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基于TPO18基因蛋白的兔豆状囊尾蚴感染间接ELISA检测方法的建立

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中国兽医学报 2024年第6期44卷 1213-1222页

作者：王泽祥罗永禄薛萍车亮王由森苟惠天孙晓林甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 兰州市永登县动物疫病预防控制中心甘肃兰州730300 平凉市动物疫病预防控制中心甘肃平凉744000

豆状囊尾蚴病是由豆状带绦虫(Taenia pisiformis)的幼虫——豆状囊尾蚴(Cysticercus pisiformis)寄生于家兔等啮齿类动物所引起的一种寄生虫病,该病威胁养兔业发展和兔肉食品安全。为了鉴定TPO18抗原在豆状囊尾蚴和豆状带绦虫的分布,并... 详细信息

豆状囊尾蚴病是由豆状带绦虫(Taenia pisiformis)的幼虫——豆状囊尾蚴(Cysticercus pisiformis)寄生于家兔等啮齿类动物所引起的一种寄生虫病,该病威胁养兔业发展和兔肉食品安全。为了鉴定TPO18抗原在豆状囊尾蚴和豆状带绦虫的分布,并建立兔豆状囊尾蚴病抗体间接ELISA检测方法,本研究原核表达兔豆状囊尾蚴18 kDa抗原,经蛋白纯化获得了可溶性的TPO18蛋白。TPO18蛋白免疫家兔制备了效价达1∶51200多克隆抗体。蛋白免疫印迹鉴定多克隆抗体与兔豆状囊尾蚴总蛋白、豆状带绦虫总蛋白及重组蛋白TPO18的反应原性,免疫组织化学法鉴定兔豆状囊尾蚴和豆状带绦虫虫体TPO18抗原分布,多克隆抗体与兔豆状囊尾蚴总蛋白、豆状带绦虫总蛋白及重组蛋白TPO18具有良好的反应原性,兔豆状囊尾蚴TPO18抗原主要分布于生发层和绒毛层,豆状带绦虫TPO18抗原主要分布在吸盘及吸盘周围和集合管上层细胞及绒毛层。以TPO18重组抗原包被酶标板,优化确定间接ELISA各项技术参数,建立基于TPO18抗原的间接ELISA抗体检测方法。经优化后的ELISA检测方法的检测条件为血清稀释度1∶100,抗原包被质量浓度为5 mg/L,抗原包被条件37℃1 h+4℃过夜,封闭条件1%BSA 37℃封闭60 min,血清反应时间60 min,酶标二抗稀释度1∶1000,酶标二抗作用时间60 min,底物反应时间15 min,临界值0.295。ELISA方法的灵敏性、特异性和重复性检测结果表明,该方法灵敏度较高,特异性较好,不与兔瘟、兔肝片吸虫、兔球虫、兔弓形虫等的阳性血清发生交叉反应;批内和批间重复性试验的变异系数均小于7%,重复性良好。运用该ELISA方法与剖检检测试验分别对86份临床血清样品检测,两种方法检测结果符合率为97.7%。综上所述,本研究成功建立了兔感染豆状囊尾蚴抗体的间接ELISA方法,为兔感染豆状囊尾蚴后感染情况监测提供了新的监测方法。

关键词：兔豆状囊尾蚴 18 kDa抗原免疫组织化学酶联免疫吸附试验特异性敏感性

2020-2022年华中地区部分猪场猪圆环病毒3型的分子流行特征与遗传变异分析

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中国农业科学 2024年第3期57卷 613-626页

作者：李博天李春琪刘国平谢军曾攀赵润泽李桐裴洁郭利伟伍锐谭磊长江大学动物科学技术学院湖北省动物疫病预防控制中心四川农业大学动物医学院

【目的】通过系统性试验方案摸清我国华中部分地区猪圆环病毒3型(porcine circovirus 3)流行病学及遗传变异特点，为PCV3疫苗研究提供数据基础。【方法】对华中地区(湖北、湖南和河南)15个规模化养猪场的3 500份临床采集样品进行real-ti... 详细信息

【目的】通过系统性试验方案摸清我国华中部分地区猪圆环病毒3型(porcine circovirus 3)流行病学及遗传变异特点，为PCV3疫苗研究提供数据基础。【方法】对华中地区(湖北、湖南和河南)15个规模化养猪场的3 500份临床采集样品进行real-time PCR检测，分析不同猪群、不同组织器官、不同排毒量和对应流行病学症状特点关系。对部分阳性样本PCV3全基因组进行扩增、测序和分析。【结果】50.86%(1 780/3 500)被检样本为PCV3核酸阳性，不同发育阶段猪群PCV3均易感，保育猪、哺乳仔猪、生长育肥猪PCV3阳性率较高，分别为70.44%(498/707)、67.19%(596/887)、41.75%(177/424)。在不同组织器官和样品中，淋巴结、肺脏、产后胎盘样本PCV3阳性率为67.05%(59/88)、63.79%(74/116)、49.11%(55/112)，血液、初乳样本PCV3阳性率分别为56.09%(502/895)、44.20%(278/629)，且鼻拭子和唾液中均检出PCV3。出现猪繁殖障碍症状、厌食症状和呼吸障碍症状的猪群PCV3阳性率高，分别为44.43%(399/898)、36.43%(431/1183)、28.04%(233/831)。24条PCV3全基因组序列长度均为2000 nt，其全基因核苷酸序列同源性为98.4%—100%，与参考株PCV3全基因组的同源性为97.4%—99.5%。遗传进化分析结果显示，23株PCV3属于PCV3b亚型，1株属于PCV3a亚型。Rep氨基酸序列比对结果发现，PCV3-L2、L23和L14株分别在(N124I)、(A183E)和(V244I)出现独特变异位点；Cap蛋白氨基酸序列比对结果发现，PCV3-L15、L21、L3和L19株分别在(T45P)、(R2K)、(R14K)和(F7L)出现独特变异位点。【结论】PCV3可感染不同发育阶段猪群，且分布于不同组织器官中；PCV3可通过垂直传播(如初乳和精液)和水平传播(如口鼻分泌物和唾液)感染猪群；PCV3感染可能与生猪繁殖障碍、呼吸障碍和多器官炎症和关节炎症密切相关。此外，被调查地区规模化猪场同时流行PCV3a和PCV3b两种亚型，其中PCV3b亚型为优势毒株。研究通过全基因组氨基酸序列分析发现部分独特变异位点位于Cap蛋白，这可能导致Cap蛋白赋予的免疫原性发生变化。对PCV3全基因序列的遗传进化做出详细阐述，为未来的PCV3疫苗研究奠定基础。

关键词：猪圆环病毒3型病毒载量全基因组扩增遗传进化分析

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家畜口蹄疫防控技术指南

北方牧业 2024年第10期 3-4页

作者：中国动物疫病预防控制中心中国动物疫病预防控制中心

当前,我国口蹄疫疫情形势总体平稳,但国家口蹄疫参考实验室发现部分猪群中口蹄疫流行毒株发生变异,同时中东地区近年来流行的南非2型(SAT 2型)口蹄疫病毒传入我国风险较高,防控工作面临新挑战。为进一步指导做好口蹄疫防控工作,特制定... 详细信息

当前,我国口蹄疫疫情形势总体平稳,但国家口蹄疫参考实验室发现部分猪群中口蹄疫流行毒株发生变异,同时中东地区近年来流行的南非2型(SAT 2型)口蹄疫病毒传入我国风险较高,防控工作面临新挑战。为进一步指导做好口蹄疫防控工作,特制定本技术指南。

关键词：防控工作口蹄疫防控技术技术指南流行毒株参考实验室中东地区疫情形势

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寻甸县肉牛寄生虫病筛查及流行病学调查

中国牛业科学 2024年第3期50卷 47-53页

作者：吴海兴夏春香金卫华李金存杜敏刘美艳昆明市动物疫病预防控制中心昆明650106 寻甸县动物疫病预防控制中心昆明650106

为履行好寻甸县肉牛科技特派团职责,助推寻甸县“一县一业”肉牛产业示范县创建,打造世界一流“绿色食品牌”,推动高原特色农业高质量发展。2021-2022年云南省寻甸县肉牛科技特派团成员对寻甸县16个乡镇,29个肉牛养殖场(户),1个肉牛交... 详细信息

为履行好寻甸县肉牛科技特派团职责,助推寻甸县“一县一业”肉牛产业示范县创建,打造世界一流“绿色食品牌”,推动高原特色农业高质量发展。2021-2022年云南省寻甸县肉牛科技特派团成员对寻甸县16个乡镇,29个肉牛养殖场(户),1个肉牛交易市场,1个屠宰场共采集654份粪便样品和899份全血样品进行了肉牛寄生虫的筛查。结果显示:29个养殖场的899份全血样品中检出巴贝斯虫阳性12份,阳性率为1.33%,阳性场5个,场阳性率17.24%;31个检测场点筛查654份粪便,共筛查出检出了线虫、吸虫、球虫、绦虫、螨虫5类寄生虫虫卵及卵囊,寄生虫总感染数176份,平均感染率为26.91%,其中球虫55份,感染率最高,为8.43%;吸虫47份,感染率为7.68%;牛带绦虫30份,感染率为4.60%;线虫32份,感染率为4.91%,疥螨12份,感染率为1.83%,混合感染的病例44份,占总感染病例的0.25%。阳性场27个,场总体阳性率为87.10%,其中吸虫场阳性率为58.06%;球虫场阳性率51.61%;线虫场阳性率48.38%;绦虫场阳性率38.71%,疥螨场阳性率25.80%。市场环节寄生虫感染率最高,为38.33%(23/60),养殖环节次之,为26.31%(151/574),屠宰环节最少,为10%(2/20)。部分乡镇感染率高;放牧牛群和犊牛感染率较高。本调查结果为寻甸县肉牛寄生虫防控提供了科学的参考依据,指导养殖户规范管理,制定科学的驱虫程序,强化环境消毒等防控措施,切实提高养殖效益和肉牛产品品质,为寻甸肉牛“绿色食品牌”打造贡献兽医力量。

关键词：肉牛寄生虫病筛查流行病学调查

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兽医实验室检测工作的重要性及强化措施

新农民 2024年第23期 123-125页

作者：孙昊岩孙凡冠县动物疫病预防控制中心

随着国内养殖业快速发展，动物疫病数量与种类日益增多，兽医实验室检测工作的重要性不断凸显。本文探讨了兽医实验室检测工作的重要性，体现为强化动物免疫工作、促进动物疫病防治及确保养殖户效益的作用，结合当前实验室检测工作的现... 详细信息

随着国内养殖业快速发展，动物疫病数量与种类日益增多，兽医实验室检测工作的重要性不断凸显。本文探讨了兽医实验室检测工作的重要性，体现为强化动物免疫工作、促进动物疫病防治及确保养殖户效益的作用，结合当前实验室检测工作的现状，提出了具体强化措施，主要包括加强人员培训、改善设备设施、提高质量管理水平等方面，有助于提升兽医实验室检测工作的效率。

关键词：兽医实验室检测工作强化措施

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2024年国家动物疫病免疫技术指南（上）

湖南农业 2024年第5期 18-19页

作者：中国动物疫病预防控制中心中国动物疫病预防控制中心

为指导做好动物疫病免疫工作，按照《国家动物疫病强制免疫指导意见（2022—2025年）》要求，特制定本指南。一、高致病性禽流感我国高致病性禽流感疫情形势平稳，2023年未报告发生家禽高致病性禽流感疫情，报告发生2起野禽H5N1亚型禽...

为指导做好动物疫病免疫工作，按照《国家动物疫病强制免疫指导意见（2022—2025年）》要求，特制定本指南。一、高致病性禽流感我国高致病性禽流感疫情形势平稳，2023年未报告发生家禽高致病性禽流感疫情，报告发生2起野禽H5N1亚型禽流感疫情。从流行毒株看，H5亚型高致病性禽流感毒株以2.***.4.4b分支病毒为主，也检测到2.***.4.4h分支病毒。

关键词：

来源：博看期刊

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畜牧兽医工作中动物检疫现状及对策

新农民 2024年第22期 120-122页

作者：孙凡孙昊岩张义元冠县动物疫病预防控制中心

畜牧兽医工作中动物检疫起着重要的作用，可以有效防止疫病传播，确保畜产品的安全性，还可以预防潜在经济损失，维护畜牧养殖业的健康发展。然而，畜牧兽医动物检疫存在一些问题，体现为管理和技术水平不足、设施缺乏、检疫人员素质不... 详细信息

畜牧兽医工作中动物检疫起着重要的作用，可以有效防止疫病传播，确保畜产品的安全性，还可以预防潜在经济损失，维护畜牧养殖业的健康发展。然而，畜牧兽医动物检疫存在一些问题，体现为管理和技术水平不足、设施缺乏、检疫人员素质不高等。针对这些问题，本文给出了优化畜牧兽医动物检疫工作的措施，以确保畜牧兽医工作顺利开展。

关键词：畜牧兽医动物检疫改进对策

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2024年国家动物疫病免疫技术指南(上)

湖南农业 2024年第5期 18-19页

作者：中国动物疫病预防控制中心中国动物疫病预防控制中心

为指导做好动物疫病免疫工作,按照《国家动物疫病强制免疫指导意见(2022-2025年)》要求,特制定本指南。一、高致病性禽流感。我国高致病性禽流感疫情形势平稳,2023年未报告发生家禽高致病性禽流感疫情,报告发生2起野禽H5N1亚型禽流感疫情。

关键词： H5N1亚型禽流感动物疫病免疫高致病性禽流感技术指南强制免疫野禽家禽疫情

青海地区不同动物源志贺菌毒力相关基因的分布研究

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黑龙江畜牧兽医 2024年第4期 60-66,75页

作者：文英王磊谢寿军乜志刚丁晓宇青海大学农牧学院西宁810016 贵德县动物疫病预防控制中心青海贵德811700

为了解青海省不同动物源志贺菌相关毒力基因的分布情况,试验对分离自青海省不同地区的62株不同动物源志贺菌进行了DNA提取,将其作为模板对志贺菌的毒力基因set1B、virA、set1A、ial、ipaBCD、Sen、icsP、iutA、icsA、ipaH进行了PCR检测... 详细信息

为了解青海省不同动物源志贺菌相关毒力基因的分布情况,试验对分离自青海省不同地区的62株不同动物源志贺菌进行了DNA提取,将其作为模板对志贺菌的毒力基因set1B、virA、set1A、ial、ipaBCD、Sen、icsP、iutA、icsA、ipaH进行了PCR检测,并统计各毒力基因在不同动物源志贺菌中的检出率、不同动物源志贺菌毒力基因携带模式及携带毒力基因种类。结果表明:62株志贺菌毒力基因set1B、virA、set1A、ial、ipaBCD、icsP、Sen、iutA、icsA、ipaH的检出率分别为6.5%、43.5%、3.2%、25.8%、37.1%、0、12.9%、22.6%、50.0%、100%。在27株猪源志贺菌中,毒力基因ipaH、VirA、icsA、ipaBCD的检出率较高,然后依次为ial、iutA、Sen,未检出icsP。在27株鸡源志贺菌中,毒力基因ipaH、icsA、virA的检出率较高,然后依次为ipaBCD、ial、Sen、iutA,未检出set1B、set1A、icsP。在4株牦牛源志贺菌中,毒力基因ipaH、icsA、ipaBCD的检出率较高,然后依次为virA、ial、iutA,未检出set1B、set1A、Sen、icsP。在4株藏羊源志贺菌中,毒力基因ipaH、ipaBCD、iutA的检出率较高;然后依次为virA、ial,未检出set1B、set1A、Sen、icsP、icsA。在62株志贺菌中,有7株菌只检出毒力基因ipaH,55株菌携带两种及以上毒力基因,共呈现出30种携带模式,其中以virA-icsA-ipaH模式的菌株最多(11.3%,7/62),然后为ipaBCD-ipaH模式(9.7%,6/62);猪源和鸡源志贺菌毒力基因的携带模式均为18种,牦牛和藏羊源志贺菌毒力基因的携带模式均为4种。在62株志贺菌中,有18株菌携带2种毒力基因,15株菌携带3种毒力基因,13株菌携带4种毒力基因,7株菌携带5种毒力基因,2株菌携带6种毒力基因。27株猪源志贺菌中携带1,2,3,4,5,6种毒力基因菌株的占比分别为3.7%、40.7%、14.8%、18.5%、14.8%、7.4%,27株鸡源志贺菌中携带1,2,3,4,5,6种毒力基因菌株的占比分别为18.5%、18.5%、29.6%、22.2%、11.1%、0,4株牦牛源志贺菌中携带1,2,3,4,5,6种毒力基因菌株的占比分别为25.0%、0、25.0%、50.0%、0、0,4株藏羊源志贺菌中携带1,2,3,4,5,6种毒力基因菌株的占比分别为0、50.0%、50.0%、0、0、0。62株志贺菌单毒力基因携带率(11.3%,7/62)动物源不同有所差异,同时应重点加强青海地区猪志贺菌病的防治工作。

关键词：志贺菌毒力基因猪鸡牦牛藏羊青海地区