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定点突变优化信号肽对嵌合抗原受体T细胞功能的影响

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生物工程学报 2024年第2期40卷 573-584页

作者：刘玉李帆戴蕙芸周润龙王梦怡甘世豪徐瑶武汉科技大学生命科学与健康学院生物医学研究院湖北武汉430081 武汉波睿达生物科技有限公司湖北武汉430075

信号肽(signal peptide, SP)参与调节嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor, CAR)结构的分泌水平及跨膜易位过程,对嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T cell, CAR-T)行使功能至关重要,本研究通过定点突变技术优化SP序列... 详细信息

信号肽(signal peptide, SP)参与调节嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor, CAR)结构的分泌水平及跨膜易位过程,对嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T cell, CAR-T)行使功能至关重要,本研究通过定点突变技术优化SP序列,并研究其对CD19-CAR-T杀伤功能的影响。首先,利用基因合成和分子克隆技术,构建含野生型SP(SP-wtY)、2种突变型SP(SP-muK或SP-muR)的靶向CD19的CAR载体;对构建成功的载体进行慢病毒包装,并使用慢病毒侵染T细胞,利用流式细胞术检测细胞的转染效率,钙黄绿素释放法检测对靶细胞的体外杀瘤能力,酶联免疫吸附(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)技术检测2种细胞因子[干扰素-γ(interferon-γ, IFN-γ)和干扰素-α(interferon-α, TNF-α)]的分泌水平。结果显示,构建了野生型和信号肽突变的重组慢病毒质粒,慢病毒转导T细胞后,携带3种信号肽(SP-wtY、SP-muK或SP-muR)的CD19-CAR转染效率分别为33.9%、35.5%、36.8%。进一步杀伤实验显示,与SP-muK和SP-wtY细胞相比,SP-muR细胞的肿瘤杀伤效果显著提高,当效靶比为10:1时共培养24 h后,SP-muR组CAR-T细胞的细胞因子IFN-γ和TNF-α分泌水平显著高于SP-muK和SP-wtY组。本研究揭示信号肽N端正电荷数的增加可以提高CAR的表达效率和对CD19+靶细胞的杀伤作用,为CAR结构的优化改造和临床高效应用提供了科学依据。

关键词：定点突变信号肽嵌合抗原受体 CD19-CAR-T细胞体外杀瘤细胞因子

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溶瘤Ⅱ型单纯疱疹病毒在肿瘤中的复制及表达

生物工程学报 2024年第2期40卷 585-595页

作者：蔡奇应张思琪刘华鹃刘滨磊湖北工业大学生物工程与食品学院湖北武汉430068 武汉滨会生物科技股份有限公司湖北武汉436000

本研究旨在检测BALB/c小鼠肿瘤注射部位溶瘤Ⅱ型单纯疱疹病毒(oncolytic herpes simplex virus type 2,oHSV2)的持续时间和复制水平。同时检测血清中人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(human granulocyte macrophage colony-stimulating factor, hGM-CSF)的表达量和HSV-2抗体水平。小鼠经瘤内注射高、低两个剂量oHSV2-Fluc [萤火虫荧光素酶(firefly luciferase, Fluc)],检测其荧光表达变化及持续时间。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qPCR)检测肿瘤组织中oHSV2基因拷贝数。酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测血清中hGM-CSF表达量以及HSV-2抗体水平。结果表明高剂量组肿瘤体积显著小于对照组(P<0.01)。瘤内注射oHSV2-Fluc表明病毒携带的Fluc可以在肿瘤中持续表达,于第11天仍能检测到荧光,直至第18天低于检测线。通过提取肿瘤组织RNA进行qPCR,表明第9天高、低剂量组肿瘤组织均存在oHSV2的mRNA。对血清进行ELISA检测,相较于对照组,高、低剂量组hGM-CSF及HSV2抗体水平显著提高(P<0.05)。这些发现表明,oHSV2能够在瘤内正常复制,同时所携带的外源因子可持续表达,对肿瘤产生杀伤作用。瘤内注射oHSV2后,小鼠血清中存在较高水平的hGM-CSF和HSV-2抗体。

关键词：溶瘤病毒持续时间肿瘤人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子

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食源性抗氧化肽的构效关系及强化方法

中国食品学报 2024年第5期24卷 465-478页

作者：康记珍许承志王希搏汪海波武汉轻工大学食品科学与工程学院武汉430040 武汉轻工大学化学与环境工程学院武汉430040 湖北瑞邦生物科技有限公司湖北荆州434008

食源性多肽因具有较高的营养价值和多种生物活性,备受研究者关注。然而,由于天然食源性多肽的来源和提取工艺受限,其抗氧化性能在实际应用中逐渐无法满足抗衰老和慢性疾病防治的需求。本文综述了食源性抗氧化多肽的来源,分析了多肽抗氧... 详细信息

食源性多肽因具有较高的营养价值和多种生物活性,备受研究者关注。然而,由于天然食源性多肽的来源和提取工艺受限,其抗氧化性能在实际应用中逐渐无法满足抗衰老和慢性疾病防治的需求。本文综述了食源性抗氧化多肽的来源,分析了多肽抗氧化性能与水解度、氨基酸组成及序列、分子质量及二级结构之间的构效关系,并探讨了当前多肽抗氧化性强化方法的研究现状及存在的问题。这些工作将为食源性抗氧化肽的应用和拓展提供重要支持。

关键词：食源性多肽构效关系强化方法抗氧化性

四倍体海稻86的诱导、鉴定及其耐盐碱特性评价分析

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作物学报 2024年第4期50卷 914-931页

作者：李航宇刘心诚贺文婷刘可意乔振华吕品苍张献华何玉池蔡得田宋兆建湖北大学生命科学学院湖北武汉430062 武汉多倍体生物科技有限公司湖北武汉430345

多倍体化是植物进化的重要趋势之一。与二倍体植物相比,多倍体植物往往具有更强的抗耐性。海稻86是具有强耐盐碱能力的水稻种质资源,在盐碱地开发应用和粮食增产研究中具有重要利用价值。为充分利用多倍体植物抗逆性增强的优势,选育耐... 详细信息

多倍体化是植物进化的重要趋势之一。与二倍体植物相比,多倍体植物往往具有更强的抗耐性。海稻86是具有强耐盐碱能力的水稻种质资源,在盐碱地开发应用和粮食增产研究中具有重要利用价值。为充分利用多倍体植物抗逆性增强的优势,选育耐盐碱能力更强的四倍体水稻新品种,本研究以海稻86为基础,对其进行离体染色体加倍获得海稻86同源四倍体;以海稻86-4x和海稻86-2x发芽期和幼苗期NaCl、Na_(2)CO_(3)和PEG-6000胁迫处理的表型指标及生理生化指标鉴定,检测两者的耐盐碱特性及差异。结果表明:(1)通过离体染色体加倍可高效诱导获得四倍体植株,加倍率达27.63%。(2)与海稻86-2x相比,海稻86-4x的细胞核DNA含量及根尖染色体数目增加一倍;形态及农艺性状发生明显变化,如植株变矮、茎秆变粗、单株有效穗数减少、籽粒及千粒重增大、每穗总粒数及每穗实粒数减少、结实率降低等。(3)在发芽期,海稻86-4x的发芽势、发芽率、芽长、根长、根数、含水量最高,海稻86-2x次之,对照黄华占最低;海稻86-4x的盐碱害率最小、盐碱害等级最低,海稻86-2x次之,对照黄华占的盐碱害率最大、盐碱害等级最高。(4)在幼苗期,海稻86-4x的脯氨酸和叶绿素含量最高、丙二醛含量和相对电导率最低,超氧化物歧化酶和过氧化物酶活性最高,海稻86-2x次之,而对照黄华占的脯氨酸和叶绿素含量最低、丙二醛含量和相对电导率最高、超氧化物歧化酶和过氧化物酶活性最低。综上可知,与海稻86-2x相比,海稻86-4x在表型指标和生理生化指标上均表现出明显的耐盐碱性优势,具有更强的耐盐碱能力。该研究结果为深入解析海稻86的耐盐碱机制奠定基础,也为耐盐碱四倍体水稻新品种的选育提供了材料基础和理论依据。

关键词：海稻86 离体染色体加倍四倍体耐盐碱性发芽势发芽率生理生化指标

稳定表达CD19-FLUC-GFP的CT26细胞系的构建及鉴定

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生物工程学报 2024年第2期40卷 458-472页

作者：郭雨洁段海潇程奕宁杨斌丰胡翰刘滨磊汪洋湖北工业大学生物工程与食品学院湖北武汉430068 武汉滨会生物科技股份有限公司湖北鄂州436000

实体瘤缺乏明确的嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T-cell,CAR-T)治疗靶点。因此,通过慢病毒将已经明确的靶点分子CD19带入实体瘤细胞系,研究CD19 CAR-T细胞对其的杀伤,能够为CAR-T细胞针对实体瘤的治疗提供潜在的支撑。... 详细信息

实体瘤缺乏明确的嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T-cell,CAR-T)治疗靶点。因此,通过慢病毒将已经明确的靶点分子CD19带入实体瘤细胞系,研究CD19 CAR-T细胞对其的杀伤,能够为CAR-T细胞针对实体瘤的治疗提供潜在的支撑。本研究利用三质粒慢病毒系统构建了稳定表达CD19、萤火虫荧光素酶(firefly luciferase,FLUC)和绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)的结肠癌CT26细胞系CT26-CD19-FLUC-GFP。该细胞系与CT26细胞系的生长活性一致。通过流式细胞术检测不同代次CT26-CD19-FLUC-GFP细胞,证实了CT26-CD19-FLUC-GFP细胞连续传代至第5、10、22代后CD19及GFP的稳定表达。进一步证实,连续传代至第22代的CT26-CD19-FLUC-GFP细胞中的CD19 mRNA及FLUC表达水平显著高于对照组CT26细胞。与T细胞相比,CD19CAR-T细胞能够显著杀伤CT26-CD19-FLUC-GFP细胞及MC38-CD19细胞。CT26-CD19-FLUC-GFP细胞腹腔植入小鼠体内1周后,通过活体成像仪可以检测到腹腔区域的FLUC表达。上述结果表明,成功构建了稳定表达CD19-FLUC-GFP的CT26细胞系,且该细胞系能够被CD19 CAR-T细胞特异性杀伤。

关键词： CD19 萤火虫荧光素酶 CT26细胞嵌合抗原受体T细胞(CAR-T) 慢病毒

毒性病理学及人工智能数字组织图像分析质量控制概述

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中国新药杂志 2024年第5期33卷 441-448页

作者：滕伊洋张亚群李一昊钱庄汪溪洁吕建军中国医药工业研究总院上海201203 上海益诺思生物技术股份有限公司上海200043 益诺思生物技术南通有限公司南通226133 湖北天勤鑫圣生物科技有限公司武汉430207

随着人工智能和机器学习的快速发展,人工智能对全切片图像的诊断几乎可以媲美病理学家,建立人工智能算法需要大量的数字组织图像训练集数据。数字组织图像分析是通过各种算法分析全切片图像,并从其中提取大量复杂的定量数据集。数字组... 详细信息

随着人工智能和机器学习的快速发展,人工智能对全切片图像的诊断几乎可以媲美病理学家,建立人工智能算法需要大量的数字组织图像训练集数据。数字组织图像分析是通过各种算法分析全切片图像,并从其中提取大量复杂的定量数据集。数字组织图像分析的质量控制不仅非常重要,而且是确保建立高质量数据集和AI算法的基础和前提。本文简要概述了全切片图像的质量控制策略、数字组织图像分析的影响因素和质量控制方法、数字组织图像分析结果的质量控制方法、毒性病理学家在数字组织图像分析中的作用、数据解释和报告以及数字组织图像用于毒性病理学诊断及AI的挑战,以期为我国药物非临床安全性评价毒性试验中使用全切片图像进行毒性病理学诊断及建立AI各种算法提供一定参考。

关键词：毒性病理学人工智能数字组织图像分析质量控制全切片图像

大球盖菇腐败真菌的分离、鉴定及生长特性研究

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食品工业科技 2024年第9期45卷 131-139页

作者：刘鑫燕李占峰彭帮柱华中农业大学食品科学技术学院湖北武汉430000 漯河微康生物科技有限公司河南漯河462300

目的:为避免微生物生长引起的大球盖菇褐变和腐败,亟待开展大球盖菇腐败菌种类的相关研究,并为探究贮藏保鲜技术提供理论依据。方法:对大球盖菇的腐败菌进行分离、纯化,通过致腐性分析筛选出优势腐败菌并对其进行形态学鉴定、分子生物... 详细信息

目的:为避免微生物生长引起的大球盖菇褐变和腐败,亟待开展大球盖菇腐败菌种类的相关研究,并为探究贮藏保鲜技术提供理论依据。方法:对大球盖菇的腐败菌进行分离、纯化,通过致腐性分析筛选出优势腐败菌并对其进行形态学鉴定、分子生物学鉴定及生长特性研究。结果:分离得到镰刀菌属16株、曲霉属14株,根霉属4株。通过致腐性分析筛选出四种致腐性强的腐败菌,经形态学和分子生物学手段鉴定其分别为假嗜花镰刀菌(Fusarium pseudoanthophilum)、黑曲霉(Aspergillus niger)、单孢根霉菌(Rhizopus azygosporus)和产紫蓝状菌(Talaromyces purpureogenus)。对四种腐败菌的生长特性进行分析,发现其最适生长温度为25~28℃。温度为4~10℃和35~55℃时腐败菌生长缓慢,60℃时腐败菌无法生长。其最适生长pH为7.0左右,pH为13.0时腐败菌无法生长。结论:大球盖菇采后贮藏在低温和适当的碱性环境可抑制腐败菌的生长繁殖,利于大球盖菇贮藏保鲜。

关键词：大球盖菇腐败菌分离鉴定

食品安全检测中原子光谱法仪器常见问题及解决方法

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中外食品工业 2024年第2期 26-28页

作者：刘天齐武汉天姿堂生物科技有限公司

原子光谱是研究原子内部结构和性质的重要手段，其发展经历了漫长而丰富多彩的历程。原子光谱的起源可以追溯到公元前5世纪的古希腊，当时的哲学家德谟克利特首次提出了“原子”这一概念。然而，直到19世纪初，原子光谱的研究才取得了... 详细信息

原子光谱是研究原子内部结构和性质的重要手段，其发展经历了漫长而丰富多彩的历程。原子光谱的起源可以追溯到公元前5世纪的古希腊，当时的哲学家德谟克利特首次提出了“原子”这一概念。然而，直到19世纪初，原子光谱的研究才取得了突破性进展。随着对原子光谱的研究不断深入，科学家们开始探索如何利用光谱分析来研究物质的组成和性质。1860年，德国化学家罗伯特·威廉·伯恩斯特提出了“伯恩斯特系列”，通过对氢原子光谱的研究，他成功地建立了原子光谱的理论模型。此后，光谱分析逐渐成为化学、物理等领域中不可或缺的工具。

关键词：食品安全原子荧光光谱原子吸收光谱加标回收率

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温变油墨在烟用接装纸上的研究及应用验证

黑龙江科学 2024年第8期15卷 146-148页

作者：田强刘艺徐竟凡何俊武汉淡雅香生物科技有限公司武汉430048

温变油墨通常用于烟标印刷中,但在烟用接装纸的印刷中,有关温变油墨的应用鲜有报道,具有较大的研究空间与发展潜力。针对温变油墨是否能在接装纸上印刷进行研究与制样,经上机实验验证发现,温变油墨在烟用接装纸上印刷具有可行性,为印刷... 详细信息

温变油墨通常用于烟标印刷中,但在烟用接装纸的印刷中,有关温变油墨的应用鲜有报道,具有较大的研究空间与发展潜力。针对温变油墨是否能在接装纸上印刷进行研究与制样,经上机实验验证发现,温变油墨在烟用接装纸上印刷具有可行性,为印刷行业从业人员提供启示。

关键词：温变油墨烟用接装纸印刷工艺