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自噬在大鼠睾丸扭转致缺血再灌注损伤中的作用机制

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海军军医大学学报 2024年第1期45卷 57-63页

作者：胡志徐律孙伟付桥张炜陈一衍褚浩武汉大学附属同仁医院(武汉市第三医院)光谷院区泌尿外科武汉430014 武汉大学附属同仁医院(武汉市第三医院)泌尿外科武汉430000

目的探讨自噬在大鼠睾丸扭转所致缺血再灌注损伤(I/RI)中的作用机制。方法将40只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、I/RI组、I/RI+雷帕霉素(RAPA)组和I/RI+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组,每组10只。后3组大鼠建立左侧睾丸扭转(720°,1 h)复位模型... 详细信息

目的探讨自噬在大鼠睾丸扭转所致缺血再灌注损伤(I/RI)中的作用机制。方法将40只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、I/RI组、I/RI+雷帕霉素(RAPA)组和I/RI+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组,每组10只。后3组大鼠建立左侧睾丸扭转(720°,1 h)复位模型,I/RI+RAPA组和I/RI+3-MA组大鼠造模前分别给予自噬激动剂RAPA和自噬抑制剂3-MA干预。于睾丸复位12 h后取各组大鼠左侧睾丸和附睾,收集精子进行精子质量分析,采用H-E染色观察睾丸组织病理变化,采用试剂盒检测睾丸组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、总抗氧化能力(T-AOC),采用TUNEL染色检测睾丸组织细胞凋亡水平,通过蛋白质印迹法检测睾丸组织中自噬相关蛋白(Beclin1、p62)和凋亡相关蛋白(Bcl2、Bax、cleaved caspase 3)表达水平。结果与假手术组比较,I/RI组大鼠精子质量下降,睾丸曲细精管排列松散,生殖细胞减少、脱落,睾丸组织SOD活性、T-AOC降低(均P<0.05),MDA含量升高(P<0.05),p62和Bcl2蛋白表达水平降低(均P<0.05),Beclin1、Bax和cleaved caspase 3蛋白表达水平升高(均P<0.05),凋亡生殖细胞明显增多。与I/RI组比较,I/RI+RAPA组大鼠精子质量提高,睾丸曲细精管排列正常,睾丸组织SOD活性、T-AOC升高(均P<0.05),MDA含量降低(P<0.05),Beclin1和Bcl2蛋白表达水平升高(均P<0.05),p62、Bax和cleaved caspase 3蛋白表达水平降低(均P<0.05),凋亡生殖细胞减少;I/RI+3-MA组大鼠精子质量下降,睾丸曲细精管排列松散,睾丸组织SOD活性、T-AOC降低(均P<0.05),MDA含量升高(P<0.05),Beclin1和Bcl2蛋白表达水平降低(均P<0.05),p62、Bax和cleaved caspase 3蛋白表达水平升高(均P<0.05),凋亡生殖细胞增多。结论激活自噬可改善I/RI大鼠精子质量和睾丸组织病理损伤,缓解氧化应激,抑制生殖细胞凋亡。

关键词：睾丸扭转缺血再灌注损伤自噬氧化性应激生殖细胞细胞凋亡

改良三尖瓣隔瓣成形术在儿童完全性房室间隔缺损中的应用及随访分析

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中华胸心血管外科杂志 2024年第4期40卷 201-206页

作者：范明莫绪明郁迪戚继荣孙剑彭卫武开宏江南大学附属儿童医院(无锡市儿童医院)心胸外科无锡214000 南京医科大学附属儿童医院心胸外科南京210000

目的总结并评价改良三尖瓣隔瓣成形技术处理完全性房室间隔缺损患儿三尖瓣隔瓣的疗效。方法选取2017年1月至2022年1月南京市儿童医院心胸外科治疗完全性房室间隔缺损患儿共计96例,术中三尖瓣处理均采用改良三尖瓣隔瓣成形术,通过超声心... 详细信息

目的总结并评价改良三尖瓣隔瓣成形技术处理完全性房室间隔缺损患儿三尖瓣隔瓣的疗效。方法选取2017年1月至2022年1月南京市儿童医院心胸外科治疗完全性房室间隔缺损患儿共计96例,术中三尖瓣处理均采用改良三尖瓣隔瓣成形术,通过超声心动图比较患儿术前及术后三尖瓣的反流程度以及右心室大小,评估改良三尖瓣隔瓣成形术的早中期疗效。结果96例患儿随访(32.04±17.62)个月,早期死亡3例,晚期死亡2例,8例患儿需二次手术。患儿术后1年、2年、5年免于三尖瓣中度以上反流率分别为:(97.8±1.5)%,(89.7±3.8)%,(78.5±11.0)%。术后超声心动图显示其末次随访时三尖瓣反流程度、右心室大小与术前相比均明显改善,心功能分级(NYHA分级)亦有明显好转。结论改良三尖瓣隔瓣成形术治疗完全性房室间隔缺损患儿三尖瓣病变,早中期疗效满意,具有很好的临床应用价值。

关键词：改良三尖瓣隔瓣成形术完全性房室间隔缺损儿童

关节镜辅助下改良耳屏切口颞下颌关节盘复位缝合术的疗效评价

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中国修复重建外科杂志 2024年

作者：刘森张林郭梁影孟献斌吴志刚蚌埠医科大学第一附属医院口腔颌面外科蚌埠市第二人民医院口腔颌面外科

目的探讨关节镜辅助下改良耳屏切口颞下颌关节盘复位缝合术治疗颞下颌关节盘前移位（anterior disc displacement,ADD）的疗效。方法回顾性分析2022年9月—2024年2月收治且符合选择标准的30例（45侧）颞下颌关节ADD患者临床资料。其中... 详细信息

目的探讨关节镜辅助下改良耳屏切口颞下颌关节盘复位缝合术治疗颞下颌关节盘前移位（anterior disc displacement,ADD）的疗效。方法回顾性分析2022年9月—2024年2月收治且符合选择标准的30例（45侧）颞下颌关节ADD患者临床资料。其中，15例（23侧）接受小切口颞下颌关节盘复位缝合术（全开放组），15例（22侧）接受关节镜辅助下改良耳屏切口颞下颌关节盘复位缝合术（关节镜组）。两组患者性别、年龄、病程、侧别、Wilkes-Bronstein分期以及术前疼痛视觉模拟评分（VAS）、最大开口度（maximal interincisal opening,MIO）、颞下颌关节功能障碍指数（dysfunction index,DI）、颞下颌关节紊乱指数（craniomandibular index,CMI）、肌肉压痛指数（palpation index,PI）等基线资料比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。术后3个月记录患者疼痛VAS评分、MIO以及颞下颌关节功能指标（PI、DI、CMI），计算上述指标手术前后差值（变化值）进行组间比较。术后1周行MRI检查，与术前图像比较评价关节盘复位情况，分为优、良、差，其中优及良判定有效复位；术后3个月行锥形束CT(cone beam CT,CBCT)检查观察髁突骨质修复情况。结果两组术后切口均Ⅰ期愈合。患者均获随访，随访时间3～18个月，平均8.2个月。全开放组3例、关节镜组1例出现面神经损伤症状，均经理疗及药物治疗后恢复正常。两组术后3个月MIO、VAS评分均较术前改善，颞下颌功能指标（PI、DI、CMI）均降低，差异有统计学意义（P颌功能指标变化值高于全开放组，差异有统计学意义（P0.05）。随访期间未见复发病例。术后MRI复查示全开放组关节盘有效复位率95.65%(22/23)、关节镜组为95.45%(21/22)，组间差异无统计学意义（P>0.05）;CBCT发现早期及时有效复位关节盘有利于髁突修复重建。结论关节镜辅助下改良耳屏切口颞下颌关节盘复位缝合术治疗ADD有明确效果，且创伤小、术后并发症少，患者恢复快，可获得较好早期疗效。

关键词：颞下颌关节盘前移位复位缝合术关节镜耳屏切口

自体毛发移植治疗儿童瘢痕性秃发的临床疗效观察

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中华小儿外科杂志 2024年第2期45卷 143-147页

作者：冯瑞王燕妮齐鸿燕王继萍靳飞王伊宁国家儿童医学中心首都医科大学附属北京儿童医院烧伤整形外科北京100045

目的探究自体毛发移植技术在儿童瘢痕性秃发、秃眉中的疗效和经验。方法收集了北京儿童医院烧伤整形外科2019年1月至2021年2月收治的因手术、烧伤、外伤导致的瘢痕性秃发、秃眉患儿共13例,其中男10例,女3例;年龄为(7.0±3.0)岁,年龄范围... 详细信息

目的探究自体毛发移植技术在儿童瘢痕性秃发、秃眉中的疗效和经验。方法收集了北京儿童医院烧伤整形外科2019年1月至2021年2月收治的因手术、烧伤、外伤导致的瘢痕性秃发、秃眉患儿共13例,其中男10例,女3例;年龄为(7.0±3.0)岁,年龄范围是4~12岁;其中10例秃发,3例秃眉。根据患儿病情特点采取自体毛囊单位提取(follicular unit extraction,FUE)或毛囊单位头皮条切取(follicular unit transplantation,FUT)移植术,随访时计算成活率、毛发生长情况、并发症,并以问卷的形式按照非常满意、满意、不满意3个标准对患儿家属进行满意度评价。结果 13例中有8例采用FUE、4例采用FUT、1例采用FUT+FUE的治疗方式。术后随访6~12个月,13例患儿毛发成活率平均值为80.9%(植发77.8%,植眉91.5%),临床效果非常满意者4例,基本满意者7例,2例认为疗效不满意,且已实施完成二次加密术。所有患儿均无术后并发症,移植毛发接近自然毛发分布特点,且供区瘢痕不明显。结论自体毛发移植技术是治疗儿童瘢痕性秃发、秃眉的安全有效的手段,应当临床推广。

关键词：瘢痕秃发毛发移植术秃眉

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单孔胸腔镜手术在结核性毁损肺治疗中的应用

中华外科杂志 2024年第5期62卷 432-437页

作者：蒋钰辉刘奇斌姚利戴希勇武汉市肺科医院外科武汉430030

目的探讨单孔胸腔镜手术治疗结核性毁损肺的临床效果和技术要点。方法本研究为回顾性病例系列研究。回顾性分析2020年6月至2022年5月行单孔胸腔镜肺切除术的33例结核性毁损肺患者的临床资料。男性13例,女性20例;年龄(47.5±16.2)岁(范围... 详细信息

目的探讨单孔胸腔镜手术治疗结核性毁损肺的临床效果和技术要点。方法本研究为回顾性病例系列研究。回顾性分析2020年6月至2022年5月行单孔胸腔镜肺切除术的33例结核性毁损肺患者的临床资料。男性13例,女性20例;年龄(47.5±16.2)岁(范围:19~68岁)。所有病例均有胸膜粘连,其中30例全胸膜腔粘连闭锁,21例有胸腔淋巴结钙化。17例合并曲霉菌感染,4例为耐药结核病。手术切口位于第5肋间腋中线处,长度4~5 cm。术中按照先易后难的原则松解胸膜粘连,根据探查情况选择合适的流程解剖和处理病肺。行上叶切除术12例,上叶切除+下叶背段切除术11例,下叶切除术3例,全肺切除术3例,中叶+下叶切除术2例,上叶切除+下叶背段切除+基底段楔形切除2例。总结分析手术操作技巧、围手术期评估和治疗、并发症处理及治疗效果等。结果6例中转为胸腔镜辅助小切口或开胸手术,其中3例因肺门致密炎性粘连及钙化淋巴结嵌顿,术中损伤肺动脉导致出血而中转为胸腔镜辅助小切口手术;2例因胸腔炎症重,粘连松解后胸壁广泛渗血,中转开胸手术;1例左全肺切除术因纵隔移位、牵拉暴露困难而中转开胸手术。27例顺利完成单孔胸腔镜手术,手术时间(238.7±76.8)min(范围:60~420 min),术中出血量(400.4±315.9)ml(范围:50~1200 ml),术后引流时间(12.7±8.3)d(范围:3~42 d),术后住院时间(15.2±7.9)d(范围:6~43 d)。术后发生持续性肺漏气12例;胸腔活动性出血2例,1例保守治疗治愈,1例行二次手术止血;支气管胸膜瘘1例持续胸腔引流控制感染后,经纤维支气管镜植入支气管单向活瓣后治愈。结论对于严格选择的病例,运用合适的手术流程和技巧,单孔胸腔镜手术的手术结果、早期恢复和远期预后总体较好,可降低手术创伤。

关键词：结核,肺胸外科手术,电视辅助外科手术,微创性回顾性研究

CRISPR/CAS9敲除PD-1的肿瘤浸润T淋巴细胞回输对小鼠结肠癌的治疗作用

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中国免疫学杂志 2024年第6期40卷 1189-1196页

作者：瞿紫微李晓辉郭建辉陈华涛吴彪孟庆彬武汉市第一医院胃肠外科武汉430022

目的:探讨应用成簇规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白(CRISPR/Cas9)技术敲除程序性死亡分子-1(PD-1)的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)回输对结肠癌小鼠的治疗作用。方法:皮下注射CT26构建小鼠结肠癌模型,从3只模型小鼠肿瘤组织中提取TIL,并... 详细信息

目的:探讨应用成簇规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白(CRISPR/Cas9)技术敲除程序性死亡分子-1(PD-1)的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)回输对结肠癌小鼠的治疗作用。方法:皮下注射CT26构建小鼠结肠癌模型,从3只模型小鼠肿瘤组织中提取TIL,并提取外周血淋巴细胞;对TIL进行PD-1基因敲除;回输实验分为对照组(Control)、输注淋巴细胞组(Lym)、输注荷瘤小鼠TIL组(TIL)、慢病毒空载对照组(pVSV-G-PX458-NC)组、PX458-PD-1-sgRNA1组(PD-1-sgRNA1),每组10只;测量各组小鼠肿瘤组织质量及肿瘤抑制率;TUNEL法检测各组小鼠肿瘤组织细胞凋亡;ELISA检测各组小鼠肿瘤组织TNF-α和IFN-γ含量;免疫组化检测肿瘤组织CD4+T、CD8+T细胞表达;免疫荧光法检测肿瘤组织细胞增殖核抗原-67(Ki-67)和血管内皮生长因子(VEGF)表达;Western blot检测肿瘤组织PD-1及其主要配体PD-L1表达。结果:PD-1-sgRNA1能明显抑制小鼠肿瘤细胞体内生长,抑制肿瘤组织Ki-67和VEGF表达及PD-1、PD-L1表达,提高肿瘤组织细胞凋亡率、TNF-α、IFN-γ含量、CD4+T、CD8+T细胞表达(均P<0.05)。结论:CRISPR/CAS9敲除PD-1的TIL回输能明显抑制结肠癌小鼠肿瘤组织Ki-67和VEGF表达,增加CD4+T、CD8+T细胞,诱导肿瘤细胞凋亡,发挥抑制肿瘤生长作用。

关键词： CRISPR/Cas9 PD-1 结肠癌肿瘤浸润淋巴细胞肿瘤生长

长链非编码RNAKCNK15-AS1靶向微RNA-140-5p对骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡及炎症因子表达的影响

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中华骨与关节外科杂志 2024年第5期17卷 459-466页

作者：孙鹏张国华陈超斌刘彬陈美周一林杨翾武汉市普仁医院骨关节外科武汉430081

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)KCNK15-AS1是否通过靶向微RNA-140-5p(miR-140-5p)影响骨关节炎(OA)软骨细胞增殖、凋亡,炎症因子表达及细胞外基质(ECM)合成。方法:实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测KCNK15-AS1和miR-140-5p在OA软骨组织中的表达。在OA软骨细胞中转染si-KCNK15-AS1,噻唑蓝(MTT)和流式细胞术分别检测细胞增殖与凋亡,蛋白质印迹法(WB)检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、p21、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-8、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、蛋白聚糖(Aggrecan)、Ⅱ型胶原(Collagen typeⅡ)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、MMP-9、MMP-13的表达。双荧光素酶活性检测分析KCNK15-AS1与miR-140-5p的靶向关系。si-KCNK15-AS1和anti-miR-140-5p共转染,观察干扰miR-140-5p表达对抑制KCNK15-AS1表达诱导的OA软骨细胞增殖、凋亡,炎症因子表达及ECM合成的影响。结果:与正常软骨组织比较,OA软骨组织中KCNK15-AS1表达量明显增加(P<0.05),miR-140-5p表达量显著减少(P<0.05)。抑制KCNK15-AS1表达明显提高OA软骨细胞24 h、48 h、72 h的吸光度(OD)值和CyclinD1、Bcl-2蛋白表达量、Aggrecan、Collagen typeⅡ水平(P<0.05),显著降低细胞凋亡率、p21、Bax蛋白水平、IL-6、TNF-α、IL-8、MMP-3、MMP-9、MMP-13水平(P<0.05)。KCNK15-AS1靶向miR-140-5p抑制miR-140-5p的表达。干扰miR-140-5p表达逆转了抑制KCNK15-AS1表达对OA软骨细胞增殖、ECM合成的促进作用,对细胞凋亡、炎症因子表达的抑制作用。结论:LncRNA KCNK15-AS1通过靶向调控miR-140-5p表达影响OA软骨细胞增殖、凋亡、炎症因子表达及ECM合成。

关键词：长链非编码RNA KCNK15-AS1 微RNA-140-5p 软骨细胞增殖炎症细胞外基质

基于CCL2-CCR2信号轴探索松萝酸对胃癌细胞恶性行为的影响

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中国免疫学杂志 2024年第8期40卷 1665-1670页

作者：滕晓丽时昭红孟庆彬周晓黎廖艳万莹杨健武汉市第一医院消化内科武汉430022 武汉市第一医院胃肠外科武汉430022

目的:探讨松萝酸(UA)调节CC趋化因子配体2-CCL2受体(CCR2)信号轴对胃癌细胞恶性行为的影响。方法:以生长良好的人胃癌细胞系SGC-7901细胞为研究对象,通过不同浓度的UA处理,设为UA低浓度(UA-L)组(62.5μmol/L UA)、UA中浓度(UA-M)组(125... 详细信息

目的:探讨松萝酸(UA)调节CC趋化因子配体2-CCL2受体(CCR2)信号轴对胃癌细胞恶性行为的影响。方法:以生长良好的人胃癌细胞系SGC-7901细胞为研究对象,通过不同浓度的UA处理,设为UA低浓度(UA-L)组(62.5μmol/L UA)、UA中浓度(UA-M)组(125μmol/L UA)、UA高浓度(UA-H)组(250μmol/L UA);同时对细胞转染CCL2过表达载体(pc DNA3.1 CCL2)、空载体(pc DNA3.1)、沉默CCL2(si CCL2)及阴性对照(si control),并采用250μmol/L UA处理SGC-7901细胞,标记为UA-H+pc DNA3.1 CCL2组、UA-H+pc DNA3.1组、UA-H+si CCL2组、UA-H+si control组,另取未处理的SGC-7901细胞作为对照组。流式细胞术、MTT及qRT-PCR检测细胞凋亡、增殖及CCL2、CCR2 mRNA表达水平;Western blot检测PD-L1、凋亡蛋白(Bax)、增殖蛋白(CyclinD1、CCL2、CCR2)、免疫逃逸相关蛋白(B7H1)表达水平;与体外分离培养的CD8+T细胞共培养后,ELISA检测上清液中IL-4、IFN-γ、IL-10水平。将各组细胞与活化的外周血单个核细胞(PBMC)1∶1共培养72 h,比较各组胃癌细胞对T细胞介导的杀伤敏感性。结果:与对照组相比,UA-L组、UA-M组、UA-H组细胞增殖率、IL-10水平、CyclinD1、PD-L1、CCL2、CCR2、B7H1蛋白及mRNA表达、与活化的PBMC 1∶1共培养72 h后的细胞计数显著降低,细胞凋亡率、IL-4、IFN-γ水平、Bax蛋白表达显著升高(P<0.05);与UA-H+pc DNA3.1组相比,UA-H+pc DNA3.1 CCL2组细胞增殖率、IL-10水平、CyclinD1、PDL1、CCL2、CCR2蛋白及mRNA表达、与活化的PBMC 1∶1共培养72 h后的细胞计数显著增加,细胞凋亡率、IL-4、IFN-γ水平、Bax蛋白表达显著降低(P<0.05);与UA-H+si control组相比,UA-H+si CCL2组细胞增殖率、IL-10水平、CyclinD1、PD-L1、CCL2、CCR2蛋白及mRNA表达、与活化的PBMC 1∶1共培养72 h后的细胞计数显著降低,细胞凋亡率、IL-4、IFN-γ水平、Bax蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论:UA可抑制胃癌细胞增殖、免疫逃逸,诱导其凋亡,可能与抑制CCL2-CCR2信号轴有关。

关键词：松萝酸 CCL2-CCR2信号轴胃癌细胞增殖凋亡免疫逃逸

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应用群体药动学模型及蒙特卡洛模拟优化淋巴结核患者使用异烟肼注射剂最佳给药方案

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中国抗生素杂志 2024年第9期49卷 1068-1074页

作者：张欢刘小玉丁巧燕张宇李思思马丽华周铭武汉市肺科医院药学部武汉430032 武汉市肺科医院外科武汉430032

目的应用非线性混合效应法(NLME)建立异烟肼注射剂在中国淋巴结核患者群体的药动学(PPK)模型,采用蒙特卡洛模拟优化异烟肼注射剂在不同NAT2代谢基因型淋巴结核患者中的给药方案。方法纳入武汉市肺科医院淋巴结核患者28例,收集66个血药... 详细信息

目的应用非线性混合效应法(NLME)建立异烟肼注射剂在中国淋巴结核患者群体的药动学(PPK)模型,采用蒙特卡洛模拟优化异烟肼注射剂在不同NAT2代谢基因型淋巴结核患者中的给药方案。方法纳入武汉市肺科医院淋巴结核患者28例,收集66个血药浓度数据和相关临床资料。采用NLME法建立PPK模型,考察NAT2代谢基因型等因素对异烟肼注射剂体内药动学特征的影响。采用诊断图、Bootstrap法、NPDE法和VPC法评价PPK模型的预测能力。采用蒙特卡洛模拟法探索不同NAT2代谢基因型患者的最佳给药方案。结果异烟肼注射剂具有一级吸收的二室模型特征,患者NAT2代谢基因型是影响其清除率的重要因素,快、中间和慢代谢基因型患者清除率分别为:53.7、44.6和25.4 L/h,表观分布容积为29.8 L。模型评价表明,模型参数估算可靠、模型稳定。蒙特卡洛模拟结果显示,NAT2快、中间、慢代谢基因型的淋巴结核患者,异烟肼注射剂最佳给药剂量分别为600、450和300 mg。结论本研究成功建立中国淋巴结核患者异烟肼注射剂PPK模型,定量描述NAT2代谢基因型对异烟肼注射剂药动学的影响,针对不同基因型患者制定最佳给药方案,为异烟肼个体化治疗提供参考。

关键词：异烟肼注射剂群体药动学蒙特卡洛模拟淋巴结核