奕杨琨第四军医大学基础医学院免疫学系陕西西安710032 武警后勤学院病原生物学与免疫学教研室天津300162

目的:构建肿瘤-睾丸抗原NY-ESO-1与GST融合基因的原核表达载体,在大肠杆菌中表达并对融合蛋白NY-ESO-1/GST进行纯化和初步鉴定。方法:设计针对NY-ESO-1的特异性引物,采用聚合酶链反应(PCR)从睾丸组织的cDNA文库扩增NY-ESO-1基因片段,经... 详细信息

目的:构建肿瘤-睾丸抗原NY-ESO-1与GST融合基因的原核表达载体,在大肠杆菌中表达并对融合蛋白NY-ESO-1/GST进行纯化和初步鉴定。方法:设计针对NY-ESO-1的特异性引物,采用聚合酶链反应(PCR)从睾丸组织的cDNA文库扩增NY-ESO-1基因片段,经上下游引物所引入的EcoR I和Xho I双酶切后克隆入原核表达载体pGEX-4T1中GST标签的下游,构建重组表达载体pGEX-4T1-NY-ESO-1,并将该载体转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中,IPTG诱导表达NY-ESO-1/GST融合蛋白,经不同浓度尿素洗脱纯化后,表达产物通过SDS-PAGE和Western blot法进行鉴定。结果:重组质粒经限制性内切酶EcoR I和Xho I双酶切鉴定和IPTG诱导表达NY-ESO-1/GST的SDS-PAGE分析表明,表达产物的相对分子质量(Mr)为44 000,与理论值相符,并主要以包涵体形式存在,灰度扫描分析显示融合蛋白表达量占菌体蛋白总量的90%,Western blot结果证实该NY-ESO-1/GST可与抗GST单克隆抗体(mAb)发生特异性结合反应,提示为融合蛋白。结论:成功构建了NY-ESO-1基因原核表达载体pGEX-4T1-NY-ESO-1,利用大肠杆菌表达系统,获得了较高纯度的包涵体形式NY-ESO-1/GST融合蛋白。

关键词： NY.ESO-1 GST 融合蛋白原核表达纯化

低氧状态下红景天苷经HIF-1α信号通路调节人成骨样MG-63细胞表型表达的研究

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中国药理学通报 2017年第6期33卷 836-843页

作者：祁琳王川梅国华温晓昶毛立群金鑫李玲王越武警后勤学院附属医院药材科天津300162 武警后勤学院附属医院口腔科天津300162 武警后勤学院病原生物和免疫学教研室天津300309 武警后勤学院基础医学实验技术教研室天津300309 武警后勤学院药理学教研室天津300309

目的研究低氧状态下红景天苷对成骨细胞表型表达的调控作用及其作用机制。方法 MTT法检测细胞增殖能力;采用Annexin V/PI双染法分析低氧诱导的细胞凋亡情况;磷酸苯二钠法检测成骨细胞分化的早期标志性基因碱性磷酸酶(ALP)活性;RT-PCR技... 详细信息

目的研究低氧状态下红景天苷对成骨细胞表型表达的调控作用及其作用机制。方法 MTT法检测细胞增殖能力;采用Annexin V/PI双染法分析低氧诱导的细胞凋亡情况;磷酸苯二钠法检测成骨细胞分化的早期标志性基因碱性磷酸酶(ALP)活性;RT-PCR技术检测低氧诱导因子(HIF)-1α、血管内皮生长因子(VEGF)、抑癌基因VHL蛋白(p VHL)、骨钙素(OC)、成骨细胞特异性转录因子Runx2及Osterix mRNA表达水平;采用ELISA法检测VEGF及OC的蛋白表达水平和I型胶原的含量;Western blot技术检测HIF-1α、p VHL、Osterix、Runx2的蛋白表达水平;免疫荧光共聚焦显微镜技术观察HIF-1α的核转位情况;荧光素酶报告基因检测技术检测HIF-1α的转录活性。结果低氧状态下红景天苷促进MG-63细胞增殖,抑制由低氧诱导的MG-63细胞凋亡,促进Osterix、Runx2表达及通过增加ALP活性、Ⅰ型胶原和OC含量促进成骨细胞分化成熟。进一步研究发现,低氧状态红景天苷可下调HIF-1α的表达及核转位,而上调其转录活性及下游靶基因VEGF的表达。结论低氧状态下红景天苷通过调节HIF-1α/VEGF信号通路促进成骨细胞增殖和分化,同时抑制由低氧诱导的成骨细胞凋亡。

关键词：红景天苷低氧诱导因子(HIF)-1α 成骨细胞增殖分化凋亡血管内皮生长因子(VEGF)

白藜芦醇调节STAT3与miR-21表达抗肝癌作用的初步研究

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中国药理学通报 2014年第2期30卷 186-191页

作者：李覃王伟张实邢杰王增田天津武警后勤学院病原生物与免疫学教研室天津300309 天津武警后勤学院附属医院天津300162 天津武警后勤学院实验动物中心天津300162 天津武警后勤学院临床医学系天津300309

目的初步探讨白藜芦醇(Resveratrol,Res)的抗肝癌作用及其分子机制。方法建立移植性肝癌小鼠模型,口服给予Res进行干预,分析肿瘤生长状况。然后采用Real-time PCR、RT-PCR等方法检测转录因子Foxp3及微小核糖核酸-21(miR-21)的基因表达,W... 详细信息

目的初步探讨白藜芦醇(Resveratrol,Res)的抗肝癌作用及其分子机制。方法建立移植性肝癌小鼠模型,口服给予Res进行干预,分析肿瘤生长状况。然后采用Real-time PCR、RT-PCR等方法检测转录因子Foxp3及微小核糖核酸-21(miR-21)的基因表达,Western blot分析信号转导子与转录激活子3(STAT3)的活性表达,流式细胞术观察CD4+CD25+T细胞数量的变化。结果与荷瘤对照组相比,Res给药组CD4+CD25+T细胞数量和Foxp3表达均明显降低,同时miR-21表达减少,该效应或许与其下调STAT3磷酸化活性水平密切相关。结论 Res可能通过调控STAT3信号分子及miR-21表达,抑制调节性T细胞产生,改变肿瘤微环境,从而发挥抗肝癌作用。

关键词：白藜芦醇肝癌调节性T细胞信号转导 miR一21 STAT3