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自噬在大鼠睾丸扭转致缺血再灌注损伤中的作用机制

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海军军医大学学报 2024年第1期45卷 57-63页

作者：胡志徐律孙伟付桥张炜陈一衍褚浩武汉大学附属同仁医院(武汉市第三医院)光谷院区泌尿外科武汉430014 武汉大学附属同仁医院(武汉市第三医院)泌尿外科武汉430000

目的探讨自噬在大鼠睾丸扭转所致缺血再灌注损伤(I/RI)中的作用机制。方法将40只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、I/RI组、I/RI+雷帕霉素(RAPA)组和I/RI+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组,每组10只。后3组大鼠建立左侧睾丸扭转(720°,1 h)复位模型... 详细信息

目的探讨自噬在大鼠睾丸扭转所致缺血再灌注损伤(I/RI)中的作用机制。方法将40只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、I/RI组、I/RI+雷帕霉素(RAPA)组和I/RI+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组,每组10只。后3组大鼠建立左侧睾丸扭转(720°,1 h)复位模型,I/RI+RAPA组和I/RI+3-MA组大鼠造模前分别给予自噬激动剂RAPA和自噬抑制剂3-MA干预。于睾丸复位12 h后取各组大鼠左侧睾丸和附睾,收集精子进行精子质量分析,采用H-E染色观察睾丸组织病理变化,采用试剂盒检测睾丸组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、总抗氧化能力(T-AOC),采用TUNEL染色检测睾丸组织细胞凋亡水平,通过蛋白质印迹法检测睾丸组织中自噬相关蛋白(Beclin1、p62)和凋亡相关蛋白(Bcl2、Bax、cleaved caspase 3)表达水平。结果与假手术组比较,I/RI组大鼠精子质量下降,睾丸曲细精管排列松散,生殖细胞减少、脱落,睾丸组织SOD活性、T-AOC降低(均P<0.05),MDA含量升高(P<0.05),p62和Bcl2蛋白表达水平降低(均P<0.05),Beclin1、Bax和cleaved caspase 3蛋白表达水平升高(均P<0.05),凋亡生殖细胞明显增多。与I/RI组比较,I/RI+RAPA组大鼠精子质量提高,睾丸曲细精管排列正常,睾丸组织SOD活性、T-AOC升高(均P<0.05),MDA含量降低(P<0.05),Beclin1和Bcl2蛋白表达水平升高(均P<0.05),p62、Bax和cleaved caspase 3蛋白表达水平降低(均P<0.05),凋亡生殖细胞减少;I/RI+3-MA组大鼠精子质量下降,睾丸曲细精管排列松散,睾丸组织SOD活性、T-AOC降低(均P<0.05),MDA含量升高(P<0.05),Beclin1和Bcl2蛋白表达水平降低(均P<0.05),p62、Bax和cleaved caspase 3蛋白表达水平升高(均P<0.05),凋亡生殖细胞增多。结论激活自噬可改善I/RI大鼠精子质量和睾丸组织病理损伤,缓解氧化应激,抑制生殖细胞凋亡。

关键词：睾丸扭转缺血再灌注损伤自噬氧化性应激生殖细胞细胞凋亡

应用群体药动学模型及蒙特卡洛模拟优化淋巴结核患者使用异烟肼注射剂最佳给药方案

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中国抗生素杂志 2024年第9期49卷 1068-1074页

作者：张欢刘小玉丁巧燕张宇李思思马丽华周铭武汉市肺科医院药学部武汉市肺科医院外科

目的应用非线性混合效应法(NLME)建立异烟肼注射剂在中国淋巴结核患者群体的药动学(PPK)模型，采用蒙特卡洛模拟优化异烟肼注射剂在不同NAT2代谢基因型淋巴结核患者中的给药方案。方法纳入武汉市肺科医院淋巴结核患者28例，收集66个... 详细信息

目的应用非线性混合效应法(NLME)建立异烟肼注射剂在中国淋巴结核患者群体的药动学(PPK)模型，采用蒙特卡洛模拟优化异烟肼注射剂在不同NAT2代谢基因型淋巴结核患者中的给药方案。方法纳入武汉市肺科医院淋巴结核患者28例，收集66个血药浓度数据和相关临床资料。采用NLME法建立PPK模型，考察NAT2代谢基因型等因素对异烟肼注射剂体内药动学特征的影响。采用诊断图、Bootstrap法、NPDE法和VPC法评价PPK模型的预测能力。采用蒙特卡洛模拟法探索不同NAT2代谢基因型患者的最佳给药方案。结果异烟肼注射剂具有一级吸收的二室模型特征，患者NAT2代谢基因型是影响其清除率的重要因素，快、中间和慢代谢基因型患者清除率分别为：53.7、44.6和25.4 L/h，表观分布容积为29.8 L。模型评价表明，模型参数估算可靠、模型稳定。蒙特卡洛模拟结果显示，NAT2快、中间、慢代谢基因型的淋巴结核患者，异烟肼注射剂最佳给药剂量分别为600、450和300 mg。结论本研究成功建立中国淋巴结核患者异烟肼注射剂PPK模型，定量描述NAT2代谢基因型对异烟肼注射剂药动学的影响，针对不同基因型患者制定最佳给药方案，为异烟肼个体化治疗提供参考。

关键词：异烟肼注射剂群体药动学蒙特卡洛模拟淋巴结核

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单孔胸腔镜手术在结核性毁损肺治疗中的应用

中华外科杂志 2024年第5期62卷 432-437页

作者：蒋钰辉刘奇斌姚利戴希勇武汉市肺科医院外科武汉430030

目的探讨单孔胸腔镜手术治疗结核性毁损肺的临床效果和技术要点。方法本研究为回顾性病例系列研究。回顾性分析2020年6月至2022年5月行单孔胸腔镜肺切除术的33例结核性毁损肺患者的临床资料。男性13例,女性20例;年龄(47.5±16.2)岁(范围... 详细信息

目的探讨单孔胸腔镜手术治疗结核性毁损肺的临床效果和技术要点。方法本研究为回顾性病例系列研究。回顾性分析2020年6月至2022年5月行单孔胸腔镜肺切除术的33例结核性毁损肺患者的临床资料。男性13例,女性20例;年龄(47.5±16.2)岁(范围:19~68岁)。所有病例均有胸膜粘连,其中30例全胸膜腔粘连闭锁,21例有胸腔淋巴结钙化。17例合并曲霉菌感染,4例为耐药结核病。手术切口位于第5肋间腋中线处,长度4~5 cm。术中按照先易后难的原则松解胸膜粘连,根据探查情况选择合适的流程解剖和处理病肺。行上叶切除术12例,上叶切除+下叶背段切除术11例,下叶切除术3例,全肺切除术3例,中叶+下叶切除术2例,上叶切除+下叶背段切除+基底段楔形切除2例。总结分析手术操作技巧、围手术期评估和治疗、并发症处理及治疗效果等。结果6例中转为胸腔镜辅助小切口或开胸手术,其中3例因肺门致密炎性粘连及钙化淋巴结嵌顿,术中损伤肺动脉导致出血而中转为胸腔镜辅助小切口手术;2例因胸腔炎症重,粘连松解后胸壁广泛渗血,中转开胸手术;1例左全肺切除术因纵隔移位、牵拉暴露困难而中转开胸手术。27例顺利完成单孔胸腔镜手术,手术时间(238.7±76.8)min(范围:60~420 min),术中出血量(400.4±315.9)ml(范围:50~1200 ml),术后引流时间(12.7±8.3)d(范围:3~42 d),术后住院时间(15.2±7.9)d(范围:6~43 d)。术后发生持续性肺漏气12例;胸腔活动性出血2例,1例保守治疗治愈,1例行二次手术止血;支气管胸膜瘘1例持续胸腔引流控制感染后,经纤维支气管镜植入支气管单向活瓣后治愈。结论对于严格选择的病例,运用合适的手术流程和技巧,单孔胸腔镜手术的手术结果、早期恢复和远期预后总体较好,可降低手术创伤。

关键词：结核,肺胸外科手术,电视辅助外科手术,微创性回顾性研究

CRISPR/CAS9敲除PD-1的肿瘤浸润T淋巴细胞回输对小鼠结肠癌的治疗作用

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中国免疫学杂志 2024年第6期40卷 1189-1196页

作者：瞿紫微李晓辉郭建辉陈华涛吴彪孟庆彬武汉市第一医院胃肠外科武汉430022

目的:探讨应用成簇规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白(CRISPR/Cas9)技术敲除程序性死亡分子-1(PD-1)的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)回输对结肠癌小鼠的治疗作用。方法:皮下注射CT26构建小鼠结肠癌模型,从3只模型小鼠肿瘤组织中提取TIL,并... 详细信息

目的:探讨应用成簇规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白(CRISPR/Cas9)技术敲除程序性死亡分子-1(PD-1)的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)回输对结肠癌小鼠的治疗作用。方法:皮下注射CT26构建小鼠结肠癌模型,从3只模型小鼠肿瘤组织中提取TIL,并提取外周血淋巴细胞;对TIL进行PD-1基因敲除;回输实验分为对照组(Control)、输注淋巴细胞组(Lym)、输注荷瘤小鼠TIL组(TIL)、慢病毒空载对照组(pVSV-G-PX458-NC)组、PX458-PD-1-sgRNA1组(PD-1-sgRNA1),每组10只;测量各组小鼠肿瘤组织质量及肿瘤抑制率;TUNEL法检测各组小鼠肿瘤组织细胞凋亡;ELISA检测各组小鼠肿瘤组织TNF-α和IFN-γ含量;免疫组化检测肿瘤组织CD4+T、CD8+T细胞表达;免疫荧光法检测肿瘤组织细胞增殖核抗原-67(Ki-67)和血管内皮生长因子(VEGF)表达;Western blot检测肿瘤组织PD-1及其主要配体PD-L1表达。结果:PD-1-sgRNA1能明显抑制小鼠肿瘤细胞体内生长,抑制肿瘤组织Ki-67和VEGF表达及PD-1、PD-L1表达,提高肿瘤组织细胞凋亡率、TNF-α、IFN-γ含量、CD4+T、CD8+T细胞表达(均P<0.05)。结论:CRISPR/CAS9敲除PD-1的TIL回输能明显抑制结肠癌小鼠肿瘤组织Ki-67和VEGF表达,增加CD4+T、CD8+T细胞,诱导肿瘤细胞凋亡,发挥抑制肿瘤生长作用。

关键词： CRISPR/Cas9 PD-1 结肠癌肿瘤浸润淋巴细胞肿瘤生长

基于CCL2-CCR2信号轴探索松萝酸对胃癌细胞恶性行为的影响

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中国免疫学杂志 2024年第8期40卷 1665-1670页

作者：滕晓丽时昭红孟庆彬周晓黎廖艳万莹杨健武汉市第一医院消化内科武汉430022 武汉市第一医院胃肠外科武汉430022

目的:探讨松萝酸(UA)调节CC趋化因子配体2-CCL2受体(CCR2)信号轴对胃癌细胞恶性行为的影响。方法:以生长良好的人胃癌细胞系SGC-7901细胞为研究对象,通过不同浓度的UA处理,设为UA低浓度(UA-L)组(62.5μmol/L UA)、UA中浓度(UA-M)组(125... 详细信息

目的:探讨松萝酸(UA)调节CC趋化因子配体2-CCL2受体(CCR2)信号轴对胃癌细胞恶性行为的影响。方法:以生长良好的人胃癌细胞系SGC-7901细胞为研究对象,通过不同浓度的UA处理,设为UA低浓度(UA-L)组(62.5μmol/L UA)、UA中浓度(UA-M)组(125μmol/L UA)、UA高浓度(UA-H)组(250μmol/L UA);同时对细胞转染CCL2过表达载体(pc DNA3.1 CCL2)、空载体(pc DNA3.1)、沉默CCL2(si CCL2)及阴性对照(si control),并采用250μmol/L UA处理SGC-7901细胞,标记为UA-H+pc DNA3.1 CCL2组、UA-H+pc DNA3.1组、UA-H+si CCL2组、UA-H+si control组,另取未处理的SGC-7901细胞作为对照组。流式细胞术、MTT及qRT-PCR检测细胞凋亡、增殖及CCL2、CCR2 mRNA表达水平;Western blot检测PD-L1、凋亡蛋白(Bax)、增殖蛋白(CyclinD1、CCL2、CCR2)、免疫逃逸相关蛋白(B7H1)表达水平;与体外分离培养的CD8+T细胞共培养后,ELISA检测上清液中IL-4、IFN-γ、IL-10水平。将各组细胞与活化的外周血单个核细胞(PBMC)1∶1共培养72 h,比较各组胃癌细胞对T细胞介导的杀伤敏感性。结果:与对照组相比,UA-L组、UA-M组、UA-H组细胞增殖率、IL-10水平、CyclinD1、PD-L1、CCL2、CCR2、B7H1蛋白及mRNA表达、与活化的PBMC 1∶1共培养72 h后的细胞计数显著降低,细胞凋亡率、IL-4、IFN-γ水平、Bax蛋白表达显著升高(P<0.05);与UA-H+pc DNA3.1组相比,UA-H+pc DNA3.1 CCL2组细胞增殖率、IL-10水平、CyclinD1、PDL1、CCL2、CCR2蛋白及mRNA表达、与活化的PBMC 1∶1共培养72 h后的细胞计数显著增加,细胞凋亡率、IL-4、IFN-γ水平、Bax蛋白表达显著降低(P<0.05);与UA-H+si control组相比,UA-H+si CCL2组细胞增殖率、IL-10水平、CyclinD1、PD-L1、CCL2、CCR2蛋白及mRNA表达、与活化的PBMC 1∶1共培养72 h后的细胞计数显著降低,细胞凋亡率、IL-4、IFN-γ水平、Bax蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论:UA可抑制胃癌细胞增殖、免疫逃逸,诱导其凋亡,可能与抑制CCL2-CCR2信号轴有关。

关键词：松萝酸 CCL2-CCR2信号轴胃癌细胞增殖凋亡免疫逃逸

长链非编码RNAKCNK15-AS1靶向微RNA-140-5p对骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡及炎症因子表达的影响

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中华骨与关节外科杂志 2024年第5期17卷 459-466页

作者：孙鹏张国华陈超斌刘彬陈美周一林杨翾武汉市普仁医院骨关节外科武汉430081

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)KCNK15-AS1是否通过靶向微RNA-140-5p(miR-140-5p)影响骨关节炎(OA)软骨细胞增殖、凋亡,炎症因子表达及细胞外基质(ECM)合成。方法:实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测KCNK15-AS1和miR-140-5p在OA软骨组织中的表达。在OA软骨细胞中转染si-KCNK15-AS1,噻唑蓝(MTT)和流式细胞术分别检测细胞增殖与凋亡,蛋白质印迹法(WB)检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、p21、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-8、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、蛋白聚糖(Aggrecan)、Ⅱ型胶原(Collagen typeⅡ)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、MMP-9、MMP-13的表达。双荧光素酶活性检测分析KCNK15-AS1与miR-140-5p的靶向关系。si-KCNK15-AS1和anti-miR-140-5p共转染,观察干扰miR-140-5p表达对抑制KCNK15-AS1表达诱导的OA软骨细胞增殖、凋亡,炎症因子表达及ECM合成的影响。结果:与正常软骨组织比较,OA软骨组织中KCNK15-AS1表达量明显增加(P<0.05),miR-140-5p表达量显著减少(P<0.05)。抑制KCNK15-AS1表达明显提高OA软骨细胞24 h、48 h、72 h的吸光度(OD)值和CyclinD1、Bcl-2蛋白表达量、Aggrecan、Collagen typeⅡ水平(P<0.05),显著降低细胞凋亡率、p21、Bax蛋白水平、IL-6、TNF-α、IL-8、MMP-3、MMP-9、MMP-13水平(P<0.05)。KCNK15-AS1靶向miR-140-5p抑制miR-140-5p的表达。干扰miR-140-5p表达逆转了抑制KCNK15-AS1表达对OA软骨细胞增殖、ECM合成的促进作用,对细胞凋亡、炎症因子表达的抑制作用。结论:LncRNA KCNK15-AS1通过靶向调控miR-140-5p表达影响OA软骨细胞增殖、凋亡、炎症因子表达及ECM合成。

关键词：长链非编码RNA KCNK15-AS1 微RNA-140-5p 软骨细胞增殖炎症细胞外基质

桃叶珊瑚苷调控RhoA/ROCK信号通路对胃癌MGC803细胞上皮间质转化和血管生成拟态的影响

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中国肿瘤生物治疗杂志 2024年第4期31卷 365-370页

作者：宋鸣周昕刘俊胡伟张敏郑新武汉市第三医院外科湖北武汉442000

目的:探究桃叶珊瑚苷(AU)调控RhoA/ROCK信号通路对胃癌MGC803细胞上皮间质转化(EMT)进程和血管生成拟态(VM)形成的影响。方法:常规培养人胃癌MGC803细胞,将其随机分为对照组、AU-L组(20μmol/L AU)、AU-M组(40μmol/L AU)、AU-H组(80μm... 详细信息

目的:探究桃叶珊瑚苷(AU)调控RhoA/ROCK信号通路对胃癌MGC803细胞上皮间质转化(EMT)进程和血管生成拟态(VM)形成的影响。方法:常规培养人胃癌MGC803细胞,将其随机分为对照组、AU-L组(20μmol/L AU)、AU-M组(40μmol/L AU)、AU-H组(80μmol/L AU)、AU-H+RhoA激活剂水仙环素(Nar)组(AU-H+Nar组,80μmol/L AU+30μmol/L Nar)。采用CCK-8法、Transwell实验、细胞划痕实验分别检测不同浓度AU对细胞增殖、迁移和侵袭的影响,三维细胞培养法观察不同浓度AU对细胞体外VM管腔结构形成的影响,WB法检测AU对各组细胞RhoA、ROCK、VM与EMT相关蛋白表达的影响。结果:与对照组相比,AU-M组、AU-H组MGC803细胞增殖率(48、72 h时)、细胞迁移率、细胞侵袭数目、VM管腔结构数,以及RhoA、ROCK1、N-cadherin、vimentin、VE-cadherin的蛋白表达均显著降低(均P<0.05),E-cadherin表达显著升高(P<0.05);同时,使用Nar处理显著减弱了AU对MGC803细胞EMT和VM形成的抑制作用(均P<0.05)。结论:AU通过下调RhoA/ROCK信号通路抑制胃癌MGC803细胞的增殖、迁移、侵袭、EMT和VM形成过程。

关键词：桃叶珊瑚苷 RhoA/ROCK信号通路胃癌 MGC803细胞上皮间质转化血管生成拟态

帕纳替尼调控miR-92b-3p对胆管癌恶性生物学行为的影响

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中国临床药理学杂志 2024年第19期40卷 2847-2852页

作者：邱实杜杰罗刚林一煌张子强江帆武汉市普仁医院胆石病中心武汉市普仁医院肝胆胰疝外科

目的研究帕纳替尼对胆管癌（CCA）的影响及分子作用机制。方法将QBC939细胞分为对照组（不做任何处理）、低剂量组(0.1μmol·L-1帕纳替尼处理)、中剂量组(0.5μmol·L-1帕纳替尼处理)、高剂量组(1.0μmol·L-1帕纳替尼处理)、高剂量+... 详细信息

目的研究帕纳替尼对胆管癌（CCA）的影响及分子作用机制。方法将QBC939细胞分为对照组（不做任何处理）、低剂量组(0.1μmol·L-1帕纳替尼处理)、中剂量组(0.5μmol·L-1帕纳替尼处理)、高剂量组(1.0μmol·L-1帕纳替尼处理)、高剂量+microRNA-92b-3组(1.0μmol·L-1帕纳替尼处理后转染miR-92b-3p mimic)、高剂量+miR-92b-3p mimic+过表达同源结构域相互作用蛋白激酶3质粒（oe-HIPK3）组(1.0μmol·L-1帕纳替尼处理后转染miR-92b-3p mimic和oe-HIPK3)、mimic-NC组（转染miR-92b-3p NC）、miR-92b-3p mimic组（转染miR-92b-3p mimic）。用细胞计数试剂盒8检测细胞的增殖情况，用Transwell实验法检测细胞迁移，用蛋白质印迹法检测蛋白相对表达水平。结果对照组、高剂量组、高剂量+miR-92b-3p mimic组、高剂量+miR-92b-3p mimic+oe-HIPK3组的细胞增殖率分别为（76.58±8.56）%、（61.85±7.77）%、（74.54±7.68）%和（58.63±6.87）%,细胞迁移数量分别为（185.32±20.14）、（132.33±18.99）、（168.23±19.85）和（138.66±15.95）个，磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶（p-PI3K）/PI3K比值分别为1.00±0.23、0.68±0.09、0.91±0.18和0.60±0.08,磷酸化蛋白激酶B（p-AKT）/AKT比值分别为1.00±0.25、0.61±0.08、1.12±0.28和0.72±0.14;高剂量组的上述指标与对照组比较，高剂量+miR-92b-3p mimic组的上述指标与高剂量组比较，高剂量+miR-92b-3p mimic+oe-HIPK3组的上述指标与高剂量+miR-92b-3p mimic组比较，在统计学上差异均有统计学差异（均P<0.05）。结论帕纳替尼能有效抑制胆管癌的恶性生物学行为，可能与抑制miR-92b-3p水平，促进HIPK3介导的PI3K/AKT信号通路有关。

关键词：帕纳替尼非编码微小RNA-92b-3p 胆管癌同源结构域相互作用蛋白激酶3 磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号通路

急性结石性胆囊炎经腹腔镜胆囊切除中转开腹术治疗预后的影响因素

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当代医学 2024年第3期30卷 146-149页

作者：胡俊君李敢春明涛武汉市第七医院外科湖北武汉430071

目的探讨急性结石性胆囊炎(ACC)经腹腔镜胆囊切除中转开腹术(CLOC)治疗预后的影响因素。方法回顾性分析2019年9月至2021年3月武汉市第七医院收治的68例ACC经CLOC治疗患者的临床资料,根据术后1年预后情况分为预后不良组(n=23)与预后良好... 详细信息

目的探讨急性结石性胆囊炎(ACC)经腹腔镜胆囊切除中转开腹术(CLOC)治疗预后的影响因素。方法回顾性分析2019年9月至2021年3月武汉市第七医院收治的68例ACC经CLOC治疗患者的临床资料,根据术后1年预后情况分为预后不良组(n=23)与预后良好组(n=45),比较两组临床资料,采用多元Logistic回归分析ACC经CLOC治疗患者预后的影响因素。结果两组年龄、体温、术前白细胞计数、右上腹肌紧张、胆囊壁厚度、胆囊肿大、胆囊颈部结石嵌顿、胆总管下段结石嵌顿、手术时机、上腹部手术史以及术者经验比较差异有统计学意义(P15×109/L(OR=2.528,95%CI:1.602~3.835)、右上腹肌紧张(OR=1.689,95%CI:1.234~2.046)、胆囊壁厚度≥6mm(OR=2.125,95%CI:1.628~4.159)、胆囊肿大(OR=1.399,95%CI:1.121~2.378)、胆囊颈部结石嵌顿(OR=1.539,95%CI:1.164~2.125)、胆总管下段结石嵌顿(OR=2.047,95%CI:1.533~3.862)及手术时机>48h(OR=1.936,95%CI:1.364~2.931)为ACC经CLOC治疗患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论术前白细胞计数、右上腹肌紧张、胆囊壁厚度、胆囊肿大、胆囊颈部结石嵌顿、胆总管下段结石嵌顿及手术时机是ACC经CLOC治疗患者预后不良的影响因素,临床可通过对其进行干预改善患者预后。

关键词：急性结石性胆囊炎腹腔镜胆囊切除中转开腹术预后影响因素